日本血吸虫感染小鼠肝脏IL-2、TNF-α的表达及注射该因子后对肝纤维化的影响

目的 探讨小鼠感染日本血吸虫后不同时期肝脏白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平及注射该因子后对肝纤维化的干预。方法 小鼠感染血吸虫尾蚴后分3组,每组16只,其中2组于感染6wk后分别隔日注射(ip)IL-2和TNF-α连续4wk,另设未感染正常鼠为对照组,采用ABC免疫组织化学技术,利用多媒体病理图文定量分析,动态观察相关因子活性。结果 感染未处理组小鼠肝脏中IL-2和TNF-α含量随感染时间(8、11、14、18wk)延长而缓慢下降,而感染6wk后经腹腔注射IL-2或TNF-α组小鼠则随着相应因子的补充而显著上升,末次注射后1～8wk,肝内IL-2或TNF-α水平明显高于感染组和正常对照组(P<0.01),肝组织肉芽肿炎症反应及纤维化程度较对照组减轻。结论 小鼠6wk后(成虫排卵后)给予外源性IL-2或TNF-α注射,能诱导相应细胞因子表达增强,并有减轻肝脏炎症和肝纤维化的表现。     

IL-10 调节日本血吸虫感染小鼠肝脏炎症和纤维化的实验观察

目的 通过日本血吸虫感染小鼠模型,观察 IL-10 在日本血吸虫感染急性期的作用及其机制,为防治肝纤维化提供新的理论依据。 方法 采用腹部贴片法建立日本血吸虫感染的小鼠模型。 于小鼠感染后第 2 天开始,实验组注射 IL-10R 阻断抗体,对照组注射 Rat IgG1,每 2 周注射 1 次,6 周后取血清和肝脏样本检测分析肝脏纤维化相关指标。 血清用于检测 ALT;肝脏用于 HE、天狼星红染色,流式细胞术检测肝脏巨噬细胞亚群变化,定量 PCR、ELISA、CBA 检测肝脏局部炎症因子变化。 结果 实验组小鼠较对照组的血清 ALT 升高( t= 5. 505,P<0. 05),单个虫卵肉芽肿变大( t= 4. 817,P<0. 05),胶原沉积变多,肝脏促炎性 Ly6Chi 巨噬细胞增多( t= 27. 63,P<0. 05),肝脏局 部炎症因子 CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、TNF-α、IL-1b、IL-6、IL-12a 和 IL-12b 均升高。 结论 经 IL-10R 阻断抗体处理的日本血吸虫感染的小鼠表现出更加严重的炎症和纤维化表型,说明 IL-10 在调节日本血吸虫感染的肝脏炎症和纤维化方面有着极为重要的作用,为今后以 IL-10 为靶点治疗血吸虫病提供新的思路。     

消退素RvE1对日本血吸虫病肝纤维化小鼠外周血肝纤维化指标和细胞因子的影响

目的：通过检测模型小鼠外周血肝纤维化有关指标和细胞因子水平研究消退素RvE1对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的影响及其机制,从而探讨合理的防治策略。方法：用日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠,构建日本血吸虫病肝纤维化模型。感染5wk后,将造模组小鼠随机分为2组：模型对照组(血吸虫感染+NS.)、治疗组（血吸虫感染+RvE1）,以正常小鼠为正常对照组。感染10wk后取血标本,采用放射免疫法检测血清肝纤维化指标,包括Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）及层粘连蛋白（LN）;采用ELISA 法测定RvE1对日本血吸虫病肝纤维化小鼠血清中TNF-α和IFN-γ水平的影响。结果：感染10wk后,各组小鼠未见自然死亡,各组小鼠体重无明显变化,统计学分析无差异;感染10wk后,RvE1治疗组小鼠血清肝纤维化各项指标,包括Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原、透明质酸及层粘连蛋白水平,与模型对照组比较均有明显降低,有显著性差异（P<0.05）;感染10wk后,RvE1治疗组小鼠血清中促炎介质TNF-α水平较模型对照组有明显降低,有显著性差异（P<0.05）,而血清中抑炎介质IFN-γ水平较模型对照组有明显升高,有显著性差异（P<0.05）。结论：我们认为给予外源性RvE1可以通过抗炎及促进肝脏炎症消退,发挥抗日本血吸虫病肝纤维化的作用。     

日本血吸虫感染小鼠肝脏炎症反应与肠道菌群谱的相关性研究

目的 观察和分析C57BL/6J小鼠感染日本血吸虫后肝脏病变与肠道菌群变化的相关性。方法 将10只6周龄的C57BL/6J小鼠随机分为健康对照组和日本血吸虫感染组。感染组每只小鼠感染(15(1)条日本血吸虫尾蚴。在感染后的第7周解剖小鼠,取肝脏组织,1)经石蜡包埋后进行HE和Masson染色检查;2)采用比色法测定羟脯氨酸(HYP)含量;3)提取肝组织的mRNA,采用RT-PCR检测炎症因子IL-1b和TGF-b的mRNA水平;4)留取小鼠粪便,委托华大基因公司进行微生物多样性检测。结果 小鼠肝脏切片经HE和Masson染色后检查,感染组平均单个肉芽肿和胶原面积在感染后7周分别为148 532μm²和193 209μm²。健康对照组和感染组羟脯氨酸含量分别为0.18和0.34μg/mg,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测健康对照组和感染组炎症因子IL-1b mRNA相对表达量分别为1.06和8.33,差异有统计学意义(P<0.01);纤维化因子TGF-bm RNA相对表达量分别为1.05和9.58,差异有统计学意义...     

盐酸法舒地尔抗日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用

目的观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化以及肝星状细胞(hepatic stel-late cells,HSCs)的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,分别为健康对照组、感染组和干预组,感染组和干预组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(14±2)/只,感染后6周,干预组给予盐酸法舒地尔(10 mg/kg)腹腔注射,2次/d,连续7 d,健康对照组和感染组注射等体积生理盐水。末次注射12 h后剖杀小鼠,分别取健康对照组和感染组小鼠肝脏固定、切片,苏木素-伊红(HE)染色或天狼星红染色后镜下观察。检测3组小鼠肝脏羟脯氨酸(hydrox-yproline,Hyp)含量,以及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原α1链(typeⅠcollagenα1,Col1α1)和上皮细胞转化序列2(epithelial cell transforming sequence 2,Ect2)的mRNA水平。采用原位灌注密度梯度离心法分离肝星状细胞,检测α-SMA、Col1α1和Ect2的mRNA水平。结果感染组小鼠肝内汇管区和虫卵肉芽肿周围炎症...     

PD-1/PD-L1及相关炎症因子在细粒棘球蚴感染致肝损伤中的免疫调节作用北大核心CSCD

目的探讨程序性死亡受体-1(programmed cell death receptor 1,PD-1)、程序性死亡受体配体1(programmed cell death-Ligand-1,PD-L1)及相关炎症因子在棘球蚴感染免疫损伤中的免疫调控机制。方法将BALB/c小鼠分为2个组:对照组(40只)、模型组(40只)。采用原头蚴腹腔注射制备细粒棘球蚴感染模型,腹腔接种后2 d、8 d、1个月、3个月、6个月时每组取8只小鼠行内眦静脉取血,采用流式细胞术微球阵列法试剂盒(Cytometric Bead Array,CBA)检测小鼠外周血中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素17A(interleukin-17A,IL-17A)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。取肝脏进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,采用免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织中PD-1、PD-L1的表达。结果对照组腹部未见异常。模型组小鼠腹部出现明显膨隆,腹腔中有包囊。对照组小鼠肝组织结构正常,模型组小鼠6个月时肝脏有大片肝细胞坏死变性,可见大量炎性细胞浸润。对照组小鼠肝组织PD-1、PD-L1表达均呈阴性,模型组小鼠3个月时肝脏开始出现明显PD-1表达的阳性细胞,主要位于肝损伤区域,6个月时小鼠PD-1的表达主要集中于肝坏死区域周围,可见明显增多的阳性细胞存在。模型组2 d和8 d时均可见PD-L1表达的大量阳性细胞,1个月肝脏PD-L1呈低表达,3个月开始表达又升高。模型组小鼠TNF-α在感染2 d时高于对照组(t=15.587,P<0.05),后开始下降,从3个月开始时TNF-α升高,至6个月时达高峰,模型组小鼠血清中IL-17A在感染8 d时高于对照组(t=0.067,P<0.05),后一直呈上升趋势,至6个月时达高峰,IL-6在感染2 d开始即高于对照组,6个月时达高峰。结论IL-6、TNF-α、IL-17A参与了细粒棘球蚴感染导致的炎症反应。细粒棘球感染模型小鼠肝脏出现高表达的PD-1/PD-L1,随着时间延长,PD-1表达逐渐增强,尤其是细粒棘球蚴感染早期,PD-L1高表达,PD-1、PD-L1在感染前期、中期就开始发挥负调节作用,可进一步促进棘球蚴组织在体内迅速生长,参与肝脏的损伤作用。在细粒棘球蚴感染早、中期,阻断PD-1/PD-L1信号通路,将有助于抗棘球蚴感染。     

熊去氧胆酸减弱日本血吸虫诱导的肝纤维化

目的研究熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)对血吸虫肝纤维化的治疗作用.方法正常6-8周龄♀C57BL/6J小鼠67只,随机分为正常组、感染组、感染组+UDCA1、感染组+UDCA2、感染组+UDCA3,每组13-14只.小鼠经腹部感染构建肝纤维化模型.各组给予相应浓度UDCA溶液,灌胃8 wk后,检测血清损伤指标天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、纤维化指标透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN),胶原纤维染色(Masson三色染色)观察各组胶原纤维面积比变化;免疫组织化学法检测Col1及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在小鼠肝组织中的表达.结果8 wk后,UDCA处理后,血清AST、ALT、HA和LN有明显降低(P0.05);肝组织纤维间隔变细或消失,形成弥漫性肝硬化结节减少,胶原面积比降低(P0.05);免疫组织化学结果显示,用药后Col1及α-SMA阳性表达减少,图像软件半定量分析结果显示差异有显著性(P0.05),且这种结果有浓度依赖性.结论UDCA对血吸虫肝纤维化有明显的改善作用,主要是通过保护肝脏、减轻肝损伤,降低细胞外基质合成等途径减弱肝纤维化的进程.     

芍药苷对日本血吸虫病肝纤维化小鼠CTGF PDGF及TNF-α的影响

目的观察芍药苷对日本血吸虫感染小鼠肝脏结缔组织生长因子（CTGF）、血小板衍化生长因子（PDGF）蛋白表达水平和血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平的影响,探讨芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿及纤维化的作用机制。方法小鼠随机分为A～E5组,A组不感染血吸虫尾蚴,为正常对照组;B、C、D、E4组小鼠感染尾蚴后6周以吡喹酮灌胃杀虫,剂量为400mg/（kg·d）,连续2d。B、C、D3组杀虫后给予芍药苷,剂量分别为30、60、120mg/（kg·d））,E组不给芍药苷,为感染对照组。5组小鼠均在芍药苷给药8周后处死,取血及肝脏。HE及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度,采用免疫组化技术检测CTGF和PDGF蛋白表达情况,采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α水平。结果芍药苷高剂量的D组与感染对照E组相比,肝组织中CTGF和PDGF蛋白表达明显减少,血清中TNF-α水平也明显下降（P均〈0.05）;而中、低剂量B组和C组的CTGF、PDGF和TNF-α水平亦较E组减少,但差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论芍药苷抗血吸虫病肝纤维化作用呈剂量依赖性,在吡喹酮杀虫处理基础上联合应用高剂量芍药苷,可通过减少肝组织CTGF和PDGF蛋白表达,降低血清中TNF-α水平,减轻肝纤维化程度。     

帕金森病小鼠黑质纹状体小胶质细胞活化表达的炎性因子与多巴胺含量的关系

目的探讨帕金森病(PD)模型小鼠中活化的小胶质细胞(MG)诱导表达肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-1β、前列腺素E2(PGE2)及一氧化氮(NO)与黑质纹状体多巴胺含量的关系。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为:模型组20只,腹腔注射百草枯;对照组20只,腹腔注射生理盐水。观察两组小鼠行为活动。分别于腹腔注药后3、6 w处死小鼠,高效液相法测定小鼠黑质纹状体多巴胺含量;免疫组织化学法检测黑质部位MG胞数、TNF-α、IL-1β、PGE2及NO表达。结果腹腔注药后3 w和6 w模型组小鼠脑内多巴胺含量均较对照组明显减少(P<0.05);6 w后模型组小鼠黑质致密部MG较对照组明显增加,TNF-α及IL-1β表达较对照组明显增加(P<0.05)。3 w和6 w后模型组与对照组PGE2及NO表达无明显变化。结论 MG增生、活化及其表达的炎症因子TNF-α和IL-1β,是导致PD发病的重要环节。     

夏枯草硫酸多糖对异烟肼所致小鼠抗结核药物性肝损伤的保护作用及机制

[目的]分析夏枯草硫酸多糖对异烟肼所致小鼠抗结核药物性肝损伤的保护作用,并探究其可能的机制。[方法]将24只SPF级雄性C57 BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组和实验组,每组8只。模型组和实验组每日定时予以异烟肼100 mg/kg灌胃1次。实验组于异烟肼灌胃前予以夏枯草硫酸多糖100 mg/kg灌胃预处理,每4 d灌胃1次,共3次。异烟肼处理2周后处死小鼠,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;肝脏匀浆后检测肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;苏木精-伊红染色观察肝脏组织病理形态学的改变;RT-qPCR技术检测肝脏组织白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;Western blot技术检测肝脏组织IL-6和TNF-α蛋白的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组和实验组小鼠血清AST、ALT活性水平和肝组织MDA含量升高(P0.001),肝组织SOD活性降低(P0.001),IL-6和TNF-αmRNA和蛋白表达明显升高(P0.001),肝组织病理可见不同程度的肝细胞变性坏死及炎细胞浸润。实验组与模型组相比,小鼠血清AST、ALT活性水平和肝组织MDA含量降低,肝组织SOD活性升高(P0.001),IL-6和TNF-αmRNA和蛋白表达明显降低(P0.001),肝组织病理改变明显减轻。[结论]夏枯草硫酸多糖对异烟肼所致小鼠抗结核药物性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化应激反应、降低炎症反应有关。     

己酮可可碱对日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏TGF- β1和Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响

目的　研究己酮可可碱 (pentoxifylline,PTX)对日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)和 、 型胶原含量的影响。　方法　 4 0只血吸虫病肝纤维化小鼠均分 4组 ,对照组不作任何治疗。吡喹酮组 5 0 0mg/ (kg· d)治疗 2 d,高剂量 PTX组 36 0 mg/ (kg· d)治疗 8wk,低剂量 PTX组 180 mg/ (kg· d)治疗 8wk。应用免疫组化染色方法和多媒体彩色病理图文分析系统 ,观察不同剂量 PTX治疗前后肝脏 TGF-β1和 、 型胶原含量的变化。　结果　 PTX对 TGF- β1和 、 型胶原含量的影响与治疗剂量有关 ,高剂量 PTX组 TGF- β1和 、 型胶原含量明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,而低剂量 PTX组与对照组之间差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。　结论　高剂量 PTX治疗血吸虫病肝纤维化小鼠可显著降低其肝脏 TGF-β1和 、 型胶原的含量。     

Smads在日本血吸虫病小鼠肝纤维化形成过程中的表达

目的　从转录水平研究参与转化生长因子β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)信号传导的Smads分子在日本血吸虫病小鼠肝纤维化形成过程中的表达。　方法　以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠形成肝纤维化动物模型,分别于感染后第 8、12、16和24周取小鼠肝组织 ,作病理学检测,观察肝纤维化程度,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)的方法检测模型组和正常组小鼠肝组织中Smad2、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA水平。　结果　Smad 2mRNA水平在感染12周后表达下降(P<0.05),16周后恢复正常,2 4周后再次下降(P<0.05)。Smad 3mRNA水平在感染后 16周开始明显升高 ,达正常水平的2倍(P<0.05)。Smad4和Smad7的mRNA水平在肝纤维化形成过程中与正常组比较无明显差异。　结论　Smad3促进肝纤维化形成。Smad2对肝纤维化形成具有双效性 ,即感染初期属于促进因子 ,感染后期属于抑制因子。     

小鼠急性日本血吸虫病肝脏肉芽肿动态及脾细胞IL-4 mRNA水平的相应变化

本研究观察了小鼠急性日本血吸虫病肝脏肉芽肿的动态改变及在ConA或SEA体外诱导下小鼠脾细胞IL－4mRNA水平的相应变化。实验结果显示SEA刺激下牌细胞IL－4mRNA的动态变化与肝脏内芽肿的形成、发展及调节过程密切相关。在血吸虫成虫排卵前,无论ConA或SEA均不能诱导IL－4mRNA的转录。在感染后5周,肝脏肉芽肿开始出现．此时用RT－PCR法可以检测到IL－4mRNA的特异条带。感染后8周,肉芽肿炎症反应达高峰,SEA诱导的IL-4mRNA转录水平同时增高。感染10周以后,肉芽肿体积逐渐缩小,IL－4mRNA特异条带也同时消失。提示IL-4可能在肉芽肿的形成及调节过程中起重要作用。     

Therapeutic effect of interleukin-10 on CCl4-induced hepatic fibrosis in rats

AIM: To study the therapeutic effect of exogenous interleukin-10 on CCl4-induced hepatic fibrosis in rats and its possible mechanisms. METHODS: Fourty-seven SD rats were randomly divided into control group (group N) and CCl4-induced hepatic fibrosis model group (group C). After CCl4 was given for 9 wk, the model group was divided into three groups. Rats in group M were put to death immediately,rats in group T were treated with IL-10 for another three wk and then put to death, rats in group R recovered after three weeks and were then killed. The degree of hepatic fibrosis was measured by HE staining and histological activity index (HAI). Histological activity index (HAI), change of collagen types I and III were measured by Picrosirius staining. The expression of TNF-alpha, MMP-2 and TIMP-1 in liver tissue was measured by S-P immunohistochemistry. RESULTS: CCl4- induced experimental rat hepatic fibrosis model was established successfully. The degree of hepatic fibrosis was markedly lower in group T than in groups M and R, and there was no difference between the two groups.The expression of collagen types I and III was significantly suppressed in group T and was slightly suppressed in groups M and R. The positive levels of TNF-alpha, MMP-2 and TIMP-1 in group M increased significantly compared to those in group N (P<0.01). The positive signals decreased significantly in groups T and R (P<0.01),but positive score was significantly lower in group T than in group R (P<0.01). CONCLUSION: Exogenous IL-10 can reverse CCl4-induced hepatic fibrosis in rats. IL-10 may exert its reversible effects on hepatic fibrosis by blocking CCl4-induced inflammation,inhibiting expression of MMP-2 and TIMP-1 and promoting resolution of collagen types I and III.     

华支睾吸虫病患者细胞因子水平与肝功能关系的研究

目的　探讨华支睾吸虫病患者细胞因子水平与肝功能的关系。　方法　 47例确诊、但未经药物治疗的华支睾吸虫病患者 ,参照Child Pugh肝功能分级法 ,按照评分将其分成A ( 3～ 4分 ) 2 0例、B( 5～ 6分 ) 15例、C( 7～ 9分 )12例等 3组。用放射免疫法及双抗体夹心酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测血清白细胞介素 2 (IL-2 )、可溶性白细胞介素 2受体 (sIL-2R )、白细胞介素 8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) ;用全自动生化分析仪检测患者血清总胆红素(TBL)、血清白蛋白 (ALB)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)。并进行统计分析。　结果　华支睾吸虫病患者sIL-2R、IL-8、TNF-α水平明显高于健康人对照组 (P <0.0 5 ,P <0.0 5 ,P <0.0 1) ,而IL 2含量明显减少 (P <0.0 1)。随着患者肝功能受累程度的加重 ,sIL-2R、IL-8、TNF-α含量依次递增 ,IL-2含量依次递减 ,A组和C组间差异具有显著性意义 (P <0.0 5 )。sIL-2R、TNF α含量与其TBL(r =0.3 3 1　P <0.0 5 ,r =0.5 18　P <0.0 1)及ALT (r =0.475　P <0.0 1,r =0.2 85　P <0.0 5 )呈正相关 ,与ALB呈负相关 (r =-0.3 19　P <0.0 5 ,r =-0.665　P <0.0 1)。　结论　华支睾吸虫病患者细胞免疫功能降低 ,血清IL-2、sIL-2R、TNF-α水平与肝功能状态有一定关系。     

小鼠感染日本血吸虫后肝组织Bcl-2、Bax的表达及己酮可可碱对它的作用

目的 观察凋亡相关基因Bcl?鄄2、Bax在小鼠感染血吸虫后肝组织中的表达情况及己酮可可碱（pentoxi-fylline，PTX）对其作用。 方法 将40只小鼠随机分为4组，其中3组每只小鼠人工感染日本血吸虫尾蚴25条，1组感染后继续喂养10周，不作治疗，作为感染对照组；2组分别于感染后2周用PTX 360 mg/（kg·d）和180 mg/（kg·d）灌胃治疗8周；另1组不感染、也不接受药物治疗，与上述3组同步喂养10周，作为正常对照组。10周后将上述4组小鼠分别剖杀取肝组织，光镜观察肝组织病变；用免疫组化染色方法检测小鼠肝组织中Bcl-2、Bax的水平。 结果 感染对照组中Bcl?鄄2和Bax的表达水平较正常对照组明显增加（P＜0.05）。高剂量PTX治疗组Bcl-2水平明显高于低剂量PTX治疗组和感染对照组（P＜0.05）。而Bax的表达水平在感染对照组、低剂量PTX治疗组、高剂量PTX治疗组等3组间差异无统计学意义（P＞0.05）。同时高剂量PTX治疗组肝组织变性坏死及纤维化程度较低剂量PTX治疗组和感染对照组轻。 结论 高剂量PTX可能通过促进Bcl-2表达，减少肝细胞的变性坏死，阻断血吸虫肝纤维化的发生。     

日本血吸虫副肌球蛋白合成肽的免疫学鉴定

目的 鉴定日本血吸虫副肌球蛋白合成肽Sj97-P22。 方法 27只雌性C57BL/6小鼠随机均分为合成肽Sj97-P22免疫组、无关肽免疫组和PBS免疫组,分别于尾基部皮下注射与完全福氏佐剂等体积充分混匀的合成肽Sj97-P22（100 μg）乳化物、无关肽（100 μg）乳化物和PBS乳化物,抗原免疫剂量为100 μg/（只·次）,共免疫2次,间隔1周。于免疫后7~10 d分离各组小鼠脾单个核细胞,运用流式细胞技术三色标记法检测其CD4^＋ T细胞胞内因子干扰素γ（IFN-γ）和白介素4（IL-4）。将Sj97-P22免疫小鼠或PBS免疫小鼠的脾单个核细胞分别与Sj97-P22、无关肽或PBS共培养,采用3H-TdR掺入法观察细胞增殖效果,并用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、IFN-γ和IL-4的浓度。 结果 Sj97-P22免疫组小鼠脾脏CD4⁺ T细胞中胞内分泌IFN-γ的细胞百分率为（8.05±0.54）%,显著高于无关肽免疫组[（4.74±1.04）%]和PBS免疫组[（6.51±0.49）%] （P＜0.05）;而分泌IL-4的细胞百分率[（0.60±0.11）%]显著低于PBS免疫组[（1.31±0.27）%]（P＜0.05）,与无关肽免疫组[（0.84±0.08）%]间的差异则无统计学意义（P＞0.05）。Sj97-P22可明显刺激Sj97-P22免疫小鼠脾单个核细胞增殖,增殖指数达到3.12±1.59,细胞培养上清中IL-2和IFN-γ浓度分别为（9.13±1.54）和（39.75±9.69）pg/ml,与无关肽和PBS刺激相比显著升高（P＜0.05）,而IL-4浓度在3个刺激物间的差异无统计学意义（P＞0.05）。Sj97-P22不能刺激PBS免疫鼠脾单个核细胞增殖及培养上清中IL-2、IFN-γ及IL-4浓度变化。 结论 Sj97-P22可能是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导小鼠抗雌虫生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫云南株未成熟卵可溶性抗原（SIEA）免疫小鼠产生的抗雌虫生殖效果及作用机制。 方法 3 000条日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤感染家兔,第34天收集兔肝中的未成熟卵制备SIEA。20只ICR小鼠随机分为两组,免疫组（11只）每鼠背部皮下多点注射SIEA（100 μg/只）,对照组（9只）给予等量生理盐水,每2周免疫1次,共5次。末次免疫后1周,用（30±2）条血吸虫尾蚴攻击感染每只鼠。第45天收集小鼠粪便,第46天剖杀小鼠,心脏灌注法收集成虫,比较成虫数及粪便、肝组织、雌虫子宫内虫卵数和肝表面虫卵结节密度;透射电镜观察雌虫卵黄腺及雄虫睾丸组织。 结果 免疫组与对照组检获成虫数差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组小鼠每克粪便每条雌虫虫卵数、每克肝组织每条雌虫虫卵数、每条雌虫子宫内虫卵数及肝表面虫卵结节密度分别为（56.68±24.78）个、 （5 826±437）个、 （49.94±12.53）个和（10.04±1.13）个/0.25 cm2; 对照组分别为（89.93±32.18）个、 （10 016±3 541）个、（76.54±19.77）个和（19.22±2.45） 个/0.25 cm2,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜观察显示,与对照组相比,免疫组小鼠体内雌虫卵黄腺内成熟卵黄细胞和脂滴减少,雄虫睾丸组织内支持细胞多见而精细胞较少,且卵黄细胞和支持细胞胞质内出现空泡。 结论 SIEA可能通过抑制日本血吸虫生殖细胞的成熟而产生抗雌虫生殖免疫效应。     

日本血吸虫病小鼠肝纤维化过程中VI型胶原的表达变化

目的:阐明血吸虫病肝纤维化时肝脏Ⅵ型前胶原m RNA表达和胶原含量的变化。方法:采用Northern核酸分子杂交和免疫组化技术。结果:小鼠感染后8 wk 时,肝内α1(Ⅵ)前胶原m RNA的表达量显著增加,10 w k时,其表达值达高峰,12～16 w k,略有下降,但直至20 wk 仍维持在较高水平。免疫组化染色显示,肝内Ⅵ型胶原在感染后8 wk 时出现于中央静脉周围和肝窦壁,10 w k 时,在肝组织内继续增多,12 w k 时虫卵肉芽肿内明显着色,16 w k 时,其含量达高峰,20 wk 时,广泛分布于汇管区、虫卵肉芽肿内及其周围,并形成致密的网络间隔。结论:血吸虫病肝纤维化形成过程中肝脏α1(Ⅵ)前胶原m RNA 表达和胶原含量均有显著增加,表明Ⅵ型胶原的检测对血吸虫病肝纤维化的评估可能有重要价值     

Changes of inflammation-associated cytokine expressions during early phase of experimental endotoxic shock in macaques

AIM: To study changes of inflammation-associated cytokine expressions during early phase of endotoxic shock in macague. METHODS: Experiments were performed in Macaque mulatta treated with LPS 2.8 mg/kg in shock model group or with normal saline in control group. Blood samples were collected before, or 60 min, or 120 min after LPS injection, respectively. Liver and spleen tissues were obtained at 120 min after LPS injection. The plasma levels of TNF-α,IL-1 β, IL-10 and IL-12P40 were determined by double-antibody sandwich ELISA with antibodies against human cytokines. The mRNA levels of TNF-α, IL-1 β, and IL-18 in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), liver and spleen were examined by real-time fluorescence semi-quantitative RT-PCR with the primers based on human genes. RESULTS: Mean systemic arterial pressure (MAP), systemicvascular resistance index (SVRI) and left ventricular work index (LVWI) of macaques were significant declined in shock model group on average 60 min after LPS injection. The plasma levels of TNF-α and IL-10 were significantly increased 60 min after LPS injection and then decreased. The plasma levels of IL-1 β and IL-12P40 were significantly increased at 120 min after LPS injection. The mRNA levels of TNF-α and IL-1 β were significantly increased 60 min after LPS stimulation in PBMCs and 120 min after LPS stimulation in livers. The mRNA level of IL-18 was significantly increased 120 rain after LPS stimulation in PBMCs and livers. But in spleen, only TNF-α mRNA level in LPS group was significantly higher 120 min after LPS stimulation, compared with that in control group. CONCLUSION: An endotoxic shock model of Macaque mulatta was successfully established. Both antibodies for ELISA and PCR primers based on human cytokine assays were successfully applied to detect macaque cytokines. In the model, inflammatory cytokines, such as TNF-α, IL-1 β,IL-12 and IL-18 as well as anti-inflammation cytokine IL-10, were released at very early phase of endotoxic shock within 120 min after LPS injection. PBMCs and liver cells might be the important sources of these cytokines.