小鼠胸腺上皮细胞的培养、鉴定及对淋巴细胞促增殖作用的初步研究

目的 研究小鼠胸腺上皮细胞的分离培养方法、鉴定及其对胸腺淋巴细胞的促增殖作用。方法 无菌取4~5周龄BALB/c小鼠的胸腺, 组织块培养30天, 观察不同时间细胞形态的变化;0.1%胰蛋白酶消化细胞传代;用波形蛋白和角蛋白进行免疫组化鉴定;新型细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒比色法检测地塞米松对胸腺、脾脏淋巴细胞单独培养及胸腺淋巴细胞与胸腺上皮细胞共培养的抑制作用。结果 培养至第3~4天可见贴壁的组织块周围出现少量胸腺上皮细胞, 从内到外细胞形状为圆形、多边形、树突状、梭形等;培养至10天左右时, 细胞生长较快, 出现大量的贴壁细胞;培养21天左右细胞大量融合并呈典型的鹅卵石样排列;细胞免疫组化显示广谱角蛋白呈阳性反应, 波形蛋白呈阴性反应;随着药物浓度的增加, 胸腺、脾脏淋巴细胞存活率均降低, 共培养后胸腺淋巴细胞的存活率升高。结论 组织块法体外培养小鼠胸腺上皮细胞简单可行;胸腺上皮细胞具有促胸腺淋巴细胞增殖的作用。     

shRNA稳定干扰Raptor基因表达的小鼠胸腺上皮细胞系的建立

目的: 建立Raptor基因稳定干扰的小鼠胸腺上皮细胞系(mouse thymic epithelial cell line 1, mTEC1)。方法: 根据Sigma公司数据库Raptor基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列,在其3′和5′端添加pLKO.1 puro慢病毒载体酶切位点序列,合成shRNA序列,插入载体。将pLKO.1 puro shRNA Raptor慢病毒载体与包装质粒混合,共同转染293T细胞,收集病毒颗粒感染mTEC1,再用嘌呤霉素对其进行筛选,最后用免疫印迹法检测Raptor,mTOR,磷酸mTOR(p mTOR)以及mTOR下游分子核糖体S6激酶(ribosomal S6 kinase, p70S6k),磷酸化p70S6k(p p70S6k)的表达水平。同时采用细胞计数和TUNEL法分别检测细胞增殖与凋亡。结果： 合成的Raptor基因shRNA序列成功插入至经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切的pLKO.1 puro载体,经测序表明序列正确;免疫印迹结果显示,pLKO.1 puro shRNA Raptor感染mTEC1后,Raptor、mTOR及其下游p p70S6k蛋白表达明显降低,但细胞增殖及凋亡无明显变化。 结论： 成功构建Raptor shRNA慢病毒表达载体,建立稳定的Raptor基因敲降的小鼠mTEC1。     

小鼠气管上皮细胞的气液相界面培养

目的通过气液相界面培养将小鼠气管上皮细胞诱导分化成具有纤毛和黏液分泌功能的上皮细胞,从功能和结构上,使其更贴近体内气管上皮细胞的自然生长状态。方法采用低温酶消化法、气液相界面培养、无血清条件培养基培养小鼠的气管上皮细胞,通过扫描电镜以及细胞免疫化学观察和鉴定细胞。结果此方法获得的细胞具有纤毛和黏液分泌功能。细胞角蛋白表达阳性。结论低温酶消化法、小鼠气管上皮细胞气液相界面培养的细胞更贴近生理状态,为进一步研究呼吸系统疾病提供了良好的模型。     

着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养及形态学观察

目的探索着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养方法，并对培养细胞进行形态学检测。方法取着床窗口(妊娠d4)小鼠双侧子宫角，用胰蛋白酶消化和机械削刮法相结合分离上皮细胞，经高密度接种及添加EGF培养后，通过光镜和透射电镜观察其形态学特征。结果接种24h后大部分细胞已贴壁，培养4d后细胞排列紧密、长成上皮细胞集落，电镜显示细胞为分泌上皮细胞，细胞纯化率在90％以上。结论采用上述方法可成功地分离、原代培养着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞。     

小鼠子宫内膜上皮细胞的分离和原代培养

目的 建立一种高效的子宫内膜上皮细胞分离和体外培养方法,为子宫疾病的发病机制或治疗药物筛选的进一步研究提供一个比较理想和有价值的的实验模型.方法 用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养小鼠子宫内膜上皮细胞,以上皮细胞角蛋白为抗原的免疫荧光法对分离培养的细胞进行纯度鉴定.结果 小鼠子宫内膜上皮细胞培养4～...     

几种成年小鼠胸腺上皮细胞分离和富集方法效果的比较

目的: 通过比较几种成年小鼠胸腺上皮细胞(TECs)分离和富集方法的效果,寻找一种具有准确体内代表性的高效TECs富集方法。 方法: 27只6 ~ 8周龄BABL/c小鼠分为9组,每组3只。1 分离实验分为5个分离组,包括1.0 g·L^-1collagenase Ⅴ组和0.5、0.7、1.0及2.0 U·mL^-1 Liberase^TM组,按照相应的酶工作浓度对胸腺组织进行消化处理;2 富集实验分为4个富集组,包括对照组和免疫磁珠(MACS)、Percoll及Ficoll 富集组,各组用1.0 U·mL^-1Liberase^TM消化胸腺组织后,将所得的单细胞悬液分别用MACS、Percoll和Ficoll法进行细胞富集(对照组除外)。分离组通过流式细胞术检测细胞活力及胸腺基质细胞(TSCs)的产量;富集组通过流式细胞术检测细胞活力、TSCs比例和TSCs中TECs重要标志上皮细胞黏附分子(EpCAM)的表达丰度,检测Percoll富集组和对照组TECs的2个亚群--皮质TECs(cTECs)和髓质TECs(mTECs)比例。 结果: 1.0 U·mL^-1 Liberase ^TM组中TSCs的产量明显高于0.5和0.7 U·mL^-1Liberase^TM组(P<0.01),且其细胞活力及消化时间均优于1.0 g·L^-1collagenase Ⅴ组(P<0.01)。3个富集组的细胞活力均较高,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,3个富集组TECs比例明显增加(P<0.05或 P<0.01);在3个富集组中,Percoll富集组富集的TECs比例高于其他2个富集组(P<0.01);与对照组比较,Percoll富集组cTECs和mTECs的百分比及cTEC/mTEC比值无明显变化(P >0.05)。 结论: Liberase ^TM较collagenase Ⅴ更适用于消化成年小鼠胸腺,其最适消化浓度为1.0 U·mL^-1。本研究采用的3种富集方法均可以提高TECs比例,对细胞的破坏均较小;Percoll富集法最有效,在富集后不影响TECs亚群细胞比例,便于后续实验操作。     

BXSB小鼠胸腺内单克隆免疫球蛋白分泌细胞的分离与鉴定

用杂交瘤技术从成年雄性BXSB小鼠胸腺细胞随机制备出1株分泌Ig的单克隆杂交瘤细胞,并对它们所产生的单克隆Ig类别及对自身抗原的反应性进行了鉴定。结果表明,杂交瘤细胞产生的单克隆Ig中,IgG类别的多于IgM类别,显示BXSB小鼠胸腺内产生各类Ig的浆细胞比例与正常小鼠胸腺内以产生IgM的浆细胞为主的情况不同。此外,BXSB小鼠胸腺内浆细胞产生的Ig仅少数为自身抗体。     

异基因小鼠胚胎胸腺移植治疗红斑狼疮的实验观察

目的探讨胚胎胸腺组织移植对系统性红斑狼疮(SLE)模型鼠的治疗效果。方法将21只符合要求的BALB/c×C57BL/6F1小鼠经尾静脉注射亲代淋巴细胞混合悬液后随机分成3(A~C)组,于SLE模型建立成功后接受相应治疗方案,第25天处死模型小鼠,采用流式细胞技术检测各组小鼠外周血中CD4+/CD8+T细胞的比值;电子天平称取小鼠胸腺湿质量后计算胸腺指数;直接免疫荧光法检测肾冰冻切片免疫复合物的荧光强度;间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体(ANA)的荧光滴度。结果①C组外周血中CD4+/CD8+T细胞的比值显著高于A组(P<0.05),但A组与B组相比,差异无显著性(P>0.05);②C组胸腺指数与B组相比,无显著性差异(P>0.05),但显著高于A组(P<0.05);③C组肾脏冰冻切片荧光强度及外周血ANA荧光滴度均低于A组和B组(P<0.05)。结论胚胎胸腺移植对SLE模型鼠有显著治疗效果,有望运用于临床SLE的治疗。     

小鼠胸腺上皮细胞系可自发分泌多种类型细胞因子

本室建成非转化的小鼠胸腺上皮细胞系,命名为MTEC_1。在无外源刺激下,MTEC_1细胞可自发分泌多种类型细胞因子,包括IL-1、IL-6、IL-7、GM-CSF及化学趋化因子(CF)。其中IL-6、GM-CSF及CF为高水平分泌量;IL-1为中度,IL-7为低水平分泌量。MTEC_1细胞不能自发分泌IL-3及TNFα。MTEC_1细胞系的建立,不仅可用于在体外培养中分析胸腺选择的信号需要,且可用于分析自分泌细胞因子间连接产生的网络调节。     

T细胞免疫防治BXSB小鼠系统性红斑狼疮的实验研究

目的 :探索用自身反应性 T细胞免疫防治 BXSB雄性小鼠发生类似人系统性红斑狼疮 (SL E)的可行性。方法 :用活化的 BXSB小鼠自身反应性 T细胞克隆 (ATL 1)从小鼠尾静脉注射进行免疫 (1× 10 6 /只 ,共 3次 ) ,然后从不同角度监测病情发展情况。 结果 :在免疫后的第 1、2、4周 ,T细胞免疫组小鼠血清中抗 ds DNA抗体水平明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在免疫后第 4、8、12、16周 ,T细胞免疫组小鼠的死亡率明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,但是两组尿蛋白的浓度在各时间段均未见显著差异。结论 :T细胞免疫能在一定程度上延缓 BXSB小鼠 SL E的进程 ,延长小鼠的生存时间。其机制可能与 T细胞免疫诱导了针对自身反应性 T细胞的调节性免疫应答有关。     

神经精神性狼疮患者的临床特点

目的了解神经精神性狼疮(neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,NPSLE)患者的临床特点,加强对该病的认识,以指导临床进行早期诊断和治疗,改善疾病预后。方法选取2011年6月—2016年6月在海南省人民医院住院的82例NPSLE患者作为病例组,同期收集本院确诊为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)但无神经精神症状的82名住院患者作为对照组,了解NPSLE患者神经精神症状,并比较两组患者的一般情况、临床表现、实验室和免疫学检查。结果 82例NPSLE患者,男性9例,女性73例,年龄(33.2±16.7)岁,病程1年者占69.5%,病例组患者病程要短于对照组(P0.05);62.2%的NPSLE患者在SLE发病3年内出现神经精神症状,常见的症状为狼疮性头痛(20.0%)、癫痫(12.0%)、性格改变(10.5%)和焦虑(10.5%),85.4%的患者合并有其他临床表现,主要为面部红斑(68.3%)、肾脏受累(59.8%)、关节疼痛(42.7%)等,与对照组相比,NPSLE患者更易合并光感性皮疹(P0.05);两组患者血小板、血肌酐、补体C4、免疫球蛋白Ig M、抗ds-DNA抗体、抗r-RNP抗体差异有统计学意义(P0.05)。结论 NPSLE患者偏向于青年女性,常发生于SLE病程的早期阶段,大部分患者在SLE发病3年内会出现神经精神症状,且更易合并光感性皮疹,血小板、肌酐、补体C4的降低和Ig M、抗ds-DNA抗体、抗r-RNP抗体水平的升高可辅助NPSLE进行早期诊断和预测。     

NK细胞特性及在系统性红斑狼疮中的作用

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以多种淋巴细胞异常活化、多种自身抗体产生和多器官受累为特征的自身免疫性疾病.自然杀伤(natural killer,NK)细胞是固有免疫系统的重要组成部分,在感染免疫、肿瘤免疫以及自身免疫中发挥十分重要的作用.本文就NK细胞在SLE...     

系统性红斑狼疮BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的分化发育

目的:研究Yaa基因与骨髓B细胞系细胞的分化发育是否有相互关系.方法:用Whitlock-Witte法从骨髓细胞中培养纯化出B细胞系细胞,继而检测B细胞系细胞对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的表型、增殖反应和抗DNA抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况.结果:用Whitlock-Witte法成功地从骨髓细胞中培养分离出B细胞系细胞.经LPS刺激后,雌雄BXSB小鼠B细胞系细胞膜表面CD19抗原和膜表面Ig的分布相似,都出现较强的增殖反应和产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA 抗体,但是对地塞米松诱导的凋亡作用不敏感.结论:Yaa基因对BXSB小鼠骨髓中B细胞系细胞的分化发育无影响,提示Yaa基因仅在外周免疫器官的成熟B细胞中表达活性;并且BXSB小鼠骨髓中的自身反应性B细胞系细胞未被删除,可能是产生自身抗体的内在原因之一.     

系统性红斑狼疮患者树突状细胞亚型水平与疾病活动指数的相关性

目的检测系统性红斑狼疮患者树突状细胞亚型水平,探讨与疾病活动指数的相关性。方法使用免疫荧光染色、流式细胞仪检测髓系树突状细胞(MDC)亚型CD11c 和淋巴系树突状细胞(PDC)亚型CD123 的表达,并与SLEDAI、ds-DNA、C3、C4进行相关性分析。结果显示SLE患者和活动期患者外周血中CD11c 和CD123 表达(0.21±0.12);(0.19±0.13)较正常对照组(0.36±0.07)和(0.29±0.9)明显降低(P<0.05)。在SLE病人中,活动期组(0.16±0.11);(0.13±0.06)和静止期组(0.26±0.13);(0.23±0.16)患者外周血CD11c 和CD123 百分率差异存在显著性(P<0.05)。CD11c 和CD123 水平与SLEDAI、ds-DNA具有明显相关性(r=-0.408、-0.436、-0.474、-0.528;P分别为0.018、0.013、0.009和0.003),与C3、C4无明显相关性。结论SLE患者外周血树突状细胞亚型明显降低,并且与SLEDAI相关明显,可作为观察狼疮活动的客观指标。     

系统性红斑狼疮17例分析

系统性红斑狼疮(SLE)多发于青中年女性,临床表现多样化。本文按美国风湿病学会(ARA)1982年修订的SLE诊断标准,选择17例住院SLE进行了分析,指出应注意对早期、不典型的病例的诊断,治疗方案和药物剂量必须根据病情活动情况而定,救冶狼疮性肾炎(LN)及减少激素用量是治疗中的重要问题。     

Pregnancy in systemic lupus erythematosus

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease that predominantly affects women of reproductive age. Pregnancy and its outcome is a major concern to most SLE patients. Queries regarding the risk of disease flares during pregnancy, chance of fetal loss, and the safety of various drugs are often raised. With the improvement in the understanding of the pathogenesis of SLE and the judicious use of immunosuppressive drugs, better disease control can now be achieved and SLE patients should not be deprived of the opportunity for bearing children. Prepregnancy counselling and close collaboration with other specialists such as the obstetricians and the perinatologists is essential in optimising the maternal and fetal outcome in lupus pregnancies. In this review, important issues regarding the fertility rate, optimal timing of conception, risk of disease flares during lupus pregnancy, pregnancy course, fetal outcome, safety of various drugs used for disease control during pregnancy and lactation, and contraceptive advice are discussed.     

C-反应蛋白与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的:探讨C-反应蛋白(CRP)与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法:测定90例SLE患者身高、体重、血压等一般情况及血清CRP、高密度脂蛋白(HDL),计算体质量指数(BMI)、平均动脉压(MAP)和SLE活动指数评分(SLEDAI),分析CRP与SLE病情活动性及其他指标的相关性。结果:CRP与SLEDAI之间无明显相关(P>0.05),而与BM(IP<0.05)和MAP(P<0.05)之间呈正相关,与HDL(P<0.05)呈负相关。结论:CRP与SLE的病情活动无相关,与SLE患者心血管危险因素相关。     

Glaucoma secondary to systemic lupus erythematosus

Background Glaucoma secondary to systemic lupus erythematosus （SLE - an uncommon but serious complication that threatens vision and therefore cannot be neglected. A few cases of second, y glaucoma resulting from lupus-induced or iatrogenic ocular impairments have been reported in association with SLE. However, a systematic analysis of the diagnosis and treatment of glaucoma secondary to SLE has not been reported in the literature. The aim of this study is to further investigate the relationship between glaucoma and SLE. Methods In this study, we reviewed nine eyes of five patients diagnosed with secondary glaucoma associated with SLE, including one case of neovascular glaucoma and four cases of steroid-induced glaucoma. Results Neovascular glaucoma was successfully treated by Ahmed glaucoma valve implantation surgery with adjunctive ranibizumab intravitreal injection, followed by panretinal photocoagulation （PRP）. The steroid-induced glaucoma in eight eyes of four cases were controlled by trabeculectomy along with antiproliferative agents. Conclusion Regular follow-up ocular examinations should be conducted to ensure early diagnosis and treatment of secondary glaucoma in SLE patients to improve the prognosis of vision.     

系统性红斑狼疮胸部X线平片的诊断价值

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者的胸部X线表现,以提高对本病的认识.方法:分析56例SLE患者的临床和胸部X线资料.结果:56例SLE患者的胸部X线检查有46例可见异常,主要表现为肺部、心脏、胸膜和膈肌的浸润.结论:X线检查对SLE胸部病变的诊断具有重要价值,但其影像学表现不具有特异性,必须密切结合临床资料综合分析.