特发性血小板减少性紫癜患者调节性T细胞及Foxp3基因的检测

目的 研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量及Foxp3基因的表达水平,探讨它们在ITP发病机制中的作用.方法 分别收集30例ITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞.PE标记的抗CD4单抗,FITC标记的抗CD25单抗,作双色流式细胞术,分析ITP患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA表达水平.结果 ITP者外周血CD4+T、CD4+CD25+T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组(P﹤0.01),并且CD4+CD25+T细胞百分率与Foxp3mRNA水平呈正相关.结论 ITP患者外周血存在细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞数量与功能状态发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与ITP的发病机制有关.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞检测及其临床意义

目的：探讨检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血 CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性 T 淋巴细胞的水平与意义。方法采用流式细胞术检测32例 PBC 患者和23例健康体检者外周血 CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性 T 淋巴细胞亚群比例;采用实时荧光定量聚酶链反应（PCR）技术检测人叉头型基因 p3（Foxp3）mRNA 表达的水平。结果PBC 患者外周血 CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性 T 淋巴细胞明显低于对照组（P ＜0．05）;Foxp3的 mRNA 水平差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论PBC 患者外周血 CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性 T 淋巴细胞减少,免疫抑制功能减弱,提示 CD4＋ CD25＋ Foxp3＋调节性 T 淋巴细胞在 PBC 的免疫发病机制中可能起重要作用,对评估 PBC 患者细胞免疫状态和预后有重要价值。     

特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋Treg细胞的表达

目的：近年研究发现，CD4^＋CD25^＋Treg细胞不论数量缺失或功能紊乱均可导致免疫异常的发生，对调节性T细胞的深入认识，将会对免疫异常疾病如自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、过敏性疾病等发病机制的揭示有着深远的意义。实验将进一步验证CD4^＋CD25^＋Treg细胞与特发性血小板减少性紫癜发病的关系及可能机制。 方法：实验于2007—06／09在中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验室完成。①实验材料：中国协和医科大学血液病医院住院的特发性血小板减少性紫癜患者27例治疗前后外周血，患者确诊符合血液病诊断及疗效标准。正常人外周血15份，实验均征得患者或家属知情同意。②实验方法：应用流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者、正常对照、以及治疗前后患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。对其中治疗有效的23例患者，采用密度梯度离心法从治疗前后的外周血中提取单个核细胞，以RT—PCR方法检测其中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果：①特发性血小板减少性紫癜患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例以及CD4^＋CD25^＋Treg细胞在总CD4^＋T细胞中所占比例明显均低于正常对照组（P〈0．05）。②有效治疗后的特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例与治疗前相比无明显改变（P〉0．05），但Treg细胞中Foxp3mRNA的表达水平比治疗前明显增加（P〈0．05）。 结论：特发性血小板紫瘢患者体内存在CD4^＋CD25^＋Treg细胞的异常，数量的减少、Foxp3表达的降低所造成的CD4^＋CD25^＋Treg细胞免疫抑制功能受损可能是特发性血小板减少性紫瘢发病的一个重要因素。     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血调节性T细胞的研究

目的研究特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr细胞）的变化，探讨其在ITP发病机制中的作用。方法分别收集35例ITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血，分离纯化T淋巴细胞。应用藻红蛋白（PE）标记的抗CD4单抗及异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗CD25单抗，作双色流式细胞术，分析ITP患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞百分率。结果ITP组外周血中Tr细胞明显低于健康对照组（P〈0．05），Tr细胞占CD4^＋T细胞的比例也低于健康对照组（P〈0．05）。结论ITP患者外周血存在细胞免疫功能失调，Tr细胞数量减少可能与ITP的发病机制有关。     

半乳凝素-10在CD4^＋CD25^＋CD127^low／-调节性T细胞中的表达与意义

目的探讨半乳凝素-10(galectin-10)在CD4 CD25 CD127low/-调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中的表达及其与Foxp3的相关性。方法通过流式细胞术分选健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中Treg细胞与CD4 CD25-CD127 T细胞,经微量抽提RNA后,用RT-PCR检测galectin-10和Foxp3的mRNA表达水平。结果galectin-10和Foxp3的mRNA显著表达于Treg细胞,几乎不表达于CD4 CD25-CD127 T细胞。健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中的结果一致。结论ga-lectin-10基因高表达于Treg细胞中,可以作为Treg细胞一项新的标志物。     

自身免疫性甲状腺炎大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞变化及意义

目的研究CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞在自身免疫性甲状腺炎（AITD）大鼠外周血中的比例变化,并初步探讨其在疾病进程中的意义。方法选取17例A1TD大鼠,取静脉血,应用流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3^＋表达,并与甲状腺炎球蛋白抗体（TgAb）,甲状腺过氧化酶抗体（TPOAb）,甲状腺微粒体抗体（TmAb）和甲状腺组织活检结果作相关分析。取正常大鼠作为对照。结果AITD大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（5．35％±1．27％）显著低于正常对照组（8．02％±2．29％,P〈0．01）,AITD大鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞占CD4‘T细胞比例（3．12％±0．78％）明显低于正常对照组（6．45％±2．12％,P〈0．01）,AITD大鼠Treg与TgAb、TmAb、TPOAb呈负相关（r=-0．291,-0．357,-0．389,P〈0．05,0．05,0．05）,并与小鼠甲状腺组织的炎症程度呈负相关（r=-0．511,P〈0．01）;Foxp3mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化相一致。结论AITD大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了AITD的病理进程。     

哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的测定及临床意义

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在哮喘患者外周血的变化及意义。方法采用流式细胞术检测60例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达量,同时测定20例急性发作期哮喘患者的肺功能。结果哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的百分比明显低于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;急性发作期哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞明显低于非急性发作期患者,差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了哮喘的发生。     

肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布及临床意义

目的检测肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布，探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测45例肺癌患者和30例健康对照者外周血中的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化，并通过体外淋巴细胞增殖实验对肺癌患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞进行鉴定。结果（1）肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞比例明显增高（P〈0．05），但治疗后其比例明显下降（P〈0．05）；（2）肺癌患者CD4^＋CD25^＋T细胞能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖和干扰素γ的分泌。结论肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例明显增高，其动态监测有助于肺癌患者免疫状态及疗效评价。     

重组人源性白介素-2对耐多药结核病人外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞及TGF-β的影响

目的：探讨重组人源性白介素-2（recombinant human IL-2,rhIL-2）对耐多药结核（multidrug-resistant TB, MDR-TB）病人外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞及转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）含量的影响。方法选择MDR-TB病人40例,20例化疗,20例化疗＋rhIL-2皮下注射,流式细胞仪检测病人外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞含量,ELISA试剂盒检测外周血TGF-β的表达。结果 MDR-TB病人外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞与TGF-β含量显著相关,治疗后化疗＋rhIL-2组外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞及TGF-β含量分别下降（1.55±0.29）%和（18.97±2.11）%,与化疗组的（0.83±0.13）%和（10.98±1.04）%相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞及TGF-β在MDR-TB的发病中起重要作用,应用rhIL-2能够降低外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞及TGF-β的含量。     

CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞在重型乙型肝炎发病中的作用

目的探讨CD4＋、CD25＋调节性T细胞（CD4＋、CD25＋ Tr）在重型乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测重型乙型肝炎病人及对照组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的水平及应用PCR测定重型乙型肝炎病人及对照组外周血中HBVDNA滴度。结果重型乙型肝炎组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的百分率为（2.63±0.83）%,较慢性乙型肝炎组的（4.15±1.17）%差异有显著性（P〈0.05）,较无症状HBV携带者组及健康对照组差异有非常显著性（P均〈0.01）;重型乙型肝炎组外周血HBVDNA滴度为1.2×10^4copies/ml,较慢性乙型肝炎组（2.3×10^6copies/ml）和无症状HBV携带者（7.8×105copies/ml）差异有非常显著性（P均〈0.01）;不同乙型肝炎病人外周血CD4^＋、CD25^＋ Tr的百分率与HBVDNA滴度正相关。结论CD4^＋、CD25＋^ Tr能抑制T细胞对HBV的免疫反应;重型乙型肝炎患者发病与CD4^＋、CD25^＋ Tr表达过低有关。     

三阴性乳腺癌外周血及病灶微环境辅助性和调节性T细胞表达

目的分析三阴性乳腺癌(trip nenegative breast cancer,TNBC)患者外周血及病灶微环境辅助性T细胞和调节性T细胞的表达水平。方法选择2012年1—4月经临床及病理确诊的女性TNBC 34例(TNBC组)、非三阴性乳腺癌(NTNBC)39例(NTNBC组)及同期确诊为乳腺良性疾病女性患者27例(对照组),均检测外周血及病灶微环境辅助性T细胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)和调节性T细胞(CD4CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg),并进行比较。结果 TNBC组外周血及病灶微环境CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均明显低于NTNBC及对照组,而CD8+水平则明显高于其他两组(P0.05);TNBC组外周血及病灶微环境CD4CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg表达水平均明显高于NTNBC组及对照组(P0.05)。结论 TNBC患者存在明确的外周血及病灶微环境调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达,其可作为本病免疫学病因诊断及评估疗效的特征性标识,并为今后寻找TNBC免疫治疗途径提供试验数据。     

系统性红斑狼疮患者外周血天然调节性T细胞检测及临床意义

目的探讨流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋叉头状转录因子（Foxp3）^＋天然调节性T细胞的方法及其在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中改变的意义。方法建立三色流式细胞术检测天然调节性T细胞的方法，并检测了15例SLE患者和15名健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞比例以及CD4^＋细胞中CD25的表达水平。结果SLE患者外周血中天然调节性T细胞为（1．03±0．42）％，显著低于健康对照组的（5．88±1．40）％（P〈0．01）；CD4^＋淋巴细胞中CD25^＋细胞的表达水平[（5．92±3．80）％]也显著低于健康对照组[（32．01±5、70）％，P〈0．01]。结论三色流式细胞术适合检测外周血中天然调节性T细胞，SLE患者存在天然调节性T细胞免疫缺陷。     

溃疡性结肠炎大鼠C04^＋CD25^＋T细胞的改变

目的 探讨CD4＋CD25^＋T细胞的异常在大鼠溃疡性结肠炎动物模型发病机制中的作用。方法 40只Wistar大鼠分为正常对照组和溃疡性结肠炎模型组，应用三硝基苯磺酸／乙醇法建立溃疡性结肠炎的大鼠模型，进行粪便细菌培养，流式细胞仪分析其外周血单个核细胞（PBMC）和肠系膜淋巴结（MLN）中的CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋T细胞的比例，实时荧光PCR测定Foxp3 mRNA的含量。结果 （1）溃疡性结肠炎模型组大鼠PBMC中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显高于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显下降（P〈0．05），MLN中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显低于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显增高（P〈0．05）；（2）模型组大鼠PBMC中Foxp3 mRNA的含量明显增高（P〈0．05）；而MLN中Foxp3 mRNA的含量明显下降（P〈0.05）；（3）模型纽大鼠肠道菌群较正常对照有显著改变（P〈0．05）。结论 CD4^＋CD25^＋T细胞的异常在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用，其异常可能与肠道菌群的改变有关。     

Castleman′s病患者的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究

目的：探讨Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与疾病的关系。方法：用流式细胞术对14例Castleman′s病患者及30例正常对照的外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞的比例进行检测。结果：局灶型Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞和CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞比例在治疗前分别为（4.55±0.53）%、（0.73±0.09）%、（0.64±0.09）%;治疗后分别为（4.88±0.24）%、（1.0±0.10）%、（0.93±0.10）%,均低于正常对照组。治疗后这3种T细胞的比例较治疗前有显著升高（P〈0.05）。多中心型患者外周血中这3种T细胞比例在治疗前分别为（9.43±0.81）%、（2.79±0.17）%、（2.46±0.09）%;治疗后（8.82±1.01）%、（2.71±0.10）%、（2.23±0.10）%,均高于正常对照组。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在局灶型和多中心型Castleman′s病中的变化是不同的,这种不同的变化可能和这两型的临床表现和预后不同有关。     

子痫前期发病中CD4＋CD25＋Treg细胞与Foxp3的检测及意义

[目的]研究CD4＋ CD25＋调节性T细胞（CD4＋ CD25＋Treg细胞）和Foxp3基因表达与子痫前期发病的相关性.[方法]选择住院确诊的妊娠期高血压孕妇12例（A组）、轻度子痫前期（MPE）孕妇14例（B组）、重度子痫前期（SPE）孕妇15例（C组）,30例正常妊娠晚期孕妇为对照组（D组）,应用流式细胞术检测并比较四组外周血中CD4＋ CD25＋ Treg和 Foxp3的表达水平.[结果]A组、B组和C组孕妇外周血CD4＋ CD25＋ Treg 和Foxp3表达水平均显著低于对照组（P〈0.05） C组外周血CD4＋ CD25＋ Treg和Foxp3表达水平显著低于A组和B组（P〈0.05）.[结论]子痫前期患者体内存在CD4＋ CD25＋ Treg细胞的异常,CD4＋ CD25＋Treg细胞的数量的减少和Foxp3表达的降低使CD4＋ CD25＋Treg细胞免疫抑制功能减弱,从而使母胎免疫耐受失衡,导致子痫前期的发生.     

慢性丙型肝炎患者HCV-RNA含量与CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的相关性研究

目的探讨慢性丙型肝炎（CHC）患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞含量与HCV-RNA的相关性。方法用流式细胞仪检测80例CHC患者和30例健康对照者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞表达,荧光定量PCR检测HCV-RNA含量。结果 CHC患者外周血中CD4＋CD25＋Treg细胞明显高于健康对照组（P〈0.01）,且随HCV-RNA载量增高,患者外周血中CD4＋CD25＋Treg细胞的含量逐渐升高（P〈0.01）。CD4＋CD25＋Treg细胞与HCV-RNA取对数后呈正相关（r=0.588,P〈0.01）,与ALT呈正相关（r=0.306,P〈0.01）。结论 CHC患者外周血中CD4＋CD25＋Treg细胞增高,且与HCV-RNA含量及ALT升高具有一致性。     

人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA与T细胞CDA^＋CD25^＋Treg表达相关性探讨

目的探讨人外周血单个核细胞中FOXP3mRNA的表达与CD4^＋CD25^＋Treg表达的相关性。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录成mRNA,以β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4^＋CD25^＋Treg的比例。结果哮喘患儿组CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P〈0.01;FOXP3mRNA的表达也显著降低,P〈0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物。结论应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4^＋CD25^＋Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4^＋CD25^＋Treg发育障碍的重要因素。