吗啡依赖性大鼠海马CA4区神经细胞的改变

目的:观察吗啡依赖性大鼠海马CA4区神经激肽B及神经肽Y细胞的变化,探讨其发病机制。方法:用皮下注射吗啡法建立雄性大鼠吗啡依赖模型。用免疫组织化学和图像分析方法观察大鼠CA4区神经激肽B和神经肽Y细胞的变化。结果:正常对照组大鼠海马CA4区单位面积神经激肽B,神经肽Y阳性反应物平均灰度值为98.3±6.3,197.5±6.14,实验组为215.2±9.1,238.4±8.35,与正常对照组比较,实验组神经激肽B,神经肽Y阳性反应物大量减少,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:神经激肽B及神经肽Y细胞减少与吗啡依赖性的发生、发展有关。     

多发性脑梗死大鼠海马一氧化氮合酶改变

目的：探讨一氧化氮合酶与多发性脑梗死的关系，探讨其发病机制。方法：选用Wistar大鼠，应用微栓子栓塞阻断法建立多发性脑梗死性缺血模型，借用一氧化氮合酶组织化学染色方法、透射电镜技术并结合显微图像分析观察大鼠海马CA1区神经元的一氧化氮合酶变化。结果：手术后1h和4h实验组一氧化氮合酶阳性反应物平均灰度值(152．4&;#177;5．6，164．1&;#177;7．6)与正常对照组190．5&;#177;6．0比较明显减低(P&;lt;0．01)。缺血对照组189．3&;#177;6．2与正常对照组比较，差异无显著性意义。结论：一氧化氮合酶阳性反应物的减少与多发性脑梗死的发生、发展具有一定的关系。     

神经肽Y2受体促进大鼠学习记忆的机制

目的：观察双侧海马插管注射神经肽Y2受体的反义寡核昔酸对大鼠海马c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响，探讨Y2受体在学习记忆中可能的作用机制。方法：双侧海马插管注射Y2受体的反义、错义寡核苷酸或生理盐水，应用RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠海马中c-fos基因在跳台法训练后的表达水平变化。结果：①反义组大鼠海马珊基因mRNA表达水c-fos平23．40&;#177;8．87明显低于生理盐水组60．38&;#177;15．52和错义组53．14&;#177;11．71，差异有显著性意义(F=22．54，P&;lt;0．001)。但错义组与生理盐水组之间大鼠海马c-fos基因的mRNA表达水平差异无显著性意义，(P&;gt;0．05)。②反义组大鼠海马c-fos蛋白阳性细胞数在海马CA1，CA3和齿状回分别为16．33&;#177;6．18，27．00&;#177;9．72和109．67&;#177;23．44，均低于生理盐水组和错义组，而错义组与生理盐水组之间。c-fos蛋白表达水平差异无显著性意义。结论：神经肽Y2受体可能是通过调节。如c-fos基因的表达参与大鼠的记忆形成过程。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景：睡眠剥夺是否引起细胞变性，其信号传导是否与某些基因调控有关。目的：探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计：随机对照实验研究。地点和材料：实验地点：郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠，雌雄不限，体质量(200&;#177;20)g，由河南省实验动物中心提供。干预：采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化，应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2．bax mRNA表达。主要观察指标：睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化；海马bcl-2和bax mRNA表达。结果：快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1，CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多，异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6．60&;#177;2．24)％，(1．69&;#177;0．45)％，(6．87&;#177;1．32)％，(1．74&;#177;0．98)％。CA1，CA3区细胞凋亡率和CA2，CA4区相比较差异有显著性意义(t=5．26～6．95，P&;lt;0．05)。bc1-2mRNA阳性信号表达积分值较强，四个区之间差异无显著性意义，bax mRNA表达增强[CA1为(211．12&;#177;59．85)；CA3为(205．56&;#177;56．99)]与CA2和CA4区[(123．42&;#177;22．80)。(124．21&;#177;20．47)]比较差异有显著性意义(t=3．20～4．36．P&;lt;0．05)。结论：睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡，与凋亡相关的bc1-2。bax mRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

去松果体大鼠学习能力、大脑皮质胆碱能纤维及一氧化氮合酶的变化

目的：探讨松果体功能减退对大鼠学习能力、大脑皮质胆碱能纤维分布以及一氧化氮合酶表达影响。方法：实验于1997—07／2000—06在珠江医院神经内科实验室完成。选择经Y型迷宫测试学习正常的雄性SD大鼠12只，随机分两组，实验组6只，行松果体摘除术，对照组6只行假手术。①学习能力测试：大鼠学习能力测试用三等分Y型迷宫进行，以大鼠学习尝试次数表示。②采用酶组织化学法测乙酰胆碱酯酶表达，采用SABC法检测神经元型一氧化氮合酶表达。③乙酰胆碱酯酶纤维定量分析：采用Leica Diaplan显微镜及Leica Quantimet 500&;#177;图像分析仪，测量单位面积内乙酰胆碱酯酶的密度，定量参数为每374693．656μm^2内乙酰胆碱酯酶纤维覆盖面积（μm^2）。运动皮质，体感皮质测量第Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ层，海马为CA1，CA2，CA3区的辐状层、腔隙层、分子层和齿状回多形细胞层。皮质神经元型一氧化氮合酶表达以每只大鼠随机取相同部位的3张切片，共计6张切片，光镜下分别随机选右侧皮质、内侧隔核一斜角带核、纹状体、海马区各部位相邻4个视野（&;#215;400），统计神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数。结果：纳入动物12只，均进入结果分析。①大鼠学习能力测试：术前实验组大鼠学习能力（14．67&;#177;4．97）次，与对照组（14．33&;#177;4．32）次基本一致（P〉0．05），松果体摘除40d后大鼠学习能力（28．67&;#177;2．42）次，比术前自身对照及术后对照组（13．83&;#177;8．33）次明显下降（P（0．01）。②大鼠大脑皮质中乙酰胆碱酯酶纤维密度测定结果：实验组各部位均比对照组明显降低[实验组运动皮质、体感皮质、海马CA1，CA2，CA3区和齿状回多形细胞层纤维密度分别为（15244&;#177;1339），（14764&;#177;1391），（12991&;#177;970），（15077&;#177;1020），（19546&;#177;1489），（19337&;#177;1378）μm^2，对照组分另4为（21001&;#177;1021），（17930&;#177;2225），（17260&;#177;1342），（18911&;#177;1048），（24108&;#177;1671），（22917&;#177;1909）μm^2，P（0．01]。③不同脑区神经元型一氧化氮合酶表达：实验组大鼠大脑皮质含有较多神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数，细胞数为（5．90&;#177;0．68）个，并以体感皮质稍多于运动皮质，多于对照组（3．68&;#177;0．39）个（P＜0．05）；隔核一斜角带核部神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数（16．21&;#177;2．03）个，明显多于对照组（9．32&;#177;1．05）个（P＜0．01）；海马部神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数（4．27&;#177;0．75）个、纹状体区（9．35&;#177;2．58）个，与对照组（3．94&;#177;0．53）个和（8．96&;#177;2.31）个相比差异无显著性（P〉0．05）。结论：大鼠松果体摘除可以引起大鼠学习能力障碍，其原因可能与大脑皮质、隔核-斜角带核神经元型一氧化氮合酶过度表达，引起一氧化氮神经毒性致胆碱能神经元受损伤有关。     

全脑缺血再灌注过程中人重组白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠海马神经元代谢性谷氨酸受体5的影响

背景：白细胞介素1受体拮抗因子能显著减轻神经元的损伤具有神经保护作用。谷氨酸通过激活多种谷氨酸受体导致兴奋毒性作用，同时也可以通过其某些受体发挥神经保护作用。但二者在脑缺血再灌注过程中的联系仍不十分明了。目的：探讨脑缺血再灌注损伤过程中自细胞介素1受体拮抗因子对海马神经元的神经保护作用以及白细胞介素1受体拮抗因子与代谢性谷氨酸受体5之间的关系。设计：完全随机对照实验。单位：中国科学院武汉物理与数学研究所波谱与原子分子物理国家重点实验室，江汉大学医学与生命科学学院。材料：实验于2004-05/2005-01在中国科学院武汉物理与数学研究所波谱学与原子分子物理国家重点实验室完成。选择正常健康纯化Wis-tar大鼠32只。方法：32只大鼠按单纯随机抽样的方法分为正常组、假手术组、生理盐水组和实验组。正常组大鼠不做任何处理，假手术组大鼠仅在颈部前后方做组织分离、椎动脉暴露、颈总动脉游离手术，不结扎和夹闭双侧椎动脉和颈总动脉；生理盐水组大鼠椎动脉用电烧灼的方法永久性阻断，颈总动脉暂时性（20min）夹闭，夹闭动脉期间内将2μL生理盐水按0．4μL/min的速度注入大鼠一侧（右侧）侧脑室，拔针前滞针5min，然后松开颈总动脉的动脉夹再灌注2h；实验组大鼠操作过程相同，仅将生理盐水换成等量的人重组白细胞介素1受体拮抗剂。然后采用苏木精-伊红染色方法对大鼠皮质区域的病理变化进行观察，免疫组织化学方法对海马神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应性进行观察。主要观察指标：①各组大鼠脑皮质、海马的基本病理学变化。②各组大鼠脑缺血敏感区海马神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应变化。结果：实验组和生理盐水组各有1只在进行缺血再灌注的过程中诱发惊厥被弃用，其余30只大鼠进入结果分析。①各组大鼠脑皮质、海马的基本病理学变化：正常组、假手术组大鼠差异不明显，生理盐水组和实验组大鼠皮质、海马神经元变性，细胞周围水肿，神经元深染、核固缩或破裂。实验组神经元变性及水肿程度明显降低，深染、核固缩或破裂的神经元明显减少。②各组大鼠脑缺血敏感区海马神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应变化（用平均吸光度值表示）：正常组与假手术组大鼠海马CA1，CA3区神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应呈强阳性[CA1区：（0．54&;#177;0．12），（0．54&;#177;0．05）；CA3区：（0．57&;#177;0．02），（0．58&;#177;0．08），（P〉0．05）]。生理盐水组、实验组大鼠海马CA1，CA3区神经元免疫反应较正常组和假手术组明显减弱[CA1区：（0．30&;#177;0．03），（0．40&;#177;0．04）；CA3区：（0．30&;#177;0．04），（0．42&;#177;0．06），（P〈0．01）]，实验组较生理盐水组明显增强（P〈0．05）。结论：白细胞介素1受体拮抗因子和代谢性谷氨酸受体5均参与大鼠脑缺血再灌注损伤的病理生理过程；白细胞介素1受体拮抗因子在大鼠脑缺血再灌注损伤的病理过程中，可能调节脑海马CA1，CA3区神经元的代谢性谷氨酸受体5的表达，实现其对海马的营养和保护作用；白细胞介素1家族中除了白细胞介素1受体拮抗因子以外，还存在其他的调节因素对神经元的代谢性谷氨酸受体5的表达进行调控。     

针刺预处理全脑缺血大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA的表达

目的：探讨针刺预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA表达的影响，并与缺血预处理的效果进行比较。 方法：实验于2003-10在黑龙江中医药大学神经解剖实验室进行。取120只Wistar大鼠随机分为5组，每组24只：①正常对照组：不干预。②假手术组：暴露4条血管，不造模。③脑缺血组：四动脉阻断法全脑缺血10min制作大鼠全脑缺血模型。④脑缺血预处理组：预全脑缺血3min，再灌注24h后再次全脑缺血10min。⑤针刺预处理组：术前7d给予针刺，双侧足三里、曲池穴，双侧连接全能脉冲电疗仪，频率为1Hz，电压为2V，30min／次，针刺百会30min／次，1次／d，7d后全脑缺血10min。每组分别于再灌注12，24，48和72h麻醉状态下取材，免疫组织化学法检测海马CA1区B细胞淋巴瘤2蛋白阳性细胞数，原位分子杂交技术检测大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA表达。结果：经补充后120只大鼠进入结果分析。①脑海马B细胞淋巴瘤2蛋白阳性细胞数：正常对照组和假手术组无；脑缺血组少量表达，再灌注48h为高峰，脑缺血预处理组和针刺预处理组24h、48h、72h均显著高于脑缺血组[（33．65&;#177;9．57），（34．56&;#177;12．64），（17．89&;#177;5．96）个／mm^2；（39．14&;#177;9．11）．（38．69&;#177;10．54），（23．35&;#177;7．68）个／mm^2；（40．65&;#177;10．53），（38．99&;#177;9．34），（15．87&;#177;4．67）个／mm^2，〈0．05]，但两组间无差异（P〉0．05）。②脑海马B细胞淋巴瘤2mRNA阳性细胞数：正常对照组和假手术组无；脑缺血组少量表达，再灌注72h为高峰，而脑缺血预处理组和针刺预处理组24h、48h、72h均显著高于脑缺血组[（42．64&;#177;9．57），（44．66&;#177;11．61），（20．8&;#177;5．97）；（45．14&;#177;8．12）．（46．68&;#177;11．54），（27．39&;#177;6．55）；（50．65&;#177;10．53），（52．19&;#177;9．33），（20．87&;#177;6．67）；P〈0．05]，但两组间无差异（P〉0．05）。 结论：针刺预处理可能通过上调B细胞淋巴瘤2mRNA和蛋白表达而减轻严重缺血后细胞凋亡并促成脑缺血耐受的产生。     

肿瘤坏死因子α在吗啡依赖和戒断大鼠海马CA1区的表达变化

目的：探讨吗啡依赖和戒断大鼠海马CA1区肿瘤坏死因子α的表达变化。方法：实验于2004—04／2005—03在泸州医学院组织胚胎学实验室完成。实验动物选择普通级两三月龄雄性SD大鼠24只。按随机数字法将实验动物分为4组：对照组、吗啡依赖组和盐酸纳洛酮催促戒断1h组和戒断3h组（后两组合称戒断组），每组6只。采用剂量递增法建立吗啡依赖动物模型，用纳洛酮催促吗啡依赖动物戒断反应。具体方法为每天两次在大鼠背部皮下注射盐酸吗啡，首日10mg／kg，隔日每次增加10mg／kg，至第6天末次注射50mg／kg。吗啡依赖组末次注射后6h麻醉下灌注固定。盐酸纳洛酮催促戒断组大鼠于末次注射吗啡6h后，以盐酸纳洛酮5mg／kg皮下注射激发戒断症状，1h和3h后，同吗啡依赖组处理实验动物。对照组大鼠按照同期平行对照的原则，以相同方式注射同体积的生理盐水。记录大鼠在正常及实验状态下的活动状况。同时取大鼠海马CA1区分别作苏木精一伊红和肿瘤坏死因子α免疫组织化学，测免疫反应阳性细胞的数量和吸光度。结果：整个实验过程未出现大鼠异常死亡，吗啡注射的所有动物均成功建立吗啡依赖动物模型，全部进入结果分析。①海马形态改变：吗啡依赖和戒断大鼠海马CA1区出现结构松散、神经元萎缩和坏死等改变。②肿瘤坏死因子α蛋白表达：对照组大鼠海马CA1区肿瘤坏死因子α蛋白表达轻度阳性，吗啡依赖组和戒断组肿瘤坏死因子α阳性细胞数均增加，各组阳性细胞主要是胶质细胞和神经元。各组阳性细胞均数与对照组比较，差异均有统计学意义[（34．83&;#177;3.54），（17．50&;#177;2．88），P〈0．01]；[（38．83&;#177;4．62），（17．50&;#177;2．88），P〈0．01]；[（58．17&;#177;6．62），（17．50&;#177;2．88），P〈0．01]。而吗啡依赖组与盐酸纳洛酮催促戒断3h组差异无统计学意义[（34．83&;#177;3．54），（38．83&;#177;4．62），P〉0．05]。吗啡依赖组和戒断组肿瘤坏死因子α阳性细胞吸光度增加，各组阳性细胞吸光度均数与对照组比较差异也均有统计学意义[（0．3780&;#177;0．0094），（0．3108&;#177;0．0010），P〈0．01]；[（0.3999&;#177;0．0120）,（0．3108&;#177;0．0010），P〈0．01]；[（0．3855&;#177;0．0066），（0．3108&;#177;0．0010），P〈0．01]，吗啡依赖组与盐酸纳洛酮催促戒断3h组比较差异无统计学意义[（0．3780&;#177;0．0094），（0．3855&;#177;0．0066），P〉0．05]。盐酸纳洛酮催促戒断1h组与戒断3h组肿瘤坏死因子α阳性细胞吸光度差异有显著性[（0．3999&;#177;0．0120），（0．3855&;#177;0．0066），P〈0．05]。结论：肿瘤坏死因子α参与了吗啡依赖和戒断的病理生理过程，可能是药物依赖形成中的脑损伤初始因素之一。     

颞叶癫痫大鼠海马内谷氨酸脱羧酶蛋白表达的动态变化及其意义

目的：观察大鼠颞叶癫痫发生后海马谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase，GAD)亚型GAD67蛋白的动态变化，探讨其意义和可能机制。方法：112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42)，实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型，对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水。选取腹腔注射后3，6，12，24，48h，7，30d为研究的时间点，颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化，大鼠处死前进行脑电图描记。免疫组织化学法检测GAD67蛋白的表达。结果：海人酸致痫后6h实验组大鼠海马齿状回、CA3,CA1区的GAD67蛋白表达分别为0．60&;#177;0．02，0．61&;#177;0．02，0．58&;#177;0．02，致痫后24h分别为0．33&;#177;0．03，0．32&;#177;0．03，0．31&;#177;0．02，均较对照组(0．23&;#177;0．02,0．21&;#177;0．02，0．20&;#177;0．02)增高(P&;lt;0．05或0．01)，6h时增高显著。结论：颞叶癫痫大鼠海马GAD67蛋白表达的增高是癫痫发生后机体的内源性抗痫机制之一。     

幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。     

神经营养因子对大鼠学习记忆及海马一氧化氮合酶阳性神经元数目的影响

背景：神经营养因子在神经系统发育和正常生理功能维持及神经损伤中起着重要的作用。对神经营养因子的研究是目前神经科学领域的热点和前沿课题之一。目的：研究脑室内注射脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)抗体阻断内源性BDNF对大鼠海马一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)阳性神经元数目的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验地点在中山大学基础医学院脑研究室。实验对象为健康雄性SD大鼠13只。干预：大鼠脑室内注射BDNF抗体1周后，采用Morris水迷宫进行行为检测。主要观察指标：观察大鼠定位航行试验和空间探索试验状况，并用NADPH-黄递酶组化染色方法观察海马NOS阳性神经元数目的变化。结果：定位航行试验：实验组大鼠平均逃避潜伏期为(33．46&;#177;2．64)s，对照组为(17．71&;#177;1．86)s，两者差异具有非常显著性意义(t=4．8733。P&;lt;0．01)；空间探索试验：实验组大鼠在平台象限游泳距离百分比为(28．89&;#177;6．31)％，对照组为(41．99&;#177;7．46)％，实验组明显低于对照组(t=3．3907，P&;lt;0．01)；与对照组相比，实验组大鼠空间学习和记忆能力明显下降。实验组大鼠海马CA1区NOS阳性神经元数目(38．37&;#177;5．23)明显少于对照组(49．53&;#177;5．74)(t=8．200，P&;lt;0．01)：实验组DG区NOS阳性神经元数目(48．77&;#177;5．51)明显少于对照组(60．40&;#177;7．39)(t=7．091．P&;lt;0．01)。结论：脑室内注射BDNF抗体可导致大鼠空间学习记忆能力下降，以及海马NOS阳性神经元数目减少，表明BDNF对学习和记忆的影响可能与海马NOS阳性神经元数目的变化有关。     

胍丁胺对吗啡戒断大鼠海马神经元型一氧化氮合酶的影响

背景：胍丁胺具有增强吗啡的镇痛作用、对抗吗啡的耐受和依赖等作用。目的：观察注射胍丁胺对吗啡戒断大鼠海马神经元型一氧化氮合酶的影响，分析海马一氧化氮通路是否参与胍丁胺抑制吗啡的戒断作用。设计：随机对照实验。单位：解放军总医院麻醉科。材料：实验于2004-04／07在解放军总医院麻醉科实验室完成。选取健康SD大鼠18只，随机分为盐水对照组、吗啡组、胍丁胺吗啡组。6只／组。方法：盐水对照组皮下注射生理盐水10mg／kg；吗啡组进行5d预处理，分别皮下注射吗啡10，20，30，40，50mg／kg，2次／d；胍丁胺吗啡组每次给予吗啡前30min皮下注射胍丁胺10mg／kg。末次给吗啡后6h，吗啡组和胍丁胺吗啡组均腹腔注射纳洛酮5mg／kg。激发吗啡戒断症状，记录1h内各项吗啡戒断症状的次数（包括湿狗样抖动、咀嚼、激惹、流涎、腹泻等体征），根据动物在纳洛酮激发戒断症状的前后体重差值计算体质量减轻数。行为学测定后将各组动物麻醉处死，取海马作冰冻切片，神经元型一氧化氮合酶免疫组织化学染色。用CMIAS系统进行图像分析．每张切片选5个视野积分吸光度的均值作为阳性神经元的积分吸光度。主要观察指标：①各组大鼠吗啡戒断症状测定结果。②各组脑海马中神经元型一氧化氮合酶的表达变化。结果：实验纳入大鼠18只，全部进入结果分析。①各组大鼠吗啡戒断症状测定结果：胍丁胺吗啡组大鼠湿狗样抖动、咀嚼、激惹、流涎、腹泻、体质量减轻等戒断症状均明显低于吗啡组[（2．0&;#177;1．3），（5．0&;#177;1．1）；（0．3&;#177;0．4），（1．8&;#177;0．7）；（3．2&;#177;1．2），（6．8&;#177;3．1）；（0．2&;#177;0．4），（1．2&;#177;0．9）；（2．7&;#177;2．1），（6．7&;#177;2．1）；（6．0&;#177;3．0），（12．8&;#177;2．7）次；P均〈0．01]，与盐水对照组基本相近（P〉0．05）。②各组脑海马中神经元型一氧化氮合酶的表达变化：各组大鼠脑海马中神经元型一氧化氮合酶阳性神经元主要分布在CA1区，其胞浆被染成棕黄色，圆形的细胞核被苏木精染成淡紫色。胍丁胺吗啡组阳性神经元免疫荧光吸光度值较吗啡组显著降低（24．32&;#177;8.31，50．82&;#177;15．13，P〈0．01），与盐水对照组基本相似（24．32&;#177;8．31，15．24&;#177;1．88，P〉0．05）。结论：胍丁胺能抑制吗啡的戒断症状，降低吗啡戒断大鼠脑海马CA1区神经元型一氧化氮合酶的活性，海马一氧化氮通路参与胍丁胺抑制吗啡的戒断。     

针刺诱导脑缺血耐受的实验研究

目的：探讨预先针刺是否能诱导脑缺血耐受而具有脑保护作用及对神经元凋亡的影响。方法：实验在黑龙江中医药大学神经解剖教研室进行。取40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、针刺预处理组各10只。针刺预处理组脑缺血前给予针刺，采用“4-动脉阻断”方法建立大鼠全脑缺血模型。神经元内氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元内氏体变化；原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果：脑缺血组皮质、海马CAl区可见大量棕色TUNEL染色阳性细胞核，皮质为(65．36&;#177;10．18)个／视野，海马CA1区(58．34&;#177;9．64)个／视野，针刺预处理组阳性细胞核皮质(10．63&;#177;5．39)个／视野，海马CAt区为(12．16&;#177;5．69)个／视野，较脑缺血组明显减少(q=6．55，8．73，P&;lt;0．05)，内氏体染色阳性细胞数脑缺血组皮质为(16．16&;#177;8．31)个／视野，海马CA1区(21.66&;#177;9．39)个／视野，针刺预处理组阳性细胞核皮质(55．36&;#177;12．19)个／视野，海马CAl区为(79．36&;#177;10．69)个／视野，较脑缺血组明显增多(q=7．65，9．23，P&;lt;0、05)。结论：针刺预处理可以诱导脑缺血耐受，减轻缺血后神经元损伤，抑制神经元凋亡可能是预先针刺发挥脑保护作用的一种途径。     

胰岛素样生长因子-1受体在糖尿病小鼠脑内的分布

目的：观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的分布及APPl7肽对其分布的影响，为多肽对糖尿病脑病和AD的治疗提供理论依据。方法：雄性昆明小鼠体质量28—32g，鼠龄8周，共18只。随机分为3组，正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DM组)和APPl7肽治疗组(APPl7peptide+DM组)。用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型，并皮下注射APPl7肽(B-淀粉样肽前体蛋白319—335)给予治疗。4周后取脑组织进行IGF-1R免疫组化染色。结果：糖尿病组IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位，而正常对照组及APPl7肽治疗组仅在皮质、海马可见阳性反应细胞，DM组与C组、APPl7peplide+DM组海马阳性反应细胞数分别为(22．3&;#177;1．7)，(14．5&;#177;1．4)，(15．2&;#177;1．1)个／10倍物镜。后两组与DM组比较差异有显著性意义(F=0．1，0．2，p&;lt;0．001)。C组与DM+APPl7ueutide组小鼠海马IGF-1R免疫组化红、绿、蓝像素值分别为86&;#177;8，101&;#177;6，130&;#177;5(F=3．3，0．6，0．5，P&;lt;0．01)和84&;#177;6，102&;#177;6，132&;#177;6(F=1．2，6．0，7．0，P&;lt;0．01)，且着色淡。结论：糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的IGF-lR阳性神经元，而APPl7肽能使IGF-IR阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

血管性痴呆大鼠海马突触结构参数的变化

目的：观察血管性痴呆大鼠海马突触结构特点，探讨血管性痴呆学习记忆障碍的神经病理机制。方法：采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立血管性痴呆动物模型，利用Morris水迷宫和Y型电迷宫检验大鼠的学习记忆能力，应用透射电镜和形态计量法分析血管性痴呆大鼠海马GrayⅠ型突触结构参数的变化。结果：血管性痴呆大鼠海马CA1区GrayⅠ型突触的体积密度、面积密度、比表面、面数密度、突触界面曲率、突触间隙宽度和突触后致密物厚度分别为[0．051&;#177;0．016，(0．298&;#177;0．130)μm^2/m^3，(5．884&;#177;1．203)μm^2／m^3，(3．285&;#177;1、113)个／85．05μm^2，1．048&;#177;0．060．（13．97&;#177;0．386)nm和(33．33&;#177;0．86)nm]，比假手术对照组[分别为0．088&;#177;0．019，(0．712&;#177;0．815)μm^2／m^3，(9.020&;#177;1．915)μm^2／m^3，(6．330&;#177;1．258)个／85．05μm^2，1．103&;#177;0．268，(25．40&;#177;0．92)nm和(47．73&;#177;1．15)nm]减小，血管性痴呆大鼠与假手术对照组突触平均面积分别为(1．573&;#177;0．343)m^2和(1．202&;#177;0．145)m^2。结论：永久性结扎双侧颈总动脉使大鼠海马CA1区GrayⅠ型突触数量减少和形态结构发生显著变化，导致学习记忆障碍。     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的：观察穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。 方法：实验于2003—03／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组，每组7只。穹隆海马伞切断参照Klein等的方法，动物麻醉固定于脑立体定位仪后，参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2．2-2．5mm，中线外1．0mm处凿开颅骨，切开硬脑膜，自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法，麻醉动物后，打开腹腔，在肾脏下方的脂肪内取出卵巢，结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外，其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学染色。激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达及其共存表达的变化。 结果：实验过程中，无动物死亡，全部进入结果分析。穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A绿色荧光细胞数与对照组比较显著减少[皮质区（11．85&;#177;8．11），（22．14&;#177;8．68），P〈0．05]；[海马CA1区（11.28&;#177;3．04），（17.28&;#177;5．85），P〈0．05]。淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶红色荧光细胞数与对照组比较显著增多[皮质区（21.14&;#177;6．20），（5．57&;#177;3.10），P〈0．01];[海马CA1区（12．43&;#177;6．24），（3．42&;#177;2．76），P〈0.01]。海马CA1区呈现黄色荧光的舣标细胞数与对照组比较显著增多[（5．71&;#177;3．64），（0．57&;#177;1．51），P〈0．01]，大脑皮质区呈现黄色荧光的双标细胞数与对照组比较，差异无显著性意义[（5．71&;#177;3．14），（2．85&;#177;3．07）。P〉0．05]。 结论：穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区出现淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多、酪氨酸激酶A表达减少，海码CA1区共存细胞表达增多现象，说明神经生长因子系统与淀粉样β蛋白前体系统可能存在内在的相互联系。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的：观察促红细胞生成素(EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区iNOS蛋白表达的影响，探讨其对缺血脑组织保护的可能机制。方法：应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；于再灌注开始时经腹腔注射EPO(3000U／kg)；48h灌注取脑。苏木精一伊红染色和TUNEL法染色观察海马CA1区神经细胞坏死和凋亡。应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达。结果：短暂性全脑缺血15min再灌注后48h，苏木精一伊红染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组(211．28&;#177;7．95)个／视野，假手术组为(209．28&;#177;11．34)个／视野，EPO治疗组海马CA1区存活神经元细胞数为(170．28&;#177;8．12)个／视野，缺血组为(146．84&;#177;8．35)个／视野。EPO治疗组与缺血组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。TUNEL法凋亡细胞测定，正常组无阳性细胞，假手术组阳性细胞(152．48&;#177;18．52)个／视野，EPO治疗组有(1797．51&;#177;151．35)个／视野，缺血组有(2250．41&;#177;180．06)个／视野，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。iNOS蛋白的表达测定，正常组无阳性细胞，假手术组海马CA1区阳性细胞区灰度值为5．36&;#177;1．54，EPO治疗组为31．80&;#177;6．42，缺血组为49．46&;#177;8．96。EPO治疗组与缺血组比较，两者差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血再灌注后神经元的死亡和凋亡，抑制iNOS蛋白的表达。     

海马小白蛋白阳性神经元对缺血反应的区域性特征

背景：短暂全脑缺血再灌流早期海马各区域小白蛋白(parvalbumin，PV)阳性神经元的变化程度以及变化时间是否存在敏感性差异?目的：研究缺血敏感脑区海马的PV阳性神经元的改变以及缺血性脑损伤的细胞分子机制。设计：随机对照的实验设计。地点和对象：实验在中山大学中山医学院人体解剖学教研室完成。40只成年健康雄性大鼠，由中山大学中山医学院实验动物中心提供。干预：建立4管阻塞缺血大鼠模型，随机分为正常对照组，缺血再灌流0，6，12，24h共5组，每组8只。全脑缺血20min后再分别灌流0～24h。PV免疫组织化学反应观察海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。主要观察指标：海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。结果：正常对照组大鼠海马各区域(CA1，CA2，CA3)的始层、锥体层、放射层和腔隙分子层，齿状回的颗粒层、分子层及多形层(门区)的切片观察均出现PV阳性反应。再灌流6～12h内见PV阳性神经元出现胞体肿胀、胞浆染色变淡等变化。放射层突起密度减少；PV阳性终末的颗粒密度稀疏，以锥体细胞胞体周围的变化为明显。PV阳性神经元数目：缺血再灌流0h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．66&;#177;3．06)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(4．33&;#177;1.53)个；再灌流6h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．33&;#177;3．51)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(5．00&;#177;1．73)个；再灌流24h时，海马CA1区从(0．33&;#177;1．53)个减少为(2．33&;#177;4．93)个，门区从(1．67&;#177;1．53)个减少为(3．33&;#177;4．51)个；上述缺血再灌流组PV阳性神经元数目减少与缺血前比较有统计学意义(t=4．4505～9．2258，P&;lt;0．05)。结论：海马PV阳性神经元对全脑缺血存在区域敏感性差异。     

乙醇灌胃对大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白、S-100B蛋白表达的影响

目的：观察乙醇灌胃致大鼠海马区神经胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白和S-100B蛋白表达的改变。方法：实验于2004—09／2005—09在延边大学医学院附属医院神经内科学教研室完成。选用3月龄Wistar雄性大鼠60只，完全随机分为正常组、灌胃1，2，4，6，8周组6组，每组10只，各灌胃组按8g／（kg&;#183;d）乙醇灌胃，依周数喂养结束后取大鼠脑组织，常规制片，行胶质纤维酸性蛋白和S-100B蛋白的免疫组化染色，光镜下进行形态学观察；采用HPIAS-1000计算机彩色病理图文分析系统对胶质纤维酸性蛋白和S-100B阳性细胞计数行定量分析，进行各灌胃组与正常组的比较。结果：60只Wistar大鼠中灌胃8周组于喂养第7周死亡1只（死亡原因为乙醇误灌入肺内，造成急性肺水肿而死亡），其余各组动物全部进入结果分析。①形态学改变：正常神经胶质细胞胞体轮廓清晰，星状突起纤细，胶质纤维酸性蛋白分布于胞浆及星状突起中。S-100B阳性染色也见于胶质细胞中，均匀分布于胞浆中。随灌胃周数增加，胶质纤维酸性蛋白阳性细胞胞体变大、形态各异，突起增多明显且粗大不规则，S-100B阳性细胞体积有所增大，胞浆丰富显色较深。②灌胃1，2，4，6，8组大鼠胶质纤维酸性蛋白和S-100B免疫反应产物阳性细胞计数值均较正常组显著增高，差异有显著性意义[胶质纤维酸性蛋白阳性细胞计数：（76．49&;#177;6．43），（84．20&;#177;3．17），（92．60&;#177;4．81），（138．20&;#177;5．52），（142．12&;#177;6．41），（29．32&;#177;2．42）个，F=883．62，P〈0．051．IS—100B阳性细胞计数：（196．96&;#177;11．47），（182．22&;#177;17．28），（215．88&;#177;15．50），（239．70&;#177;14．95），（254．92&;#177;23．42），（115．53&;#177;11．62）个，F=99．88，P〈0．051。结论：乙醇使大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白和S-100B的表达增加，增加的程度与乙醇灌胃时间有关。随着灌胃时间的延长，大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白和S—100B的表达增多。     

多发性脑梗死大鼠海马CA3区P物质及其受体对发病机制的影响

目的 观察多发性脑梗塞大鼠海马CA3区神经元的SP和SPR变化及神经生长因子(nerve growth factor，NGF)、精制蝮蛇抗栓酶(Svate-3)联合应用对MCI(multi—cerebral Infarction，MCI)的影响，为进一步探讨MCI发病时的细胞内机制和临床治疗提供了实验依据。方法 选用Wistar大鼠30只，随机分为正常对照组、实验对照组和实验组。应用微栓子栓塞阻断法建立MCI缺血性动物模型，借用组织化学的方法结合显微图像分析，观察大鼠海马CA3区神经元的SP和SPR改变，并且对比观察NGF，Svate-3对MCI海马CA3区神经元的作用。结果 SP及SPR阳性反应物平均灰度值组间比较，实验对照组比正常对照组升高分别为(202&;#177;10)，(127&;#177;7)和(168&;#177;8)，(95&;#177;9)。P&;lt;0．01。结论 SP及SPR可能参与MCI病理生理过程，NGF和Svate—3在缺血状态下可以减轻神经元的损伤，并能提高其存活能力。