热休克反应对氧化应激所致nucleolin裂解的影响

观察热休克反应对氧化应激（0.5 mmol/L H2O2）诱导细胞凋亡发生时 nucleolin(C23)裂解的影响并探讨其机制。方法： 采用caspase-3 活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 264.7巨噬细胞 及K562白血病细胞凋亡及C23的裂解;通过热休克反应观察热休克反应对C23裂解的影响。结果： 0.5 mmol/L H2O2处理细胞2 h caspase-3活性显著升高,12 h达高峰。免疫印迹结果显示上述各种细胞的C23蛋白均发生了裂解（有80 kD裂解片断出现）,而且最早出现裂解片段的时间都在H2O2处理30 min到1 h左右;同时热休克反应通过诱导HSP70,HSP25等应激蛋白表达而显著减少氧化应激所致C23的裂解。结论： 氧化应激诱导凋亡发生的同时也引起C23的裂解;热休克反应显著抑制氧化应激所致C23的裂解,其机制与热休克反应诱导多种热休克蛋白表达有关。     

槲皮素对热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp表达的影响

目的：研究热休克诱导人肝癌HepG22细胞热休克蛋白70（HSP70）和P－糖蛋白（P-gp)随时间的表达规律，并研究应用槲皮素（Qu)对二表达的抑制效应。方法：（1）使用恒温水浴法42℃热休克HepG2细胞90min；（2）采用免疫细胞化学法，流式细胞术检测热休克前，热休克后2，4，8，12，24h时HSP70和P－gp的表达规律，以及热休克前1h应用槲皮素在热后4h二的表达。结果：（1）42℃热休克诱导HepG2细胞，HSP70表达增多，“核内迁移”，阳性细胞数升高，4h达到最高（11．47％），较对照组（6．64％）升高近2倍（P＜0．005），24h后回落到低值，细胞核内表达减少；P－gp阳性细胞数随HSP70升高后升高，12h达到最高值（96．31％），较对照组（33．95）升高近3倍（P＜0．005），24h回落到低值，同时，细胞内低水平的HSP70表达在细胞质中，少部分在细胞核内。（2）热休克前应用槲皮素能有效抑制热2休克诱导HSP70和P-gp的过量表达，槲皮素并能有效抑制二内在表达，以100－200μmol/L Qu作用明显（P＜0．005），呈浓度剂量效应。结论：（1）热休克可能诱导HepG2细胞HSP70和P－gp的过量表达，P－gp与HSP70具有相关关系；（2）槲皮素可能在转录水平上抑制HepG2细胞HSP70和P－gp的合成。     

不同条件对大鼠脑胶质瘤C6细胞HSP70表达的诱导

目的　探索和建立 SD大鼠胶质瘤细胞 (C6 ) HSP70蛋白表达最佳诱导条件。　方法　用 MTT法观察不同热休克条件和 /或药物诱导下 C6细胞生存率 ;用 FCM法检测 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达。　结果　 (1) C6细胞在 4 2 ,4 3℃热休克 0～ 12 h的过程中 ,其生存率无明显影响。各种实验用药物 ,只要加上热休克 4 3℃ 2 h,对C6细胞的生存率的影响较单种药物同浓度要明显。 (2 ) C6细胞经 4 3℃热休克 1,2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 ,16 ,2 0 ,2 4 h后 ,其胞膜 HSP70蛋白表达率均较对照组 (平均 4 .72 % )显著增高 (P<0 .0 5 ) ,其中 12 h表达率 (89.15 % )为最高 ,榄香烯 +热休克组又较其他各组高。　结论　一定条件下的热休克及某些药物可诱导 C6细胞膜 HSP70蛋白的表达 ,其中单因素以 4 3℃热休克 12 h表达率为最高 ,多因素以榄香烯 +43℃热休克 2 h表达率为最高     

热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞Smac的释放及细胞凋亡

目的：探讨热休克预处理(heat shock pretreatment，HS)对过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)所致心肌细胞凋亡及促凋亡分子线粒体释放的第二种Caspase激活物(the second mitochondria-deftved activator of easpases，Smac)从线粒体释放的影响。方法：①采用H2O2(0．5mmol／L)导致心肌细胞凋亡；②采用热休克预处理(42℃，1h，恢复12h)诱导热休克蛋白表达；③采用Hoechst荧光染色，观察细胞凋亡发生并计算凋亡核百分率；④采用easpase活性定量检测及Western-blotting观察caspase-3，9的活化；采用免疫荧光及Western-blotting检测细胞成分分离后Smac从线粒体的释放。结果：①H2O2处理2h，Smac从心肌细胞线粒体释放入胞浆；处理4hcaspase-3，9活性升高，12h达高峰；处理24h心肌细胞明显出现凋亡，凋亡核百分率明显升高；②热休克预处理可诱导心肌细胞中HSP90。HSP70及αB-晶状体蛋白的表达增高；抑制Smac释放、caspase-3，9的活化及细胞凋亡的发生。结论：线粒体信号通路在H2O2所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用；热休克预处理通过抑制上述通路而减轻H2O2所致的细胞凋亡，其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断Smac从线粒体向胞浆释放、抑制caspase-3，9的活化有关。     

热休克蛋白抑制过氧化氢所致C2C12细胞凋亡的机制

目的：探讨热休克蛋白抑制活性氧所致C2C12细胞凋亡的分子机制。方法：采用热休克对体外培养的C2C12细胞进行预处理,以诱导热休克蛋白的表达;Hoechst33258染色观察过氧化氢（H2O2）所致的C2C12细胞凋亡;凋亡蛋白酶活性检测试剂盒和Western-blotting检测凋亡蛋白酶-3,8,9的活性;细胞组分分离后Western-blotting检测细胞色素C的释放。结果：热休克预处理导致C2C12细胞热休克蛋白70,αB-晶状体蛋白表达明显增加,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放,抑制凋亡蛋白酶-3,8,9活化及随后的C2C12细胞凋亡。结论：热休克蛋白通过干预线粒体信号通路与死亡受体通路的活化抑制过氧化氢导致的C2C12细胞凋亡,从而为临床防治心血管疾病提供了新的信息。     

携带反义热休克蛋白70抑制人喉癌细胞的生长

目的 构建携带反义热休克蛋白70(HSP70)的重组腺病毒载体以用于喉癌的基因治疗研究.方法 将HSP70基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒PAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌Bj5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带反义HSP70的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASHSP70.结果 成功的构建携带反义HSP70的重组腺病毒载体系统,经测病毒滴度可达8×109.HSP70反义RNA阻断了Hep-2细胞的HSP70的表达,经Western blotting和免疫组化证实,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70,而对照和空载体组高表达HSP70.转染反义HSP70的腺病毒载体的Hep-2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰,而空载体组没有.结论 构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASHSP70可望有效地将反义HSP70导入人喉癌细胞株,为进一步研究喉癌基因治疗提供实验基础.     

真核双表达载体pIRES-CEA-HSP70的构建与鉴定

目的 构建癌胚抗原（CEA）与热休克蛋白70（HSP70）的真核双表达质粒，并检测其在体外的表达。方法 从结肠癌及正常肝组织中经RT-PCR扩增获得CEA及HSP70 cDNA，并将其定向克隆至真核双表达质粒pIRES中，重组质粒pIRES-CEA及pIRES-CEA-HSP70，经酶切及测序鉴定后，分别转染仓鼠卵巢细胞（CHO）；经RT-PCR及ELISA法检测，CEA和HSP70在CHO细胞中得到有效表达。结果 真核双表达载体pIRES-CEA-HSP70构建成功且CEA和HSP70在CHO细胞中得到有效表达。结论 真核表达载体pIRES-CEA-HSP70的成功构建为治疗CEA阳性肿瘤提供一定的实验基础。     

热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞Smac的释放及细胞凋亡

目的 :探讨热休克预处理 (heatshockpretreatment,HS)对过氧化氢 (hydrogenperoxide ,H2 O2 )所致心肌细胞凋亡及促凋亡分子线粒体释放的第二种Caspase激活物 (thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases ,Smac)从线粒体释放的影响。方法 :①采用H2 O2 (0 .5mmol/L)导致心肌细胞凋亡 ;②采用热休克预处理 (4 2℃ ,1h ,恢复 12h)诱导热休克蛋白表达 ;③采用Hoechst荧光染色 ,观察细胞凋亡发生并计算凋亡核百分率 ;④采用cas pase活性定量检测及Western blotting观察caspase 3,9的活化 ;采用免疫荧光及Western blotting检测细胞成分分离后Smac从线粒体的释放。结果 :①H2 O2 处理 2h ,Smac从心肌细胞线粒体释放入胞浆 ;处理 4hcaspase 3,9活性升高 ,12h达高峰 ;处理 2 4h心肌细胞明显出现凋亡 ,凋亡核百分率明显升高 ;②热休克预处理可诱导心肌细胞中HSP90 ,HSP70及αB 晶状体蛋白的表达增高 ;抑制Smac释放、caspase 3,9的活化及细胞凋亡的发生。结论 :线粒体信号通路在H2 O2 所致的心肌细胞凋亡中发挥重要作用 ;热休克预处理通过抑制上述通路而减轻H2 O2 所致的细胞凋亡 ,其机制与其诱导热休克蛋白表达、阻断Smac从线粒体向胞浆释放、抑制caspase 3,9的活化有关。     

热诱导HeLa细胞中HSP70蛋白的动态变化

目的研究不同温度热诱导后HeLa细胞热休克蛋白(heat shock protein70,HSP70)蛋白动态表达.方法 HeLa细胞经过不同温热(41℃ 1h、42℃ 1h、43℃ 1h、45℃ 30min)的诱导,以SDS-PAGE及Western印迹方法检测细胞裂解液中HSP70蛋白表达.结果热诱导后HSP70蛋白表达的高峰出现时间随诱导温度的提高逐渐后移(如:41℃ 8h、43℃ 16h),且41℃、42℃热诱导后蛋白表达于诱导后8～16h期间有持续高水平表达,而45℃ 30min热诱导细胞大部分于诱导后即时死亡,且仅有低水平的HSP70表达;高表达后HSP70一般于诱导后24～32h始恢复至正常细胞表达水平.结论温热诱导(41℃ 1h)短时间内即可产生高表达量HSP70,而较激烈热诱导(43℃ 1h、45℃ 30min)仅产生少量延迟表达的HSP70蛋白,且导致大量HeLa细胞死亡,此为临床肿瘤温热治疗提供了理论依据.     

热休克蛋白对烧伤后肾脏抗氧化酶的保护作用

目的 研究严重烧伤和热预处理大鼠肾脏热休克蛋白72(HSP72)表达，严重烧伤和热预处理后大鼠肾脏杭氧化酶的变化，讨论了热休克蛋白72的细胞保护机制。方法 将大鼠分为烧伤组，热休克预处理后烧伤组，对照组三组。观察对照及处理后1、3、6、12、24h共6个点；采用用免疫印迹观察蛋白质表达的变化。结果 (1)热休克预处理后大鼠肾脏热休克蛋白表达峰值是在12h，在24h其表达水平仍比正常对照高。(2)热预处理后大鼠肾脏MDA含量低于烧伤组；SOD、CAT活性高于烧伤组。结论 热休克蛋白具有保护肾脏抗氧化酶活性的作用，热预处理能够减轻严重烧伤后，肾损伤。     

热休克蛋白72在氧化应激所致急性乳鼠培养心肌细胞损伤中的作用

目的：探讨HSP72对氧化应激所致心肌细胞急性损伤的保护作用。方法：用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP72的表达，采用HSP72反义寡核苷酸阻断HSP72的表达。向原代培养的乳鼠心肌细胞中加入终浓度为0．5mmol／LH2O2，以模拟氧化应激。测定乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力。结果：氧化应激引起心肌细胞乳酸脱氢酶释放率明显升高，而细胞总蛋白质的合成降低。热休克预处理导致心肌细胞中HSP72表达明显增加，并使H2O2所致心肌细胞LDH释放率显著降低，细胞总蛋白质的合成基本恢复正常水平。HSP72反义寡核苷酸能在很大程度上阻断HSP72的表达及热休克预处理所所致的心肌细胞保护作用。结论：在热休克预处理减轻过氧化氢所致乳鼠心肌细胞急性损伤的作用中，HSP72发挥了主要作用。     

HSP70在严重烧伤大鼠心肌中的表达及其保护作用的研究

目的 研究热休克蛋白70(HSP70)在严重烧伤大鼠心肌中的表达变化规律，并观察诱导热休克反应对烧伤后心肌损害的保护作用。方法 72只Wistar大鼠随机分为单纯烫伤组(B组)、亚砷酸钠预处理组(SA组)，于致伤前及30％TBSAⅢ度烫伤后3、6、12、24、48h检测血清心肌钙蛋白Ⅰ含量变化，Western blot检测心肌组织HSP70蛋白表达情况。结果 大鼠严重烧伤后3h心肌组织HSP70蛋白表达显著升高，伤后48h达高峰。大鼠烫伤后3h血清心肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量即开始明显升高，伤后12h达高峰。亚砷酸钠预处理可显著诱导机体的热休克反应，SA组伤后多数时相点血清cTnⅠ含量显著低于B组，且波动幅度较小。结论 严重烧伤早期即可引起心肌组织HSP70蛋白表达显著增强，HSP70蛋白可能在烧伤后早期心肌损害中发挥其内源性抗损伤机制。     

热应激预适应对H2O2诱发乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的观察热应激预适应对H2O2诱发乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法用胰蛋白酶消化法分离Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,将其分为正常对照组(37℃无H2O2损伤),H2O2损伤组(37℃ H2O2损伤)和热应激组(42℃ H2O2损伤).测定3组细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶(SDH)比活力、细胞色素C氧化酶(CCO)比活力;应用免疫组化技术检测热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果与正常对照组比较,H2O2损伤组的SDH、CCO比活力显著下降(P<0.05);而热应激组下降不明显(P＞0.05).并且,HSP70仅在热应激组中大量表达.结论 H2O2能够引起乳鼠心肌细胞损伤;而热应激预适应对其具有保护作用,其保护机制可能与热应激时HSP70的大量表达有关.     

热休克蛋白70对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的影响

目的:研究热休克蛋白70(HSP 70)对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的影响,探索HSP对脑复苏的可行性。方法:将46只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组与干预组,假手术组不进行模型制作及治疗干预;模型组仅制作心搏骤停(SCA)并心肺复苏动物模型,不进行治疗干预;干预组大鼠在SCA并心肺复苏模型制作后静脉注射HSP 70。分别于6、12 h后检测各组大鼠脑海马区神经细胞凋亡数目、Bcl-2蛋白表达量,对比分析各组大鼠神经细胞凋亡情况的差异,验证HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的保护作用。结果:HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞具有保护作用,能减少神经元细胞凋亡数目,增加Bcl-2蛋白表达。结论:HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞有保护作用,对脑复苏具一定的治疗前景。     

腺病毒介导的热休克蛋白70表达对神经元氧化应激损伤的保护作用

目的探讨重组腺病毒介导的HSP70表达对过氧化氢（H2O2）诱导的神经元和胶质细胞损伤的保护作用。方法用携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70感染体外培养的神经元和胶质细胞,RT-PCR、West-ern blotting检测靶细胞中外源性HSP70的表达。vAd-HSP70感染组、vAd-GFP感染组和未感染组细胞经0.5 mmol/L的H2O2处理后,MTT检测细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒检测细胞培养上清液中LDH活力,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果vAd-HSP70感染组的细胞可检测到外源性HSP70基因表达。H2O2处理后,vAd-HSP70感染组细胞活力较其他组明显增强（P〈0.01）,vAd-HSP70感染组、vAd-GFP感染组、未感染组细胞培养上清液中LDH活力分别为（976&#177;106）、（1 332&#177;197）、（1 380&#177;121）,差异有统计学意义（P〈0.01）。电镜结果显示,vAd-HSP70感染组细胞膜较vAd-GFP感染组和未感染组完整清晰,无明显线粒体肿胀及细胞核溶解等不可逆损伤情况。结论腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗H2O2损伤,具有明确的细胞保护作用。     

去甲肾上腺素诱导热休克蛋白70保护心肌细胞的机制

目的探讨去甲肾上腺素预处理心肌细胞后诱导心肌热休克蛋白70(HSP70)的表达及其对心肌细胞保护作用机制。方法 Wistar大鼠乳鼠心肌细胞培养,分为3组:对照组:心肌培养3～5天未施加任何因素;缺氧/复氧组:心肌细胞培养3～5天后,模拟缺氧(加入饱和氮气pH 6.8 D-Hank’s液培养细胞)3 h,复氧(用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞)孵育6 h;去甲肾+缺氧/复氧组:模拟缺氧前30 min加入100 nmol/L去甲肾,其它同缺氧/复氧组。测定心肌HSP70和bcl-2以及相关的细胞凋亡指标。结果 HSP70和bcl-2的表达在去甲肾+缺氧/复氧组明显高于缺氧/复氧组,去甲肾+缺氧/复氧组的细胞凋亡率明显低于缺氧/复氧组。结论去甲肾上腺素预处理可能通过诱导心肌组织HSP70和bcl-2高表达,发挥其对供心的保护作用。     

艾灸对急性胃黏膜损伤大鼠HSP60、HSP70表达的影响

目的观察艾灸中脘、足三里穴对急性胃黏膜损伤模型大鼠胃黏膜上皮HSP60、HSP70表达的影响。方法 32只SD大鼠完全随机分为空白组、模型组、艾灸穴位组和艾灸非穴位组。艾灸预处理大鼠8 d无水乙醇灌胃,造急性胃黏膜损伤模型。采用免疫组织化学法检测HSP60、HSP70的表达。结果与空白组比较,模型组中胃黏膜损伤指数、HSP60表达明显升高(P<0.01)。与模型组和艾灸非穴位组相比,艾灸穴位组胃黏膜损伤指数明显降低(P<0.01),HSP60、HSP70过度高表达(P<0.01)。结论艾灸中脘、足三里穴预处理能够降低无水乙醇对胃黏膜的损伤指数,诱导HSP60、HSP70的过度表达,减少伤害性刺激,从而起到保护胃黏膜的作用。艾灸穴位要比非穴位的作用更加明显,说明艾灸对胃黏膜保护作用具有一定的穴位特异性。     

Zinc is a potent heat shock protein inducer during liver cold preservation in rats

Objective A simple liver cold preservation model was established to study the synthesis of heat shock protein 70 (HSP70) induced by zinc (ZnSO［4］,i.p.) and its protection during liver cold preservation in rat.Methods Male Wistar rats were divided into 5 groups (n=6).In control group rat received no pretreatment; in Zn-1 group, Zn-2 group, and Zn-3 group rats were pretreated with zinc sulfate at a dose of 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg respectively; and in H group rat received heat shock preconditioning (42.5℃×15 min).Livers were preserved in UW solution for 6, 12 and 24 h, respectively.HSP70 was analyzed by Western blot.Aspartate transaminase (AST) and lactate dehydrogenase (LDH) values of the perfusion solution and the histology of the liver were evaluated.Results HSP70 expression was markedly elevated after pretreatment with zinc and heat shock.AST and LDH values in the Zn-1, Zn-2 and H groups were significantly lower than those in the control group, respectively (P&lt;0.05).There was no significant difference among the three groups (P&gt;0.05), whereas the AST and LDH values in the Zn-3 group were much higher than those in the control group.Histology results showed that liver injury in the Zn-1, Zn-2 and H groups were minimal, while it was severe in the Zn-3 group.Conclusions Zn(2+) is a potent and feasible inducer of HSP expression and is able to protect liver from cold preservation injury.The proper inducing dosage of Zn(2+) ranged from 5 mg/kg to 10 mg/kg.The dosage of 15 mg/kg for Zn(2+) as a HSP inducer is not indicated for its severe toxicity to the liver.