造血干细胞移植后白血病细胞染色体核型和bcr/abl融合基因表达观察

目的：探讨造血干细胞移植(HSCT)后白血病细胞染色体核型和基因表达观察的意义。方法：用骨髓细胞短期培养法和直接法G显带分析染色体；双色荧光原位杂交检测bcr／abl融合基因。结果：2例供者为女性的男性急性髓细胞白血病(AML)患者异体外周血干细胞移植(allo-PBSCT)后染色体检测持续46，XX。最长生存50个月。4例慢性髓细胞白血病(CML)经allo-PBSCT后，Ph染色体和bcr／abl融合基因阳性1例，经供者淋巴细胞输注加干扰素治疗，已生存70个月。Ph染色体阴性bcr／abl融合基因阳性2例，最长生存27个月。Ph染色体阳性bcr／abl融合基因阴性1例，已生存14个月。2例AML自体造血干细胞移植后检测出非特征性染色体畸变，复发后再化疗达完全缓解，最长生存期达81个月。结论：造血干细胞移植后白血病细胞遗传学检测可观察近期疗效，指导后续治疗选择。     

应用RT-nest-PCR法检测慢性髓细胞白血病非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变

目的：应用筑巢式RT—PCR（RT—nest-PCR）法检测慢性髓细胞性白血病（CML）患者非亲缘异基因骨髓移植（URD）后微小残留病变（MRD），并探讨它与复发的相关性。方法：分别采用RT-nest—PCR法和常规细胞遗传学方法检测bcr／abl融合基因和Ph染色体。结果：20例CML行URD患者术前Ph染色体和bcr／abl融合基因检测均为阳性，移植术后30dPh染色体皆转为阴性，bcr／abl融合基因完全转阴时间为1～3个月，中位时间2个月；在随防的18例CML患者中，有16例患者bcr／abl融合基因完全转阴后没再转为阳性。在1例复发的CML患者中可见到血型、Ph染色体和bcr／abl融合基因动态变化，另1例CML患者在移植成功后的21个月和36个月检测到bcr／abl融合基因，经随访未见临床和血液学复发征象。结论：检测bcr／abl融合基因是目前观察CML患者非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变最敏感的方法之一，非亲缘异基因骨髓移植能最大限度地消除CML患者体内残留病变，患者能长期无病生存。     

异基因造血干细胞移植后并发严重移植物抗宿主病1例

患者,男,35岁,2007年1月诊断慢性粒细胞白血病（CML）-慢性期,3月查bcr／abl融合基因阳性率为12．1％,6月行同胞间HLA全相合异基因外周血造血干细胞移植（allo—PBSCT）术。移植后40d复查bcr／abl融合基因阳性率0．02％;移植后90d复查bcr／abl融合基因阳性率0．57％;血常规正常,骨髓细胞学检查提示增生性骨髓像,粒系各阶段比例正常。逐渐停用环孢素。停药20d出现背部、双侧大腿皮肤丘疹伴瘙痒;口腔干燥,颊黏膜粗糙,进食辛辣食物时口腔黏膜疼痛。移植后120d出现咳嗽、咯少量白色泡沫痰。     

实时定量PCR检测慢性粒细胞白血病微小残留病研究进展▲

慢性粒细胞白血病（CML）是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。约90％～95％CML患者具有费城染色体（Pniladelphia．Pn）。其分子基础是9号染色体上的o-abl基因易位到22号染色体上的bcr基因上形成新的基因嵌合体-bcr／abl融合基因，即t（9；22）（q34；q11）。     

bcr—abl融合基因在慢性粒细胞白血病诊治中的意义

目的探讨定量检测bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CML）诊断、治疗及微小残留病变监测中的意义。方法应用实时定量PCR（RQ—PCR）方法检测145例CML患者bcr—abl融合基因的表达情况。结果abl和bcr-abl的标准曲线相关系数均大于0．99,批内差及批间差均小于4％;11例不同分期的CML患者同时检测外周血和骨髓中bcr—abl水平,8例外周血较骨髓低,3例较骨髓高;急变期的bcr—abl表达情况较加速期和慢性期均明显增高。结论RQ—PCR技术检测bcr—abl融合基因准确可靠,对于评价疗效、监测微小残留病变以及预测疾病进展具有重要的临床应用价值。     

老年白血病bcr/abl融合基因的表达及其临床意义

目的　观察bcr/abl融合基因在老年白血病的表达及其临床意义。　 方法 　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)一步法检测 62例老年白血病患者bcr/abl融合基因的表达。　 结果 　 62例患者中bcr/abl融合基因阳性 5 3例 ,阳性率 85 5 % ,其中急性淋巴细胞白血病 (ALL) 17例 ,阳性 9例 (5 2 9% ) ;慢性粒细胞白血病 (CML)45例 ,阳性 44例 (97 88% )。DOCP方案治疗 7例bcr/abl ALL患者完全缓解 (CR)率 2 8 6% ,6例bcr/abl-ALL患者CR率 66 7% (P <0 0 1)。　 结论　bcr/abl融合基因检测有助于CML和ALL的临床诊断、治疗选择、微小残留病变 (MRD)监测以及预后判断 ;老年ALLbcr/abl融合基因阳性率较高 ,可能是其治疗效果较差的原因之一 ;bcr/abl ALL患者CR率明显低于bcr/abl-ALL患者 ;RT PCR一步法特异性好、敏感性高、简便快速 ,尤其适用于MRD的临床监测。     

实时定量PCR检测慢性粒细胞白血病微小残留病研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。约90%～95%CML患者具有费城染色体(Philadelphia,Ph),其分子基础是9号染色体上的c-abl基因易位到22号染色体上的bcr基因上形成新的基因嵌合体-bcr/abl融合基因,即t(9;22)(q34;q11)。该基因表达P210bcr/abl融合蛋白具     

实时定量PCR监测造血干细胞移植后BCR/ABL融合基因的表达

目的监测慢性粒细胞白血病（CML）患者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后BCR／ABL融合基因表达水平的动态变化,从而判断移植效果,指导临床治疗。方法应用Taqman实时定量RT-PCR方法,以B-actin作为内参照,检测10例初发CML患者及25例接受allo-HSCT治疗的CML患者在移植前、后不同时段外周血中BCR／ABL mRNA表达水平。结果15例接受移植的患者移植前、移植后1、2个月的NBCR／ABL（％）中位数分别为：6．57（0．14～38．83）、0．10（0～1．71）、0（0～0．52）,3个月后全部为0。移植后早期检测BCR／ABL转录本较移植前逐渐下降,移植后1、2个月NBCR／ABL（％）均较移植前下降（x^2均为13．07,P〈O．01）;移植后2个月较1个月下降（x^2=8．10,P〈0．01）。其余10例患者从移植后3～43个月不同时段起连续检测NBCR/ABL（％）也全部为0。结论实时定量RT-PCR方法检测CML患者的BCR／ABL融合基因的表达,操作迅速,灵敏度、特异性好,用于移植后微小残留病的检测对评估预后并指导临床治疗具有重要意义。     

慢性粒细胞白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓细胞中Wilms瘤抑癌基因（WT1）的表达水平及其临床意义。方法建立实时定量RT-PCR方法,采用Light Cycler PCR仪检测了46例（109份骨髓细胞cDNA标本）CML患者和23例非白血病患者骨髓细胞中WT1及内参β胆色原脱氢酶（GAPDH）的表达水平,以WT1N=（WT1拷贝数／GAPDH拷贝数）×10^4计算WT1表达水平。结果23份CML加速期与22份CML急变期患者骨髓细胞中WT1N的中位表达水平分别为103．71和129．44,明显高于64份CML慢性期和对照组（分别为3．44和1．47,P〈0．01）,对照组与CML慢性期之间WT1基因表达差异无统计学意义;CML加速期与急变期之间WT1基因表达差异也无统计学意义（P〈0．05）。WT1基因表达水平与BCR／ABL融合基因表达水平具有一定的相关性。对其中7例CML患者行异基因骨髓移植前后动态检测WT1上升可提示白血病复发。结论CML患者加速急变期骨髓细胞中WT1基因表达升高,具有参考意义。     

甲磺酸伊马替尼在慢性粒细胞白血病异基因造血干细胞移植治疗前的应用

目的:动态观察甲磺酸伊马替尼(商品名:格列卫)在2例加速期BCRABL阳性的慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因外周血造血干细胞移植(AlloPBSCT)前的应用。方法:应用PCR技术,对接受甲磺酸伊马替尼的BCRABL阳性的CML患者选择不同时间定性检测bcr/abl基因,同时进行骨髓形态学及染色体分析。结果:①甲磺酸伊马替尼治疗1个月后2例均达到血液学完全缓解,病例2达到细胞遗传学完全缓解;②移植后中性粒细胞>0.5×109/L,血小板>20×109/L病例1为13d,病例2为20d;③病例1于+32d血型转为供者型,病例2于+40d供受细胞稳定嵌合,目前2例患者血液学持续完全缓解。结论:化疗可以动员G0期bcr/abl阳性克隆进入增殖周期,表现对甲磺酸伊马替尼敏感,在CML尤其是进入加速期、急变期的患者行PBSCT前应用甲磺酸伊马替尼,有助于体内的bcr/abl白血病细胞清除,达到肿瘤净化作用。     

A possible correlation between the type of bcr-abl hybrid messenger RNA and platelet count in Philadelphia-positive chronic myelogenous leukemia.

The Philadelphia (Ph1) chromosome, in which the hybrid bcr-abl gene is formed, is thought to be the initial event in chronic myelogenous leukemia (CML). The position of the breakpoint within the breakpoint cluster region (bcr) on Ph1 chromosome and the splicing pattern determine the species of the fused bcr-abl messenger RNA (mRNA). We tried to detect the two types of fused mRNAs in 57 chronic-phase cases of Ph1-positive CML using the polymerase chain reaction procedure (RT-PCR). The bcr exon 2/abl exon 2 fused mRNA (b2-a2) was detected in 17 patients, the bcr exon 3/abl exon 2 fused mRNA (b3-a2) was detected in 34 patients, and both types of mRNA were detected in six patients. The platelet counts of patients who expressed b3-a2 mRNA or both types were significantly higher than those of patients who expressed only b2-a2 (841.5 v 373.5 x 10(9)/L; P less than .015), although there was no significant difference in the white blood cell counts or hemoglobin. This finding suggests a possibility that the type of bcr-abl mRNA may affect the thrombopoietic activity in CML.     

反义bcr—abl寡核苷酸对K562细胞的体外作用

目的 研究b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸（ASO）体外对慢性髓细胞性白血病（CML）细胞株K562的抑制作用,为反义技术用于CML患者体内基因治疗和体外骨髓净化提供依据。方法 采用体外细胞培养技术及四唑盐（MTT）比色法、免疫组织化学染色法观察b3a2-ASO体外对K562细胞的生长、克隆形成及P210 bcr-abl蛋白表达的影响。结果 经b3a2-ASO(110μm/ml)作用40h后,K562细胞生长抑制率达66．12％,集落抑制率为65．44％;作用15h后P210bcr-abl蛋白合成抑制率可达60％。而无义寡核苷酸（NSO）对前述三个指标均无显著影响;b3a2-ASO及NSO对bcr-abl阴性细胞株HL60的细胞生长和存活率亦无显著影响。结论 b3a2-ASO对K562细胞有序列特异性抑制作用,提示其可以作为CML反义基因治疗,尤其是骨髓净化的有力措施之一。