革兰阴性杆菌超广谱β内酰胺酶检测与耐药性分析

随着广谱抗生素在临床普遍应用，尤其是近年来三代头孢菌素的广泛使用，使革兰阴性杆菌(主要为肠杆菌科细菌)产生了ESBLs，此酶能水解所有青霉素类，第一、二、三代和部分第四代头孢菌素以及单环氨曲南类，给临床治疗带来了很大困难，因此ESBLs的检测对于指导临床治疗，控制院内感染的传播具有重要意义，本文就我院2003年3月—2004年3月，对于临床标本所分离的革兰阴性杆菌ESBLs检测与耐药性结果作了统计分析，现报道如下：     

革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的状况及其耐药性监测

目的调查产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的革兰阴性杆菌的耐药状况。方法采用确证试验法检测产ESBLs的革兰阴性杆菌。结果187株革兰阴性杆菌中检出ESBLs阳性菌24株，检出率为12．83％；它们对β-内酰胺类抗生素呈现极高的耐药性。结论产ESBLs的革兰阴性杆菌具有极高的耐药性及多重耐药性。检测革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的状况并探讨它们的耐药谱，有利于指导临床合理使用抗生素。     

239株革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的：检测超广谱β—内酰胺酶(extended spectrum β-lactamases,ESBLs)在革兰阴性杆菌中的表达及耐药特点，为临床积累经验。方法：应用双纸片协同试验和确证试验对239株革兰阴性杆菌进行ESBLs检测，同时分析药敏结果。结果：239株革兰阴性杆菌中ESBLs的检出率为20．5％(49／239)，其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、其他菌种的检出率分别为23．3％(21／90)、33．3％(8／24)、16．0％(20／125)。产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌菌株对青霉素类、第三代头抱菌素、β—内酰胺酶抑制药、β—内酰胺类、氨基糖苷类的耐药率分别为100％，57％～95％、19％～71％、0～90％、38％～90％，其中耐药率最低的为β—内酰胺类的亚胺培南-西司他丁(0)、β—内酰胺酶抑制药的哌拉西林-三唑巴坦(19％)和氨基糖香类的阿米卡星(38％)。结论：不仅大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌可产ESBLs，其他革兰阴性杆菌也可产ESBLs；对产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌感染的治疗可首选亚胺培南-西司他丁。     

革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的状况及其耐药性监测

目的调查产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的革兰阴性杆菌的耐药状况.方法采用确证试验法检测产ESBLs的革兰阴性杆菌[1].结果187株革兰阴性杆菌中检出ESBLs阳性菌24株,检出率为12.83%;它们对β-内酰胺类抗生素呈现极高的耐药性.结论产ESBLs的革兰阴性杆菌具有极高的耐药性及多重耐药性.检测革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的状况并探讨它们的耐药谱,有利于指导临床合理使用抗生素.     

产超广谱β内酰胺酶和高产AmpC酶革兰阴性杆菌耐药性检测

目的了解铜陵地区产ESBLs和高产AmpC酶革兰阴性杆菌的耐药性.方法2003年10月至2004年9月铜陵地区临床分离的革兰阴性杆菌270株,用Kirby-Bauer法进行药敏试验,根据NCCLS 2002年判断标准分析结果.结果270株革兰阴性杆菌中检出产ESBLs或（和）高产AmpC酶68株,检出率25.2%,其中单产ESBLs 49株,以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌中检出率最高,分别为31.6%和31.0%：单产AmpC酶3株,均为阴沟肠杆菌,同时产AmpC酶和ESBLs16株,其中鲍曼不动杆菌8株.产酶株对头孢菌素耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs菌株对替卡西林-克拉维酸、头孢哌酮-舒巴坦等含酶抑制剂的抗菌药物耐药率在50%以上,对亚胺培南敏感性好.结论ESBLs和高产AmpC酶是导致革兰阴性杆菌耐药的主要两类酶,产酶株对多种抗菌药物耐药,仅对亚胺培南敏感.     

AmpC酶及超广谱β内酰胺酶在126株革兰阴性杆菌中的分布

目的：研究临床分离的革兰阴性杆菌不同菌株产AmpC酶及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分布。方法：AmpC酶的检测是通过冻融法获得酶粗提物,然后作三维试验,以狭缝与抑菌圈交界处是否出现扩大的长菌区域来判断试验的结果。ESBLs的检测是采用纸片确证试验。结果：126株对第三代头孢菌素耐药或中介的革兰阴性杆菌中产AmpC酶株有58株(占46％),产ESBLs株有28株(占22．6％)。结论：ESBLs及AmpC酶已成为介导革兰阴性杆菌耐药的两大主要因素。     

革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶头孢菌素酶状况及耐药性研究

目的了解本院目前常见的革兰阴性杆菌菌种分布及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC）情况,分析产酶菌耐药谱特征。方法用法国生物梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定与药敏系统对革兰阴性杆菌进行鉴定,对可疑产ESBLs、AmpC的菌株,用标准纸片扩散法和三维试验法进行两种酶的表型确证,再用纸片扩散法行药物敏感性检测。结果检出单产ESBLs、单产AmpC、同时产ESBLs和AmpC的细菌分别为175株（43.8%）、54株（13.5%）和28株（7.0%）。ESBLs检出率以肺炎克雷伯菌最高,为60.3%;AmpC检出率在阴沟肠杆菌中最高,为46.7%。单产ESBLs菌株对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦以及哌拉西林/三唑巴坦的敏感性较高,耐药率分别为2.3%、26.3%和33.1%;单产AmpC菌株对亚胺培南和头孢吡肟具有较高的敏感性,耐药率分别为3.7%和29.6%;同时产AmpC和ESBLs的菌株仅对亚胺培南敏感,未发现耐药株。结论革兰阴性杆菌产ES-BLs、AmpC率较高,该类菌对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感。     

革兰阴性杆菌中VEB-1型超广谱β-内酰胺酶的分布情况调查

目的分析上海第二医科大学附属瑞金医院(以下简称瑞金医院)和上海交通大学附属第六人民医院(简称市六医院)分离的340株革兰阴性杆菌中VEB-1型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的分布，并分析瑞金医院灼伤科患者标本中分离的产VEB-1型ESBL铜绿假单胞菌是否有同源性。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增细菌的veb-1基因，用PCR-RFLP检测并分型整合子，以ERIC2为引物，采用随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)对瑞金医院灼伤科分离到的16株产VEB-1型ESBL的铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果市六医院分离的菌株中未检测到veb-1基因，瑞金医院仅在灼伤科来源的铜绿假单胞菌中检出VEB-1型ESBL，且这些菌株用RAPD分析具有同源性。结论瑞金医院灼伤科流行携带veb-1型ESBL基因的铜绿假单胞菌。     

革兰阴性杆菌超广谱β—内酰胺酶检测与耐药性分析

目的：了解本院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的产生率及耐药性。方法：按照2000年NCCLS推荐的纸片扩散初筛法和确认法检测ESBLs及K-B法进行药敏试验。结果：8种革兰阴性杆菌ESBLs的检出率以肺炎克雷伯菌最高（43.4％）；检测ESBLs的药物中CTX和CTX/CA的阳性率高于其他药物，分别为89.6％（120/134）、91.8％（123/134）；产ESBLs菌株对各种抗生素的耐药率明显高于非ESBLs菌株，亚胺培南仍然未出现耐药现象。结论：临床微生物实验室应加强革兰阴性杆菌ESBLs与耐药性检测，进一步探讨细菌的耐药机制，指导临床合理用药，减少或减缓细菌耐药的产生。     

济南地区革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的现状及药敏检测

目的：了解济南地区耐第三代头泡菌素的革兰阴性杆菌中AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的状况，并对18种抗菌药物作药敏试验，比较产酶菌与非产酶菌对18种抗菌药物的耐药率。为临床治疗产酶菌引起的感染提供理论依据。方法：应用头泡西丁三维试验检测AnpC酶。应用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散确证法检测ES-BLs。以K—B琼脂扩散法做药敏试验。对AmpC阳性进行质粒接合试验。结果：在受检的250株革兰阴性杆菌中，53株(21．2％)产AmpC酶，98株(39．2％)产ESBLs，6株(2．4％)同时高产AmpC ESBLs酶。53株AmpC酶阳性菌中，6株临床分离菌的耐药质粒接合转移成功。产酶菌对头孢吡肟、亚胺培南和阿米卡星耐药率低。在7种喹诺酮类抗菌药物中，左氧氟沙星及加替沙星的耐药率较其他喹诺酮类低。结论：济南地区革兰阴性杆菌耐药性的产生，是由于细菌产生AnpC酶和ES-BLs引起的，以ESBLs为主。AmpC酶既可以染色体介导也可以质粒介导，以染色体介导为主。治疗产2种β内酰胺酶的细菌引起的感染亚胺培南为首选，头孢吡肟、左氧氟沙星、加替沙星和阿米卡星可作为选用药物之一。     

产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的检测

目的研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药谱。方法收集2002年8月至2003年6月间从嘉善县第一人民医院分离的167株大肠埃希菌、154株肺炎克雷伯菌和67株阴沟肠杆菌，用头孢噻肟或头孢他啶药敏纸片筛选产ESBLs可疑株；用头孢噻肟和头孢噻肟加克拉维酸或头孢他啶和头孢他啶加克拉维酸双纸片扩散法检测ESBLs；采用K-B法进行药敏试验。结果符合CTX筛选标准的有158株，符合CAZ筛选标准的有94株，两者都符合的有76株，共176株产ESBLs可疑株。CTX和CTV／CA双纸片检出115株阳性，CAZ和CAZ／CA双纸片检出62株阳性，两种双纸片法都为阳性的有51株，共检出126株产ESBLs菌株。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的ESBLs检出率分别为30%（50／167）、34％（52／156）和36％（24／67）。产ESBLs株对氨苄西林、阿齐霉素和克林霉素的耐药率近乎100％，对阿米卡星、环丙沙星和呋喃妥因的耐药相对较低，除2株产ESBLs肺炎克雷伯菌耐亚胺培南外，其余均为敏感。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的产ESBLs率较高，耐药性严重。筛选产ESBLs可疑株的最佳纸片为CTX，表型确证产ESBLs菌株的最佳双纸片为CTX和CTX／CA，阴沟肠杆菌的产ESBLs率超过肺炎克伯菌成为主要产ESBLs菌。     

革兰阴性杆菌诱导酶、超广谱酶测定及影响因素探讨

对诱导型β-内酰胺酶及超广谱β-内酰胺酶 (ESBL )试验影响因素进行探讨 ,旨在提高两酶的阳性检出率。方法 :采用纸片相邻法 ,诱导酶测定以亚胺培南为诱导剂放平皿中央 ,周围以头孢他啶、头孢曲松等靶药物纸片与之相邻。 ESBL测定以复方阿莫西林放平皿中央 ,周围以头孢他啶、头孢曲松为底物与之相邻。结果 :诱导酶测定诱导剂与靶药物之间距离以 1 5mm为宜 ,靶药物以两种以上为佳 ,可以起到互补作用 ,并可提高其阳性率。ESBL测定复方阿莫西林和头孢曲松 (或头孢他啶 )之间的距离以 1 5mm为最佳 ,底物亦可选择两种以上三代头孢菌素 ,以提高 ESBL的阳性检出率。结论 :诱导酶和 ESBL测定可以弥补体外常规药敏试验之不足 ,对临床用药有重要的指导作用。     

产超广谱β-内酰氨酶革兰阴性杆菌医院感染分析

近年来 ,细菌耐药性问题正日益成为全球医药界关注的焦点 ,随着三代头孢菌素的问世及其在临床上广泛使用 ,对 β 内酰胺类药物耐药的细菌增多也呈严重趋势。导致细菌对 β 内酰胺类药物耐药的最主要机制是产生特异性的 β 内酰胺酶 ,包括由质粒介导的超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)和主要由染色体编码的AmpC 酶。因为产ESBLs耐药革兰阴性杆菌为多重耐药 ,很容易引起医院感染的爆发流行 ,非常难以控制。了解产ESBLs革兰阴性杆菌的耐药性和发生该类细菌感染的危险因素 ,对于控制此类耐药菌及其耐药性的传播 ,指导临床用药有着非常重要的意…     

三维试验提取法测定革兰阴性杆菌高产I型β—内酰胺酶初步研究

目的：了解革兰阴性杆菌高产I型β－内酰胺酶（AmpCs）与超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）的发生率。方法：应用三维试验提取法，以头孢西丁为底物测定细菌高产AmpCs；应用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的纸片扩散法表型确证试验测定ESBL。结果：381株革兰阴性杆菌AmpCs和ESBLs的发生率分别为：大肠埃希菌2．0％（2／102）、31．4％（32／102），肺炎克雷伯菌1．4％（2／142）、38．0％（54／142），阴沟肠杆菌57．4％（31／54）、66．7％（36／54），粘质沙雷菌53．8％（7／13）、61．5％（8／13），枸橼酸杆菌属37．5％（6／16）、50％（8／16），变形杆菌属7．1％（1／14）、28．6％（4／14），铜绿假单胞菌16．7％（5／30）、33．3％（10／30），不动杆菌属11．1％（1／9）、66．7％（6／9）。结论，革兰阴性杆菌均有不同程度产高产I型β－内酰胺酶（AmpCs）及超广谱β－内酰胺酶（ESBLs），对其进行监测，有助于临床合理使用抗生素。     

革兰阴性杆菌诱导型β—内酰胺酶试验及药敏检测结果

对135株芏兰阴性杆菌进行诱导型β-内酰胺酶检测的同时对产酶组与非产酶组药敏结果加以分析，结果，产诱导型β-内酰胺酶细菌60株，占44％，其中以铜绿假单胞菌，产气肠杆菌，弗劳地枸橼酸杆菌，阴沟肠杆菌检出率最高，依次为56％，50％，44％和40％，产酶组与非产酶组对三代头孢菌素耐药率7比较，发现二者无显著差异，提示常规药敏试验未能完全反映细菌耐药情况，诱导型β-内酰胺酶的检测，可以补充常规药敏不足，同时本文通过WHONET－3统计软件对产诱导酶的菌进行配对散点图分析，发现亚胺培南与氨基糖甙类和喹诺酮类抗功药物有较强的互补性，提示在临床调整用药时，可以选择抗菌药物不同的配对联合用药，以求达到治疗目的。     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶检测与耐药性分析

目的了解本院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的产生率及耐药性.方法按照2000年NCCLS推荐的纸片扩散初筛法和确认法检测ESBLs及K-B法进行药敏试验.结果8种革兰阴性杆菌ESBLs的检出率以肺炎克雷伯菌最高(43.4%);检测ESBLs的药物中CTX和CTX/CA的阳性率高于其他药物,分别为89.6%(120/134)、91.8%(123/134);产ESBLs菌株对各种抗生素的耐药率明显高于非ESBLs菌株,亚胺培南仍然未出现耐药现象.结论临床微生物实验室应加强革兰阴性杆菌ESBLs与耐药性检测,进一步探讨细菌的耐药机制,指导临床合理用药,减少或减缓细菌耐药的产生.     

快速筛查革兰阴性杆菌β内酰胺酶

目的应用Cica-Beta-Test试剂盒快速筛查革兰阴性杆菌β内酰胺酶:超广谱β内酰胺酶(ESBILs)、金属β内酰胺酶(MBLs)和染色体介导头孢菌素酶(AmpC酶),为临床抗感染治疗提供耐药依据。方法收集2010年1月至2011年3月上海交通大学医学院附属仁济医院临床分离革兰阴性杆菌共110株,其中头孢噻肟和(或)头孢他啶不敏感大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌各20株,多重耐药鲍曼不动杆菌20株和阴沟肠杆菌30株。其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌用美国CLSI推荐方法确证产ESBLs;对鲍曼不动杆菌用聚合酶链反应(PCR)法检测其MBLs和AmpC酶耐药基因;对阴沟肠杆菌用表型筛选法(三维试验法)检测其AmpC酶;对所有菌株应用Cica-Beta-Test试剂盒快速筛查ESBLs、MBLs和AmpC酶。根据检测结果对试剂盒进行评估。结果应用Cica-Beta-Test试剂盒检测110株临床分离菌未发现假阳性,确诊试验总符合率为92.0%(92/100),其中与PCR法比较检测MBLs和AmpC酶结果符合率为100%;与CLSI推荐ESBLs双纸片确诊试验比较,符合率为86.7%(52/60)。30株阴沟肠杆菌用AmpC酶表型筛选法比较符合率为86.7%(26/30)。结论 Cica-Beta-Test试剂盒可对各种革兰阴性杆菌产生的β内酰胺酶进行筛查及初步分型,简便、快速,灵敏度高,准确率高,尤其能对CLSI未推荐方法的耐药革兰阴性杆菌进行β内酰胺酶快速筛查意义更大。     

不动杆菌超广谱β-内酰胺酶特性研究

[目的]了解不动杆菌临床株所产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的一些特性。[方法]采用超声破碎法制备ESBLs粗提液，紫外分光光度法测定酶的底物特异性和抑制剂的抑酶作用，等电聚焦电泳法测定等电点。[结果]三株不动杆菌所产的ESBLS酶作用优先底物是青霉素类抗生素，对亚胺培南无水解作用，WA74株所产的酶对头孢菌素的相对水解率较低（〈50％）。棒酸、舒巴坦、他唑巴坦对WA31、WA52菌株所产的ESBLs有较强的抑制作用，对WA74 ESBLs抑制作用较弱，EDTA不能抑制3种酶的水解活性。3种β-内酰胺酶pI分别为7．3、8．4、6．1。[结论]鲍曼不动杆菌WA31、WA52产生的ESBLs属于A类Bush 2be群可能为TEM型，溶血不动杆菌WA74产生的ESBLs属于D类Bush 2d群。     

产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株检测及耐药性分析

目的了解我院送检标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的检出率及耐药情况,指导临床医生合理有效地使用抗生素。方法用NCCLS推荐的确证试验对临床分离的198例革兰氏阴性杆菌进行ESBLs鉴定,抗生素敏感测定采用K-B琼脂扩散法。结果共检出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株42株,总检出率21.4%;其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的ESBLs检出率分别为20.6%、23.7%及16.7%。检出的产ESBLs细菌对所有青霉素类抗生素产生耐药,多数菌株对三代头孢类抗生素的耐药率>80%,对磺胺类、喹诺酮类抗生素的耐药率也在60%以上。氨基糖苷类对产ESBLs菌表现出较好的抗菌作用,亚胺培南对所有产ESBLs菌表现出最强抗菌作用。结论第三代头孢菌素和亚胺培南的大量应用是产生ESBLs菌的主要原因,亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素是产ESBLs菌株临床治疗有效的药物。     

对产与不产超广谱β-内酰胺酶细菌的耐药分析

现将我院分离的269株革兰阴性杆菌,对产与不产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的耐药情况进行分析,现报告如下。1材料与方法1.1标本本源2002年7月～2003年7月,本院送检的标本中分离的菌株。其中,大肠埃希菌152株(56.50%),ESBLs阳性菌40株,占大肠埃希菌的27.63%;肺炎克雷伯菌117株(43.