雌激素受体启动子异常甲基化作为白血病早期诊断分子标志物的实验研究

目的 探讨雌激素受体基因启动子区异常甲基化作为白血病早期诊断分子标志物的可能性.方法 应用MSP和RT-PCR检测40例急性白血病患者(未治疗)外周血雌激素(ER)受体启动子甲基化及其表达状态,Western-blot检测白血病细胞株以5'-Aza-Dc去甲基化前后蛋白表达的差异.结果 6种白血病细胞株以5'-Aza-Dc去甲基化后ERα蛋白表达明显增强,97.5%的急性白血病患者ERα-A启动子呈甲基化状态并导致其表达异常.结论 白血病细胞的雌激素受体基因启动子(ERα-A)存在异常甲基化现象并导致其基因表达沉默,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示ERα-A基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标志物.     

TNF-α诱导人蜕膜细胞凋亡基因表达谱的分析

目的:研究TNF-α诱导人蜕膜细胞异常凋亡后基因表达谱的变化,为了解病理妊娠蜕膜细胞基因表达及药物治疗研究提供基础.方法:体外常规进行人蜕膜细胞培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,采用人全基因组17KcDNA基因芯片分析TNF-α作用后的基因表达谱变化情况,分析基因的变化趋势.结果:TNF-α诱导蜕膜细胞后检出基因9 320条,上调基因36条,下调基因48条.表达上调的已知基因主要为细胞周期依赖性蛋白激酶和抑制剂基因、DNA损伤及修复基因,另外还有氧化压力和炎症损伤基因等.表达下调的基因与细胞营养、细胞生长、细胞周期及信号转导相关.结论:TNF-α诱导蜕膜细胞异常凋亡.     

PML-RARα反义核酸增强NB4细胞对硒化壳聚糖诱导分化作用敏感性的探讨

[目的]研究PML-RARα反义核酸(antisense oligodexynucleotide,ASODN)对硒化壳聚糖诱导的NB4细胞分化敏感性的影响. [方法]人工合成PML-RARαASODN经阳离子脂质体包裹后瞬时转染NB4细胞,采用RT-PCR检测转染后PML-RARα基因表达情况,通过镜下观察细胞形态改变,NBT法观察细胞功能变化及流式法检测细胞膜CD11抗原表达来观测细胞分化. [结果]经PML-RARαASODN处理的NB4细胞PML-RARα基因表达明显下调,PML-RARα基因的反义核酸和硒化壳聚槠均能提高细胞NBT还原率,升高CD11b抗原,二者合用,则NBT还原率和CD11b抗原表达进一步增强.[结论]阳离子脂质体转染PML-RARαASODN具有促进硒化壳聚糖诱导NB4细胞分化作用的敏感性.     

异黄酮对前列腺癌细胞的激素受体基因表达的影响

[目的] 通过大豆异黄酮的活性物质染料木黄酮和大豆苷元抑制前列腺癌PG-3和LNCaP细胞增殖和对激素基因表达的影响，探讨大豆异黄酮治疗和预防前列腺癌的可能机制。[方法] 0、10、20、40、60、80和160μmol／L剂量组的染料木黄酮和大豆苷元处理前列腺癌细胞，细胞存活率用MTT方法检测，α雌激素受体(ERα)、β雌激素受体(ERβ)、雄激素受体(AR)和血管上皮生长因子(VEGF)等基因的mRNA表达用RT-PCR进行检测。[结果] 染料木黄酮和大豆苷元对PC-3、LNCaP细胞具有明显的抑制生长作用，在160μmol／L的浓度时，染料木黄酮、大豆苷元作用72h后，PC-3细胞的存活率分别为12．28％和44．88％，LNCaP细胞的存活率分别为25．48％和43．14％，其抑制效应具有时间和剂量依赖性，同时发现对．PC-3细胞的VEGF、ERα和ERβ基因表达下调，AR基因处理前后没有检测到；对LNCaP细胞的VEGF和AR基因表达下调，ERα和ERβ的表达并无影响。[结论] 大豆异黄酮能抑制前列腺癌细胞的增殖效应，存在时间和剂量效应关系，雌激素受体基因可能直接在大豆苷元抑制PC-3细胞的增殖中参与作用，而染料木黄酮抑制PC-3细胞和染料木黄酮及大豆苷元抑制LNCaP细胞可能主要是通过Akt通路影响VEGF和AR等基因而实现。     

α-生育酚琥珀酸酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其作用的分子形式

目的　探讨α- 生育酚琥珀酸酯 (α TOS)诱导人胃癌SGC -790 1细胞凋亡时发挥作用的分子形式。方法　在体外培养的SGC 790 1细胞中 ,分别加入 5、10和 2 0 μg ml的α- TOS ,以 2 0 μg mlα 生育酚 (α- TOH)和1μl/ ml乙醇为对照培养 4 8小时后采用联咪二苯吲哚 (DAPI)染色 ,荧光显微镜下观察细胞形态 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段 ,并用HPLC法检测细胞内和培养液中α TOS和α- TOH含量。结果　细胞经DAPI染色发现 ,10 μg ml和 2 0 μg mlα TOS处理组细胞核染色体浓集 ,伴有细胞核固缩和核碎片形成。琼脂糖凝胶电泳检测发现 ,上述 2组细胞DNA出现梯形分子条带。在α -TOS处理的细胞内和培养液中HPLC仅检测到α- TOS ,未发现其分解产物α- TOH。结论　α TOS能诱导SGC 790 1细胞凋亡 ,且是以不分解的整体分子形式发挥其诱导凋亡作用 ,与α- TOH的作用无关。     

苯诱发白血病动物模型的研究现状

苯是确认的致癌物,持续苯暴露可引起血液系统肿瘤。流行病学研究已经证实职业苯暴露人群急性髓系白血病的高发病率。近年,苯诱导的急性白血病动物模型的建立促进了苯致白血病机制的深入研究,本文对苯皮下注射及吸入染毒两种方法诱导白血病动物模型的建立进行了综述。     

亚砷酸钠暴露对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞雌激素受体α表达的差异研究

目的研究亚砷酸钠(Na As O2)暴露对雌雄ICR胎鼠鼠肺Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法孕期20 d的ICR胎鼠,分辨雌雄,以Ⅰ型胶原酶分离AECⅡ,以免疫黏附法和差速贴壁法纯化细胞,以免疫荧光法鉴定纯度;以0.5、1.25、5μmol/L Na As O2分别处理AECⅡ12 h和24 h;以不含Na As O2的培养基处理AECⅡ12 h和24 h作空白对照组,每组分设6个重复剂量。以实时荧光定量PCR检测各组ACEⅡ内ERαm RNA表达情况,以western blot检测各组ERα蛋白的表达情况。结果免疫荧光显示纯化后AECⅡ纯度为85%±5%;经Na As O2处理12 h,雌性AECⅡ中各剂量组ERαm RNA和中、高剂量组的蛋白表达高于同剂量组雄性(P0.05);雌性各剂量组ERαm RNA和蛋白表达均高于同性别对照组;雄性中剂量组蛋白表达高于雄性对照组。经Na As O2处理24 h,雌性低剂量组ERαm RNA表达和中、高剂量组蛋白表达高于同剂量组雄性(P0.05);雌雄各剂量组ERαm RNA和中高剂量组蛋白表达均高于各自对照组,雌雄对照组之间ERαm RNA和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠暴露可致雌性胎鼠AECⅡ内ERα表达高于雄性。     

ω-3PUFA及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞生长的影响

目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将ω-3PUFA可调控的跨膜型TNFα真核表达载体转导入HL-60和MCF-7细胞,免疫荧光细胞化学方法检测ω-3PUFA对转染细胞外源基因表达的调控,生长曲线、流式细胞和DNA梯形带分析检测ω-3PUFA对转染细胞增殖能力和凋亡的影响。结果:在6.0×10-5mol/Lω-3PUFA诱导下转染细胞外源性跨膜型TNFα表达增加。HL-60和MCF-7细胞经6.0×10-5mol/Lω-3PUFA处理后增殖能力减弱,但只有HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期及形成DNA梯形带。经ω-3PUFA处理后,以上变化在HL-60和MCF-7转染细胞中均更为显著。结论:ω-3PUFA诱导的外源性跨膜型TNFα基因产物可以增强ω-3多不饱和脂肪酸的抗肿瘤能力,而诱导细胞凋亡可能是其中重要机制之一。     

SULT1A3、ERα、ERβ在子宫肌瘤组织中的表达及其与子宫肌瘤发病的相关性分析

目的探讨SULT1A3、ERα、ERβ在子宫肌瘤组织中的表达及其与子宫肌瘤发病的相关性分析。方法通过对子宫肌瘤组(行子宫切除术的患者32例)和正常组(子宫下垂严重,行子宫切除术的患者20例)的病理切片组织,采用免疫组织化学、Western blot、qRT-PCR检测的方法,对SULT1A3、ERα、ERβ蛋白和mRNA水平进行分析。结果子宫肌瘤组中SULT1A3、ERα的阳性表达为65.63%和96.88%,正常组中SULT1A3、ERα的阳性表达为100%和70%,子宫肌瘤组中SULT1A3低于正常组(P<0.01),子宫肌瘤组中ERα高于正常组(P<0.05),正常组中ERβ的阳性表达为35%,子宫肌瘤组ERβ的阳性表达为65.63%,正常组中ERβ显著低于子宫肌瘤组(P<0.01),正常组中SULT1A3蛋白灰度值表达高于子宫肌瘤组(P<0.05),正常组中ERα、ERβ蛋白灰度值表达低于子宫肌瘤组(P<0.05),在子宫肌瘤组中SULT1A3与ERα的表达呈现负相关(P<0.05),ERα与ERβ呈正相关(P<0.05)。结论SULT1A3水平升高,会促使ERα表达降低,从而减弱子宫肌瘤发病的发生和发展。     

维生素D3和他莫西芬对乳腺癌细胞凋亡影响

目的 研究受1,25二羟维生素素D3调控的雌激素受体α表达载体联合他莫西芬对雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将本室构建的含有4个拷贝维生素D反应元件(VDRE)和胸苷激酶启动子(Tk)的VDRE-Tk-ERα表达载体转染到MDA-MB-231细胞中,利用免疫荧光法检测1,25二羟维生素D3对雌激素受体α(ERα)的诱导表达并通过末端原位法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬诱导转染该表达质粒的MDA-MB-231凋亡诱导效应.用免疫印迹(Western blot)法检测细胞核因子kB(NFkB)P65活性亚单位表达以及核转位情况的变化.结果 1,25二羟维生素D3能够有效诱导MDA-M-231VDRE-ERα细胞内ERα的表达,在此基础上与他莫西芬联合作用较对照和单独作用组能够有效诱导该乳腺癌细胞发生凋亡.与此同时,NFkB P65活性亚单位的表达以及核转位均受到不同程度的抑制.结论 利用1,25二羟维生素D3可通过靶控外源性雌激素受体α的表达进而调控NFkB P65活性亚单位的表达及活性,从而诱导细胞发生凋亡并最终恢复乳腺癌细胞对他莫西芬的化疗敏感性.     

父母职业与儿童白血病

儿童白血病病例-对照研究,发现母亲孕期从事化学品生产及处理,金属冶炼及处理、农业及林业生产、制药及医务等工作与子代白血病危险度增高有关,母亲孕期接触苯、汽油、农药等,其子代急性淋巴及非淋巴细胞白血病均见升高,但苯的暴露与急性非淋巴细胞白血病关系更为密切。未发现父亲职业及职业暴露与儿童白血病有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-α对妊娠期肝内胆汁淤积症代谢的影响及调控机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)信号通路对妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)代谢的影响,初步揭示ICP肝功能异常的发病可能机制,为其防治提供理论基础。方法收集2013年1月-2014年1月于该院就诊人群的正常妊娠胎盘组织和ICP妊娠胎盘组织各30例;体外分离和培养胎盘组织,双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定胎盘组织培养上清液和组织中的PPAR-α、雌激素受体α(ERα)及雌激素受体β(ERβ)的表达水平;采用PPAR-α激活物培养ICP患者组织,对ICP患者胎盘组织活性进行检测,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胎盘组织中PPAR-α、ERα及ERβ的m RNA表达,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测胎盘组织中PPAR-α、ERα及ERβ的蛋白表达。结果 ICP患者胎盘组织培养液和胎盘组织中PPAR-α的表达较对照组均明显下调,而ERα和ERβ的表达较对照组均明显上调;使用PPAR-α激活剂处理的ICP患者胎盘组织活性明显提高;使用PPAR-α激活剂处理的胎盘组织中ERα和ERβ的m RNA水平和蛋白水平表达明显下调。结论 PPAR-α可能通过上调ERα和ERβ的表达促进了ICP的发生,可作为临床上防治ICP的分子靶点。     

反式二羟环氧苯并(a)芘所致人支气管上皮细胞POLK基因高表达

目的观察不同剂量反式二羟环氧苯并(a)芘(anti-BPDE)处理对人支气管上皮细胞(16HBE)POLK基因表达的影响。方法分别以0.25、0.50、1.00、2.00μmol/L的反式-BPDE1次或3次处理16HBE细胞,采用TaqmanMGB探针实时定量聚合酶链反应方法相对定量POLK和POLZ基因表达,同时对反式-BPDE转化的16HBE及肺癌H1299细胞POLK基因表达进行了分析。结果反式-BPDE1次处理及3次处理可诱导正常16HBEPOLK基因高表达。反式-BPDE转化16HBE和肺癌H1299细胞POLK基因表达明显增高,分别是正常16HBE的2.25和5.49倍。结论反式-BPDE处理可致16HBEPOLK基因高表达。     

SDF－1α通过 p38MAPK－HIF－1α通路加强卵巢癌细胞转移的机制探讨

目的：明确缺氧诱导因子－lα（ HIF－1α）在基质细胞衍生因子－1α（ SDF－1α）调控的卵巢癌细胞迁移中的作用及其机制。方法采用免疫组化分析HIF－1α在卵巢癌组织中的表达水平;将HIF－1αsiRNA转染SKOV3卵巢癌细胞,分别用SDF－1α和SDF－1α＋SB203580处理,用RT－PCR及western blotting分析HIF－1α、p38MAPK的表达水平。结果免疫组化分析表明,HIF－1α在卵巢癌组织中高表达,同时SDF－1α可明显诱导HIF－1α的mRNA及蛋白水平的表达;当用HIF－1αsiRNA转染后,细胞中HIF－1α的表达水平明显下降。当用通路抑制剂SB203580处理后,SDF－1α诱导的HIF－1α水平明显降低。结论 SDF－1α可通过p38MAPK－HIF－1α通路来调控卵巢癌细胞的迁移。因此,该研究将为卵巢癌的防治提供新的研究方向。     

TNF-α对膀胱癌细胞株NF-κB信号通路分子表达及细胞增殖水平的影响

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导对膀胱癌细胞NF-κB通路分子表达及增殖水平的影响。方法TNF-α处理T24、5637膀胱癌细胞株,实时荧光定量PCR检测NF-κB信号通路Rel A、Rel B基因表达,CCK-8法检测细胞增殖活性。结果 T24细胞Rel A、Rel B表达在作用3 h和1 h后出现上调,5637细胞Rel A表达在TNF-α作用3 h后显著升高,差异均有统计学意义(P0.05),Rel B表达差异无统计学意义(P0.05)。TNF-α作用3 h的Rel A基因在2株细胞表达上调程度差异有统计学意义(P0.05);TNF-α作用不同时间点的Rel B表达改变程度在2株细胞差异均有统计学意义(P0.01)。TNF-α作用于2株细胞后,处理组和阴性对照组的存活率差异均无统计学意义(P0.05)。结论膀胱癌细胞NF-κB信号通路Rel A、Rel B表达上调可能是TNF-α作用的早期事件,TNF-α对该通路的作用具有细胞选择性和不平衡性,其对膀胱癌细胞增殖活性无显著影响。     

接苯工人外周血TCR Vα基因谱系和克隆性分析

目的了解接苯工人外周血T细胞的TCR Vα基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增16例接苯工人外周血单个核细胞中29个TCR Vα基因的互补决定区3（CDR3），PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果健康者表达大部分的Vα亚家族，15例接苯工人分别表达1～10个Vα亚家族，1例重度苯中毒工人29个亚家族均未表达。12例接苯工人均存在1个或多个Vα亚家族T细胞出现寡克隆、双克隆及寡克隆趋势。Vod2、Vod4和Vα19亚家族出现寡克隆性T细胞的频率较高。结论接苯工人外周血T细胞出现TCR Vα亚家族限制性利用和存在部分Vα亚家族寡克隆T细胞。     

活性维生素D_3协同他莫西芬对裸鼠乳腺癌细胞移植瘤的抑制效应

目的:探讨活性维生素D3联合他莫西芬对转染pVDRE-Tk-ERα质粒的MDA-MB-231乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的协同抑制效应及其相应机制。方法:将重组pVDRE-Tk-ERα真核表达质粒转染到ER阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞内并将处于对数生长期的MDA-MB-231VDRE-ERα细胞皮下注射到Balb/c裸鼠体内,4w后,分别用0.5μg/kg的活性维生素D3和50mg/kg的他莫西芬单独及联合处理裸鼠移植瘤模型20d,测量各组裸鼠移植瘤的体积大小。利用HE染色观察移植瘤的组织结构,用免疫组化法检测移植瘤细胞Ki-67蛋白的表达变化以检测移植瘤细胞的增殖活性变化。结果:活性维生素D3和他莫西芬联合作用组较对照和单独作用组能够显著减小裸鼠移植瘤的体积并有效改变其组织病理结构,二者联合运用还能在体内显著抑制乳腺癌细胞的增殖活性。结论:活性维生素D3在体内可通过VDRE-Tk启动子诱导ERα的表达从而有效恢复雌激素阴性乳腺癌细胞对他莫西芬的敏感性。     

曲美他嗪对糖尿病大鼠心肌缺氧诱导因子-1α表达影响的研究

目的观察曲美他嗪对糖尿病大鼠心肌中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法单次腹腔一次性注射链脲佐菌素（50 mg/kg）诱导建立糖尿病大鼠模型,尾静脉采血测定糖化血红蛋白（HbA1C）及血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）,随机分为观察组30例（曲美他嗪2 mg/kg,每日1次灌胃）,对照组28例给予等量生理盐水灌胃,实时荧光定量PCR方法检测HIF-1αmRNA的表达水平。结果观察组大鼠曲美他嗪治疗后心肌HIF-1αmRNA的表达量显著低于对照组（P〈0.05）,大鼠心肌中HIF-1α表达量与HbA1C、TC及LDL-C呈正相关（P〈0.05）。结论曲美他嗪可显著降低糖尿病大鼠心肌HIF-1α的表达;糖尿病大鼠心肌中HIF-1α的表达量与血糖、血脂相关。     

分析急性白血病儿童血液和脑脊液中TNF-α的临床变化及其意义

目的:探讨分析急性白血病儿童血液和脑脊液中TNF-α的临床变化及其意义。方法:选取2011年5月~2013年5月收治的50例急性白血病儿童患者,分成17例急性骨髓性白血病(AML)和18例急性淋巴细胞白血病(ALL),以及15正常例对照患儿。给予50例患儿采用放射免疫法分析检测患儿治疗前、完全缓解(CR)时、连续缓解时血液及脑脊液中TNF-α水平。结果:急性骨髓性白血病和急性淋巴细胞白血病患儿治疗前血液TNF-α明显高于正常对照患儿,经对比,具有明显统计学意义(P0.05)。后经CR后将至正常水平并在连续CR期中处于正常水平。急性淋巴细胞白血病患儿和急性骨髓性白血病患儿治疗前脑脊液的TNF-α明显高于15例正常对照患儿,经对比,具有明显统计学意义(P0.05),经采用鞘内注射治疗后TNF-α逐渐恢复正常水平。结论:TNF-α是具有广泛生物学作用的细胞因子,脑脊液中的TNF-α和血液水平可充分反应急性白血病患儿肿瘤负荷受累程度,为后续治疗起着重要的指导意义。     

金雀异黄素对子宫内膜异位症大鼠模型中ERα、ERβ表达的影响

目的:探讨金雀异黄素(GEN)对子宫内膜异位症(EMs)大鼠模型中雌激素受体(ER)α、β表达水平的影响。方法:将大鼠分为正常组(A组)和子宫内膜异位症组;子宫内膜异位症组随机分为4组:模型组(B组)、GEN低剂量组(C组)、GEN中剂量组(D组)和GEN高剂量组(E组)。测量血清中雌二醇(E2)的含量,通过RT-PCR方法检测种植物中ERα、ERβ在mRNA水平上的表达,免疫组化法观察异位内膜组织中ERα、ERβ的表达。结果:与治疗前比较,血清中E2的含量差异无统计学意义(P>0.05);高剂量GEN组子宫内膜异位模型中种植物组织中ERα、ERβmRNA水平下降;种植物中ERα的表达在各组之间无明显差异,但GEN中剂量和GEN高剂量治疗组中种植物的ERβ蛋白表达较模型组明显下降(P<0.01)。结论:GEN对EMs的抑制作用可能更趋向于ERβ选择性拮抗剂的作用。