槲皮素对宫颈癌放射增敏作用及机制研究

目的研究槲皮素(Que)对人宫颈癌Hela细胞株的体外放射增敏作用并初步探讨作用机制。方法克隆形成法检测放射增敏作用及给药时序、浓度的影响;流式细胞法检测细胞周期分布;DAPI染色镜下观察法检测凋亡;Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 Que与射线单独或联合作用后细胞存活率均较单纯放射组明显降低(P0.05),不同浓度、不同时序处理,细胞存活率也具有显著差异(P0.05);Que与射线均能使Hela细胞阻滞于G2/M期,联用阻滞效果更加显著(P0.01);Que与射线均能破坏细胞核,联用后细胞核皱缩、碎裂更加显著;Que与射线单独及联用均能上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论 Que可通过阻滞Hela细胞周期于G2/M期,下调Bcl-2/Bax的比率来诱导细胞发生凋亡并增强其对放射线的敏感性。     

复方苦参注射液对宫颈癌细胞体外放射增敏作用研究

目的研究复方苦参注射液对人宫颈癌Hela细胞株的体外放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法克隆形成法检测放射增敏作用及给药时序、浓度对细胞存活率的影响;DAPI染色法镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞法检测细胞周期分布情况;Western blot法检测bcl-2、bax蛋白表达情况。结果复方苦参注射液与射线单独或联合作用后细胞存活率均较单纯放射组明显降低(P均0.05),不同浓度、不同时序处理后细胞存活率比较差异有统计学意义,先照射后给药效果优于先给药后照射(P0.05);复方苦参注射液与射线均能使Hela细胞阻滞于G2/M期,联用阻滞效果更加显著(P0.05);复方苦参注射液与射线均能破坏细胞核,联用后细胞核皱缩、碎裂更加显著;复方苦参注射液与射线单独及联用均能上调bax蛋白表达(P均0.05),下调bcl-2蛋白表达(P均0.05)。结论复方苦参注射液可通过阻滞宫颈癌Hela细胞周期于G2/M期,下调bcl-2/bax的比值来诱导细胞发生凋亡并增强其对放射线的敏感性。     

黄芪甲苷对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移侵袭作用机制研究

目的:探讨黄芪甲苷能否抑制Hela细胞的增殖和侵袭迁移能力,并初步探讨相关机制。方法:选取人宫颈癌Hela细胞,0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/ml黄芪甲苷作用于细胞,通过CCK-8和平板克隆形成实验探讨该药物对Hela细胞增殖能力的影响;通过Transwell细胞迁移和侵袭实验研究黄芪甲苷对Hela细胞侵袭迁移能力的影响;通过Western Blot检测肿瘤侵袭、迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达情况。结果:0.2mg/ml以上黄芪甲苷对Hela细胞增殖能力具有显著抑制作用,存在浓度-时间依赖性;0.2mg/ml黄芪甲苷处理Hela细胞24、48 h后,穿过小室的细胞数均明显减少;0.2mg/ml黄芪甲苷对肿瘤侵袭和迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达水平均显著下降。结论:黄芪甲苷可抑制Hela细胞的增殖和细胞迁移侵袭的能力,其抑制作用可能和Hela细胞MMP 2、MMP 9的表达下调有关。     

蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的 研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制.方法 用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响.结果 在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖,改变Hela细胞的细胞周期,使细胞阻滞于G2/M期,并能诱导细胞凋亡.结论 蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡,从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用.     

石榴皮化学组分体外活性筛选及抗肿瘤机理的初步研究

目的 对石榴皮中没食子酸、鞣花酸、槲皮素、异槲皮素、木犀草素、柚皮苷、山萘酚、熊果酸的8个化合物进行体外抗氧化、抗肿瘤活性筛选,并进行活性组分抑制肿瘤机理的初步研究.方法 用DPPH法测定石榴皮中8个化合物的抗氧化活性;MTT法分别测定8种化合物对Hela细胞、胃癌BGC-823、结肠癌SW-480细胞株的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测活性组分对胃癌BGC-823细胞周期分布及细胞凋亡率影响.结果 石榴皮中的8种化合物,除柚皮苷外,清除DPPH自由基能力依次为没食子酸>鞣花酸>木犀草素>槲皮素>异槲皮素>山萘酚>熊果酸;没食子酸、鞣花酸和熊果酸对人宫颈癌细胞株Hela细胞、胃癌BGC-823、结肠癌SW-480细胞株增殖有一定程度的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布,发现没食子酸对BGC-823细胞阻滞在S期,木犀草素可使BGC-823细胞阻滞在G2/M期.熊果酸阻滞BGC-823细胞在G1/G0和G2/M期;流式细胞仪检测细胞凋亡结果表明,木犀草素和熊果酸均可诱导BGL-823细胞凋亡.结论 石榴皮中抗肿瘤活性有效成分是鞣质和萜类,可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性.     

柴胡皂苷-D抑制宫颈癌Hela细胞的分子机制研究

目的:宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,严重影响女性健康。柴胡皂苷是中药柴胡抗炎、抗肿瘤等作用的主要成分,其中柴胡皂苷D效果尤为明显。研究探讨柴胡皂苷D对宫颈癌细胞的作用的分子机制。方法:采用CCK-8法检测柴胡皂苷D对Hela细胞增殖的影响,利用流式细胞仪检测柴胡皂苷影响Hela细胞凋亡和细胞周期,同时利用定量PCR法检测细胞周期及凋亡相关基因的表达水平。结果:与对照相比,柴胡皂苷D能够显著抑制Hela细胞的增殖(P0.01),通过流式细胞检测,发现柴胡皂苷D能够增加细胞凋亡比例(P0.05),将Hela细胞阻滞在细胞周期G1期。进一步实验发现,柴胡皂苷D能够降低周期素Cyclin D1和Cyclin E,进而影响细胞周期;同时增加凋亡促进基因Bax表达,降低凋亡抑制基因Bcl-2基因表达,从而影响细胞凋亡。结论:柴胡皂苷D通过周期蛋白阻滞Hela细胞周期停滞在G1期,通过影响凋亡相关蛋白诱导Hela细胞凋亡。     

天花粉蛋白对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因的影响

目的:研究天花粉蛋白(TCS)对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达的影响,以探讨TCS诱导Hela细胞凋亡的机制。方法:MTT法检测TCS对Hela细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态;RT-PCR和Western blot分析TCS对Hela细胞Survivin基因表达的影响;流式细胞仪分析TCS对Hela细胞周期的影响。结果:①TCS显著性抑制Hela细胞增殖;②TCS处理后Hela细胞Survivin mRNA水平无明显改变,但蛋白表达水平显著降低;③TCS降低Hela细胞周期中G2/M期细胞比率,但增加S期细胞的数量。结论:通过下调凋亡抑制因子Survivin的表达而诱发Hela细胞凋亡,可能是TCS抑制Hela细胞增殖的分子机制。     

葡萄柚黄酮抗MDS细胞株Skm-1机制研究

目的:观察葡萄柚黄酮(PTFC)对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株Skm-l的毒性,并探讨作用机制.方法:采用四氮唑盐法(MTT法)观察PTFC对MDS细胞株增殖抑制作用,用流式细胞术检测PTFC对细胞凋亡的诱导作用和对周期的干预作用,用Westemblot检测相关蛋白表达.结果:PTFC呈时间-剂量依赖性抑制Skm-1细胞,24 h、48h的IC 50分别为1.54 mg/mL,1.36 mg/mL.流式细胞术检测凋亡结果显示,细胞早期凋亡率随着药物作用无明显增加,PTFC可阻滞细胞于G0/G1期.Westernblotting结果显示PTFC未能激活Caspase-3、PARP,能引起CDK4、CDK6、CyclinD1、PI3K、Akt、P-Akt、P65下调.结论:PTFC对MDS细胞株有明显的毒性作用,其作用机制是通过PI3K/Akt/NF-kB信号通路使得细胞周期阻滞在G0/G1期,具有潜在的药物应用价值,值得进一步深入研究.     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

摘要：目的：研究川芎嗪与黄芪甲苷及不同浓度配伍对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型的保护作用及机制。方法：建立H2O2诱导损伤模型,将细胞分为十七组,空白对照组、过氧化氢(0.2mmol/L)模型组,川芎嗪（40,80,160μg/mL）剂量组、黄芪甲苷（10,20,40μg/mL）剂量组及两两配伍组,MTT法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的增值影响,筛选出最佳配伍比例;检测最佳配伍组MDA含量和SOD活性,Annexin V- FITC/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡率, Western Blot 检测 p- Akt 和Akt 蛋白的表达 ,RT-PCR检测AKt mRNA的表达。结果： 与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷不同浓度配伍组均能提高细胞存活率,且川芎嗪（80μg/mL）剂量组 黄芪甲苷（40μg/mL）剂量组具有极显著差异(P<0.001);川芎嗪、黄芪甲苷配伍组降低细胞MDA含量(P<0.001),提高细胞SOD活力(P<0.001)。同时,川芎嗪、黄芪甲苷配伍组能降低细胞凋亡率（P<0.01）,上调 p-Akt/Akt蛋白（P<0.01）,上调Akt基因mRNA的表达（P<0.001）。结论：川芎嗪（80μg/mL） 黄芪甲苷（40μg/mL）对 H2O2诱导的 HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的 HUVECs 凋亡,其机制与 PI3K/Akt 信号通路有关     

隐丹参酮对宫颈癌Hela细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的:研究隐丹参酮对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法:MTT法检测不同浓度隐丹参酮分别在24,48,72 h对Hela细胞的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测隐丹参酮对Hela细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测E6,p53,p21蛋白的表达。结果:不同质量浓度(0.5~16 mg.L-1)隐丹参酮对Hela细胞的毒性均有明显剂量和时间依赖性,其24,48,72 h的IC50值分别为17.8,8.17,6.55 mg.L-1;隐丹参酮可使Hela细胞细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡。Western blot表明,隐丹参酮作用Hela细胞后HPV E6的蛋白水平表达逐渐降低,p53和p21的蛋白水平表达逐渐升高。结论:隐丹参酮对宫颈癌Hela细胞有较强的细胞毒性,其作用机制可能是使Hela细胞生长停滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低;抑制HPV E6的蛋白的表达,使p53功能恢复,启动凋亡,从而起到杀伤肿瘤的作用。     

白藜芦醇对TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的:观察白藜芦醇(Res)对TNF-α诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及凋亡的影响,探讨其对PI3K/Akt/BAD信号通路作用。方法:MTT比色法测定Res对TNF-α诱导RA FLS生长的抑制作用。流式细胞仪检测Res对RA FLS细胞周期及凋亡率的影响。Western-blot方法分析Res对TNF-α诱导RA FLS中磷酸化Akt蛋白及其下游效应分子磷酸化BAD蛋白表达的影响。结果:Res对TNF-α诱导RA FLS增殖具有抑制作用,呈时间剂量依赖性。随着Res浓度增加,RA FLS凋亡率增加,G0/G1期细胞增多,G2/M期及S期细胞减少,与TNF-α组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。Res可抑制TNF-α诱导RA FLS磷酸化Akt蛋白以及磷酸化BAD蛋白的表达。结论:Res通过阻滞RA FLS细胞周期、下调PI3K/Akt信号通路Akt磷酸化水平发挥抑制增殖、诱导凋亡作用,Res具有治疗RA的潜在价值。     

黑蒜提取液对Lewis肺癌细胞株的放疗增敏作用

目的 探讨黑蒜提取液（black garlic extract,BGE）对肺癌Lewis细胞放射敏感性的影响。方法 采用MTT法测定BGE作用后肺癌Lewis细胞增殖率,平板集落形成实验观察BGE联合放疗对细胞克隆形成率的影响,Hoechst荧光染色观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测BGE作用后细胞周期的变化,Real time-PCR检测B淋巴细胞瘤－2（bcl-2）、凋亡促进蛋白（bax）mRNA的表达。结果 BGE对肺癌Lewis细胞株生长有明显的抑制作用。BGE联合60Co γ射线照射能够促进Lewis细胞凋亡,诱导Lewis细胞的G2/M期阻滞,明显降低bcl-2表达,促进bax高表达。结论 黑蒜提取液对肺癌Lewis细胞具有放射增敏作用,其增敏机制可能与其改变细胞周期及影响bcl-2、bax蛋白表达有关。     

人参果总皂苷对人宫颈癌Hela细胞抗肿瘤作用及机制的研究

目的:研究人参果总皂苷对体外培养的肿瘤细胞作用,并初步探讨其作用机制。方法:MTT法测定人参果总皂苷对人宫颈癌细胞(Hela)细胞株的增殖的影响;电镜观察人参果总皂苷对肿瘤细胞形态学的影响;Western blot免疫印记法检测人参果总皂苷对Hela细胞细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:0.125、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00μg/ml人参果总皂苷对Hela细胞的增殖均有抑制作用;0.5μg/ml人参果总皂苷作用于Hela细胞后,透射电镜下可见细胞核染色质边集、核碎裂及凋亡小体情况,具有一定的促进肿瘤细胞凋亡的作用;cyclin和CDK4的蛋白表达逐渐减少。结论:人参果总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制可能与促进肿瘤细胞的凋亡有关诱导其凋亡使细胞停滞于G2/M期密切相关。     

芒果苷对白血病HL-60细胞周期及CDC2/CyclinB1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病HL-60细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期分裂基因2(CDC2)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用MTT比色法测定芒果苷对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测芒果苷对细胞周期的影响;用RT-PCR技术检测CyclinB1及CDC2 mRNA表达水平。结果:芒果苷呈剂量及时间依赖性抑制HL-60细胞的生长,作用24 h后,G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞;CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达随药物质量浓度的增加而逐渐增强,在芒果苷质量浓度80μmol/L时表达达到峰值。结论:芒果苷可抑制HL-60细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期,显著上调HL-60细胞CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达水平。芒果苷诱导HL-60细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。     

紫草多糖对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及HPV18 E6/E7 mRNA表达的影响

目的观察紫草多糖对宫颈癌Hela细胞株增殖、凋亡及HPV18 E6/E7 mRNA表达的影响。方法体外培养Hela细胞株(含高危型HPV18)。采用CCK8法检测5,10,20,40,60,80μmol/L的紫草多糖培养液对细胞生长的抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测空白对照组和紫草多糖20,40,80μmol/L组细胞凋亡情况;PI单染法检测空白对照组和紫草多糖20,40,80μmol/L组细胞周期;采用实时荧光定量PCR法检测空白对照组和紫草多糖5,10,20,40,60,80μmol/L组HPV18 E6/E7 mRNA表达量。结果紫草多糖各组宫颈癌Hela细胞生长受抑,且呈时间和剂量依赖性;紫草多糖各组Hela细胞凋亡率和Hela细胞S期、G2/M期所占比例均明显高于空白对照组(P均0.05),且呈浓度依赖性升高;紫草多糖40,60,80μmol/L组HPV18 E6/E7 mRNA相对表达量均明显低于空白对照组(P均0.05),且呈浓度依赖性降低。结论紫草多糖体外可抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导Hela细胞凋亡,其作用机制与抑制HPV18 E6/E7 mRNA的表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

冬凌草甲素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长的G2/M期阻滞机制研究

目的 研究冬凌草甲素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长作用及G2/M期阻滞机制.方法 MTT法检测冬凌草甲素对SGC-7901细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测冬凌草甲素对SGC-7901细胞周期的影响;Western blotting法检测冬凌草甲索对Cdkl、Cyclin B1两种蛋白表达的影响.结果 冬凌草甲素作用于SGC-7901细胞的IC50为15.64μmol/L;冬凌草甲素对G2/M期细胞的阻滞作用随着浓度的增加而增强;Cdk1和Cyclin B1蛋白的表达量随着冬凌草甲素浓度的增大显著降低.结论 冬凌草甲素通过下调SGC-7901细胞内Cdk1、CyclinB1两种蛋白的表达,阻滞细胞于G2/M期而抑制SGC-7901细胞生长.     

乳浆大戟提取物诱导HeLa细胞凋亡及其机制研究

目的研究乳浆大戟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTT法和克隆形成实验检测乳浆大戟提取物对宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖抑制作用;利用Annexin V-FITC/PI双染和DAPI细胞核染色法检测乳浆大戟提取物诱导细胞凋亡情况;线粒体膜电位检测凋亡细胞的线粒体膜电位变化情况;流式细胞仪和Westernblot法分别分析细胞周期及细胞周期蛋白变化情况。结果①乳浆大戟提取物以时间和剂量依赖的方式显著抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖;②乳浆大戟提取物能使宫颈癌HeLa细胞线粒体膜电位显著降低,诱导细胞发生凋亡性细胞死亡;③乳浆大戟提取物能够显著阻滞宫颈癌HeLa细胞在G0/G1期,降低Cyclin D1、Cyclin E和CDK4的表达水平,增加P21的表达水平。结论乳浆大戟提取物通过下调Cyclin D1、Cyclin E和CDK4的表达和上调P21的表达,使HeLa细胞阻滞在G0/G1期,进而显著抑制宫颈癌HeLa细胞生长和增殖,诱导细胞依赖线粒体通路的凋亡性死亡。     

4种9,10-二氢菲类化合物的体外抗肿瘤活性及机制

 目的研究4种9,10-二氢菲类化合物对4种人癌细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法测定它们对人肝癌细胞株HepG2,人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460,人乳腺癌细胞株MCF-7,人神经胶质瘤细胞株SF-268的增殖抑制作用;采用流式细胞仪技术和蛋白质电泳技术检测它们对HepG2细胞的细胞周期以及细胞周期蛋白表达的影响。结果9,10-二氢菲类化合物对HepG2细胞的增殖有一定的抑制作用;其中4,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲可能通过下调周期蛋白CyclinB1的表达将HepG2细胞阻滞在G2/M期。结论9,10-二氢菲类化合物通过将HepG2细胞阻滞在G2/M期从而对其增殖产生了一定的抑制作用。     

黄芪甲苷对ChangLiver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对Chang Liver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用。方法:以Chang Liver细胞为研究对象,使用乙醇、H2O2分别建立酒精性及非酒精性氧化损伤模型,MTT法测定细胞存活率,微板法、比色法检测转氨酶活力及抗氧化能力,DCF荧光法检测细胞内活性氧,流式细胞术检测细胞周期,DNA ladder法检测细胞凋亡。结果:2种氧化损伤均可导致Chang Liver细胞存活率和抗氧化酶活性下降、以及细胞外液中转氨酶活力和丙二醛含量升高,黄芪甲苷对上述损伤均有显著或极显著的保护效果;同时,乙醇能够显著降低损伤细胞内的活性氧水平,而H2O2能够显著升高损伤细胞内的活性氧水平,黄芪甲苷则能使上述异常的活性氧水平趋于正常。同时缓解乙醇或H2O2对Chang Liver细胞G0/G1期的阻滞现象,并对二者诱导的细胞凋亡均有一定的抑制作用。结论:黄芪甲苷对Chang Liver细胞的酒精性和非酒精性氧化损伤均有保护作用。