Apelin改善慢性肾脏病大鼠血管钙化

目的探讨脂肪因子Apelin在慢性肾脏病大鼠血管钙化中的作用。方法将大鼠随机分为对照组(给予正常饮食)、模型组(给予0.75%腺嘌呤饮食复制血管钙化的慢性肾脏病大鼠模型)、 Apelin干预组(给予0.75%腺嘌呤饮食,并用微量泵每天持续注射Apelin-13 20μg/kg)、Apelin处理正常大鼠组(给予正常饮食,并用微量泵每天持续注射Apelin-13 20μg/kg),每组10只。6周后将大鼠处死,用生化法检测血清中肌酐、尿素氮、钙、磷的浓度;ELISA检测血清Apelin-13的浓度;RT-qPCR法检测主动脉中APJ和Pit-1mRNA表达;免疫组化法观察主动脉中Runx2和骨保护素的表达;Von Kossa染色观察主动脉钙盐沉积。结果 6周后,与对照组相比,模型组大鼠血清肌酐及尿素氮水平明显升高(P0.01);血钙降低、血磷升高(P0.01);血清Apelin水平(P0.01)和主动脉中APJ mRNA(P0.05)表达下降;主动脉中Runx2、骨保护素表达增加,明显钙盐沉积,Pit-1 mRNA的表达升高(P0.05)。与模型组相比,Apelin干预组血磷下降(P0.05);血清Apelin水平和主动脉中APJ mRNA表达量均升高(P0.05); Runx2和骨保护素的表达下降,主动脉钙化程度减轻,Pit-1 mRNA表达减少(P0.05)。结论 Apelin可以有效改善慢性肾脏病大鼠血管钙化。     

Apelin可促进脊髓损伤大鼠运动和脊髓形态的修复

背景：研究表明,Apelin/APJ在调节细胞增殖、凋亡、抑制炎症反应和血管重建等方面显示出功能。因此,推测Apelin在脊髓损伤中具有类似的功能。目的：评价Apelin对大鼠脊髓损伤的治疗作用。方法：(1)体内实验选用大鼠横断脊髓损伤模型,采用45只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、脊髓损伤组、Apelin-13组。脊髓损伤组和Apelin-13组大鼠采用横断损伤法建立脊髓损伤模型,Apelin-13组每日腹腔注射Apelin-13 0.2 mg/kg,其余2组每日注射等量生理盐水,连续治疗14 d。于大鼠造模后第1,3,7,14天采用BBB运动评定量表评定大鼠后肢运动功能;于第14天收集大鼠脊髓,用于免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等分析。(2)体外实验利用H2O2诱导PC12细胞损伤,加入不同浓度(1,2,4μmol/L)的Apelin-13, CCK8法检测其对诱导损伤的PC12细胞的活力的影响,探索Apelin的神经保护作用。结果与结论：(1)脊髓损伤后大鼠后肢功能完全丧失,损伤后3 d开始观察到运动恢复,但脊髓损伤组各时间点之间差异无显著性意义;Apelin促进了脊髓损伤大鼠...     

血管紧张素-(1-7)/Mas受体轴通过调控NF-κB通路保护心肌细胞对抗高糖诱导的损伤

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]/Mas受体轴能否通过抑制核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的心肌细胞损伤。方法:应用细胞计数检测试剂盒(CCK-8)检测心肌细胞存活率;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞的形态及数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位(MMP);应用免疫蛋白印迹法测定NF-κB p65和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果:应用35 mmol/L葡萄糖分别处理H9c2心肌细胞30、60、90、120和150 min均能明显增加磷酸化(p)NF-κB p65的水平,其中60 min时,表达水平增加最明显;1μmol/L Ang-(1-7)与HG共同处理心肌细胞60 min能抑制HG对p-NF-κB p65表达的上调作用;0.1~30μmol/L的Ang-(1-7)与HG分别共处理心肌细胞24 h均能抑制HG的细胞毒性,使细胞存活率增多;另一方面,1μmol/L Ang-(1-7)能抑制HG引起的细胞凋亡、氧化应激、线粒体损伤等,使凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、ROS生成水平及MMP丢失减少;但是10μmol/L Ang-(1-7)/Mas受体拮抗剂A-779能明显阻断上述的Ang-(1-7)的心肌细胞保护作用;与Ang-(1-7)的作用相似,100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)与HG共处理心肌细胞24 h也能显著抑制上述的HG损伤作用。结论:Ang-(1-7)/Mas受体轴可通过抑制NF-κB通路对抗HG诱导的心肌细胞损伤。     

Apelin抑制TGF-β诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换

目的探讨多肽Apelin对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换(EMT)的抑制作用及其机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞,分别给予含TGF-β1(2μg/L)和/或不同浓度Apelin-13的培养基孵育细胞48 h,设立6个实验组(每组n=5):对照组、TGF-β组、TGF-β+Apelin(10-8,10-7和10-6mol/L)组和Apelin(10-6mol/L)组。刺激结束后,用免疫荧光染色观察细胞的上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布和表达。Western blot检测细胞中E-cadherin、α-SMA及Smads信号通路的主要信号分子p-Smad2/3、Smad2/3和Smad-7的蛋白表达。RT-PCR法检测细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及细胞自身Apelin和APJ受体的mRNA表达量。结果与对照组相比TGF-β组细胞为长梭形,E-cadherin的表达减少,α-SMA的表达增多,细胞外基质FN和Col-Ⅰ的mRNA表达量也显著升高;TGF-β+Apelin组上述效应被显著抑制,且呈浓度依赖性。与TGF-β组相比,TGF-β+Apelin组细胞活化型Smads的水平降低(P0.05),Smad7的表达增加(P0.05)。TGF-β组细胞自身APJ受体的表达量显著升高(P0.05),TGF-β+Apelin组上述效应受到抑制,且呈浓度依赖性。结论 Apelin干扰TGF-β/Smads信号通路从而抑制肾小管上皮细胞EMT;肾小管上皮细胞自身Apelin/APJ系统可能起到一定的代偿作用。     

血管紧张素-(1-7)通过抑制TLR4激活和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过抑制Toll样受体4(TLR4)激活和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤。方法:应用Western blot检测心肌细胞受体相互作用蛋白3(RIP3;反映坏死性凋亡的指标)和TLR4的表达水平;CCK-8法测定心肌细胞存活率;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;ELISA检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平;双氯荧光素染色法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;罗丹明123染色法测定线粒体膜电位(MMP)。结果:HG(35 mmol/L葡萄糖)作用H9c2心肌细胞24 h可使RIP3的表达水平明显升高,应用30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h可抑制HG对RIP3的上调;另一方面,HG可上调TLR4的表达,100μmol/L坏死性凋亡的特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和HG共处理心肌细胞24 h可抑制HG对TLR4的上调;而1μmol/L Ang-(1-7)和HG共处理心肌细胞24 h能同时抑制HG对RIP3和TLR4的上调。此外,1μmol/L Ang-(1-7)、30μmol/L TAK-242或100μmol/L Nec-1与HG共处理心肌细胞均能对抗HG引起的心肌细胞损伤,细胞存活率升高,LDH活性降低,ROS生成和MMP丢失减少,同时IL-1β和TNF-α的分泌减少。结论:Ang-(1-7)通过抑制TLR4激活和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤。     

灵孢多糖对过氧化氢致SH-SY5Y细胞凋亡及线粒体功能障碍的调控

背景：目前研究证实，灵孢多糖可促进神经退行性相关疾病的神经再生。神经退行性疾病的发生与线粒体功能失调密切相关，但灵孢多糖对神经退行性疾病的细胞凋亡及线粒体功能的调控作用尚不明确。目的：探索灵孢多糖对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及线粒体功能障碍的调控作用及机制。方法：SH-SY5Y细胞分为3组：对照组，过氧化氢组，灵孢多糖组。对照组细胞正常培养，过氧化氢组细胞用300μmol/L过氧化氢处理24 h，灵孢多糖组先用300μg/μL灵孢多糖干预一两个小时，然后加入300μmol/L过氧化氢干预24 h，干预结束后用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位，TUNEL染色试剂盒检测细胞凋亡情况，丙二醛试剂盒和超氧化物歧化酶试剂盒检测丙二醛和超氧化物歧化酶活性，免疫荧光染色法和Western blot法检测凋亡、线粒体动力学相关蛋白的表达。结果与结论：(1)与对照组相比，过氧化氢组线粒体膜电位和超氧化歧化酶活性显著降低，细胞凋亡率、丙二醇水平显著增高，差异均有显著性意义(P <0.05)；与过氧化氢组相比，灵孢多糖组线粒体膜电位和超氧化歧化酶活性显著增高，细胞凋亡率、丙二醛水平显著下降，差...     

MCU在高糖诱导心肌H9c2细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨线粒体钙离子单向转运体(mitochondrial calcium uniporter, MCU)在高糖(high glucose, HG)诱导心肌H9c2细胞凋亡中的作用机制。方法:将心肌H9c2细胞随机分为3组:对照(control)组,5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞;HG组,25 mmol/L葡萄糖处理细胞;精胺(spermine,Sp)干预(HG+Sp)组,25 mmol/L葡萄糖和5μmol/L Sp共同处理细胞。Western blot检测H9c2细胞MCU、caspase-9和caspase-3蛋白的表达;RT-qPCR检测H9c2细胞MCU的mRNA水平;Rhod-2 AM探针检测线粒体内Ca²⁺的荧光强度;吸光度法检测丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase, PDH)的活性;萤火虫萤光素酶检测细胞裂解液ATP的浓度;JC-1染色法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψ_m);MitoSOX^TM染色法检测线粒体活性氧簇(re...     

Apelin/APJ在人支气管上皮细胞炎症反应中的作用及地胆头对其影响的研究北大核心CSCD

目的:探讨Apelin/APJ系统在急性肺损伤(ALI)细胞模型的作用,研究中药地胆头(草)对支气管上皮细胞Apelin/APJ系统及炎症介质的影响。方法:依据对人支气管上皮细胞(16HBE)施加条件不同(n=8),分为正常对照组(阴性对照组),模型组(LPS组),阳性对照组(LPS+Apelin-13组),低、中、高地胆头组[LPS+ESE(20μg/ml)组、LPS+ESE(40μg/ml)组、LPS+ESE(80μg/ml)组]。激光共聚焦扫描显微镜法检测16HBE细胞及炎症模型Apelin/APJ表达与定位;CCK8法检测地胆头对LPS诱导的细胞损伤的影响;ELISA法测定各组支气管上皮细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平;RT-PCR及Western blot法检测16HBE中Apelin/APJ的转录及表达。结果:Apelin、APJ均在16HBE细胞膜上表达;10μg/ml LPS干预后Apelin/APJ细胞膜表达明显增多(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α细胞因子水平明显升高(P<0.05),Apelin-13+LPS组中16HBE的Apelin/APJ表达上调,支气管上皮细胞炎症反应减轻(P<0.05),地胆头预处理可明显提高Apelin/APJ表达,抑制LPS诱导的炎症细胞因子的产生(P<0.05)。结论:Apelin/APJ系统在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)过程中被激活,对抗炎症反应。地胆头通过上调16HBE细胞Apelin/APJ系统,减轻炎症反应,从而发挥抗炎作用。     

STF-31对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡影响的机制分析

目的 观察STF?31对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLs)的增殖以及凋亡的作用并分析其机制。方法 应用2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L浓度的STF?31处理RAFLs,并设置一组不加STF?31的空白对照。分别于24 h、48 h以及72 h进行下述指标观察：以MTT法检测STF?31对RAFLs细胞的增殖抑制效果;通过倒置显微镜观察STF?31作用后的细胞形态学改变;以ATP试剂盒分析STF?31作用后的RAFLs细胞内ATP水平;通过JC?1得到给药后RAFLs内线粒体膜电位的变化;以流式细胞术双染法观察STF?31作用于RAFLs细胞48 h后产生的细胞凋亡比率;应用Western blot法检测STF?31作用在RAFLs后的凋亡相关蛋白Bax、Bcl?2以及p?Akt的表达。结果 STF?31随着浓度增加、时间延长,可以更好地抑制RAFLs细胞的增殖(P<0.05),作用RAFLs细胞24 h、48 h和72 h的IC₅₀分别为9.870、1.400和0.513μmol/L;镜下观察到STF?31作用在RAFLS细胞后,RAL...     

京尼平抑制高糖诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化应激及凋亡损伤

目的:探讨京尼平(genipin,GEN)对高糖损伤的大鼠心肌H9c2细胞的抗氧化作用和抑制细胞凋亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,高浓度(50 mmol/L)葡萄糖处理H9c2细胞建立细胞损伤模型,分为正常糖对照组(NC组,葡萄糖浓度为5.6 mmol/L)、高糖损伤组(HG组,葡萄糖浓度为50 mmol/L)、正常糖+京尼平组(NC+GEN组)和高糖+京尼平组(HG+GEN组,京尼平浓度为10μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力;酶标法和WST-1法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;荧光探针DCF检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;ELISA法检测核小体片段的聚集值;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞内线粒体膜电位变化;利用Western blot法检测线粒体内抗氧化酶锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),以及早期凋亡蛋白细胞色素C(Cyt C)、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与HG组比较,HG+GEN组细胞活力显著升高(P 0.05),细胞内MDA的含量及细胞上清液中LDH的活性明显降低(P 0.05),细胞内SOD活性升高(P 0.05),细胞内线粒体膜电位明显升高(P 0.05),ROS水平降低(P 0.05),核小体片段聚集程度显著降低(P 0.05)。HG组线粒体内抗氧化酶Mn-SOD比NC组降低(P 0.05),但线粒体内凋亡蛋白Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平比NC组显著升高(P 0.05),而HG+GEN组与HG组相比,Mn-SOD升高(P 0.05),Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著降低(P 0.05)。结论:京尼平对高糖损伤的心肌H9c2细胞具有抗氧化保护作用和抑制细胞凋亡的作用。     

ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症

目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。     

白藜芦醇缓解低氧/复氧诱导的TCMK1细胞线粒体自噬

目的 研究白藜芦醇(Res)对低氧/复氧(H/R)导致小鼠肾小管上皮细胞系TCMK1内线粒体功能及线粒体自噬的影响。方法 体外建立H/R细胞模型,经Res或(和)线粒体自噬抑制剂1 (Mdivi-1)预处理TMCK1细胞2 h,采用CCK8法检测TCMK1细胞存活率;试剂盒法检测钙离子超负荷情况;流式细胞测量术测定线粒体膜电位(MMP)变化和活性氧(ROS)含量;Western blot检测线粒体融合蛋白(OPA)、分裂蛋白(DRP)以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3,Bax, Bcl2表达;免疫荧光检测线粒体外膜转位酶(TOMM20)和自噬溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)共定位情况。结果 与对照组相比,H/R组TCMK1细胞存活率显著减低(P<0.05),细胞内钙离子、ROS及MMP含量显著减低(P<0.05),OPA表达显著减低(P<0.05),同时DRP表达显著增高(P<0.05),线粒体与LAMP2共定位的细胞数目显著减少;与H/R组相比,10μmol/L Res可以显著增加TMCK1细胞的存活率(P<0.05),抑制细胞内ROS的...     

尿酸对人肾小管上皮细胞氧化应激和TGF-β表达的影响

目的观察尿酸对人肾小管上皮细胞氧化应激和TGF-β表达的影响,并探讨其可能作用靶点与机制。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分别加入不同浓度的尿酸(UA,240、480、720μmol/L)干预48 h后收集细胞;应用Western blot和免疫荧光化学法对转化生长因子(TGF-β)、抗增殖因子(PHB)蛋白表达进行细胞亚定位及半定量分析。MitoSOX染色检测活细胞线粒体中活性氧(ROS)的产生;分光光度计检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。结果 Western blot和免疫荧光结果显示,240μmol/L尿酸干预HK-2细胞48 h,TGF-β、PHB蛋白均较正常组无明显改变,480μmol/L尿酸干预HK-2细胞,TGF-β表达升高,而PHB较前降低;尿酸浓度为720μmol/L时,TGF-β上调与PHB下降更加显著。线粒体中ROS的产生量也在480μmol/L尿酸干预48 h时明显升高,且随尿酸刺激浓度升高继续上调;240μmol/L尿酸刺激细胞48 h,细胞上清中MDA含量、T-SOD活性较正常组无明显差异,480μmol/L尿酸干预HK-2细胞48h,MDA含量上升、T-SOD活性降低,尿酸浓度为720μmol/L时,上述变化更为显著。结论尿酸可诱导肾小管上皮细胞氧化应激反应,并使TGF-β蛋白表达上调,其机制可能与抑制线粒体相关蛋白PHB表达,使线粒体ROS合成增多有关。     

硫化氢抑制丙酮醛诱导的人皮肤角质形成细胞损伤

目的 观察硫化氢(H2S)对丙酮醛(MGO)诱导的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)损伤的影响.方法 HaCaT细胞分为MGO组、对照组和MGO+NSHD(H2S供体)组.MGO组用200、400、600 μmol/LMGO处理HaCaT细胞48 h造成细胞损伤;对照组给予等体积培养基;MGO+NSHD组应用400 μmol/LMGO处理,48 h前用50、100、200μmol/LNSHD预处理1h.通过CCK-8检测各组细胞活性.HaCaT细胞经100 μmol/LNSHD预处理1h,用20 μmol/L的H2S荧光探针WSP-1染色结合荧光照相术检测NSHD预处理1h组和对照组培养基和细胞内的H2S含量.将HaCaT细胞分为MGO组、MGO+NSHD组、NSHD组和对照组.MGO组仅用400 μmol/L MGO处理48 h;MGO+NSHD组在400 μmol/L MGO处理48 h前用100 μmol/L NSHD预处理1 h;NSHD组的细胞仅用100 μmol/L NSHD处理1h;对照组则给予等体积培养基.Hoechst 33258核染色结合荧光照相术检测细胞凋亡.Rh123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP).结果 HaCaT细胞经200、400和600 μmol/L MGO处理48 h,细胞活性依次为0.325±0.023、0.224±0.009和0.095±0.102,均低于对照组0.415±0.031(F=37.866,P＜0.05),其中400 μmol/LMGO组细胞活性约为对照组的1/2,选用此浓度的MGO作为有效损伤浓度.100 μmol/L NSHD处理1h可使培养基和细胞内的H2S含量较对照组均增加.在400μmol/L MGO处理48 h前,分别用50、100和200 μnol/L NSHD预处理1h,细胞活性依次为0.235±0.028、0.314±0.017、0.346±0.020,均高于单独400μmol/L MGO处理组0.224±0.009(F=61.209,P＜0.05).400 μmol/L MGO处理48 h后细胞凋亡率高于对照组和NSHD组[(32.6±3.5)％比(5.1±1.2)％、(3.4±0.8)％,均P＜0.05],MMP低于对照组和NSHD组(28.5±2.9比46.1±3.8、48.6±4.3,均P＜0.05).MGO+ NSHD组细胞凋亡率(18.3±2.6)％,低于MGO组但高于对照组和NSHD组(均P＜0.05),MMP为38.9±3.2,高于MGO组但低于对照组和NSHD组(均P＜0.05).结论 NSHD能通过释放H2S拮抗MGO诱导的皮肤细胞损伤.     

大豆苷元减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡

目的 探讨大豆苷元(daidxein, DAI)调节NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)信号通路对高糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡的影响。方法 将HK-2细胞分为：对照组(NC组)(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、HG组(30 mmol/LD-葡萄糖)、DAI-L、DAI-M、DAI-H组(30 mmol/LD-葡萄糖分别和25、50、100μmol/L DAI孵育HK-2细胞)、DAI-H+LPS组(30 mmol/LD-葡萄糖、100μmol/L DAI和1μg/mL LPS共同孵育HK-2细胞)。MTT法检测HK-2细胞增殖；流式细胞术检测HK-2细胞凋亡；ELISA法检测HK-2细胞炎性因子白介素-1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)水平；采用扫描电镜观察细胞焦亡形态；免疫荧光染色检测细胞焦亡相关蛋白；Western blot检测NLRP3、cleaved-caspase-1、GSDMD-N蛋白表达。结果 NC组细胞呈圆球形，边界比较规则，而HG组细胞肿胀变大，边界不规则；HG组...     

胰岛β细胞铁过载模型的建立及铁过载对胰岛β细胞损伤的研究

目的:通过枸橼酸铁铵(FAC)与大鼠胰岛素瘤细胞株INS-1共培养,构建铁过载INS-1细胞模型,并观察铁过载对胰岛细胞铁沉积、存活、胰岛素分泌、氧化应激以及线粒体损伤的影响。方法:体外培养INS-1细胞,不添加FAC作为对照组,加入不同浓度(5、10、20、40、80、160和320μmol/L)的FAC干预INS-1细胞,分别培养24 h、48 h和72 h,建立铁过载INS-1细胞模型,测定细胞内的不稳定铁池(LIP),CCK8法分析细胞活力的改变,筛选出后续实验组所用FAC浓度,ELISA法检测胰岛素分泌功能,活性氧簇(ROS)探针染色流式细胞术检测ROS的生成,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,透射电子显微观察线粒体的变化。结果:加入不同浓度FAC处理后,铁过载组INS-1细胞内的LIP水平明显高于对照组(P0.05)。随着FAC浓度的升高及干预时间的延长,INS-1细胞的活力逐渐降低(P0.05)。选取80、160和320μmol/L FAC作用48 h作为后续实验的铁过载组。胰岛素分泌随FAC浓度的增加出现先升高后降低,160和320μmol/L组与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。INS-1细胞内ROS的水平较对照组均显著增加(P0.05)。线粒体膜电位随着铁浓度的增加而降低(P0.05)。铁过载后INS-1细胞的线粒体肿胀,内嵴扩张,失去正常结构,随着FAC浓度增加,线粒体结构破坏更加明显。结论:与FAC共培养48 h可成功建立INS-1细胞铁过载模型。铁过载可显著破坏线粒体结构和功能,增加细胞内ROS的水平。胰岛β细胞的存活对铁敏感,即使低剂量的铁也损伤胰岛β细胞,但只有细胞数量减少到一定程度,才会减少胰岛素的分泌。     

血管紧张素-(1-7)通过抑制活性氧激活的环氧合酶-2通路保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤

目的探讨活性氧(ROS)激活的环氧合酶-2(COX-2)通路在高糖(HG)损伤H9c2心肌细胞中的作用及血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过调控ROS激活的COX-2通路抑制HG引起的心肌细胞损伤。方法应用Western blot法检测COX-2蛋白的表达;细胞计数盒(CCK-8)测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞的形态及数量的变化;DCFH-DA染色荧光显微镜测定细胞内ROS水平;JC-1染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP)。结果应用1000μmol/L ROS清除剂(N-乙酰半胱氨酸,NAC)或1μmol/L Ang-(1-7)共处理H9c2心肌细胞12 h能显著地抑制HG对COX-2表达的上调作用;35 mmol/L葡萄糖(HG)处理心肌细胞24 h引起明显的损伤作用,使细胞存活率和MMP降低,凋亡细胞数量及细胞内ROS生成增多;Ang-(1-7)或COX-2抑制剂(NS-398)共处理心肌细胞明显地抑制上述HG引起的损伤作用。结论 Ang-(1-7)通过抑制ROS激活COX-2通路保护心肌细胞对抗HG引起的损伤。     

钙敏感受体在高糖诱导的人眼小梁网细胞损伤中的作用

目的：观察钙敏感受体（CaSR）在高糖（HG）诱导的人眼小梁网细胞（HTMC）损伤中的作用和机制。方法：将HTMC随机分为：对照（control）组（10%胎牛血清-DMEM）、HG组（10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖）、HG+CaSR激动剂NPS R568组（10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖+10μmol/L NPS R568）和HG+CaSR抑制剂Calhex231组（10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖+3μmol/L Calhex231），培养72 h。CCK-8法测量不同浓度的葡萄糖刺激下HTMC活力；试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；Western blot检测CaSR、SOD2、凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3和Bcl-2）及自噬相关蛋白（ATG7、P62、LC3-I和LC3-Ⅱ）表达；免疫荧光染色观察CaSR细胞定位和表达。结果：葡萄糖浓度为50 mmol/L时，HTMC相对活力由1.00±0.03下降至0.60±0.07(P<0.05)；与control组相比，HG使H...     

ATP敏感性钾通道在硫化氢抑制高糖引起的心肌细胞损伤中的作用

目的:研究ATP敏感性钾通道(KATP通道)在硫化氢(H2S)抑制高糖引起心肌损伤中的作用。方法:应用Western blot法检测心肌细胞KATP通道蛋白的表达水平;CCK-8试剂盒测定心肌细胞存活率;Hoechst33258染色测定凋亡细胞数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位(MMP)。结果:应用高糖(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2细胞1~24 h,其中6 h、9 h、12 h和24 h均能明显下调KATP通道蛋白的水平,12 h和24 h KATP水平降至最低。在HG处理心肌细胞12 h前,应用400μmol/L硫氢化钠(Na HS,为H2S的供体)预处理30 min明显抑制高糖对KATP通道蛋白表达的下调作用。100μmol/L线粒体KATP通道开放剂二氮嗪和50μmol/L非选择性KATP通道开放剂吡拉地尔(Pin)及Na HS预处理均显著抑制高糖引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数量及MMP丢失减少。相反,100μmol/L线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸和1 mmol/L非选择性KATP通道阻断剂格列本脲均能明显阻断上述Na HS的心肌细胞保护作用。结论:KATP通道介导了H2S对高糖引起的心肌细胞损伤的抑制作用。     

甘氨酸受体α_1亚基在乳鼠心肌细胞的表达及损害性因素对其表达的影响

目的:研究甘氨酸受体α1亚基(GlyRα1)在乳鼠心肌细胞中的表达以及脂多糖(LPS)、缺氧/复氧(H/R)、异丙肾上腺素(ISO)和高糖(HG)对其表达的影响。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,Western blotting方法检测心肌细胞上GlyRα1的表达;心肌细胞分别用LPS、H/R、ISO以及HG处理24 h,采用CCK-8试剂检测细胞活力,Western blotting方法检测心肌细胞上GlyRα1的表达。结果:Western blotting方法检测到乳鼠心肌细胞上GlyRα1的表达;LPS(20 mg/L)、ISO(100μmol/L)以及HG(25mmol/L)处理心肌细胞24 h与心肌细胞H/R 3 h对心肌细胞存活率无明显影响;LPS组、H/R 3 h组以及ISO组心肌细胞上GlyRα1表达均高于对照组(P0.01),而HG组心肌细胞上GlyRα1表达低于对照组(P0.01)。结论:乳鼠心肌细胞上存在GlyRα1,并且一定浓度的LPS、ISO与一定时间的H/R均可上调乳鼠心肌细胞GlyRα1的表达,而HG可下调乳鼠心肌细胞GlyRα1的表达。