中性粒细胞数在高氧肺损伤早产鼠肺泡内的变化

目的：探讨早产鼠吸入高浓度氧所致肺损伤时肺泡内中性粒细胞（PMN）数量的变化。方法：生后6 h的SD早产鼠120只,随机分为空气组和高氧组,每组60只。空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入氧体积分数〉900 mL/L,两组分别于实验进行24 h、3、5、10、14 d取肺组织观察病理变化,肺泡灌洗获取肺泡灌洗液（BALF）,离心,取沉淀做PMN计数。结果：①空气组随着日龄增加肺泡结构逐渐分化;高氧组3 d起可见小血管扩张、充血,肺泡及间隔内有炎性细胞浸润,肺泡腔内有红细胞渗出;随着吸氧时间延长,肺间隔增厚,大量PMN浸润,肺发育受阻,肺泡简化。②从第3天起,高氧组BALF中PMN增多,与相应同日龄空气组比较,差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：PMN参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症细胞。     

早产鼠高氧肺损伤中肺泡内IL-8的含量变化

目的探讨早产鼠高氧肺损伤时肺泡内白介素8（IL-8）的含量变化。方法生后6 h的SD早产鼠120只,随机分为空气组和高氧组,每组60只。空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入氧体积分数〉900 ml/L,两组分别于实验进行24 h、3 d、5 d、10 d、14 d取肺组织观察病理变化,用双抗体夹心法检测肺泡灌洗液（BALF）中IL-8含量。结果空气组随着日龄增加肺泡结构逐渐分化;高氧组3 d始见小血管充血扩张,红细胞渗出至肺泡腔,肺泡及间质见炎性细胞浸润;随着吸氧时间延长,肺发育受阻,肺泡结构紊乱,肺泡数量减少。从第3天起,BALF中IL-8含量显著增高,与相应同日龄空气组比较,差异有统计学意义（P均〈0.01）。结论 IL-8参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症介质。     

人参二醇皂苷对失血性休克复合内毒素二次打击大鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响

目的：观察失血性休克复合内毒素（LPS）二次打击大鼠肺泡毛细血管内皮细胞膜水通道蛋白1 (AQP1)的表达变化及人参二醇皂苷( PDS)和糖皮质激素（Dex）对其影响。方法: 通过失血性休克复合LPS二次打击建立稳定的急性肺损伤模型,分为假手术对照组（S）、二次打击模型组（HL）、Dex预治疗组（HLD）及PDS预治疗组（HLP）;应用HE染色观察肺组织病理学变化,采用RT-PCR、Western blotting及免疫组织化学检测AQP1的表达。结果: ①病理组织学结果显示, HL组肺组织可见较弥漫的间质炎性改变,肺泡间隔明显增宽,肺间质内有大量的炎性细胞浸润,可见灶性出血,肺泡腔变小,部分腔内含有水肿液;而HLD组及HLP组大鼠肺脏改变明显减轻。②HL组肺组织AQP1 mRNA及蛋白表达水平均低于其他各组(P<0.05);免疫组织化学检测,肺泡周围毛细血管内皮细胞AQP1呈弱阳性,而HLD组及HLP组AQP1 mRNA及蛋白表达量明显高于HL组（P<0.05）。结论：失血-LPS二次打击可使大鼠肺组织中AQP1 的表达减少,加重肺损伤,是肺水肿形成的原因之一;Dex与PDS能使其表达提高,从而起到减轻肺水肿的作用;PDS与Dex有减轻失血性休克复合内毒素二次打击诱导的肺损伤作用。     

高氧暴露下新生大鼠肺组织Smo和Gli1蛋白的表达和意义

目的 探讨Sonic hedgehog信号通路中Smo和Gli1蛋白在高氧诱导的急性肺损伤中的表达及意义.方法 通过持续吸入高浓度氧气建立新生大鼠高氧肺损伤模型.实验组吸入95％的医用氧气,对照组吸入空气.分别留取第3、7和14 d的肺组织,HE染色观察肺脏病理改变,应用免疫组织化学和Western blot检测肺组织中Smo和Gli1蛋白的动态表达情况.结果 高氧暴露3d肺毛细血管开始充血、渗出;7d时肺结构紊乱,炎性细胞浸润;14 d时肺泡融合,纤维增生,间隔增宽.高氧组Smo和Gli1蛋白主要分布于支气管上皮、肺泡上皮、血管内皮细胞及部分纤维组织.与对照组相比,Smo于高氧第7天表达显著增加,第14天达高峰;Gli1蛋白表达于14 d显著增加.结论 高浓度氧可致新生大鼠肺损伤和肺发育停滞.Smo和Gli1蛋白的高表达可能与高氧诱导的肺损伤和支气管肺发育不良的发生发展有关.     

降钙素基因相关肽在高氧致幼年鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的：探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在高氧肺损伤形成过程中的作用．方法：SD大鼠64只按随机数字表法分为8组,每组8只,分别为空气对照组和高氧暴露1d组、3d组、7d组、14d组．通过肺组织形态学及肺组织湿／干质量,了解高氧肺损伤炎症水肿的病理改变、放射免疫法检测肺组织匀浆中CGRP含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定肺组织内CGRP的两个亚型（α-CGRP,β-CGRP）的mRNA表达．结果：高氧暴露组3～7d肺组织充血水肿,大量炎性细胞侵润;14d肺泡腔扩大,肺纤维细胞增生;高氧暴露7～14d组肺湿／干质量明显高于空气对照组;随高氧暴露时间延长,肺组织匀浆中CGRP浓度逐渐增高,于第3日达峰值,之后逐渐下降,第14日降至正常水平;肺组织中CGRP两个亚型mRNA表达不同,α—CGRPmRNA在高氧刺激24h内表达开始增高,高表达持续至高氧暴露7d,7d后表达明显降低;β-CGRPmRNA表达晚于α-CGRPmRNA,在高氧刺激3d时表达开始增高,高氧暴露14d仍处于高表达状态．结论：CGRP参与高氧肺损伤的形成过程,并在减轻高氧致肺损伤方面可能起着重要的作用．     

AQP5、MMP-9在重症急性胰腺炎肺损伤中的变化及意义

目的：观察重症急性胰腺炎（Severe acute pancreatitis,SAP）肺损伤、肺水肿与水通道蛋白5（Aquaporin 5,AQP5）及基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinases-9,MMP-9）表达变化的关系,研究AQP5 及MMP-9在SAP肺损伤中的意义。方法：逆行注射5% 牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型。40只SD大鼠随机分成实验组（SAP组）和假手术（Shamed-operated,SO）组,分别于3、6、12、24 h观察肺组织病理改变。通过免疫荧光组化、实时荧光定量PCR及Western blot法分析肺组织AQP5及MMP-9的变化。结果：与SO组相比,SAP组肺组织损害明显。通过免疫荧光组化、实时荧光定量PCR和Western blot检测发现,SAP组肺组织AQP5表达在3 h前无明显变化（P >0.05）,但6 h后表达明显减少（P<0.05）;MMP-9 mRNA的表达水平3 h开始即明显升高,12 h时达峰值,24 h后开始下降（P<0.05）;MMP-9蛋白表达从3 h开始呈逐渐增加趋势（P<0.001）。结论：SAP急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）早期肺组织AQP5无明显改变,后期则逐渐下降,提示肺AQP5可能不是导致SAP肺损伤早期肺水肿的直接原因;MMP-9大量表达,肺毛细血管基膜溶解,连续性中断,通透性增高是肺损伤早期肺水肿的主要机制;但AQP5表达水平下调影响了AQP5介导的水分子跨膜转运效率,导致肺泡内液清除障碍,促进了肺水肿形成,加重了肺损伤、肺水肿的程度,推进了急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）的进程。     

高氧促进不成熟肺组织HO-1表达的研究

目的 研究持续高氧暴露时,新生大鼠不成熟肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）的表达,推测其在高氧肺损伤机理中的作用。 方法 随机将足月SD 新生大鼠80只分为空气组和高氧组,每组40只。高氧组出生后立即置入氧体积分数>95%的持续高氧环境中饲养,空气组则持续空气中饲养。两组分别于暴露于高氧或空气中4、7、10 d时随机抽取8只,麻醉后取肺组织,比较两组肺组织的病理学改变,采用免疫组化法检测HO-1在肺组织中的表达,并计算两组肺组织面积积分光密度（IOD）值。结果 病理学检查显示,高氧7 d,可见肺泡结构破坏,肺泡壁大量炎细胞侵润,肺间隔增宽,可见明显肺水肿改变。高氧10 d,肺体积缩小,正常肺泡数目减少。肺泡结构破坏,局部纤维增生,肺纤维化明显。肺组织中血红素加氧酶-1蛋白阳性表达主要表现为肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞胞浆呈棕黄色,高氧4、7、10 d 组IOD值表明各时间点肺组织的HO-1表达均高于空气组(P<0.05)。结论 持续高浓度氧可促进不成熟肺组织HO-1表达增加,这种表达增加可能与不成熟肺组织高氧肺损伤病理生理有关。     

MAPKs通路在高氧肺损伤发病机制中的作用

目的:观察丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinases.MAPKs)信号通路细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulated kinase,ERK)、C-jun氨其未端激酶(C-JunN-terminal kinase,JNK)、p38MAPKs在高氧肺损伤肺组织的分布以及表达,应用信号途径抑制剂,研究MAPKs信号在高氧诱导肺损伤发生发展中的作用.方法:幼年Wistar大鼠随机分为如下各组(n=6):空气对照组(A)、高氧暴露3、7、14 d组(O3、O7、O14组)、高氧7 d+ERK抑制剂PD98059(O PD)组、高氧7 d+p38抑制剂SB203580(OT+SB)组、高氧7 d+JNK抑制剂SP600125(O P)组及相应空气+抑制剂组.其中,PD98059 0.3ms/ks及SB2035800.2 mg/kS由大鼠尾静脉注入,SP600125 15 mg/ks经腹腔注射.光镜下观察肺组织形态学改变并进行肺损伤病理评分;测定肺湿/干重比(Wet/drg ratio,W/D)、肺泡灌洗液(Bronchoalvedar lavage fluid,BALF)蛋白含量及肺通透系数;免疫组化检测磷酸化MAPKs在肺组织的分布,Western blot检测MAPKs蛋白含量变化.结果:与空气暴露组比较,高氧暴露各组肺组织可见不同程度损伤,O7及O14组肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透系数明显增加(P＜0.05);而抑制剂组中O SB、O SP组肺泡结构较O7组有明显改善,肺损伤病理学评分降低,同时W/D、总蛋白、肺通透系数较也明显下降(P＜0.05);MAPKs阳性细胞在高氧组表达明显增多,分布广泛;各相应抑制剂组中其阳性细胞显著减少;Western blot结果显示,高氧组ERK、p38、JNK蛋白含量明显高于空气组,在高氧各组中以O7组ERK及O14组p38、JNK表达最强.各信号通路抑制剂均能有效抑制相应MAPKs蛋白的表达.结论:高浓度氧可激活肺组织ERK、p38、JNK信号途径;p38及JNK可能促进了高氧肺损伤的发生发展.     

新生鼠高氧肺损伤中肺泡内白介素8含量的变化

目的:探讨新生鼠吸入高浓度氧所致肺损伤时肺泡内白介素8(IL-8)的变化.方法:生后24 h内的SD新生鼠100只,随机分为空气组和高氧组,每组50只.空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入＞95%氧,两组分别于实验进行后24 h,3、6、10、14 d取肺组织观察病理变化,并进行肺泡灌洗获取肺泡灌洗液(BALF),ELISA方法检测灌洗液中IL-8含量.结果:与空气组比较,高氧组肺组织24 h开始出现炎症细胞反应,肺泡内见巨噬细胞、极少量中性粒细胞及红细胞,随着吸氧时间延长,肺发育受阻,肺泡数量减少,有纤维样物质增生;从第3天起,BALF中IL-8含量显著增高,与相应同日龄空气对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:高浓度氧可导致肺组织损伤并影响肺发育;IL-8可能参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症介质之一.     

Temporal Expression of Notch in Preterm Rat Lungs Exposed to Hyperoxia

Notch signaling is essential in tissue and organdevelopment. Signals transmitted through theNotch receptor, in combination with other factorsinfluence cell differentiation, proliferation and ap optotic events at all stages of development and re habilitation or remolding of tissues[1]. Previous re searches revealed that Notch receptor/ligand per sistently exists over the whole period of fetal lungdevelopment[2], but it is still unknown how theywork during the chronic lun…     

CXCL12/CXCR4在高氧致新生大鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的 检测趋化因子12(CXCL12)[又名基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)]及其受体( Cys-X-Cys receptor4,CXCR4)在高氧致新生大鼠肺损伤中的变化,初步探讨其在新生大鼠高氧肺损伤中的作用及可能机制。方法SD新生大鼠64只,按随机数字...     

Relationship between Notch Receptors and Hyperoxia-induced Lung Injury in Newborn Rats

Alveolar epithelia are the target cells of thehyperoxia lung injury. The repair of lung injuryentirely depends on the proliferation/differentia tion of Type Ⅱ alveolar epithelial cells (AECⅡ),which are stem cells of lung tissues and are in volved in the alveolization so as to form the alveo lar blood barrier. Currently, the regulating mecha nisms of the proliferation/differentiation of AECⅡhave become a hotpot. The Notch signaling, as anevolutionary cell i…     

新生鼠高氧肺损伤中p38MAPK的磷酸化

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在新生鼠高氧肺损伤中的表达及意义.方法 160只新生鼠分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,分别建立动物模型.在12、24、72 h和1周4个时相点处死,进行肺组织病理学检查、肺湿/干重比值(W/D)测定、Western blot法检测p38MAPK的表达.结果 高氧暴露72 h即可建立肺损伤模型.新生鼠暴露于高氧12h后,p38MAPK开始表达,72h达高峰,后逐渐降低.在高氧暴露72 h后,空气对照组未见p38MAPK表达,高氧肺损伤组可见p38MAPK表达;高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK表达明显强于高氧肺损伤 SB203580组.结论 p38MAPK参与了新生鼠高氧肺损伤的过程,SB203580可以减轻这种损伤.     

肝细胞生长因子对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对高氧暴露体外培养的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Type Ⅱ alveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)增殖、凋亡及功能的影响,探讨HGF对高氧肺损伤保护作用的机制.方法:原代培养早产鼠AEC Ⅱ,纯化后随机分为4组:空气组(Air)、高氧组(HO)、空气 HGF组(Air HGF)、高氧 HGF组(HO HGF).采用流式细胞术及免疫印迹(Western blot)法观察AEC Ⅱ的增殖和凋亡情况,RT-PCR分析各组肺泡表面活性物质蛋白(surfactant associated protein,SP)SPA,SPB,SPC mRNA表达.结果:(1)各组细胞周期比例及细胞凋亡显示,与Air组比,HO组Sub G1(代表凋亡细胞比例),G0期/G1期细胞比例明显增高(P＜0.01),G2期/M期细胞比例明显降低(P＜0.01);Air HGF组S期细胞比例明显增高(P＜0.01).与HO组比,HO HGF组G0期/G1期细胞比例显著降低(P＜0.01),S期和G2期/M期细胞比例明显增高(P＜0.01).(2)各组增殖细胞核抗原表达显示,HO组显著低于Air组(P＜0.01),Air HGF组明显高于Air组(P＜0.05);HO HGF明显高于HO组(P＜0.05).(3)各组SPA,SPB,SPC mRNA表达显示,HO组强度较Air组弱(P＜0.01),而HO HGF组较HO组明显增加(P＜0.05).结论:高氧导致早产鼠AEC Ⅱ增殖抑制,凋亡增加,SPA,SPB,SPC mRNA表达降低,HGF可部分抑制这种变化,提示HGF对高氧肺损伤起一定的保护作用.     

重组骨桥蛋白通过抑制核因子κB和基质金属蛋白酶2和9减轻高氧急性肺损伤

目的研究吸入重组骨桥蛋白（r-OPN）对高氧急性肺损伤的作用及其机制。方法将96只小鼠按随机数字表法分为PBS处理组和r—OPN处理组,每组中12只小鼠置于室内空气中作为对照,其余小鼠置于浓度大于95％的氧气室中,各组分别于24、48和72h取出12只小鼠评价肺损伤严重程度;逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肺组织核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9及其抑制剂TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达;免疫组化染色检测肺组织NF-κB蛋白的表达和组织分布。结果长时间暴露于高氧能够引起急性肺损伤。暴露于高氧环境72h后,PBS处理组小鼠较r．OPN处理组小鼠发生更严重的肺损伤。RT—PCR结果显示PBS处理组小鼠肺组织NF．κBmRNA在暴露于高氧48h和72h后表达量较同时段r-OPN处理组明显增加（0．54±0．03比0．21±0．08,0．57±0．07比0．34±0．01,均P〈0．05）。r—OPN处理组小鼠在暴露于高氧72h后TIMP-1mRNA表达较PBS处理组明显增加（0．89±0．09比0．62±0．12,P〈0．05）,在暴露于高氧48h和72h后TIMP-2mRNA表达较PBS处理组明显增加（0．85±O．11比0．59±0．23,P〈0．01;0．88±0．16比0．56±0．13。P〈0．01）。免疫组化结果显示PBS处理组小鼠在暴露于高氧72h后气道上皮NF·κB蛋白表达明显高于r-OPN处理组（53．26±4．70比32．53±7．28,P〈0．05）。结论r-OPN可通过抑制NF-κB表达及促进TIMPs的表达来抑制MMPs的释放和激活,从而减轻高氧所致的急性肺损伤。     

Effects of Ethyl Pyruvate on High Mobility Group Box1 gene expression in septic lung of rat

Objective： Ethyl Pyruvate （EP） has been shown to be an effective anti-inflammatory agent in a variety of model systems. The aim of this study was to investigate the effects of EP on High Mobility Group Box1 （ HMGB1 ） genes expression and the possible mechanisms of EP protecting against acute lung injury induced by sepsis. Methods： Forty Wistar rats were randomly divided into normal controls, sham operation,acute lung injury,and EP treatment （40 mg/kg intra-peritoneally every 6 hrs） groups. At the time points of 24 hours the animals in each group were sacrificed, and the lungs were harvested. Wet/dry lung weight ratio, the protein in the bronchoalveolar lavage fluid（ BALF）, and pulmonary permeability index（PPI） were determined. The histological morphology of lung was observed under microscope. The expression of HMGB1 mRNA was measured using semi-quantitative RT-PCR. Results： EP treatment decreased wet/dry lung weight ratio, the protein in the BALF, and PPI （ P 〈 0.01 ）. The histological morphology of lung injury was ameliorated. EP significantly inhibited the HMGB1 mRNA expression （ P 〈 0.01 ）. HMGB1 mRNA expression in lungs positively correlation with wet/dry lung weight ratio, the protein in the BALF, and PPI. Conclusion： EP administered inhibits HMGB1 mRNA expression, and protects the lungs against acute injury induced by sepsis.