槲皮素对宫颈癌放射增敏作用及机制研究

目的研究槲皮素(Que)对人宫颈癌Hela细胞株的体外放射增敏作用并初步探讨作用机制。方法克隆形成法检测放射增敏作用及给药时序、浓度的影响;流式细胞法检测细胞周期分布;DAPI染色镜下观察法检测凋亡;Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 Que与射线单独或联合作用后细胞存活率均较单纯放射组明显降低(P0.05),不同浓度、不同时序处理,细胞存活率也具有显著差异(P0.05);Que与射线均能使Hela细胞阻滞于G2/M期,联用阻滞效果更加显著(P0.01);Que与射线均能破坏细胞核,联用后细胞核皱缩、碎裂更加显著;Que与射线单独及联用均能上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论 Que可通过阻滞Hela细胞周期于G2/M期,下调Bcl-2/Bax的比率来诱导细胞发生凋亡并增强其对放射线的敏感性。     

黑蒜提取液对Lewis肺癌细胞株的放疗增敏作用

目的 探讨黑蒜提取液（black garlic extract,BGE）对肺癌Lewis细胞放射敏感性的影响。方法 采用MTT法测定BGE作用后肺癌Lewis细胞增殖率,平板集落形成实验观察BGE联合放疗对细胞克隆形成率的影响,Hoechst荧光染色观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测BGE作用后细胞周期的变化,Real time-PCR检测B淋巴细胞瘤－2（bcl-2）、凋亡促进蛋白（bax）mRNA的表达。结果 BGE对肺癌Lewis细胞株生长有明显的抑制作用。BGE联合60Co γ射线照射能够促进Lewis细胞凋亡,诱导Lewis细胞的G2/M期阻滞,明显降低bcl-2表达,促进bax高表达。结论 黑蒜提取液对肺癌Lewis细胞具有放射增敏作用,其增敏机制可能与其改变细胞周期及影响bcl-2、bax蛋白表达有关。     

复方苦参胶囊对宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察复方苦参胶囊对体外培养宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法宫颈癌细胞经药物处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的复方苦参胶囊处理宫颈癌Hela细胞24,48,72 h后,均呈现出显著的细胞增殖抑制作用,抑制作用具有时间依赖性和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术结果显示不同浓度的复方苦参胶囊处理宫颈癌Hela细胞48 h后可显著增加宫颈癌细胞凋亡率,差异有统计学意义(P<0.01),并可增加G1期比例同时降低S期细胞比例,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论复方苦参胶囊可抑制体外培养宫颈癌细胞增殖并诱导其凋亡,该作用可能是通过抑制S期细胞比例,将细胞周期阻滞在G1期实现的。     

黄芪甲苷对宫颈癌细胞株放射敏感性的影响及相关机制

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV)对宫颈癌细胞株Hela的放射敏感性影响并讨论其可能机制。方法:采用MTT法检测黄芪甲苷对Hela细胞生长的抑制作用,克隆形成实验和流式细胞术分别检测Hela细胞的放射敏感性和细胞周期,Tunel法检测Hela细胞凋亡能力,Western blot检测Hela细胞中p-EGFR、EGFR与p-Akt、Akt蛋白表达水平变化。结果:黄芪甲苷抑制Hela细胞的生长,且60μg/mL时抑制作用最大; 60μg/mL黄芪甲苷联合放射治疗后,D_0和D_q值显著小于单独放射时的值,拟合的生存曲线左移,且降低放射诱导的细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡;黄芪甲苷可显著下调EGFR与Akt的磷酸化水平,EGFR与Akt总蛋白表达水平不变。结论:黄芪甲苷具有增加宫颈癌细胞株Hela放射敏感性的作用,可能与细胞周期G2/M期阻滞和DNA损伤修复蛋白表达水平降低有关。     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响

目的研究大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响。方法实验分为空白对照组、大蒜素25μg/m L组、大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组,取对数生长期人喉癌Hep-2细胞,每组分别给予相应干预24 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,RTPCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达并计算bax/bcl-2表达比值,Western blotting法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,bcl-2 mRNA表达显著下调而bax mRNA显著上调,bax/bcl-2表达比值显著升高,Caspase-3蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。大蒜素100μg/m L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量均显著高于顺铂40μg/m L组(P均<0.05)。结论大蒜素具有阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程和促进其凋亡的作用,机制可能与其能够调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

肿节风颗粒对60Co γ射线照射后小型猪腮腺细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨肿节风对60Co γ射线照射后小型猪腮腺细胞凋亡、B细胞淋巴瘤基因-2(bcl-2)/bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达的影响及其机制.方法:将60头小型猪随机分为空白组、单纯照射组、肿节风(0.3 g·kg-1)+照射组3个大组,每个大组再随机分为a,b,c,d4个平行组.肿节风+照射组于照射前1周经口给予肿节风至腮腺取出,每日1次,其他2组给予等量生理盐水.单纯照射组和肿节风+照射组进行60Co γ射线照射,放射总剂量为30Gy,空白组不给予照射.a,b,c,d4个平行组分别于照射后1,10,40,90 d取腮腺,采用Western blotting法检测腮腺组织bcl-2和bax的表达,TUNEL法检测腮腺细胞的凋亡.结果:在同一时点(同一平行组),bcl-2蛋白均表现为空白组＞肿节风+照射组＞单纯照射组;bax蛋白均表现为单纯照射组＞肿节风+照射组＞空白组;单纯照射组和肿节风+照射组腮腺细胞的凋亡率均较空白组增高(P＜0.05).单纯照射组中,bcl-2蛋白表达量在照射结束后第10天为最低、第90天为最高;bax蛋白在第10天为最高、第90天为最低;凋亡率在照射结束后第10天为最高(P＜0.05).肿节风+照射组中,bcl-2蛋白表达量逐渐递增;bax蛋白表达量逐渐递减;凋亡率第一天最高(P＜0.05).结论:肿节风对bax蛋白表达有抑制作用,对bcl-2蛋白表达有促进作用,可以一定程度上缓解小型猪腮腺细胞的凋亡.肿节风通过上调bcl-2、下调bax的表达可能是抑制腮腺细胞凋亡的主要机制之一.     

复方苦参注射液影响放射后鼻咽上皮细胞存活及其机制的研究

目的观察复方苦参注射液对放射后鼻咽上皮细胞(NP69)存活的影响,并探讨其放射防护作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测电离辐射后NP69细胞的增殖情况;采用流式细胞法观察复方苦参注射液对电离辐射后NP69细胞凋亡的影响;克隆形成试验检测各组细胞的克隆形成率;采用DCFH-DA荧光探针检测复方苦参注射液对电离辐射后NP69细胞氧自由基的清除作用。结果苦参干预组NP69细胞的增殖率高于单纯放射组(P0.05);苦参干预组NP69细胞的凋亡率较单纯放射组明显减少(P0.05);苦参干预组NP69细胞克隆形成率高于单纯放射组(P 0.05);经复方苦参注射液处理后,NP69细胞氧自由基活性较单纯放射组明显降低(P 0.05)。结论复方苦参注射液可能是通过清除NP69细胞中辐射产生的氧自由基,从而抑制辐射后NP69细胞凋亡并促进其增殖。     

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的 探讨复方中药紫龙金(简称紫龙金)对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNcaP的体外作用机制。方法 应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响,应用RT-PCR方法检测前列腺特异性抗原基因(PSA)和雄激素受体(AR),凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响;应用western blot方法测定对bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G1/G1期阻滞和诱导凋亡作用,作用72h时IC50为0．79mg／ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl-2的表达,降低bcl～2蛋白表达,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0／G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl-2基因表达,降低bcl-2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。     

丹参酮ⅡA对人宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响。方法:用梯度浓度(12.5、25、50、100和200μg/m L)丹参酮ⅡA处理人宫颈癌Hela细胞,MTT法检测丹参酮ⅡA对细胞增殖的影响,Western blotting法检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白p-JAK2、JAK2、p-STAT3和STAT3表达。RT-PCR法检测JAK2/STAT3信号通路相关凋亡基因bax、bcl-2表达。结果:100和200μg/m L浓度丹参酮ⅡA对Hela细胞增殖具有极显著抑制作用,与对照组比较,100和200μg/m L浓度处理的细胞,蛋白p-JAK2、p-STAT3均降低,蛋白JAK2、STAT3变化不显著;基因bcl-2表达降低,bax表达升高。结论:100和200μg/m L浓度的丹参酮ⅡA通过JAK2/STAT3信号通路影响Hela细胞的增殖与凋亡。     

二仙汤含药血清对顺铂干预的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控蛋白bcl-2、bax表达的影响

目的:观察二仙汤含药血清对顺铂干预的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控蛋白bcl-2、bax表达的影响,从细胞凋亡的角度探讨二仙汤含药血清对卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制。方法:22~24 d的SD雌性大鼠30只,随机分为3组,分别为生理盐水组,补佳乐组,二仙汤组。每组大鼠10只。给药4 d后处死大鼠,心脏取血,制备药物血清。22~24 d的SD大鼠卵巢颗粒细胞,经培养贴壁后,用顺铂损伤大鼠原代卵巢颗粒细胞。经各组药理血清作用后,应用放免法,进行雌激素和孕激素水平测定及分析。应用免疫组化法,测定各分组bcl-2、bax蛋白的表达情况,并进行图像分析。结果:放免结果显示,与正常组相比,模型组和补佳乐组E2表达明显改变,有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,补佳乐组、二仙汤组E2表达均有增加;与正常组相比,模型组P表达水平有所变化,有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,二仙汤组P表达略高于补佳乐组,但低于正常组。免疫组化结果显示,在卵巢颗粒细胞细胞质上可见bcl-2和bax蛋白表达的棕黄色颗粒。和正常组相比较,顺铂干预后各组bcl-2表达均减弱,而以模型组最明显,有统计学意义(P0.05);和模型组比较,各药物组均可见bcl-2阳性表达增加,但弱于正常组,有统计学意义(P0.05)。bax与bcl-2表达强度结果相反,和正常组比较,顺铂干预后的各组bax均表达增强,模型组呈现极强表达现象,有统计学意义(P0.05);和模型组比较,各药物组均可见阳性表达减弱,但表达高于正常组,有统计学意义(P0.05)。结论:二仙汤能降低经顺铂干预后大鼠bax蛋白在卵泡颗粒细胞表达,增强bcl-2蛋白的表达,二仙汤能够通过调节凋亡蛋白bcl-2、bax蛋白的表达,抑制卵巢颗粒细胞发生凋亡,从而保护卵巢功能。