下调VEGF-C基因对乳癌细胞增殖和凋亡影响

目的 应用经过化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体外抑制血管内皮生长因子C(VEF-C)基因的表达, 探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰技术对乳癌基因治疗的可行性和特异性.方法 设计针对VEF-C基因的siRNA,选用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000作为转染试剂,以脂质体转染法将双链siRNA导入人乳癌细胞株MCF-7细胞,设立空白对照组(只加无血清无抗生素培养基)、脂质体组(每孔只加LipofectamineTM 2000 0.5 μL)、3个siRNA浓度梯度组(50、100、200 nmol/L)及siRNA SCR组(100 nmol/L),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测siRNA对 MCF-7细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258 染色观察MCF-7细胞的凋亡,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测转染前后VEF-C基因和p53基因的 mRNA及蛋白表达变化.结果 转染VEF-C siRNA 8 h后MCF-7细胞生长受到抑制,Hoechst 33258荧光染色显示转染siRNA 72 h后细胞内可见凋亡小体.VEF-C基因和p53基因 mRNA和蛋白水平表达明显降低(F=30.7～11.11,q=5.7～20.75,P<0.01),空白对照组、脂质体组和siRNA SCR组各指标差异无显著性(P>0.05).结论 化学修饰的siRNA介导的RNA干扰能下调靶基因VEF-C的表达和抑制MCF-7细胞增殖,乳癌中p53与VEF-C表达有关,提示突变型p53可能参与VEF-C表达的调控.     

脂多糖对人脐血内皮祖细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对体外培养的人脐血内皮祖细胞(EPCs)增殖及凋亡的影响。方法:以密度梯度离心法获取人脐血EPCs,体外诱导分化并鉴定。实验分对照组及不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0mmol/L)LPS组。四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪测凋亡率及细胞周期。结果:110.0mmol/L组促进EPCs增殖,20.0 mmol/L组抑制EPCs增殖,差异有统计学意义(P<0.05),其余2组对EPCs增殖能力无显著影响,与对照组比差异无统计学意义(P>0.05)。220.0 mmol/L组促进EPCs凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。其余各组对EPCs凋亡率无明显影响,与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。310.0、20.0 mmol/L组影响细胞周期,10.0 mmol/L组G0/G1期细胞减少,S和G2/M期增加;20.0 mmol/L组发生S期阻滞,G2/M期细胞减少,与对照组比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS对EPCs增殖能力及凋亡的影响与其浓度有关,当浓度为20.0 mmol/L时抑制增殖并促进凋亡。     

抗VEGF抗体对骨肉瘤OS-732细胞血管生成及其肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的：探讨阻断血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF)的血管生成作用对骨肉瘤OS-732细胞及血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型,通过解剖显微镜血管计数,光镜HE染色,原位末端标记及PC-NA免疫组化检测观察VEGF抗体对骨肉瘤血管生成及肿瘤增殖,凋亡状态的影响。结果：VEGF抗体组肿瘤区血管数目及瘤细胞数显著低于PBS对照组,肿瘤细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,增殖指数两组差异不明显,同时VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期微血管内皮细胞少见。结论：VEGF抗体能显著抑制骨肉瘤OS-732血管生成,抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,可能是VEGF抗体发挥抗血管生成作用的途径之一,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,最终达到抑制瘤细胞生长的作用。     

多种病理因素对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响及VEGF的干预作用

目的 研究缺氧、H2O2、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞(VEC)增殖、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的干预作用,探讨VEGF预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄和支架内血栓形成的机制.方法 将VEC分成对照组、缺氧处理组、缺氧+VEGF处理组、H2O2处理组、H2O2+VEGF处理组、OX-LDL处理组、OX-LDL+VEGF处理组、TNF-α处理组和TNF-α+VEGF处理组.利用四氮唑盐比色法检测各组细胞吸光度值,观察VEC增殖情况,采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,通过RT-PCR法了解各组细胞凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/Fas mRNA表达情况.结果 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α处理组凋亡细胞和Apo-1/Fas mRNA表达明显多于对照组和相应VEGF处理组,而细胞增殖和Bcl-2 mRNA表达则明显低于对照组和相应VEGF处理组(均P<0.01).结论 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α能抑制VEC增殖,诱导VEC凋亡,而VEGF能部分拮抗上述作用,其抗凋亡作用可能与Bcl-2 mRNA表达上调和Apo-1/Fas mRNA表达下调有关,为VEGF用于预防PCI后再狭窄和支架内血栓形成进一步提供了理论依据.     

GSTP1表达下调促进膀胱癌细胞T24凋亡

目的 通过慢病毒表达系统,使用shRNA下调入膀胱癌T24细胞GSTP1基因的表达,研究其对T24细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 通过慢病毒表达系统,建立稳定低表达GSTP1基因的T24细胞株;进行CCK-8实验以及克隆形成实验,检测GSTPI表达下调对T24细胞增殖的影响;对细胞进行Annexin V-FITC/PI染色,使用流式细胞仪,检测GSTP1表达下调对T24细胞凋亡的影响.结果 与未处理组、对照组相比,GSTP1干扰组的T24细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡检测结果显示,GSTP1表达下调后明显促进T24细胞凋亡,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 GSTP1表达下调抑制膀胱癌细胞T24增殖,并其机制可能与促进T24细胞凋亡相关.     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响.方法 PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒.EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4 DNA连接酶将目的 基因片段和载体连接.电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌.厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24 h,MTT比色法测定细胞存活率.结果 PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达.与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01).结论 成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖.     

北五味子多糖对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨北五味子多糖(SCP)对体外培养人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养人膀胱癌T24细胞,分为对照组和50、100及200 mg·L^-1SCP组。不同剂量SCP干预24～48 h后,采用MTT法检测各组T24细胞增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色法检测各组T24细胞凋亡情况,AnnexinⅤ-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测各组T24细胞凋亡率,流式细胞术检测各组T24细胞不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组T24细胞中磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,50、 100和200 mg·L^-1SCP组T24细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01);T24细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);50、100和200 mg·L^-1SCP组T24细胞G0/...     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖及其周期的调控

目的：通过莲心碱作用于膀胱癌细胞T24,研究其对膀胱癌细胞T24增殖的影响。方法使用不同浓度的莲心碱处理膀胱癌细胞T24,通过CCK-8实验及克隆形成实验,检测莲心碱对细胞增殖的影响;对细胞进行 PI染色后,使用流式细胞仪,检测莲心碱对T24细胞周期的影响;通过实时定量PCR,检测莲心碱作用后T24细胞的 p21基因mRNA的改变。结果莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖有明显的抑制作用,各剂量组（1．5625、3．1250、6．2500、12．5000、25．0000μg/mL）与甲醇对照组差异有统计学意义（P＜0．05）,并呈剂量依赖性;细胞周期检测结果显示,莲心碱将 T24细胞阻滞在 S期;实时定量 PCR检测结果显示,莲心碱提高T24细胞 p21基因的mRNA。结论莲心碱对膀胱癌细胞T24具有增殖抑制并将其阻滞在 S期,该作用机制可能与 p21表达上调有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的相关信号通路等分子机制。方法应用光学显微镜和流式细胞仪检测EGCG作用T24细胞的凋亡诱导作用。采用Western blotting方法检测PI3K／Akt信号通路的改变;同时研究了caspase-3,PARP等蛋白在诱导细胞凋亡中的作用。结果EGCG作用于T24细胞24h后能明显诱导细胞凋亡,呈显著浓度依赖性。EGCG使T24细胞caspase-3和PARP均被激活;T24细胞phospho—Thr308-Akt和phospho—Ser473-Akt的表达逐渐降低,但tAkt未见改变。结论EGCG能诱导T24细胞凋亡,EGCG凋亡诱导作用可能和抑制P13K／Akt信号通路的激活有关。     

中华眼镜蛇膜毒素12对膀胱癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响*

目的 探讨中华眼镜蛇膜毒素12（MT-12）对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及自噬的影响。方法 ①采用CCK-8法检测不同浓度（0.10、0.25和0.50?μg/ml）的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120?h后,对膀胱癌RT4、T24细胞增殖能力的影响;②采用流式细胞术检测MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24?h后,对膀胱癌RT4、T24细胞凋亡的影响,主要观察细胞凋亡率的改变;③Pan-Caspase抑制剂和MT-12处理膀胱癌细胞后通过MTT法检测细胞活力;④通过GFP-LC3转染,观察自噬小体形成,通过Western blotting检测自噬标志物的表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120?h后,MT-12能抑制膀胱癌RT4、T24的细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24?h后,实验组可以增加凋亡细胞的比例。Pan-Caspase抑制剂V-ZAD-FMK对2株膀胱癌细胞系进行处理后,MT-12并未完全失去对膀胱癌的抑制效果。Western blotting和GFP-LC3转染检测结果显示,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,GFP-LC3转染结果自噬体（绿色荧光点）增多。结论 MT-12以浓度-时间依赖的方式抑制膀胱癌RT4、T24细胞的增殖能力,并诱导其调亡;MT-12能够引起细胞的自噬,并且自噬性的死亡可能发生在MT-12对膀胱癌细胞的抑制作用过程中。     

染料木黄酮诱导膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的　研究染料木黄酮对人T2 4膀胱癌细胞的抑制作用和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法　将不同浓度的染料木黄酮作用于人T2 4膀胱癌细胞 ,用MTT法检测其有效作用浓度 ,分别采用透射电子显微镜、瑞氏染色、Hoechest332 5 8荧光染色、流式细胞仪观察和检测T2 4细胞凋亡情况。结果　MTT法测得染料木黄酮对T2 4细胞的IC50 值为32 80mg·L-1,浓度为 2～ 80mg·L-1的染料木黄酮具有诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡的作用 ,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论　染料木黄酮具有抗膀胱癌作用 ,其重要作用机制之一是诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（（一）-epigallocatechin gallate,EGCG）在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞增殖和细胞周期的影响及其可能机制。方法不同浓度的EGCG作用T24细胞24h后,应用MTT法、集落形成试验和碘化丙锭（PI）染色分别观察T24细胞在增殖、集落形成和细胞周期等方面的变化;并检测CyclinD1和CDK4的变化。结果20—100μg／mL EGCG对T24细胞作用24h后的抑制率分别为4％-61％,与对照组相比,当EGCG为40—100μg／mL时抑制率有显著性差异（P〈0．05）。EGCG能抑制T24细胞集落形成,当浓度为20和40μg／mL时能完全抑制其细胞集落形成。EGCG能使T24细胞出现GO／G1期阻滞,与对照组相比,在40-80μg／mL时有统计学意义（P〈0．05）。EGCG能抑制细胞Cyclin D1和CDK4的表达。结论EGCG能显著抑制T24细胞增殖并诱导GO／G1期阻滞,后者可能与抑制Cyclin D1和CDK4表达有关。     

氧化苦参碱体外诱导膀胱癌T24细胞凋亡

目的观察氧化苦参碱对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法不同浓度(0.625、1.25、2.5 mg/mL)氧化苦参碱作用于膀胱癌T24细胞,采用流式细胞术、光镜及电镜观察其诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用。用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变。免疫印迹法检测survivin和caspase-3蛋白的表达情况。结果氧化苦参碱作用人膀胱癌细胞后,光镜及电镜下均见到典型的细胞凋亡形态,流式细胞术观察发现凋亡峰。同时观察到氧化苦参碱抑制survivin的转录和表达,对caspase-3有上调作用(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过抑制survivin、上调caspase-3表达诱导膀胱癌T24细胞发生凋亡。     

人膀胱癌细胞系BC-6的建立及其生物学特性

目的:建立人膀胱癌细胞系BC-6,为膀胱癌的基础研究提供实验模型.方法:18例膀胱癌标本采用组织块直接培养法、8例采用细胞悬液培养法行原代培养;其中12例同时行裸鼠皮下移植,在皮下生长后,连续裸鼠体内传代3次,再行体外培养.结果:组织块直接培养和细胞悬液培养均未成功.12例裸鼠皮下接种肿瘤有3例生长,l例裸鼠意外死亡,l例裸鼠体内传代F2代肿瘤消失.1例肿瘤裸鼠皮下接种后生长较快,裸鼠体内传代3次后,取部分肿瘤组织体外培养得到膀胱癌细胞系BC-6,其形态结构,分化程度与原发瘤保持一致,染色体形态仍为人类核型,众数维持在66～72之间,占82%,细胞周期分析G1期0.58,G2期0.08,S1期0.35,细胞群体培增时间为44h.结论:通过裸鼠体内移植瘤建立的膀胱癌细胞系BC-6,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代1 a以上,传代92代.细胞形态不变,生长周期恒定,己经成为一个稳定的细胞系.