β-榄香烯对人乳腺癌细胞侵袭和迁移作用的研究

目的:研究β-榄香烯对不同分子亚型人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用。方法:以不同转移潜能MCF-7、MDAMB-231乳腺癌细胞作为研究对象,设空白对照组及药物组,药物组以不同浓度β-榄香烯溶液作用细胞24h与48h后,CCK8法检测其对细胞活力的影响。应用细胞克隆形成实验进一步检测β-榄香烯对两种细胞增殖和克隆形成能力的影响。此外,Transwell实验和划痕实验检测β-榄香烯对高转移性细胞株MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的作用。结果:β-榄香烯对MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞的活力均有抑制作用,且对高转移细胞MDA-MB-231抑制作用更强,对于MCF-7细胞24h,48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(43.45±0.43),(43.05±0.56)μg/ml,对MDA-MB-231细胞24h,48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(12.20±0.61),(8.30±0.27)μg/ml。克隆形成实验结果表明β-榄香烯能够抑制乳腺癌细胞的克隆形成率,与空白对照组相比具有显著性差异。当β-榄香烯浓度为25μg/ml时,对MDA-MB-231细胞的抑制率达到49.2%,对MCF-7只有15.5%。此外,Transwell实验和划痕实验结果显示当β-榄香烯浓度达到10μg/ml时就能抑制高转移性细胞株MDA-MB-231的侵袭和迁移能力。结论:β-榄香烯能够抑制MCF-7、MDA-MB-231的细胞活力、增殖和克隆形成,且对高转移性细胞株MDA-MB-231的侵袭和迁移能力显示出很强的抑制作用,其具体作用机制有待进一步研究。     

告达庭衍生物抑制人乳腺癌细胞增殖及其作用机制研究

目的:研究告达庭-3-O-β-D-加拿大麻糖苷(Ca-G)对人乳腺癌细胞的作用及其作用机制。方法:采用MTT法研究Ca-G对人乳腺癌细胞株细胞增殖的影响;通过流式细胞术研究Ca-G对人乳腺癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的作用;采用western blotting研究Ca-G对细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:Ca-G能够明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的增殖,并阻滞细胞周期G1期,其机制可能是通过调控G1期关键蛋白cyclin D1发挥作用; Ca-G能通过caspase3/7途径诱导乳腺癌细胞株产生细胞凋亡。结论:Ca-G可有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的增殖。这为告达庭及其衍生物抗肿瘤作用的进一步研究提供了一定的实验基础,也为综合开发C21甾体苷类化合物的临床应用提供一种思路。     

黄芩提取物下调Piwil2增强他莫昔芬对乳腺癌细胞敏感性的分析

目的探讨黄芩提取物能否通过调节Piwil2的表达来增强他莫替芬对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的敏感性。方法通过MTT检测他莫昔芬以及黄芩提取物与他莫昔芬联合作用于MDA-MB-231、MCF-7细胞后,24～96h各组细胞的增殖抑制率;通过RT-PCR检测黄芩提取物、他莫昔芬、黄芩提取物与他莫昔芬联合作用MDA-MB-231、MCF-7细胞72h,各组细胞Piwil2 mRNA的表达情况。结果他莫昔芬作用于MDA-MB-231、MCF-7细胞24～96h后增殖抑制率显著低于黄芩提取物与他莫昔芬联合作用MDA-MB-231、MCF-7细胞。黄芩提取物与他莫昔芬联合作用MDA-MB-231细胞72h,细胞Piwil2 mRNA的表达水平明显低于他莫昔芬组,与黄芩提取物组比较差异不明显。结论黄芩提取物可能通过下调Piwil2的表达来增强他莫替芬对乳腺癌细胞的敏感性。     

香菇多糖诱导CIK细胞对肺癌A549细胞杀伤作用的研究

目的:明确香菇多糖对CIK细胞(细胞因子诱导的杀伤细胞)体外增殖及抗肿瘤活性的影响,为临床应用香菇多糖提高CIK细胞过继免疫治疗疗效提供理论数据。方法:于CIK细胞培养第11天加入不同浓度香菇多糖,诱导培养72h后比较细胞密度,流式细胞仪检测CIK细胞CD3、CD56双阳率,CCK8法检测比较经不同浓度香菇多糖诱导后的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率。结果 :诱导72h后,加入5、25、50μg/m L香菇多糖的CIK细胞密度虽有上升但与未加入香菇多糖的空白对照组比较无统计学差异(P0.05)。经5μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率与空白对照组相当(P0.05);而经25、50及75μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率较空白对照组明显升高(P0.05),以50μg/m L香菇多糖诱导组的差异最为明显。经5μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率与空白对照组相当(P0.05);而经25、50及75μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌细胞杀伤率明显高于空白对照组(P0.05),以50μg/m L香菇多糖诱导组对肺癌细胞的杀伤率最高。结论:香菇多糖对CIK细胞的体外增殖无促进作用,高浓度香菇多糖反而抑制CIK细胞增殖;适当浓度的香菇多糖处理CIK细胞能使CD3、CD56双阳性率上升,同时可提高CIK细胞对肺癌A549细胞株杀伤率。香菇多糖诱导CIK细胞的最适浓度在50μg/m L。     

参芪扶正注射液对脐血CIK细胞体外增殖及杀瘤活性的影响

目的观察参芪扶正注射液对脐血细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外增殖及杀瘤活性的影响。方法用脐血单个核细胞,诱导分化CIK细胞,分为4组。细胞因子组加入γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素2(IL-2)、CD3单抗细胞因子;参芪扶正注射液组:加入参芪扶正注射液;细胞因子+参芪扶正注射液组:加入参芪扶正注射液﹑IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3单抗细胞因子;对照组只加培养液。培养12天后CIK细胞达到增殖高峰期,用流式细胞仪检测细胞表型和增殖能力,MTT法检测CIK细胞对K562细胞的杀伤作用,ELISA法检测CIK细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果对脐血CIK细胞体外增殖的影响,在培养12天时,参芪扶正注射液组与细胞因子组比较差异无统计学意义(P>0.05),细胞因子+参芪扶正注射液组与细胞因子组相比差异有统计学意义(P<0.01);CIK细胞对K562细胞的杀伤作用,各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),参芪扶正注射液组CIK细胞在12、16天时分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α因子水平优于对照组(P<0.01)。结论参芪扶正注射液对脐血CIK细胞既有显著的增殖和杀瘤作用,又可促进脐血CIK细胞分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α。     

肿节风中迷迭香酸成分对乳腺癌细胞增殖、迁移能力及凋亡相关基因表达影响

迷迭香酸是中药肿节风Sarcandra glabra中抗肿瘤有效成分之一。该研究首先采用了CCK-8法和细胞划痕实验的方法观察了0,10,30,90,270,810μmol·L~(-1)迷迭香酸给药24,48,72 h后对MCF-7和MDA-MB-231的作用,结果表明90~810μmol·L~(-1)的迷迭香酸对MCF-7细胞的增殖和迁移无显著影响,而90,270,810μmol·L~(-1)迷迭香酸能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,并呈剂量效应关系,抑制效果随着时间的延长而增强。研究进一步采用了流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI染色后迷迭香酸对MDA-MB-231细胞凋亡的影响,结果显示90,270,810μmol·L~(-1)迷迭香酸给药48 h即能诱导该细胞凋亡。为探究其原因,研究进一步采用了实时荧光定量PCR和Western blot法检测凋亡关键基因Bcl-2与Bax的mRNA与蛋白表达水平,结果表明,上述剂量的迷迭香酸能显著下调Bcl-2的表达并上调Bax基因的表达。研究最终提示,迷迭香酸对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作用的效果完全不同,其能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移,诱导其产生凋亡,其机制可能与诱导细胞内Bcl-2基因的下调和Bax基因的上调有关。以上结果对三阴性乳腺癌临床治疗及相关中药药物研发具有一定意义。     

PIB5PA增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性的研究

目的探讨PIB5PA(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate5-phosphatase)基因转染人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞后对紫杉醇敏感性的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞株,MTT法观察不同浓度(0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5μmol/L)紫杉醇处理后对两株细胞生存率的影响;流式细胞PI单染法检测两株细胞凋亡率的差异;蛋白免疫印迹法检测0.3μmol/L紫杉醇处理两株细胞不同时间点Bcl-2家族成员蛋白表达差异。将p CGNPIB5PA质粒转染对紫杉醇相对不敏感MDA-MB-231细胞,0.3μmol/L紫杉醇处理24h,免疫蛋白印迹法检测PIB5PA,磷酸化Akt以及Bcl-2家族成员蛋白的表达,MTT和PI单染法检测MDA-MB-231细胞对紫杉醇敏感性的改变。结果MDA-MB-231细胞对紫杉醇敏感性较差,过表达PIB5PA后细胞生存率明显降低,细胞中磷酸化Akt水平降低,Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)表达明显增高,对紫杉醇敏感性明显增强。结论 PIB5PA可能通过上调Bim表达增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性。     

西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:研究西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移以及对环氧化酶2(COX-2)转录的影响,以期探讨西黄丸对三阴性乳腺癌细胞的作用。方法:大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组和西黄丸含药血清组,以含药血清干预三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移,RT-PCR法检测COX-2、TNF-αmRNA表达。结果:西黄丸含药血清可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,并且西黄丸含药血清可以降低MDA-MB-231细胞划痕愈合率,可以降低在炎性环境下MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA表达(P<0.05)。结论:西黄丸含药血清可以有效地抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进其细胞凋亡,可能抑制细胞迁移,并且可以减少炎性因子的转录。     

华蟾素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖迁移凋亡的影响

目的:研究华蟾素对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,用倒置显微镜观察不同浓度华蟾素对MDA-MB-231细胞形态的影响;CCK-8实验检测华蟾素对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;划痕实验检测华蟾素对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制作用;FITC/PI双染流式细胞术检测不同浓度华蟾素对MDA-MB-231细胞凋亡率的影响;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9和PTHrP的表达。结果:CCK-8结果显示华蟾素可以时间、浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖;划痕实验结果表明华蟾素可抑制MDA-MB-231细胞迁移;流式细胞术结果表明华蟾素可浓度依赖性地诱导MDA-MB-231细胞凋亡;Western Blot结果表明,华蟾素可上调MDA-MB-231细胞中促凋亡蛋白Bax、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9,下调抑凋亡蛋白Bcl-2。此外,华蟾素还可抑制MDAMB-231细胞中PTHrP的表达。结论:华蟾素通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡可能是其抗三阴性乳腺癌的机制;华蟾素通过下调乳腺癌MDA-MB-231细胞中PTHrP进而抑制溶骨性骨转移的发生,有待于后续的动物实验来进行验证。     

黄芪皂苷对不同类型乳腺癌细胞的作用效应及机制研究

目的：研究中药黄芪皂苷对不同类型乳腺癌细胞的作用效应及对胞内miRNA-155表达的影响,探讨其发挥效应可能的途径,为阐明中药的抗肿瘤作用机制和其临床应用的推广提供理论依据。方法：选择代表不同类型的乳腺癌细胞系MCF-7,MDA-MB-231和T-47D,选取对数生长期的细胞随机分为对照组和加药组,在加药组中加入不同浓度的黄芪皂苷溶液(终浓度0μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL),绘制细胞生长曲线并检测细胞克隆形成情况,并用流式细胞仪检测细胞凋亡,使用qRT-PCR测定FOX3a、SOCS1的mRNA表达水平。结果：黄芪皂苷在体外能抑制3种乳腺癌细胞系的生长和增殖,并且诱导乳腺癌细胞凋亡,但作用效应不尽相同。对T-47D的作用最强并且呈剂量依赖型,对MDA-MB-231和MCF-7的作用稍弱并呈时间-剂量依赖型。黄芪皂苷能使MCF-7和T-47D中的FOX3a、SOCS1表达降低,而MDA-MB-231中FOX3a, SOCS1升高。结论：黄芪皂苷对乳腺癌有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并且对不同的细胞类型作用效应不同。在MCF-7和T-47D...