丹参川芎嗪注射液对脓毒症幼鼠急性肝损伤保护作用的研究

目的探讨丹参川芎嗪注射液对脓毒症幼鼠急性肝损伤的保护作用及其可能机制。方法将36只SD幼鼠随机分为3组:对照组、模型组、丹参川芎嗪注射液组,各12只。采用腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg建立脓毒症幼鼠模型,丹参川芎嗪注射液组1 h后给予腹腔注射丹参川芎嗪注射液5 mL,分别于造模后6、12 h各取6只幼鼠采集血样和肝组织样品,光镜下观察肝组织病理改变,检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(GOT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平和肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化合物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性,采用q RT-PCR和Western blotting检测肝组织中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)m RNA和蛋白表达水平。结果对照组肝细胞排列整齐,形态正常,结构完整无病理改变;模型组幼鼠6 h时肝细胞出现水肿、部分坏死,12 h时水肿加重,部分肝细胞颗粒变性,细胞排列紊乱;丹参川芎嗪注射液组6、12 h肝细胞水肿、坏死、颗粒变性与模型组比较明显减轻;与对照组比较,模型组6、12 h血清AST、GOT和LDH水平及肝组织MDA水平均升高(P 0.05),肝组织GSH水平及SOD、GST活性均降低(P 0.05);与模型组比较,丹参川芎嗪注射液组6、12 h血清AST、GOT和LDH水平及肝组织MDA水平均降低(P 0.05),肝组织GSH水平及SOD、GST活性均升高(P 0.05);与对照组比较,模型组肝组织中Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白均升高(P 0.05);与模型组比较,丹参川芎嗪注射液组肝组织中Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白均升高(P 0.05)。结论丹参川芎嗪注射液对脓毒症致急性肝损伤具有保护作用,其保护机制可能与激活Nrf2/HO-1通路,增强肝组织抗氧化能力有关。     

苯并芘对孕早期小鼠胎盘绒毛组织的影响及芦丁的防护作用研究

目的探讨苯并芘(BaP)对孕早期小鼠胎盘绒毛组织细胞的影响及芦丁的防护机制。方法选取性成熟ICR小鼠150只(雌鼠100只、雄鼠50只),随机分为空白组,模型组及芦丁低、中、高剂量组,每组30只(雌鼠20只、雄鼠10只),雌雄分开饲养。模型组予BaP 2 mg/(kg·d)灌胃;芦丁低、中、高剂量组予BaP 2 mg/(kg·d)的同时分别灌胃芦丁0.5,1,2 g/(kg·d);空白组灌胃相同体积的0.9%氯化钠注射液与橄榄油。各组连续灌胃15 d后雌雄鼠同笼,第2天发现精液栓为受孕,挑出受孕小鼠继续灌胃7 d后处死,取胎盘组织测定bax与bcl-2 mRNA表达水平及细胞色素P450(CYP450)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果模型组bax mRNA表达水平及bax/bcl-2比值均明显高于空白组(P均0.05);芦丁各剂量组bax mRNA表达水平及bax/bcl-2比值均明显高于空白组(P均0.05),但均低于模型组(P均0.05),且随着芦丁剂量的增加二者逐渐降低(P均0.05)。模型组bcl-2 mRNA表达水平明显低于空白组(P均0.05);芦丁各剂量组bcl-2 mRNA表达水平均低于空白组(P均0.05),但均高于模型组(P均0.05),且随着芦丁剂量的增加其表达水平逐渐升高(P均0.05)。bax与bcl-2 mRNA表达水平间呈负相关性(r=-0.825,P=0.021)。芦丁各剂量组CYP450活性均明显高于空白组(P均0.05),但低于模型组(P均0.05),且随着芦丁剂量的增加其活性逐渐降低(P均0.05);芦丁各剂量组GSH-PX、SOD活性均明显低于空白组(P均0.05),但均高于模型组(P均0.05),且随着芦丁剂量的增加二者活性逐渐升高(P均0.05)。结论芦丁能通过提高抗氧化酶活力与抑制凋亡基因表达来保护BaP所致的胎盘绒毛组织细胞损伤,提高生育能力。     

丹参诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bcl-2、bax基因表达研究

目的探讨丹参作用类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax基因mRNA水平的表达。方法关节液原代培养获取成纤维样滑膜细胞,分别用终浓度为0,0.195和0.39 g/L的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存,采用rt-PCR方法检测bcl-2和bax在mRNA水平的表达。结果以丹参浓度为0(bcl-2的相对表达量为0.55±0.27)作为溶剂对照组,bcl-2的表达在丹参浓度为0.195 g/L时(bcl-2的相对表达量为0.53±0.35)没有显著性差异(P=0.468),当丹参浓度达到0.39 g/L时,bcl-2的表达(相对表达量为0.25±0.17)显著性降低(P<0.05);bax的表达在2种丹参浓度条件下均无显著性差异(P均>0.05)。结论丹参可抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bcl-2的表达,从而通过降低bcl-2/bax的值促进成纤维样滑膜细胞凋亡。     

葛根素对肾脏缺血再灌注大鼠肾脏氧化应激损伤的影响及其机制研究

目的研究葛根素对肾脏缺血再灌注大鼠肾脏氧化应激损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、葛根素25 mg/kg组、葛根素50 mg/kg组、葛根素100 mg/kg组、银杏叶提取物(100 mg/kg)组;除假手术组外,其余各组均通过夹闭双侧肾蒂血管45 min后松夹恢复血流再灌注的方法制备肾缺血再灌注模型;再灌注后各给药组立即腹腔注射给药,每天1次,连续2周,假手术组和模型组给予等体积生理盐水。末次给药后,测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)及总抗氧化能力(T-AOC)水平;通过苏木精-尹红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;通过原位末端标记法(TUNEL)观察肾小球细胞凋亡状况并计算凋亡指数;检测肾脏组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过RT-PCR法测定肾脏组织中bax和bcl-2 mRNA表达量,并计算bax/bcl-2比值。结果葛根素50,100 mg/kg组血清BUN、SCr、UA含量均明显低于模型组(P均<0.05);各给药组大鼠肾脏组织病理形态学变化和肾小球细胞凋亡状况呈不同程度改善,以葛根素100 mg/kg组效果最为显著;葛根素50,100 mg/kg组大鼠肾小球细胞凋亡指数及肾脏组织中bax mRNA表达量、MDA含量及bax/bcl-2比值均明显低于模型组(P均<0.05),肾脏组织中SOD、CAT活性及bcl-2mRNA表达量均明显高于模型组(P均<0.05),其中葛根素100 mg/kg组血清T-AOC水平和肾脏组织中GSH-Px活性均显著高于模型组(P均<0.05)。结论葛根素对肾脏缺血再灌注大鼠肾脏氧化应激和细胞凋亡具有抑制作用;作用机制可能与其能够改善肾脏组织抗氧化酶活性、促进抗凋亡基因bcl-2表达、抑制促凋亡基因bax表达并降低bax/bcl-2比值有关。     

康泉方对大鼠前列腺组织凋亡调控基因bax、bcl-2mRNA表达的影响

目的 探讨康泉方对实验性大鼠前列腺组织凋亡调控基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的影响.方法 采用大鼠去势后注射丙酸睾丸酮致前列腺增生法造模,同时灌胃给药30天后,处死大鼠取前列腺组织并测量湿重,RT-PCR法检测各组前列腺腹叶组织bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达.结果 与模型组比较,康泉各剂量组前列腺湿重显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;康泉高剂量组前列腺湿重与正常组比较,差异无显著性（P＞0.05）;与模型组比较,康泉各剂量组bax mRNA及bax/bcl-2显著升高（P＜0.01）,bcl-2 mRNA显著下降（P＜0.01）;康泉高剂量组bax mRNA、bcl-2 mRNA及bax/bcl-2与正常组比较,差异无显著性（P＞0.05）.结论 康泉方对大鼠良性前列腺增生有明显的治疗作用,其作用机理可能通过调节前列腺组织bax mRNA、bcl-2 mRNA表达,促进前列腺细胞凋亡,并呈明显量效关系.     

自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢细胞凋亡相关因子的影响

目的探讨自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢组织形态学及卵巢颗粒细胞凋亡因子bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA的影响。方法选用自然老化的围绝经期雌性SD大鼠,臀部肌肉左右交替肌注氢化可的松构建肾阳虚型围绝经期大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为更年汤组、教材方组、利维爱组、生理盐水组;另选择4月龄SD雌性大鼠20只作为青年组,18月龄SD雌性大鼠20只作为老年组。青年组、老年组、生理盐水组均给予生理盐水灌胃,各给药组给予相应药物灌胃,灌胃15 d后处死大鼠,分离摘取双侧卵巢,运用病理切片观察卵巢组织大体形态,运用免疫组化及原位杂交法检测卵巢颗粒细胞凋亡因子bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA表达情况。结果各给药组卵泡发育良好情况优于老年组和生理盐水组(P均0.05),卵泡闭锁、卵泡扩张情况轻于老年组和生理盐水组(P均0.05);自拟更年汤组与利维爱组卵泡发育良好情况优于教材方组(P均0.05),自拟更年汤组与利维爱组比较差异无统计学意义(P0.05);自拟更年汤组卵泡闭锁、卵泡扩张情况轻于教材方组和利维爱组(P均0.05),教材方组与利维爱组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。各给药组bax、bax mRNA阳性表达明显低于老年组和生理盐水组(P均0.05),bcl-2与bcl-2 mRNA阳性表达明显高于老年组和生理盐水组(P均0.05);自拟更年汤组与利维爱组bax、bax mRNA阳性表达明显低于教材方组(P均0.05),bcl-2与bcl-2 mRNA阳性表达明显高于教材方组(P均0.05),自拟更年汤组bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA阳性表达与利维爱组比较差异无统计学意义(P均0.05)。结论自拟更年汤能促进卵泡发育,抑制卵泡闭锁和扩张,能上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子bcl-2、bcl-2 mRNA的阳性表达,抑制促凋亡因子bax、bax mRNA的阳性表达。     

中药补精益视片对豚鼠形觉剥夺性近视视网膜Bcl-2及Caspase-3表达的影响

目的观察补精益视片对形觉剥夺性近视豚鼠视网膜bcl-2及caspase-3表达的影响,探讨其对视网膜凋亡的干预机制。方法将65只3周龄三色豚鼠随机分为5组,阴性对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组及中药高剂量组,每组13只,除阴性对照组外,其余各组均采用右眼遮盖造模,中药低剂量组、中药中剂量组及中药高剂量组灌胃浓度分别为:0.3g/kg、0.6 g/kg、1.2 g/kg,模型组和阴性对照组用等量蒸馏水灌胃。卖验前后测眼球屈光度及眼轴长度,各组在相应时间点处死豚鼠,采取免疫组化染色和RT-PCR法检测各组视网膜组织中Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达水平变化。结果(1)模型组眼轴长度大于阴性对照组及中药低、中、高剂量组(P0.05);初始屈光度组间差异没有统计学意义(P0.05);模型组最后屈光度较对照组及中药低、中、高剂量组增加,差异有统计学意义(P0.05);(2)免疫组化染色:①Bcl-2,模型组视网膜内、外核层、光感受器细胞层积分光密度总和低于阴性对照组及中药低、中、高剂量组(P0.05),而中药低、中、高剂量组组间比较差异无统计学意义(P0.05);②Caspase-3,模型组视网膜内、外核层、光感受器细胞层积分光密度总和高于阴性对照组及中药低、中、高剂量组,差异有统计学意义(P0.05),而中药低、中、高剂量组组间比较差异无统计学意义(P0.05);③RT-PCR模型组视网膜bcl-2 mRNA与阴性对照组相比有下降的趋势,随着中药剂量由低到高,豚鼠视网膜bcl-2 mRNA表达有增高的趋势;而模型组视网膜caspase-3mRNA与阴性对照组相比有升高的趋势,随着中药剂量由低到高,豚鼠视网膜caspase-3 mRNA表达有降低的趋势。结论中药补精益视片调控近视豚鼠视网膜bcl-2及caspase-3的表达是其抑制视网膜细胞凋亡的机制之一。     

苦参素对心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激和细胞凋亡的影响

目的研究苦参素对心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激和心肌细胞凋亡的影响。方法将120只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,苦参素低(25 mg/kg)、中(50mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组和地尔硫卓(1 mg/kg)组;除假手术组外,其余各组大鼠均通过夹闭冠状动脉30 min后松夹的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型;再灌注后各给药组立即通过腹腔注射给药,每天1次,连续7 d,假手术组和模型组给予等体积生理盐水。末次给药后,生化分析法测定血清谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;通过TTC染色法测定心肌梗死面积,通过苏木精-尹红(HE)染色观察心肌组织病理形态学改变;测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,总抗氧化能力(T-AOC)水平以及丙二醛(MDA)含量;通过原位细胞凋亡检测(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡状况并计算凋亡指数;通过免疫组织化学(IHC)法检测心肌组织中bcl-2、bax蛋白表达情况并进行半定量分析,计算bcl-2/bax比值。结果苦参素中、高剂量组大鼠血清AST、CPK、LDH水平明显低于模型组(P均0.05),心肌梗死面积明显小于模型组(P均0.05);心肌组织中SOD活性显著高于模型组(P均0.05),MDA含量显著低于模型组(P均0.05),其中苦参素高剂量组GSH-Px活性和T-AOC水平均显著高于模型组(P均0.05)。各给药组大鼠心肌组织病变不同程度改善,其中以苦参素高剂量组效果最为显著;各给药组大鼠心肌细胞凋亡状况明显好转,苦参素中、高剂量组凋亡指数明显低于模型组(P均0.05);苦参素中、高剂量组大鼠心肌组织中bcl-2表达量和bcl-2/bax比值明显高于模型组(P均0.05),bax表达量明显低于模型组(P均0.05)。结论苦参素对心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激损伤和心肌细胞凋亡具有抑制作用;作用机制可能与其能够改善抗氧化酶活性、促进抑制凋亡蛋白bcl-2表达、抑制促凋亡蛋白bax表达并提高bcl-2/bax比值有关。     

臭牡丹总黄酮抑制小鼠Lewis肺癌实体瘤及其与p53、bcl-2、bax表达相关性研究

目的:探讨臭牡丹总黄酮对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及其与p53、bcl-2、bax基因表达的相关性。方法:取近交系雄性C57BL/6小鼠50只,造模,将造模成功的Lewis肺癌小鼠40只随机分成模型组,顺铂组,臭牡丹总黄酮高、低剂量组;另取10只无瘤小鼠作为空白对照组。腹腔注射给药,模型组给予生理盐水0.01 m L/g,连续14 d;顺铂组给予顺铂0.4mg/kg连续5 d;臭牡丹高、低剂量组分别予臭牡丹总黄酮提取物0.6 g/kg、0.3 g/(kg·d),连续14 d。给药结束后次日处死小鼠,称取瘤重,计算肿瘤抑制率,采用Real-time PCR法检测p53、bcl-2及bax mRNA的表达水平。结果:1)对瘤重影响:4组瘤重结果如下(±s):模型组(4.70+1.29)g、顺铂组(2.24+0.68)g、总黄酮高剂量组(3.26±1.06)g、总黄酮低剂量组(3.99±1.31)g;其中顺铂组、总黄酮高剂量组瘤重低于模型组(P0.05),并且该2组瘤重无统计学意义(P0.05)。2)肿瘤抑制率:顺铂组:53.4%;臭牡丹总黄酮高剂量组:30.6%,臭牡丹总黄酮低剂量组:15.1%。3)对基因表达影响:臭牡丹总黄酮高、低剂量组皆能上调p53和bax mRNA表达(高剂量组P0.01,低剂量组P0.05);顺铂组能下调bcl-2(P0.05)及上调bax mRNA表达(P0.01)。结论:臭牡丹总黄酮能够改善Lewis肺癌小鼠生存状况,能有效抑制肿瘤生长;并且其抑制肿瘤生长的分子机制可能与上调p53和bax mRNA的表达以诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞凋亡的诱导作用

目的探讨白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞凋亡的诱导作用。方法实验分为4组,分别采用0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L浓度的白藜芦醇处理对数生长期的甲状腺癌SW579细胞。干预48 h后,采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡率;干预72h后,Real Time PCR法检测各组bax mRNA和bcl-2 mRNA表达情况。结果 50 mmol/L组、100 mmol/L组、200 mmol/L组细胞凋亡率和bax mRNA表达量均显著高于0 mmol/L组(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达量明显低于0 mmol/L组(P均<0.05);100 mmol/L组、200mmol/L组细胞凋亡率和bax mRNA表达量均显著高于50 mmol/L组(P均<0.05),而bcl-2mRNA表达量明显低于50 mmol/L组(P均<0.05);200 mmol/L组细胞凋亡率和bax mRNA表达量显著高于100 mmol/L组(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达量明显低于100 mmol/L组(P均<0.05)。结论白藜芦醇有诱导甲状腺癌SW579细胞凋亡的作用,机制可能与其能调节bcl-2及bax表达有关。