安阳市首次分离到产毒O157:H7菌株的PCR鉴定

目的:鉴定从生羊肉中分离到的大肠杆菌O157:H7菌株的毒性基因和rfbO157、flicH7特异性基因。方法:PCR技术同时检测大肠杆菌O157:H7的四种毒性基因和rfbO157、flicH7特异性基因。结果:可疑菌株含有鞭毛H7基因(fli-cH7),志贺毒素2(stx2)基因,溶血素基因(hlyA),肠上皮细胞纤毛清除素基因(eaeA)和O157:H7特异性基因(rfbO157),但不含有志贺毒素1(stx1)基因。结论:菌株为产志贺毒素大肠杆菌O157:H7血清型。     

产志贺毒素大肠杆菌毒力基因检测

目的 分析河南省2000～2002年分离的351株与产志贺毒素大肠菌(STEC)感染有关的菌株，了解不同来源标本各种毒素基因携带模式。方法 应用多重PCR技术，检测所有菌株志贺毒素(stx1和stx2、hlyA、eaeA、rfbO111和rfbO157基因。结果 351株待检菌株分为枸橼酸杆菌、O157：H7大肠杆菌、rfbO157基因阳性不携带志贺毒素基因的大肠杆菌和rfbO157基因阴性携带志贺毒素基因的大肠杆菌4种不同类型。4种类型菌株具有6种rebO157、stx2、stx1基因模式。携带志贺毒素基因的菌株主要源自波尔山羊、普通本地羊和病人，其它家畜家禽中有不同程度感染STEC。结论 河南省存在STEC的感染．主要以O157：H7大肠杆菌为主，但也存在其它非O157的STEC。     

河南省新发传染病EHEC O157:H7监测研究

[目的]了解河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻的发病情况、宿主带菌状况、食品污染程度及志贺毒素(stx)基因型,为制订有效的防治对策提供依据。[方法]采集河南省监测点腹泻病人、家畜、家禽粪便,水和肉食品等标本分离EHEC菌株,应用分子生物学技术检测分析菌株rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2和stx1等毒力基因和突变基因。[结果](1)从腹泻病人、家畜、家禽、食品、水、蜣螂和苍蝇中均分离出EHEC菌株共275株,总分离率7.88%;其中O157︰H7菌株为232株(84.36%),携带stx2基因EHECO157︰H7菌株88株(37.93%);非O157︰H7菌株43株(15.64%)。(2)宿主动物中羊带菌率最高(6.96%),是河南省EHEC最主要宿主动物;多重PCR检测出8种不同毒力基因组合型,主要为rfbO157 、hlyA 、eaeA 、stx2 组合。stx2变种毒素GK探针检测出3种毒素变种杂交带型,其中stx2原毒素 stx2vha型占7.4%,stx2vha型的占72.2%,未知新杂交带型占20.4%。(3)EHECO157︰H7菌株可分为9个PFGE型,自羊、牛、鸡和蜣螂和腹泻病患者中分离的携带stx2vha菌株同属一个PFGE型。(4)144株不携带志贺毒素的O157菌株中发现O157︰H38、O157︰H42和O157︰Hund(未确定型)新菌株。[结论]河南省家禽、家畜中普遍携带EHECO157︰H7大肠杆菌,羊是最主要的宿主动物;EHECO157︰H7为我省优势菌型,其毒素基因型为stx2-eaeA-hlyA并以stx2vha亚型为主。EHEC在外环境中污染严重并可在人与人、动物与人之间传播,家畜、家禽携带stx2 EHECO157︰H7率的高低与EHEC人群感染发病呈相关关系。     

福建省O157：H7大肠杆菌毒力及特征基因的初步研究

目的 对福建省分离的80株E.coli O157：H7菌株进行毒力及特征基因的检测分析。方法 应用聚合酶链反应（PCR），以志贺毒素基因（stx)，粘附抹平因子基因（eaeA)，溶血素基因（hlyA)，O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因（fliCH7)为靶基因进行检测。结果 福建省分离的O157：H7菌株毒力基因携带率为6．25％（5／80）。菌株毒力基因图谱为stx eaeA hlyA和eaeA hlyA。rfb O157基因阳性与O157血清型符合率为100％。结论 福建省分离的O157：H7菌株毒力基因携带率（6．25％）低于江苏省疾病高发地区（85．7％，P＜0．05）。     

济源市三例O157:H7大肠杆菌感染的追踪调查

目的 探讨腹泻病人携带大肠杆菌O157：H7的机率，观察带菌时间及预后，方法 采用流行病学监测方法发现病人，通过病人粪便mEC肉汤增菌14个小时，用胶体金免疫标记卡筛选，免疫磁珠法集菌，CHROMAGAR－O157：H7显色培养基分离，rfbO157、rfbO111、hlyA、stx1、stx2、exeA引物PCR扩增等方法进行病源菌分离，毒力因子鉴定。结果 从30例腹泻病人中分离出的4株O157：H7菌株，PCR rfbO157扩增均为阳性。其中二株具有stx2、hlyA、eaeA毒力基因，二株为O157：H7不产毒株，结论 O157：H7大肠菌是引起腹泻的重要病原体。     

河南豫东地区产志贺样毒素E.coli O157:H7感染病例的流行病学调查研究

[目的]探讨河南省局部地区腹泻病人感染及携带大肠杆菌O157：H7的情况，观察带菌时间及预后。[方法]采用流行病学监测方法发现病人，通过病人粪便mEC肉汤增菌14h、胶体金免疫卡筛选、免疫磁珠法集菌、CHROMAGAR—O157：H7显色培养基分离、rfbO157、rfbO111、hlyA、stx1、stx2、eaeA引物PCR扩增方法进行毒力因子测定等方法，观察、研究感染病人的发病和预后。[结果]从1303份腹泻病人中共分离出的38株O157：H7菌株，检出率2．9％，PCR rfbO157扩增均为阳性。其中2株具有stx2、hlyA和eaeA毒力基因，36株为O157：H7不产毒株。[结论]我省首次从病人中分离出O157：H7产毒株，病人发病后可于第3～8d内检出病原体。     

浙江省检出首例带stx2 O157:H7病人的报告

目前大多数学者认为肠出血性大肠杆菌O157：H7之所以能对人类致病，其致病因子为志贺毒素，并认为该毒素为肠出血性大肠杆菌（EHEC）所特有。浙江省于1997年首次在杭州人和动物中检出肠出血性大肠杆菌O157：H7后，又相继在宁波等地从动物中检出，但是都不带志贺毒素1（stxl）和志贺毒素2（stx2）。本次检出的病人为浙江省首次发现带有stx2毒素的肠出血性大肠杆菌O157：H7菌株。现报告如下。     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌0157：H7的分子生物学特性研究

目的：了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157：H7（HZI-11株）的分子生物学特性。方法：应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种。应用0157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因，进行菌株血清型的鉴定。应用多重Real-time PCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因。对菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型，并与国内代表菌株进行比较。ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性。结果：细菌生化鉴定为大肠埃希菌，山梨醇阴性。血清型为O157：H7。毒力基因stx2、hly和eae均阳性，stx1阴性。PFGE谱带同江苏分离O157：H7菌株几乎完全相同，带型的相似度为97％。结论：该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）O157：H7。与国内近年在江苏等地流行的STEC O157：H7菌株密切相关。STEC O157：H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁。     

12株疑似O157：H7大肠菌PER鉴定研究

目的：对12株疑似O157：H7大肠菌采用PCR法进行鉴定。方法：利用单一PCR和多重聚合酶链反应（mPCR）检测不同来源菌株志贺样毒素（stx1和stx2）、溶血素（hly）、粘附抹平因子（eaeA）、β-葡糖醛酸糖苷酶（uidA）、O157抗原编码（血E）、H7鞭毛抗原编码（niC）基因。结果：4株大肠菌rfbE和fliC基因检测为阳性，确认为EHEC O157：H7，其中1株菌株扩增出全部毒力基因，另3株菌株扩增出除stx1外其它全部毒力基因；2株大肠菌rfbE基因检测阳性，确认为O157：H7-大肠菌；其它均为非O157：H7其它大肠菌。结论：PCR技术的应用能对可疑O157：117大肠菌进行有效鉴定与分析，应成为今后病原学鉴定的主要技术手段。     

福建省食品污染物监测O157∶H7大肠杆菌的调查与分析

目的:对福建省食品中O157∶H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测。方法:按照《全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROM agar O157显色平板,血清和生化系列证实。结果:1 380件食品中分离到O157∶H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%。结论:福建省食品中存在O157∶H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157∶H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157∶H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分。     

福建省O157∶H7大肠杆菌毒力及特征基因的初步研究

[目的]对福建省分离的80株E. Coli O157∶H7菌株进行毒力及特征基因的检测分析.[方法] 应用聚合酶链反应 (PCR),以志贺毒素基因 (stx)、粘附抹平因子基因 (eaeA)、溶血素基因(hlyA)、O157抗原编码基因 (rfbO157) 和H7抗原编码基因 (fliCH7) 为靶基因进行检测.[结果] 福建省分离的O157∶H7菌株毒力基因携带率为6.25%(5 / 80). 菌株毒力基因图谱为stx+eaeA+hlyA和eaeA+hlyA.rfb O157 基因阳性与O157血清型符合率为100 %.[结论] 福建省分离的O157∶H7菌株毒力基因携带率 (6.25%) 低于江苏省疾病高发地区 (85.7%,P<0.05).     

PCR方法检测EHEC O157：H7的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因

目的：应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物，对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157：H7（EHEC O157：H7）检测鉴定，全面了解此类菌的致病力情况。方法：分纯并富集被鉴定菌株，首先以单克隆诊断血清学凝集，阳性者再经100℃水煮制成粗模板，应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及stx2及其变种5种基因，扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照。结果：45株被检测菌经PCR扩增检测，5种基因全部阳性的有10株，4种基因出现阳性的只有1株，3种基因阳性的有6株，2种基因阳性的有17株，1种基因阳性的有10株，1株菌的5种基因检测均为阴性。45株菌中和。，阳性的有44株fliCH7基因阳性的菌株有30株，hlyA阳性的菌株只有10株，eaeA阳性基因的菌株有21株，stx2及其变种阳性的也只有11株。结论：这次45株菌中有5株具有全部的5种基因，44株为EHEC O157，其中30株为EHEC O157：H7，这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性，而且能较全面地反应其毒力强度，适合于有条件的基层实验室开展。     

大肠埃希菌O157∶H7携带stx2::IS1203v基因研究

目的了解中国部分地区大肠埃希菌O157：H7菌株携带志贺毒素基因变异状况。方法采用聚合酶链反应扩增志贺毒素基因，使用核苷酸序列测定判断是否存在志贺毒素的新变种，用HeLa细胞毒性实验研究其细胞毒性的变化。结果1992—2002年中国部分地区分离到的289株产志贺毒素的大肠埃希菌O157：H7中有3株菌携带的志贺毒素2（stx2）基因有1．3kb的插入序列（IS）插入，且这段IS和IS1203变种（IS1203 variant，IS1203v）有100％的核苷酸序列同源性。IS1203v插入到3株大肠埃希菌O157：H7 stx2基因的位置及开放性读码框（ORF）方向有所不同。除此之外，3株菌原有的stx2基因序列完全一致且为Stx2原型毒素。和Stx2原型毒素相比，这3株携带stx2：：IS1203v基因的菌株对HeLa细胞的毒性明显降低。结论分离到IS1203v插入stx2基因的大肠埃希菌O157：H7菌株；IS1203v的插入可导致对HeLa细胞的细胞毒性降低。     

中国部分地区大肠埃希菌O157的分子分型及变异研究

目的了解出血性大肠埃希菌（EHEC）O157的分子流行特征和遗传变异关系并完善EHECO157：H7感染性腹泻监测制度。方法采用聚合酶链反应分析毒力基因的分布情况；用脉冲场凝胶电泳技术对1988-2005年部分地区分离到的249株EHECO157：H7（其中产志贺毒素的245株，不产志贺毒素的4株）和51株O157非H7进行分子流行病学分析。结果stx2基因在我国的EHECO157：H7菌株中有着很高的分布率，部分菌株携带stx2基因变种。300株O157共分为161种带型，其中51株O157非H7菌株共有42种带型，4株O157：H7非产毒株分别为4种带型，245株EHECO157：H7共有115种带型。结论EHECO157间的基因变异较大；产stx2原毒素的菌株和5衄2毒素发生变异的菌株带型相差较大。部分菌株之间存在着一定的交叉，说明虽然这两大类菌株有其特有的流行克隆系，但是它们的克隆系之间亲缘关系较近。     

鉴定大肠杆菌O157:H7特异基因的PCR方法

目的建立一种特异、灵敏鉴定大肠杆菌O157:H7的PCR检测方法。方法针对大肠杆菌O157:H7表面抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbO157、fliCH7设计引物,分别扩增出目的产物。结果利用建立的方法对4株大肠杆菌O157:H7菌及12株非大肠杆菌O157进行检测,rfbO157、fliCH7基因的特异性均为100%;rfbO157基因的灵敏度约为6×104cfu/ml;fliCH7基因的灵敏度可达6cfu/ml。结论本方法特异性好,为实验室鉴定大肠杆菌O157:H7提供了一种简单、容易操作的手段。     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7的分子生物学特性研究

目的:了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157:H7(HZ1-11株)的分子生物学特性.方法:应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种.应用O157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因,进行菌株血清型的鉴定.应用多重Real-timePCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因.对菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,并与国内代表菌株进行比较.ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性.结果:细菌生化鉴定为大肠埃希菌,山梨醇阴性.血清型为O157:H7.毒力基因stx2、hly和eae均阳性,stx1阴性.PFGE谱带同江苏分离O157:H7菌株几乎完全相同,带型的相似度为97%.结论:该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)O157:H7,与国内近年在江苏等地流行的STECO157:H7菌株密切相关.STEC O157:H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁.     

12株疑似O157:H7大肠菌PCR鉴定研究

目的:对12株疑似O157:H7大肠菌采用PCR法进行鉴定。方法:利用单一PCR和多重聚合酶链反应(mPCR)检测不同来源菌株志贺样毒素(stx1和stx2)、溶血素(hly)、粘附抹平因子(eaeA)、β-葡糖醛酸糖苷酶(u idA)、O157抗原编码(rfbE)、H7鞭毛抗原编码(fliC)基因。结果:4株大肠菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157:H7,其中1株菌株扩增出全部毒力基因,另3株菌株扩增出除stx1外其它全部毒力基因;2株大肠菌rfbE基因检测阳性,确认为O157:H7-大肠菌;其它均为非O157:H7其它大肠菌。结论:PCR技术的应用能对可疑O157:H7大肠菌进行有效鉴定与分析,应成为今后病原学鉴定的主要技术手段。     

不同来源产志贺毒素大肠埃希菌分布特征

目的探讨不同标本中产志贺样毒素大肠埃希菌（STEC）的分布特征。方法采集动物粪便、肉类食品和排污口污泥样品，常规分离大肠埃希菌，血清学分型，PCR鉴定产志贺样毒素（stx1，stx2）菌株。结果293份标本中鉴定出8株STEC，1株为产志贺毒素O157：H7型，2株为不产志贺毒素O157：H7型，5株为产志贺毒素非O157：H7型。结论STEC存在于不同来源的标本中，菌株表型与毒力因子存在一定差异。     

PCR方法检测EHEC O157∶ H7的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种基因

目的:应用当前国际上常用的rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA、stx2及其变种5对引物,对45株疑似肠出血性大肠埃希菌O157∶ H7(EHEC O157∶ H7)检测鉴定,全面了解此类菌的致病力情况.方法:分纯并富集被鉴定菌株,首先以单克隆诊断血清学凝集,阳性者再经 100℃水煮制成粗模板,应用PCR检测各菌株是否具有rfbO157、fliCH7、hlyA、eaeA及stx2及其变种5种基因,扩增结果经EB染色后在凝胶成像仪下观察特异性条带并拍照.结果:45株被检测菌经PCR扩增检测,5种基因全部阳性的有10株,4种基因出现阳性的只有1株,3种基因阳性的有6株,2种基因阳性的有17株,1种基因阳性的有10株,1株菌的5种基因检测均为阴性.45株菌中rfbO157阳性的有44株,fliCH7基因阳性的菌株有30株,hlyA阳性的菌株只有10株,eaeA阳性基因的菌株有21株,stx2及其变种阳性的也只有11株.结论:这次45株菌中有5株具有全部的5种基因,44株为EHEC O157,其中30株为EHEC O157∶ H7,这次选择的5种基因不仅能给被检测菌株定性,而且能较全面地反应其毒力强度,适合于有条件的基层实验室开展.     

应用高分辨率熔解曲线技术检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c

目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用。方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较。结果:20份O157:H7样品中有3种类型熔解曲线。测序结果显示,12例A型熔解曲线中除1例为stx2a+stx2c杂合型外,其它均为原毒素基因型stx2a;1例B型熔解曲线测序结果为stx2a+stx2c杂合型,7例C型熔解曲线菌株测序结果均为stx2c纯合子。结论:HRM技术简便、快速,可作为志贺毒素2基因变种stx2c的检测方法。