钙敏感受体在缺氧-复氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的： 观察大鼠心肌钙敏感受体(CaSR) 在心肌缺氧/再灌注损伤时的表达情况及其介导的细胞内钙变化，以及其参与细胞凋亡的相关信号转导途径。方法： Lagendorff离体灌流方法复制心脏缺氧-复氧（anoxia-reoxygenation，A/R）模型；观察缺氧/再灌注及加入CaSR激动剂时CaSR的表达；应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察大鼠心肌细胞正常、缺氧、缺氧/再灌注时［Ca2+］i变化；HE染色观察细胞形态学改变；TUNEL染色观察细胞凋亡； Western blotting检测心肌组织胞浆中caspase 3、caspase 9 的表达。结果： 心肌A/R组及加入CaSR激动剂时CaSR的表达明显增高，细胞内钙明显升高。HE染色发现A/R组和激动剂组损伤明显，TUNEL显示2组凋亡细胞大量存在。同时，A/R组和激动剂组胞浆中caspase 3和caspase 9的表达增加。结论： CaSR参与大鼠心肌A/R损伤时细胞内钙超载的形成，并促进A/R损伤时心肌细胞凋亡。     

西洋参茎叶总皂苷通过抑制过度内质网应激减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的: 观察西洋参茎叶总皂苷 (PQS) 对缺氧/复氧 (H/R) 心肌细胞的保护作用,并从内质网应激 (ERS)的角度探讨其分子机制。方法: 建立心肌细胞缺氧/复氧 (H/R) 损伤模型,以台盼蓝染色法、乳酸脱氢酶活性以及流式细胞术检测细胞损伤及凋亡情况;以RT-PCR和Western blotting方法,检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、钙网蛋白 (CRT)、C/EBP同源蛋白 (CHOP)、caspase-12及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果: 和H/R组心肌细胞相比,PQS+H/R组:(1) 细胞凋亡率降低4.19% (P<0.05),存活率升高21.2% (P<0.05),LDH活性降低66.58% (P<0.05);(2) Bcl-2 mRNA和蛋白表达分别升高30.9%和48.0% (P<0.05),Bax mRNA和蛋白表达分别降低39.7%和48.4% (P<0.05);(3) GRP78 mRNA和蛋白表达分别降低61.6%和37.7% (P<0.05),CRT mRNA和蛋白表达分别降低35.7%和52.2% (P<0.05); CHOP mRNA和蛋白表达分别降低57.0%和51.7% (P<0.05);剪切后的caspase-12蛋白表达降低34.9% (P<0.05)。结论: PQS可减轻H/R诱导的心肌细胞损伤,其机制是降低H/R诱导的GRP78、CRT mRNA和蛋白表达,抑制CHOP、caspase-12等内质网凋亡通路激活,从而抑制过度ERS介导的细胞凋亡。     

脂联素通过减轻内质网应激抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的:通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,观察脂联素(adiponectin,APN)对心肌细胞缺氧/复氧内质网应激所致心肌细胞损伤的影响,为心脏缺血/再灌注损伤的防治提供理论依据。方法:采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞,α肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h的单层心肌细胞,实验分为以下3组:正常对照组、单纯H/R组、APN+H/R(3 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L)组。实验终止后,观察心肌细胞形态的变化,测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,通过流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡。用RT-PCR和Western blotting测定内质网应激指标GRP78、caspase-12的表达。结果:与空白对照组相比,单纯H/R后,细胞凋亡率显著增加(68.20%±1.73%vs0.73%±0.21%,P0.05),乳酸脱氢酶(LDH)的活性增加,内质网应激蛋白GRP78、caspase-12在蛋白及mRNA水平表达明显增高,APN预处理后进行H/R,可较大程度地逆转上述指标变化,与H/R组相比均具有显著差异(P0.05),并且呈现一定的浓度依赖性。结论:H/R可以诱导心肌细胞的内质网应激;脂联素可以通过减轻内质网应激来减轻心肌细胞凋亡,对心肌细胞有保护作用。     

钙敏感受体在黄芪注射液防治心肌损伤中的作用

目的研究黄芪注射液对心肌损伤大鼠钙敏感受体表达的影响及黄芪注射液可能的心肌保护作用机制。方法 40只大鼠随机分为4组:空白组、心肌损伤组、黄芪注射液组(20 mL/kg)、黄芪注射液(20 mL/kg)+钙敏感受体激动剂Cinacalcet(3.0 mg/kg)组。腹腔内注射5 mg/kg异丙肾上腺素,制备大鼠心肌损伤模型。Western blot方法检测各组大鼠心肌组织中钙敏感受体的表达以及Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达;TUNEL染色法评价各组大鼠心肌细胞的凋亡;酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β、NF-κB的水平。结果黄芪注射液显著抑制了心肌损伤组大鼠钙敏感受体的表达(P0.01),促进了Bcl-2的表达(P0.01),降低了Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达(P0.01),降低了血清TNF-α、IL-1β和NF-κB的水平(P0.01);钙敏感受体激动剂Cinacalcet可以部分消除黄芪注射液对心肌损伤组大鼠的心肌保护作用。结论黄芪注射液对心肌损伤组大鼠的心肌保护作用可能与抑制钙敏感受体的表达、减少炎症反应、降低心肌细胞凋亡有关。     

缺氧预处理减轻内质网应激所致的大鼠心肌微血管内皮细胞损伤

目的:研究缺氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)对内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)所致的心肌微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MVECs)损伤的影响。方法:以毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导大鼠心肌MVECs ERS,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出和细胞凋亡率检测细胞损伤,phalloidin-FITC荧光染色和内质网染色分别观察细胞骨架和细胞内质网形态变化,双向电泳-质谱技术检测TG作用后内皮细胞蛋白质谱表达变化,Western blotting技术检测ERS相关的分子表达。结果:TG剂量依赖性诱导MVECs LDH漏出和细胞凋亡,并出现内质网应激分子钙网蛋白(calreticulin,CRT)和葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)表达上调;HPC减轻TG诱导的MVECs损伤,并可以抑制TG诱导的ERS相关分子的表达上调。结论:HPC减轻内质网应激所致的大鼠心肌MVECs损伤。     

钙敏感受体在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的:观察钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法:Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。应用Western blotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在肺动脉平滑肌的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测不同处理因素对细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,应用MTT法分析不同处理因素对细胞存活率的影响。结果:大鼠肺动脉平滑肌细胞有CaSR蛋白表达。缺氧能够增加CaSR和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、细胞存活率及[Ca2+]i(与对照组比较,P0.05)。GdCl3(CaSR激动剂)能够增强缺氧的上述作用,NPS2390(CaSR抑制剂)则能够减弱缺氧的作用。结论:缺氧诱导的CaSR表达增加参与了缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖。     

附子多糖保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞及其抗内质网应激的机制研究

目的: 观察附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护,并探讨附子多糖的保护机制是否与其抑制内质网应激反应有关。方法: 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组(缺氧3 h后复氧6 h)和不同浓度附子多糖(0.1 g/L、1 g/L、10 g/L、20 g/L)+缺氧/复氧组。MTT法测定心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blotting分析葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及caspase-12的表达,荧光定量PCR进一步检测CHOP及caspase-12 mRNA表达。结果: 缺氧复氧后,心肌细胞中内质网应激反应标志蛋白GRP78表达增加,内质网应激凋亡相关蛋白CHOP及caspase-12蛋白和mRNA表达亦明显升高。与缺氧/复氧组相比较,附子多糖预处理24 h后可以有效抑制缺氧/复氧引起的GRP78、 CHOP和caspase-12的表达上调,增加心肌细胞的存活率,抑制心肌细胞凋亡的发生。附子多糖的保护效应呈剂量依赖形式,10 g/L剂量时达到峰值。结论: 附子多糖保护缺氧/复氧后心肌细胞的可能机制与其抑制内质网应激所介导的细胞凋亡途径相关。     

心血管系统钙敏感受体的研究进展

1 概述 钙敏感受体(calcium-sensing receptor, CaSR)是G 蛋白偶联受体C家族成员,该家族成员还包括mGluR、GABA_B受体和信息素受体.CaSR在哺乳动物、鸟、两栖动物、爬虫动物和鱼类均有分布~([1]).1993 年,Brown等~([2])从牛甲状旁腺首次克隆出CaSR.     

缺氧后适应中蛋白激酶Cε与钙敏感受体相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用

目的:研究缺氧后适应中蛋白激酶Cε(PKCε)与钙敏感受体(CaR)相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用.方法:Wistar乳鼠(出生后3-7 d)心肌细胞培养3-5 d,随机分为7组:正常对照组(N组),缺氧/复氧组(H/Re组),缺氧后适应组(HPC组),GdCl3组(GdCl3,NiCl2,CdCl2组),caffeine组(caffeine, GdCl3,NiCl2,CdCl2组),PKCε抑制剂组(PKCI组)和PKCI+GdCl3组 (PKCI,GdCl3,NiCl2,CdCl2组).采用饱和氮气pH6.8的D-Hanks液和含20%新生牛血清的DMEM液复制心肌缺氧/复氧模型.检测各组细胞存活率及各组乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量变化,Western blotting检测心肌细胞膜CaR和PKCε蛋白表达水平,免疫共沉淀检测细胞膜上CaR和PKCε的相互作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化,TUNEL染色观察细胞凋亡.结果:H/Re、GdCl3和PKCI组的细胞存活率低于对照组和HPC组;反之,LDH活力和MDA含量高于对照组和HPC组.同时,在GdCl3、caffeine和PKCI+ GdCl3组CaR的蛋白表达水平较HPC和PKCI组增高,且[Ca2+]i和细胞凋亡率也高于后2组;而PKCI和PKCI+ GdCl3组PKCε蛋白表达水平低于H/Re、HPC、GdCl3和caffeine组.免疫共沉淀检测到CaR和PKCε在细胞膜上发生相互作用.结论:在乳鼠心肌细胞缺氧后适应中,PKCε已转位到细胞膜和CaR相互作用,此相互作用能减少[Ca2+]i,对缺氧的乳鼠心肌细胞在进行复氧时产生保护作用.     

甘氨酸受体在甘氨酸抗心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用机制研究

目的：探讨甘氨酸受体在心脏保护中的作用及甘氨酸受体的性质。方法：利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌缺氧/复氧(A/R)模型，并用甘氨酸受体阻断法和消除细胞外氯离子法, 测定各组培养心肌细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）的含量、钙离子浓度和心肌细胞凋亡率。结果：A/R组用甘氨酸处理后SOD活性、NO含量升高，MDA含量、［Ca²⁺］_i、细胞凋亡率降低，与A/R组比较显著差异。分别用甘氨酸受体阻断剂士的宁和消除细胞外氯离子处理后，甘氨酸的上述保护作用明显减弱，与A/R组比较无显著差异。结论：甘氨酸能抑制缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的自由基生成、抑制钙超载，减轻心肌细胞的凋亡并增加细胞内SOD等保护蛋白和NO的合成而发挥细胞保护作用。甘氨酸的细胞保护作用可能是通过甘氨酸受体发挥作用的，甘氨酸受体的本质可能是甘氨酸门控氯离子通道。     

内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用

 目的：探讨内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法：在体外原代培养出生1~3 d大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA。实验分组：（1）空白对照组;（2）缺氧组;（3）缺氧+脂质体组;(4)缺氧+阴性对照siRNA组;(5)缺氧+Bim-siRNA组。MTT法观察细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况;Western blotting检测内质网应激标志分子caspase-12和三磷酸肌醇（IP3）的表达情况。结果：免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。在荧光显微镜下,转染了阴性对照siRNA组的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;Western blotting 结果显示,Bim-siRNA转染均能有效降低Bim蛋白的表达,其中第2对沉默效率最高,达到86.73%。缺氧损伤导致心肌细胞活性明显下降（P<005）,转染Bim-siRNA后细胞活性较阴性对照组升高。缺氧细胞凋亡率较对照组明显增加（P<0.01）,细胞内钙离子浓度明显增高,而沉默bim的表达能降低细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度。缺氧导致内质网应激标志分子caspase-12和IP3表达较空白对照组明显上调（均P<005）,而抑制Bim表达后caspase-12和IP3表达明显降低。结论：沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,内质网应激标志分子caspase-12和IP3可能参与了Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡的过程。这有望为临床心肌缺血缺氧损伤的治疗提供新思路。     

薯蓣皂素对缺氧诱导的H9c2大鼠心肌细胞内质网应激损伤的保护作用

目的　探究薯蓣皂素 (Diosgenin, DG) 对缺氧诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤及心肌缺血再灌注 (Mycardial ischemia reperfusion, MI/R) 模型大鼠的保护作用及作用机制。 方法　将细胞分为H9c2组、低氧诱导 (Hypoxia)组、DG (10mg/L)、DG (20 mg/L)和DG (50 mg/L)组,缺氧诱导细胞损伤,并给予对应浓度的DG或溶媒处理,CCK8检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,Western blot检测C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白 (CCAAT/enhancer-binding protein (C/EBP) homologous protein, CHOP)、Caspase-12、DNA损伤诱导蛋白 (Growth arrest and DNA damage-inducible protein 34, GADD34) 和免疫球蛋白重链结合蛋白 (Immunoglobulin heavy-chain-binding protein, Bip)的表达,试剂盒检测上清液超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase, SOD) 和丙二醛 (Malondialdehyde, MDA) 浓度。复制大鼠MI/R模型,灌胃给予大鼠DG,检测大鼠心率和平均动脉压 (Mean artery pressure, MAP)。检测大鼠血清肌酸激酶(creatine kinase, CK)、SOD和MDA浓度,HE染色检测组织损伤,Western blot检测内质网应激相关蛋白表达。 结果　与H9c2组比较,Hypoxia组细胞增殖速度显著降低,细胞凋亡率明显升高;与Hypoxia组比较,DG (10, 20, 50 mg/L) 组细胞增殖速度明显升高,细胞凋亡率明显降低;同时, DG (10, 20, 50 mg/L)能显著减弱Hypoxia对CHOP、Caspase-12表达的诱导作用和对GADD34和BiP表达的抑制作用。此外,缺氧能显著升高上清液MDA浓度,降低SOD浓度;DG能明显减弱缺氧的作用。DG还能显著升高MI/R模型大鼠心肌功能,减轻心肌组织损伤,降低心肌组织CHOP和Caspase-12的表达,诱导GADD34和BiP的表达,降低血清MDA浓度,升高SOD浓度。 结论　DG能通过抑制内质网应激减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤及MI/R模型大鼠心肌组织损伤。     

心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌组织内质网应激相关凋亡途径的研究

目的:探讨心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌组织内质网应激介导的凋亡途径。方法:结扎小鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死后心力衰竭(心衰)模型,32只小鼠利用随机数字法分4组:假手术组、心肌梗死后2周组、4周组和6周组,采用超声心动图检查观察心室扩张及心功能变化情况,Western blotting检测内质网分子伴侣GRP78蛋白以及内质网应激相关凋亡蛋白CCAAT/增强子结合蛋白ε(CCAAT/enhancer-binding proteinε,CHOP)、c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及其磷酸化水平、caspase-12及其活性剪切片段的表达。采用TUNEL法观察心肌细胞的凋亡情况。结果:与假手术组相比较,心肌梗死后心力衰竭的小鼠左心室扩大,心功能下降。小鼠心肌组织GRP78、CHOP蛋白表达增高(P0.05)。JNK、caspase-12蛋白表达没有明显变化,但其活化形式磷酸化JNK及剪切后的caspase-12表达增高(P0.05)。TUNEL染色显示心肌梗死后心力衰竭的小鼠心肌组织凋亡明显增多(P0.05)。结论:心肌梗死后心力衰竭诱导内质网应激反应,并伴随着其相关的CHOP、JNK、caspase-12三条通路的激活,提示内质网应激可能参与了心梗后心衰中心肌细胞的凋亡。     

同型半胱氨酸介导的内质网应激对肝细胞脂质代谢的影响

目的： 探讨同型半胱氨酸（Hcy）介导的内质网应激对肝细胞脂质代谢的影响。方法: 5 mmol/L Hcy与HepG2细胞共孵育，检测细胞内Hcy、甘油三酯、胆固醇的含量。高蛋氨酸饮食诱导小鼠高Hcy血症，分析肝细胞内甘油三酯(TGE)、胆固醇(CHO)含量的变化，检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP-78）、胆固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1） mRNA及蛋白表达的变化。结果: 与Hcy孵育后，各时点HepG2细胞内Hcy、脂质（TGE、CHO）含量均显著升高（P<0.05,vs 0 h）。高蛋氨酸饮食小鼠各时点血浆Hcy、肝细胞内TGE、CHO含量均显著高于0周（P<0.05），而血浆TGE、CHO含量升高并不明显（P>0.05,vs 0周）；肝组织内质网应激蛋白GRP-78、SREBP-1 mRNA及其蛋白表达均显著高于0周（P<0.05）。结论: Hcy诱导的内质网应激可致内源性胆固醇调节通路失调，并使肝细胞合成、摄取甘油三酯、胆固醇增加。     

右美托咪定通过抑制内质网应激反应减轻肺缺血/再灌注小鼠肾损伤

目的:评价右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)通过抑制内质网应激反应减轻小鼠肺缺血/再灌注(I/R)诱发肾损伤的机制。方法:雄性健康SPF级C57BL/6J小鼠50只,体重20~24 g,8~10周龄,随机分为5组(n=10):假手术组(sham组)、I/R组、阿替美唑(atipamezole,Atip)组、DEX组和DEX+Atip组。采用小鼠在体左侧肺门夹闭30 min再灌注180 min方法制备肺缺血/再灌注损伤(I/R)模型。Atip组、DEX组和DEX+Atip组分别在肺门阻断前30 min腹腔注射Atip(250μg/kg)、DEX(20μg/kg)和DEX+Atip,其余处理同I/R组。再灌注结束后眼眶采血检测血肌酐与尿素氮浓度,取肾组织光镜下观察肾细胞的形态学改变,检测caspase-3的酶活性,TUNEL法检测肾细胞凋亡指数,Western blot和RT-PCR检测c-Jun氨基末端激酶(JNK)、caspase-12、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的蛋白及mRNA水平。结果:与假手术组相比,其余组光镜下肾组织有明显损伤,血肌酐与尿素氮、肾细胞凋亡指数、caspase-3酶活性、JNK、caspase-12、CHOP和GRP78的蛋白及mRNA水平均升高(P0.01)。与I/R、Atip组和DEX+Atip组相比,DEX组光镜下可见肾细胞损伤减轻,血肌酐与尿素氮、肾细胞凋亡指数、caspase-3酶活性、JNK、caspase-12和CHOP表达均有下降,GRP78表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:右美托咪定预先给药可减轻小鼠肺缺血/再灌注诱发的肾损伤,其机制可能与激动α2-肾上腺素能受体,抑制内质网过度应激有关。     

微波辐照诱导内质网应激致心肌微血管内皮细胞损伤

目的探讨微波辐照致心肌微血管内皮细胞损伤与内质网应激之间的关系。方法取培养3~4代心肌微血管内皮细胞随机分为对照组和辐照各组。1.分别采用10mW/cm2,30mW/cm2、50mW/cm2微波辐射心肌微血管内皮细胞,辐照时间均为6min。于照射后24h收集细胞。2.细胞被暴露于30mW/cm2微波6 min,继续培养1 h、3 h或24 h之后,内皮细胞被收集,对照组于24 h结束实验。以膜联蛋白V-碘化丙啶双染法检测细胞凋亡;鬼笔环肽染色法观察微血管内皮细胞骨架的变化,评价微血管内皮细胞的损伤情况;免疫印迹法检测内质网应激分子钙网蛋白(CRT)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达,评价微波辐照是否引起微血管内皮细胞内质网应激。结果内皮细胞凋亡率的量效研究发现,微波辐照之后,10mW/cm2、30mW/cm2、50mW/cm2照射组的细胞凋亡率分别为(2.34±0.15)%、(2.72±0.96)%、(2.62±0.34)%,与对照组(0.88±0.32)%比较差异显著(P0.05)。时效研究则发现,30mW/cm2照射后1h、3h和24h细胞凋亡率分别为(1.12±0.15)%,(1.49±0.54)%和(1.85±0.45)%。与对照组(1.10%±0.28)%比较,照射后1h组差异不显著(P0.05),照射后3h组和24h组差异显著(P0.05);内质网应激分子的检测发现,30mW组CRT、GRP78、CHOP的蛋白表达分别较对照组升高124%,76%,256%。50mW组CHOP的蛋白表达分别较对照组升高52%,189%。与对照组相比,30mW组CRT、GRP78、CHOP GRP78、及50mW组GRP78、CHOP表达差异显著(P0.05)。10mW组CRT、GRP78、CHOP及50mW组CRT蛋白表达与对照组相比差异无显著性(P0.05)。对照组内皮细胞表现出很少的肌动蛋白纤维。内皮细胞暴露于微波引起的丝状肌动蛋白应力纤维数量的急剧增加。最大应力纤维的形成发生在内皮细胞受到照射后3h或照射功率为30mW。结论微波辐照可诱导严重内质网应激反应,造成大鼠心肌微血管内皮细胞损伤。     

PERK介导的内质网应激参与血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的机制

目的: 研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)介导的内质网应激(ERS)反应在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 在AngⅡ诱导原代培养的乳大鼠心肌细胞肥大模型上,采用[³H]-亮氨酸掺入、心肌细胞表面积测定等评估心肌细胞肥大程度;以实时定量PCR、RT-PCR和Western blotting检测ERS标志性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、钙网蛋白(CRT)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达变化。结果: 与正常对照组比较,AngⅡ组CRT mRNA和蛋白表达分别高146.4%和125.3%(P<0.05),GRP78 mRNA和蛋白的表达分别高84.0%和77.6% (P<0.05),PERK mRNA和蛋白表达分别高165.4%和132.1%(P<0.05),eIF2α mRNA和蛋白表达分别高110.9%和46.5%(P<0.05),CHOP mRNA和蛋白表达分别高117.7%和63.3%(P<0.05)。结论: PERK介导的内质网应激反应参与了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。