Anderson-Fabry病研究进展

Anderson-Fabry病(Anderson-Fabry Disease,AFD)又称为Fabry病,是X连锁隐性遗传的溶酶体病,患者因缺乏α-半乳糖苷酶A(α-Gal A),致使糖鞘脂成分如神经酰胺三己糖苷(CTH)或globotriaosylce-ramide(Gb3)、二乳糖苷神经酰胺等堆积于体内各器官,引起临床表现。典型表现见于半合子男性,杂合子女性可表现正常或异常。近年来国外对AFD的     

肝癌大鼠各组织中的鞘糖脂图谱

作者应用微量法(Ladish法)对正常及肝癌大鼠肝、心、肺、肾、脾等组织的鞘糖脂图谱及脂结合唾液酸含量进行比较分析。肝癌大鼠上述各组织中,脂结合唾液酸含量大幅升高,单唾液神经节苷脂减少(GM_8减少,GM_2与GM_1稍有增多),而多唾液酸神经节苷脂(GD_8,GD_(1a))相对增多;中性鞘糖脂也有明显变化。研究结果表明,大鼠肝细胞癌变伴有肝外其他组织中鞘糖脂代谢的改变。     

6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少

目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对CNE-2L2细胞与层粘连蛋白的粘附及细胞表面片状伪足的影响。方法Western印迹检测6A8α-甘露糖苷酶的表达。置细胞于层粘连蛋白(laminin)包被的培养板孔中,37℃孵育1h后,用结晶紫染色细胞,用0.1mol/L枸橼酸钠/50%乙醇溶解结合到细胞中的染料。测定540nm处的吸光度值(AT),按R=AT/A100×100%计算粘附率(A100为100%粘附值)。扫描电镜观察细胞表面的片状伪足。结果6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的2个克隆细胞株(AS1和AS2)对层粘连蛋白的相对粘附率分别为0.447±0.096与0.533±0.065,而6A8α-甘露糖苷酶表达正常的对照细胞(W、M和S)的相对粘附率分别为0.78±0.035、0.7±0.05和0.80±0.04。两者的差别有生物学意义(P<0.01)。6A8α-甘露糖苷酶表达正常的细胞表面片状伪足丰富,6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的细胞表面的片状伪足基本上消失。结论6A8α-甘露糖苷酶表达抑制可导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少。     

异紫杉脂素的酶法糖基化

目的 以异紫杉脂素为例，探索酶法糖基化的可行性，为其他具有重要生理活性的天然化合物提供可行的生物转化方法。方法 利用半乳糖苷酶转糖基活性对异紫杉脂素进行了糖基化修饰。结果 通过薄层层析，质谱，红外光谱，^1HNMR,^13CNMR数据显示产物即是异紫杉脂素半乳糖苷。结论 E.coli和脆壁酵母来源的β-半乳糖苷酶可以对异紫杉脂素进行糖基化修饰。     

16例经典型Fabry病患者的临床表现和基因突变分析

目的 了解中国人经典型Fabry病患者的临床特征,并进行致病基因突变分析以提高国内对Fabry病的诊断水平.方法 对16例无血缘关系、经外周血白细胞α-半乳糖苷酶A活性检测确诊的Fabry病男性患者的临床表现进行总结分析;提取患者外周血DNA,对α-乳糖苷酶A基因(GLA基因)的每个外显子及旁侧内含子序列进行PCR产物直接测序;对所发现的新突变进行保守性分析及群体筛查以确定其致病性.结果 16例患者年龄为11-40岁,均具有Fabry病的典型特征,从发病到确诊拖延4～30年.在16例先证者中检测到14个突变,其中错义突变11个、无义突变1个、单碱基缺失1个、剪接位点突变1个,其中8个为新突变(c.119 C>A、c.275 A>T、c.520T>C、c.547G>C、c.647A>G、c.929T>G、c.1045T>A、IVS1-1G>A).群体酶切筛查均未发现有与患者相同的突变.新的错义突变在不同物种GLA基因中均具高度保守性.结论 Fabry病在国内的误诊率高;中国人GLA基因突变无突变热点;基因突变检测是诊断Fabry病的可靠方法.     

ER α-甘露糖苷酶表达降低引起大鼠肝脏上皮细胞微绒毛减少变短

目的：观察蛋白质糖基化改变对大鼠肝脏上皮细胞WB-F344表面微绒毛及在培养中生长的影响。方法：构建含正义或反义6A8 DNA的重建pAGX( )质粒,用脂质体法将重组质粒或空载质粒转染WB-F344细胞,作G418筛选,以有限稀释法作细胞克隆,进行PCR检测新霉素抗性（neo^H）基因以确定转染DNA在细胞基因组中的整合;用P-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside作底物检测细胞匀浆上清中ER α-甘露糖苷酶的活性;采用扫描电镜观察细胞表面的微绒毛,并做生长曲线检测。结果：转染反义6A8的各WB-F344克隆细胞株的匀浆上清中,ER α-甘露糖苷酶活性有不同程度降低,其中以克隆AS1与AS2的降低最明显。克隆AS1与Con A结合增强,表面微绒毛减少、变短,细胞增殖减慢。结论：大鼠肝脏ER α-甘露糖苷酶表达抑制所致的蛋白质糖基化改变,可导致大鼠肝脏上皮细胞WB-F344微绒毛减少、变短,细胞生长速度减慢。     

4岁发病的Fabry病1例

Fabry病是由于溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A基因缺陷导致的X连锁隐性脂质贮积病,患者体内酰基鞘鞍醇三己糖进行性贮积,导致周围神经性疼痛,心、脑、肾、眼等多脏器损害,严重者可于青壮年死亡。但由于临床表现缺乏特异性,Fabry病早期诊断困难。本文报道1例男性患儿,4岁起出现双脚脚趾间断性刀割样疼痛,近2年加重伴双手手指胀痛,11岁时来院就医。患儿病程7年,曾接受多种止痛药物治疗无效,尚未出现心、脑、肾、皮肤、眼等脏器合并症,常规生化、免疫、肌电图、神经传导速度、脑影像学检查未见异常,诊断困难。外周血白细胞α-半乳糖苷酶A活性显著降低[1.0 nmol/(h.mg protein),正常对照值24.5～86.1 nmol(h.mg protein)],符合Fabry病诊断。基因分析显示,患儿α-半乳糖苷酶A基因IVS6+2 T>C剪切突变,其母亲及妹妹未携带相同突变,证实IVS6+2 T>C为新发突变。我国Fabry病发生情况不详,患者多起病隐匿,随着疾病进展逐渐出现发作性肢体疼痛及多脏器严重损害,引起尿毒症、心肌病、卒中,残障率及死亡率很高,早期的鉴别诊断至关重要。α-半乳糖苷酶活性检测是诊断Fabry病的关键,基因突变分析有助于确诊并指导家系的遗传咨询。     

β-半乳糖苷酶的糖苷键作用特异性研究

研究了不同微生物来源乳糖酶的糖苷键键型作用特异性,研究表明米曲霉乳糖酶的水解优先顺序是β-1－6键＞β-1－4键＞β-1－3键,乳酸克鲁维酵母乳糖酶的水解顺序则是β-1－4键＞β-1－6键＞β-1－3键。并发现所实验所用的环状芽孢杆菌对β－1－4键表现出了高度的键专一性。乳糖水解合成低聚双糖的种类和有关动力学数据都表明不同酶源的乳糖酶在键特异性方面存在很大差异。     

米曲霉β—半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖

研究了温度、ＰＨ酶量和起始乳糖浓度对低聚半乳糖合成的影响，发现乳糖水解为单糖和合成低聚糖所需的最佳条件并不相同；     

人正常生育期子宫肌肉的鞘糖脂组成

从正常生育期人子宫肌肉组织分离、纯化了神经节苷脂(Gls)和中性鞘糖脂(N-GSL),测定了两类鞘糖脂的含量、对其组分进行 HPTLC 谱分析,并通过酶水解法对 Gls 主要成份作了鉴定。结果表明子宫肌肉组织的 Gls中 GD_3含量高达56. 6%,其次为 GM_3占16. 9%,GT_(1b)占9. 8%。此外,还有少量 GM_1、 GD_(1a)、与 GD_(1b)。N-GSL 主要组分为 CTH 和 CQH,各为30. 5%与35. 4%,次为 CDH 占16. 8%,CMH 与含多糖基(≥5个糖基)的组分各<10%。本样品每100克湿重神经节苷脂含量约3. 48mg(以唾液酸表示),N-GSL 为3. 71mg(以鞘氨醇表示)。     

腺病毒介导基因转染活体眼组织的研究

目的 :了解活体内不同途径应用腺病毒转染外源基因在眼组织的分布情况 .方法 :将含有 β 半乳糖苷酶 (beta galactosidase,β gal)报告基因的腺病毒 ,在 1× 10 9～ 1× 10 11nfu·L-1的滴度下 ,分别采用玻璃体腔内注射、前房注射、表面点药及球旁注射到大鼠眼内 ,3d ,1,2 ,3和 4wk后用 β gal染色法观察 β gal基因在眼组织内的分布情况 .结果 :各病毒滴度组均可有效地转染外源基因 ,且未观察到细胞病理改变 .玻璃体腔内注射的大鼠眼球组织包括角膜、虹膜、睫状体、视网膜均有β gal基因表达 ,前房注射组角膜、虹膜、睫状体有表达 ,表面点药组仅有角膜上皮细胞表达 ,球旁注射组眼外肌有表达 .注射 3d后开始出现 β gal基因阳性表达 ,持续达 4wk以上 .结论 :腺病毒能有效、稳定地转染外源基因到活体眼组织的角膜、虹膜、睫状体、视网膜     

人子宫肌瘤鞘糖脂的分离纯化及其薄层层析图谱

本文将手术切除的人子宫肌瘤及瘤旁正常肌组织纯化分离的神经节苷脂和中性鞘糖脂进行高效薄层层析,扫描结果发现子宫肌瘤较同一病人正常子宫肌的GD_3的%明显减少,GM_1、多唾液酸神经节苷脂有增高的趋势,而肌瘤的GM_3则有降低的趋向。子宫肌瘤及瘤旁组织的中性鞘糖脂薄层层析图谱相近似,均以红细胞糖苷脂(GbOse_4Cer)及三己糖苷神经酰胺(GbOse_3Cer)为主要成分,乳糖苷及半乳糖苷神经酰胺(Lac-Cer、Gal-Cer)二者的%都少。鉴于子宫肌瘤是激素依赖性肿瘤,这些鞘糖脂组分的改变在肿瘤发生过程中起什么作用,以及它们是否与女性激素作用有关,有待进一步研究。     

大肠杆菌乙酸代谢突变株的培养和外源基因表达

大肠杆菌JL3是JM101经诱变和连续培养所选育到的乙酸耐受性突变株，JL3在复合培养基中产生的乙酸比JM101少，菌体对葡萄糖的得率（YX／S）增加，在基本培养基M中连续培养，最大菌体得率（YG）增大，维持系数（m)降低，存在外源乙酸时，JL3对葡萄糖亲和性增加，显示较强的生长优势，在含有10g/L乙酸钠的复合培养基中，JL3／pUC19的β－半乳糖苷酶比活比JM101／PUC19提高30％。     

大豆茎中两个新鞘脂类化合物

目的：解析两个新化合物的平面结构。方法：应用硅胶柱层析等分离技术分离化合物，根据理化性质及IR，MS，NMR等光谱数据鉴定结构。结果：鉴定两个化合物结构为N-2-(1，3，4-三羟基-十八烷基)-α-羟基-二十五烷酰胺(Ⅰ)，N-2-(1，3，4-三羟基-十八烷基)-α-羟基-二十四烷酰胺(Ⅱ)。结论：化合物Ⅰ，Ⅱ均为新化合物，分别命名为大豆鞘脂A和大豆鞘脂B。     

不同类型标本的衰老相关—β—半乳糖酸苷酶染色方法

目的：研究衰老相关－β－半乳糖苷酶（ＳＡ－β－Ｇａｌ）组化染色在不同类型组织切片中的应用。方法：比较血涂片、冰冻切片及石蜡切片在不同条件下ＳＡ－β－Ｇａｌ的显色效果。结果与结论：冰冻切片结果良好；石蜡切片经抗原修复后，结果不及未经抗原修复者；血涂片以４０ｇ／Ｌ多聚甲醛固４５ｍｉｎ者效果最佳。ＳＡ－β－Ｇａｌ可用于不同类型的组织标本。     

Fabry病一例及文献回顾

Fabry病的特点是α糖苷酶A缺陷,造成全身性的遗传性代谢障碍,是X连锁的遗传性疾病,当α糖苷酶A缺陷时会引起组织和血浆中鞘糖脂的异常沉积[1],日久鞘糖脂会沉积于全身的各个系统,导致多系统受害,其中以肾脏及心脏受累最常见,也可见神经系统及皮肤的损害[2],较为罕见.本文报道一例以神经系统为主要表现的Fabry病,并对...     

神经节苷脂与脑缺血性疾患

神经节苷脂 (ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ ,Ｇｇｓ)是一类含唾液酸的糖鞘脂 ,参与细胞膜上细菌毒素、病毒等受体的组成 ,并在细胞分化、黏附、癌基因转化、抑制肿瘤生长[1 ] 、调节免疫反应、脊神经突触传递及细胞凋亡[2 ] 等方面起作用。近来发现Ｇｇｓ亦参与介导ＨＩＶ 1入侵的     

重组β—半乳糖苷酶腺病毒载体的构建及其在血管闰滑肌细胞中的表达

目的构建表达β-半乳糖苷酶(β-gal)的重组腺病毒,以期为再狭窄的基因治疗研究提供一个对照载 体和为腺病毒介导的基因转移的安全性、可行性、转染效率的研究提供一有用的工具。方法采用基因重组方法构 建穿梭质粒pAd-β-gal,通过同源重组法制备出重组腺病毒Ad-β-gal,转染的293细胞用X-gal染色鉴定Ad-β -gal的正确与否。通过测定260nm的紫外光吸收值估计病毒高度。原代大鼠血管平滑肌细胞采用组织块培养 法。Ad-β-gal以100moi感染VSMCs并行X-gal染色,以观察β-gal在VSMCs中的表达情况。结果成功构建了 pAd-β-gal穿梭质粒和Ad-β-gal重组腺病毒,转染的293细胞和VSMCs经X-gal染为蓝色,病毒浓度为9×l011 pfu/ml,以100moiAd-β-gal转染VSMCs,其转染效率接近l00%。结论表达β-gal的重组腺病毒构建成功,并在 VSMCs中得到有效表达,本研究为将来再狭窄基因治疗研究提供了一对照载体,也为腺病毒介导的基因转移的安 全性、可行性、有效性的研究提供了一有用的工具。     

Fabry病1例及文献回顾

Fabry病的特点是α糖苷酶A缺陷,它是一种全身性的遗传性代谢障碍,是X连锁的遗传性疾病,因α糖苷酶A参与鞘糖脂的分解代谢,所以该酶缺陷时会造成组织和血浆中鞘糖脂的沉积,日久鞘糖脂会沉积于全身的各个系统,导致多系统受害其中以肾脏及心脏受累最常见,另外也可见神经系统及皮肤的损害。本文报道一例以神经系统为表现的Fabry病,以期对该病有更进一步的认识。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂药代动力学研究

神经节苷脂是含唾液酸的酸性糖鞘脂，是细胞膜的组成成分，在中枢神经系统，尤其在大脑灰质中含量丰富。单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialote-trahexosylganglioside，GM1)是最重要的神经节苷脂之一，在中枢神经系统病变的治疗中起重要作用，具有促进神经重构的功能，可以加速神经细胞修复、最大程度的恢复原有的神经功能。