纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的：观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法：实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞，随机分为3组：①正常对照组：细胞置于36℃，含体积分数为0．9的空气、体积分数为0．1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组：细胞移至4000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（体积分数为0．9氮气、体积分数为0．1的CO2），在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组：在缺氧前24h在培养液中加入1 μmol／L的纳洛酮，其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果：3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著（P〉0．05）。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组（7．94&;#177;0．13，6．68&;#177;0．33，3．39&;#177;0．36，P〈0．01），且缺氧组高于纳洛酮组（P〈0．01）。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组（8.67&;#177;0．61，11．59&;#177;1．34，P〈0．01），但两组均高于正常对照组（3．48&;#177;0.28，P〈0．01）。结论：缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高，证实[Ca^2＋]i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关，且恢复氧供并不能纠正[Ca^2＋]i异常。应用纳洛酮后，在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的[Ca^2＋]i升高幅度较缺氧组明显减小，说明纳洛酮对缺氧的神经元[Ca^2＋]i具有一定的稳定作用，可以减轻神经元[Ca^2＋]i的升高，进而对神经元细胞起到保护作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的:观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法:实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为3组:①正常对照组:细胞置于36℃,含体积分数为0.9的空气、体积分数为0.1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组:细胞移至4000cm3的恒温(36℃)密闭容器内,连续充以无氧气体(体积分数为0.9氮气、体积分数为0.1的CO2),在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组:在缺氧前24h在培养液中加入1μmol/L的纳洛酮,其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果:3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著(P>0.05)。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组(7.94±0.13,6.68±0.33,3.39±0.36,P<0.01),且缺氧组高于纳洛酮组(P<0.01)。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组(8.67±0.61,11.59±1.34,P<0.01),但两组均高于正常对照组(3.48±0.28,P<0.01)。结论:缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高,证实犤Ca2+犦i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关,且恢复氧供并不能纠正犤Ca2+犦i异常。应用纳洛酮后,在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的犤Ca2+犦i升高幅度较缺氧组明显减小,说明纳洛酮对缺氧的神经元犤Ca2+犦i具有一定的稳定作用,可以减轻神经元犤Ca2+犦i的升高,进而对神经元细胞起到保护作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元的保护作用

背景：纳洛酮对脑缺血再灌注损伤细胞的保护作用机制尚不明确。选择体外培养皮质神经元研究纳洛酮疗效可排除多重因素干扰。目的：观察缺氧对体外培养大鼠皮质神经元的影响及纳洛酮的保护机制。设计：重复测量设计。地点和对象：实验地点：军事医学科学院神经生物学研究室。研究对象：体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元。干预：取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元，随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组(缺氧前24h加纳洛酮预处理)；缺氧6h后在常氧下继续培养24h。主要观察指标：观察各种条件下神经元的存活率和形态学的改变，测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果：缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡，LDH渗出量增多[6h：正常对照组为(78．68&;#177;7．34)％，缺氧组为(194．38&;#177;22．32)％；12h：正常对照组为(77．98&;#177;8．85)％，缺氧组为(331．66&;#177;36．12)％]，细胞存活率减少[6h：正常对照组为(91．82&;#177;2．89)％，缺氧组为(66．96&;#177;4．98)％；12h：正常对照组为(90．84&;#177;2．61)％，缺氧组为(32．02&;#177;6．34)％]，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。经纳洛酮预处理的神经元，缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组，LDH渗出[6h：(159．86&;#177;34．03)％；12h：(256．28&;#177;28．29)％]显著低于缺氧组(P&;lt;0．01)，而存活率[6h：(78．08&;#177;4．15)％：12h：(53．68&;#177;4．32)％]明显高于缺氧组，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：对缺氧诱导的皮质神经元的损伤，纳洛酮具有明显的保护作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮层神经元细胞的保护作用

目的　观察缺氧对大鼠皮层神经元细胞的影响及纳洛酮的保护作用。方法　取体外培养 12d的Wistar大鼠皮层控经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组 (缺氧前 2 4h加纳洛酮预处理 ) ;缺氧 6h后在常氧下继续培养 2 4h。观察各种条件下神经元细胞的存活率和形态学的改变 ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量。结果　缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡 ,LDH渗出量增多 ,细胞存活率减少 (P <0 0 1)。经纳洛酮预处理的神经元 ,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组 ,LDH渗出显著低于缺氧组 (P <0 0 1) ,而存活率明显高于缺氧组 (P <0 0 1)。结论　缺氧能诱导皮层神经元损伤 ,而纳洛酮对神经元的缺氧损伤具有明显的保护作用     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元的保护作用

背景纳洛酮对脑缺血再灌注损伤细胞的保护作用机制尚不明确.选择体外培养皮质神经元研究纳洛酮疗效可排除多重因素干扰.目的观察缺氧对体外培养大鼠皮质神经元的影响及纳洛酮的保护机制.设计重复测量设计.地点和对象实验地点军事医学科学院神经生物学研究室.研究对象体外培养12 d的Wistar大鼠皮质神经元.干预取体外培养12 d的Wistar大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组(缺氧前24 h加纳洛酮预处理);缺氧6 h后在常氧下继续培养24 h.主要观察指标观察各种条件下神经元的存活率和形态学的改变,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡,LDH渗出量增多[6 h正常对照组为(78.68±7.34)%,缺氧组为(194.38 ±22.32)%;12 h正常对照组为(77.98±8.85)%,缺氧组为(331.66±36.12)%],细胞存活率减少[6 h正常对照组为(91.82±2.89)%,缺氧组为(66.96±4.98)%;12 h正常对照组为(90.84±2.61)%,缺氧组为(32.02±6.34)%],差异有显著性意义(P＜0.01).经纳洛酮预处理的神经元,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组,LDH渗出[6 h(159.86±34.03)%;12 h(256.28±28.29)%]显著低于缺氧组(P＜0.01),而存活率[6 h(78.08±4.15)%;12 h(53.68±4.32)%]明显高于缺氧组,差异有显著性意义(P＜0.01).结论对缺氧诱导的皮质神经元的损伤,纳洛酮具有明显的保护作用.     

急性低压缺氧对大鼠脑皮质神经元超微结构的改变

目的：观察大鼠在5000m、7000m、10000m、12000m高度(停留5min)脑皮质神经元超微结构的改变。方法：Wistar大鼠50只，随机分成5000m组、7000m组、10000m组、12000m组和空白对照组。将缺氧组大鼠分别放入人体低压舱内，分别上升到5000m、7000m、10000m及12000m高度，停留5min。用JEM-1200EX透射电镜观察各组大鼠脑皮质神经元超微结构的改变。结果：缺氧组大鼠脑皮质神经元超微结构与空白对照组相比有差异，尤以10000m以上差异显著，主要表现为核结构不清，胞膜不清及核变形，异染色质与常染色质对比不明显，核周质中线粒体及粗面内质网数量减少．结构不清等．结论：急性低压缺氧可造成大鼠脑皮后神经元超微结构的改变．     

不同剂量纳洛酮对大鼠皮质神经元的影响

背景：纳洛酮对各种类型的昏迷具有显的促醒作用。一般认为纳洛酮的促醒作用与抑制内源性阿片肽(主要为β内啡肽)有关，但昏迷的程度并非一定与β内啡肽水平呈正相关。目的：在已证实促醒剂纳洛酮对皮质神经元具有直接兴奋作用的基础上；进一步研究阐明纳洛酮的兴奋皮质作用是否具有剂量依赖性。设计：以细胞为研究对象的单因素设计。单位：一所大学医院的神经内科，一所军医大学医院的神经内科。材料：实验在华中科技大学同济医学院实验中心完成。选取出生8～12d健康Wistar大鼠30只，体质量150～250g，雌雄不限。方法：实验在20～24℃的室温下进行。灌流槽置于倒置显微镜载物台上，选择表面光洁，胞体呈三角型或锥形且折光性强，有一个以上突起的神经元进行膜片钳实验。以急性分离Wistar大鼠额叶皮质锥体细胞为研究对象，采用膜片钳全细胞记录技术，观察不同剂量纳洛酮作用下，皮质神经元膜电位和自发性电活动频率变化的差异。主要观察指标：不同剂量纳洛酮的兴奋反应率、去极化幅度和自发电活’动增加的比率。结果：急性分离的皮质神经元对100，50，10，0．1μmol／L等纳洛酮的兴奋反应率分别为83％，67％，86％，71％，33％，对应的去极化幅度分别为9．8，9．6，8．4，5．2和1．3mV，自发电活动增加的比率分别为587％，375％，291％，125％，69％。结论：纳洛酮对皮质神经元具有直接兴奋作用，且其兴奋作用具有典型的剂量依赖性。     

纳洛酮对大鼠额叶皮质神经元兴奋性的影响

背景：纳洛酮的促醒机制不可能完全是因为抑制内源性阿片肽所致，所以进一步探讨纳洛酮逆转昏迷作用的神经药理机制，具有重要意义。目的：观察促醒剂纳洛酮对大鼠额叶皮质神经元兴奋性的影响，以了解纳洛酮是否通过非阿片受体抑制机制发挥促醒作用。设计：两因素析因设计。单位：解放军第一六一中心医院神经内科；华中科技大学同济医学院同济医院神经内科。材料：实验于2003-12／2004-04在华中科技大学同济医学院实验中心完成。选取出生8-12d健康Wistar大鼠30只，体质量150～250g，雌雄不限。方法：实验在20～24℃的室温下进行。选择表面光洁，胞体呈三角形或锥形且折光性强，有一个以上突起的神经元进行膜片钳实验。实验给药方法包括灌流给药(γ氨基丁酸)和压力喷射给药(谷氨酸和纳洛酮等)。主要观察指标：谷氨酸和γ氨基丁酸及纳洛酮对急性分离的FCX锥体细胞兴奋性的影响。结果：急性分离的皮质神经元能对兴奋性性神经递质谷氨酸和抑制性神经递质γ氨基丁酸产生正常反应。电流钳记录模式下，纳洛酮(0．1mmol／L)使额叶皮质神经元去极化伴动作电位发放频率增加，电压钳记录模式下，纳洛酮(0．1mmol／L)使神经元产生内向电流(13／14)。结论：纳洛酮对皮质神经元具有直接兴奋作用，提示其可通过直接兴奋皮质，发挥逆转昏迷，促觉醒作用。     

纳洛酮对缺氧心室肌细胞早期凋亡的影响

目的　观察纳洛酮对培养家兔心室肌细胞缺氧 /复氧后早期细胞凋亡的方法。方法　取乳兔心室肌细胞培养传一代后分成 3组 :正常对照组、单纯缺氧 /复氧组 (缺氧组 )、缺氧 /复氧加纳洛酮干预组 (用药组 ) ,然后以流式细胞仪检测缺氧 /复氧后的细胞凋亡。结果　缺氧 2h/复氧 4h ,缺氧组的凋亡比率较正常对照组明显增多 (P <0 0 1) ,较用药组也明显增高 (P <0 0 1)。缺氧组内凋亡细胞所占比率明显多于坏死比率 (9 88± 0 98vs 5 10± 0 2 9,P <0 0 5 )。结论　缺氧 /复氧可诱导家兔心室肌细胞早期凋亡 ,而且凋亡是缺氧 /复氧后细胞早期死亡的主要表现形式 ,纳洛酮可明显降低早期凋亡的发生     

乳酸升高对体外原代培养大鼠皮质神经元存活率的影响

背景：中枢疲劳机制目前不完全清楚，乳酸蓄积可能在中枢疲劳中发挥重要作用，乳酸蓄积是否影响神经元功能？ 目的：观察乳酸对原代的皮质神经元存活率的影响。 设计：单一样本观察。单位：解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所细胞生物学实验室。 材料：新生（第1天）Wistar乳鼠40只（解放军军事医学科学院实验动物中心）。 方法：实验于2003-10／2004-05在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所细胞生物学实验室完成。体外原代大鼠大脑皮质神经元，将神经元分为两部分：①添加不同浓度乳酸（0，5，10，20mmol／L）使培养液pH值分别降至7．35，7．15，6．95和6．00，观察神经元存活率。②添加不同浓度乳酸（0，5，10，20mmol／L）后，保持培养液pH值为7．35，分别观察神经元存活率，分析乳酸对神经元的作用是通过下调pH值还是乳酸本身的作用。 主要观察指标：①不同浓度乳酸调节pH值的变化对神经元存活率的影响。②不同乳酸浓度，相同pH值对神经元存活率的影响。③乳酸下调pH与乳酸本身对神经元的毒性作用比较。 结果：①神经元存活率随pH降低而降低，pH值为7.35，7．15，6．95和6．00神经元存活率由100％分别降至68％，69％，53％（P〈0．05）。②当乳酸浓度分别为0，5，10，20mmol／L，pH值均为7.35时，神经元存活率由100％降至88％，82％．81％。与对照组相比差异明显（P〈0．05）。③pH下调组神经元存活率显著低于相应乳酸作用组。 结论：乳酸升高造成pH降低与神经元存活率关系密切，过量乳酸亦可不依赖下调pH值的作用发挥神经毒性。     

Calphostin C对培养神经元缺氧后Bcl-2表达及神经元凋亡的研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)对神经元缺氧凋亡的影响及作用机制.方法建立体外培养孕Wister大鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,在此基础上观察神经元存活率、Bcl-2和凋亡DNA表达的规律;然后用3种不同浓度的PKC催化亚基特异性抑制剂CalphostinC预孵育培养神经元后进行缺血处理,观察神经元上述指标的改变.结果随着缺氧时间的延长和CalphostinC浓度的增加,培养神经元的存活数显著下降、Bcl-2免疫组化阳性细胞数明显减少、TUNEL荧光染色平均荧光强度显著升高.结论(1)PKC和Bcl-2均参与了缺氧神经元凋亡;(2)PKC抑制剂CalphostinC可加重缺氧神经元凋亡;(3)PKC的激活在缺氧神经元的凋亡中起保护作用,且该作用可能是通过促进Bcl-2表达实现的.     

纳洛酮对大鼠脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研究

目的 观察盐酸纳洛酮对大鼠脑复苏后海马CA1区细胞凋亡及其相关调控基因蛋白表达的影响，探讨盐酸纳洛酮脑保护的分子生物学机制。方法 将大鼠随机分成假手术组、单纯脑缺血再灌注组和脑复苏盐酸纳洛酮治疗组，制作大鼠脑缺血再灌注模型，分别用TUNEL和免疫组化法检测各组动物脑复苏后海马CA1区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax、p53、Fas的蛋白表达。结果 治疗组大鼠脑组织中凋亡细胞数低于缺血再灌注组，Bcl-2的表达明显高于缺血再灌注组，Bax、p53、Fas的表达低于对照组（P〈0．05）。结论 纳洛酮可能通过促进Bcl-2的表达和抑制Bax、p53、Fas的表达来减少脑复苏后神经细胞的凋亡而发挥其脑保护的作用。     

PrP105-132在IL-6、IL-8介导下对大鼠原代大脑皮质细胞的影响

目的探讨朊蛋白病中大脑皮质细胞死亡与朊蛋白、IL-6、IL-8的关系。方法大鼠原代皮质细胞分为对照组、PrP组、IL-6+IL-8组、PrP+IL-6+IL-8组,培养48 h后收集细胞,进行细胞形态学观察、细胞凋亡率及细胞生存率检测。结果 PrP组、PrP+IL-6+IL-8组细胞数目以及细胞生存率均较对照组、IL-6+IL-8组减少,而细胞凋亡率升高(P0.01)。PrP+IL-6+IL-8组细胞凋亡率明显高于PrP组(P0.01)、细胞生存率明显低于PrP组(P0.05)。结论 PrP105-132肽段对大脑原代皮质细胞有毒性作用,能够引起神经细胞凋亡;在IL-6、IL-8存在条件下PrP105-132对大脑原代皮质细胞的毒性作用增强。     

人参皂甙Rb1抗新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡研究

目的探讨人参皂甙Rb1对体外培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机理。方法应用“Neurobasal加B2 7Supplement”体外培养大鼠大脑皮层神经细胞 ,并在缺氧条件下使用台盼蓝拒染法、Hoechst 3 3 3 42荧光染色法、免疫细胞化学染色法观察人参皂甙Rb1对原代神经细胞的抗凋亡保护作用。结果在 10— 10 0 μg/ml的浓度范围内 ,人参皂甙Rb1能降低缺氧诱导的神经细胞凋亡率 (10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5 ) ,增加缺氧神经细胞Bcl 2蛋白的表达 (5 0— 10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5 ) ,同时减少Bax蛋白的表达 (5 0— 10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5—P <0 .0 0 1) ,提高Bcl 2 /Bax比值 (5 0— 10 0 μg/ml组 ,P <0 .0 5 )。 结论在 5 0— 10 0μg/ml的浓度范围内 ,人参皂甙Rb1通过上调缺氧神经细胞Bcl 2表达和下调Bax表达 ,避免缺氧神经细胞凋亡。     

脑脊液中高浓度铁对大鼠行为学及神经元凋亡的影响

目的：研究高浓度铁对大鼠行为学及神经元凋亡的影响,从而进一步探讨其与阿尔采默末病（AD）病因学间的关联。方法：用在大鼠侧脑室埋管、经脑室给药的方法向实验组大鼠脑室注入FeCl3 10μL;向对照组注入人工脑脊液10μL,第5、10天重复给药1次,用Morris水迷宫测定其行为学改变,用Annexin V-FITC染色细胞,通过流式细胞仪测定大鼠早期神经细胞凋亡百分率。结果：行为学实验组大鼠寻找平台时间、距离和均大于对照组;实验组染色阳性细胞百分率高于对照组。结论：本实验证明向脑室内注入铁离子可引起大鼠学习记忆功能障碍的行为学改变及神经元凋亡,这正是AD的特征性临床病理改变,因此推测脑脊液中高浓度铁离子可能是与引起散发性AD的病因有关联。     

Headache patients: Different responses induced by naloxone during work-test

The responses to work-test in ischemia (tourniquet technique), before and after I.V. injection of naloxone (2 mg) or saline, were investigated in healthy volunteers and patients suffering from various types of headache. The patients were examined during both painful and painless periods. We found that only the subjects suffering from migraine showed a significantly shortened pain tolerance at work-test in ischemia, after injection of naloxone, and only during painful periods. Psychogenic headache patients and migraine patients in painless periods showed responses during work-test similar to those in healthy volunteers, even after injection of naloxone. We believe that hyperalgesic effect of naloxone is due to involvement of b-endorphin systems only during organic pain.     

电磁辐射诱导乳鼠大脑皮层神经元凋亡的研究

目的　以体外原代培养的皮层神经元为对象 ,研究电磁脉冲 (场强为 6× 10 4 V m)辐射后早期神经细胞死亡和凋亡的变化情况 ,并探讨电磁脉冲的可能致伤机制。方法　于照射后 1h、6h、12h、2 4h和 48h分别采用MTT比色法和流式细胞术测定细胞活力和凋亡细胞的比例 ,用HE染色及TUNEL检测细胞凋亡并分别用普通光学显微镜和萤光显微镜进行凋亡观察。结果　电磁脉冲辐射后 ,神经细胞不仅发生快速的坏死 ,而且还发生细胞凋亡 ,于辐射作用后 12h达到高峰。结论　电磁脉冲辐射后早期可导致神经细胞凋亡和坏死 ,此改变可能与电磁脉冲致细胞DNA损伤有关。