Survivin反义寡核苷酸经线粒体途径诱导肺癌细胞凋亡研究

目的: 探讨survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)诱导肺癌细胞凋亡的作用及survivin抗凋亡的分子机制。方法: 脂质体介导下,分别以100 nmol/L、300 nmol/L、500 nmol/L survivin ASODN作用于肺癌细胞株NCI-H446后,在不同时间用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测凋亡;Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial potentialmembrane,△Ψm)变化,EL ISA法检测胞质细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)浓度,比色法检测胞质内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(cystenyl aspartate specific proteinase-9,caspase-9)活性变化;加入caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK后FCM检测细胞凋亡。结果: Survivin ASODN 500 nmol/L作用72 h效果最佳,细胞凋亡指数(AI)达48.35%,增殖指数(PI)为24.38%;Survivin ASODN导致细胞△Ψm逐渐下降,并相继引起Cyt C的释放和caspase-9的激活。三者变化具有时间依赖性和差异性;Z-LEHD-FM K显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论: Survivin主要通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用;Survivin ASODN能够显著诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

Survivin反义寡核苷酸诱导K562细胞株凋亡的实验研究

目的 探讨Survivin反义寡核苷酸对K562细胞株凋亡的影响.方法 将K562细胞分为四组:反义组、无义组、脂质体组及空白对照组,通过脂质体将Survivin反义寡核苷酸转染入各组K562细胞,用免疫组化法测定转染前后K562细胞Survivin基因及Caspase-3的表达差异,用Tunel及Annexin V-FITC测定各组细胞的凋亡率.结果 Survivin基因在K562细胞高表达,转染反义核苷酸后其表达下降,转染Survivin基因反义核苷酸后Caspase-3的表达较其它各组升高,K562细胞生长受抑,细胞凋亡率升高.结论 Survivin反义寡核苷酸能够下调Survivin基因的表达,促进白血病细胞株K562的凋亡.     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞株凋亡的实验研究

目的 观察Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞株（SGC7901）增殖、凋亡的作用。方法 人工合成Survivin硫代ASODN，通过脂质体转染胃癌细胞株（SGC7901）后，用MTT法检测细胞毒作用；用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡；用RT-PCR、免疫组化技术检测SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 （1）Survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞增殖呈时间和剂量依赖性；（2）Survivin ASODN处理组SGC7901细胞24h后凋亡率为33．6％，正义寡核苷酸（SODN）组为10．7％，2组相比，有显著性差异（P〈0．05）；（3）SurvivinASODN处理组SGC7901细胞Survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降。结论 Survivin ASODN能够抑制增殖、诱导凋亡，推测可能通过下调Survivin mRNA及蛋白表达而起作用。     

Survivin反义寡核苷酸治疗荷瘤小鼠的实验研究

目的评价生存素(Survivin)反义寡核苷酸(AS ODN)在荷肝癌小鼠中的治疗作用。方法BALB/nu/nu裸鼠皮下注射人肝癌细胞株hepG2,建立原位移植荷人肝癌模型。将荷肝癌鼠随机分为3组:AS ODN治疗组、空白对照组和脂质体对照组,分别腹腔注射Survivin AS ODN 8μg/kg、等容积的生理盐水和空白脂质体,每日1次,连续作用7d,第8天处死荷肝癌鼠,留取瘤块标本,测定原位肿瘤大小,肿瘤生长指数;瘤组织经苏木精-伊红染色观察组织病理学形态;Western blot法检测Survivin蛋白表达;流式细胞术检测原位肝癌细胞凋亡指数和增殖指数。结果①成功地建立了原位荷肝癌的动物模型。移植瘤大体形态呈现为不规则结节状,与正常肝组织间分界较清楚。②Surrivin AS ODN治疗组肿瘤生长指数为(50.96±24.20)%,显著低于空白对照组(170.22±23.37)%和脂质体对照组(168.02±28.58)%,差异均有显著性意义(均P<0.05)。③苏木精-伊红染色显示3组瘤块标本均有移植肝癌的典型组织学表现,与对照组比较,AS ODN治疗组的原位肿瘤组织中可见到明显的细胞死亡和细胞碎片。④Western blot结果显示ASODN治疗组肝癌组织中Survivin蛋白的表达明显低于空白对照组和脂质体对照组。⑤流式细胞术结果显示AS ODN治疗组肿瘤细胞的凋亡指数为(21.97±2.11)%,显著高于空白对照组(3.21±0.57)%和脂质体对照组(3.07±0.81)%(P<0.05);而其增殖指数为(11.65±1.25)%,显著低于空白对照组(18.72±0.76)%和脂质体对照组(18.32±1.38)%(P<0.05)。结论原位肝癌移植模型能高度模拟人肝癌的形态学特点和生物学特性。Survivin AS ODN腹腔注射治疗能有效下调肿瘤组织Survivin蛋白表达,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,而对正常肝组织和其他器官组织无明显毒副作用。     

bcl—2反义寡核苷酸诱导小细胞肺癌细胞凋亡

ｂｃｌ２是一类与细胞凋亡相关的癌基因，其过度表达所致细胞凋亡受抑制是肿瘤发生的重要基础，并增加肿瘤细胞对放疗和化疗的抵抗性。本试验以脂质体为载体，对ｂｃｌ２ｍＲＮＡ翻译起始部位的反义寡核苷酸导入小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）细胞，探讨其对ＳＣＬＣ细胞ｂｃ...     

Survivin反义寡核苷酸联合TCS诱导食管癌细胞Eca-109凋亡的研究

目的:探讨survivin反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)联合TCS诱导细胞凋亡的作用及其分子机制.方法:以食管癌细胞Eca-109为实验对象,将实验分6组:未处理组、脂质体组、survivin正义寡核苷酸组(Sense oligodeoxyn ucleotide,SODN)、survivin反义寡核苷酸组(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)、天花粉蛋白组(Trichosan thein,TCS)、survivin反义寡核苷酸联合天花粉蛋白组.各处理因素作用食管癌细胞Eca-109 48 h,RT-PCR检测Eca-109细胞survivin mRNA表达变化;Western blot检测Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达变化;AnnexinV-FITC/PI双染法检测Eca-109细胞早期凋亡率.结果:ASODN组、TCS组和联合组的survivin mRNA和Survivin蛋白表达水平明显降低,联合组较单独药物组(ASODN组、TCS组)降低,而以上3组的早期凋亡率和Caspase-3蛋白表达水平明显升高,联合组较单独药物组增高(P＜0.05);TCS组和联合组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平明显降低,Bax蛋白的表达增加.结论:TCS联合survivin的ASODN在诱导Eca-109细胞的凋亡方面,能够发挥协同作用;TCS和survivin的ASODN共同抑制survivin基阒表达,TCS下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达,分别激活caspase级联反应上游、下游途径,是两药发挥协同作用的分子基础.     

生存素反义寡核苷酸诱导脑胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

n蛋白表达有明显的抑制作用(P＜0.01);以脂质体单独转染后,C6细胞凋亡水平无明显变化(P＞0.05),以SODN转染后则较多细胞发生了凋亡(与空白对照组比较,P＜0.05),而Survivin ASODN转染后C6细胞凋亡数显著增多(与其他各组比较,P＜0.01).结论 Survivin ASODN能靶向抑制Survivin蛋白的表达,从而解除其对凋亡的抑制作用,诱导胶质瘤细胞凋亡的发生,最终抑制胶质瘤细胞的生长.     

Survivin 反义寡核苷酸对小鼠肺癌的生长抑制作用

目的　Survivin是一种凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins ,IAP)家族成员,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。选择五组小鼠survivin反义寡核苷酸,并从中进步筛选效果显著的反义寡核苷酸,在小鼠体内进一步验证其抑制肿瘤生长的能力。方法　设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸五组。利用脂质体转染技术将其转入肺癌细胞D12 1,Westernblot检测survivin的表达抑制效应,从中筛选效果显著的反义寡核苷酸,确定最佳浓度,将此浓度下转染的D12 1细胞经小鼠尾静脉注入,观察生存曲线。结果　各组反义寡核苷酸在4 0 0nmol·L-1转染细胞,Westernblot结果显示NO .5组survivin表达程度减弱,选取NO .5反义寡核苷酸,在不同浓度下观测转染2 4h后,细胞凋亡情况及survivin表达状况。2 0 0nmol·L-1时,sur vivin表达出现减弱,但细胞生长尚未受到影响;4 0 0nmol·L-1时细胞开始出现凋亡,指数明显高于对照组(P <0 .0 5 ) ,以6 0 0nmol·L-1转染组最为明显。用NO .5反义寡核苷酸在2 0 0nmol·L-1浓度下转染D 12 1细胞,将此细胞致瘤小鼠,小鼠的生存期明显延长。结论　因为survivin基因在多数恶性肿瘤组织中丰富表达,选择合适的sur vivin反义寡核苷酸,将有利于应用在肿瘤的     

survivin反义寡核苷酸激活caspase-3诱导SGC7901胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究转染生存素（survivin）反义寡核苷酸诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组（Control组）、脂质体组（Lip组）、正义寡核苷酸组（Sodn组）及反义寡核苷酸组（Asodn组）。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染人胃癌细胞48h后,MTT检测细胞增殖抑制率,Western blot检测caspase-3蛋白表达改变,Hoechst染色观察细胞凋亡形态改变及流式细胞仪检测凋亡率。结果Hoechst染色荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈正常的蓝色,而Asodn组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;Asodn组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均增高,与Control组、Lip组及Sodn组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论survivin反义寡核苷酸可诱导胃癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活caspase-3表达,启动凋亡信号传导。     

MAPK反义寡核苷酸诱导大鼠成纤维细胞凋亡的研究

目的 探讨MAPK反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，ASO）对大鼠肾成纤维细胞凋亡的影响。方法 脂质体转染法将MAPK反义寡核苷酸导入NRK-49F细胞中，Western—blotting测定细胞内MAPK蛋白的表达。DAPI染色观察细胞形态，流式细胞术检测细胞凋亡比率。结果 MAPKASO降低细胞MAPK蛋白含量；且可促进细胞凋亡，转染细胞出现凋亡特征性改变，凋亡率为35．8％，与其余各组有显著差异（P〈0．05）。结论 MAPK反义寡核苷酸通过阻断信号转导分子MAPK诱导大鼠成纤维细胞细胞凋亡，为防治肾移植术后间质纤维化提供一定的理论依据。     

Experimental Study on Induction of Renal Cell Carcinoma Apoptosis by Antisense Oligonucleotide Targeting Survivin

Survivinisakindofinhibitorofapoptosispro teins (IAP)withparticularstructureandcharacter .Itisexpressedinmanytumorsinsteadofnormaltis sue.Forthisuniqueexpressionspecificity ,survivinhavebeenahotpointofinvestigationfortumordiag nosisandtreatment.Onthebaseof…     

VEGF反义核酸对Lewis肺癌细胞作用的研究

目的 探讨利用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸的基因治疗肺癌.方法 制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组.接种Lewis肺癌细胞后24h内,用ASODN及SODN皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况.用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达,RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达.结果 VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组、对照组平均瘤重分别为(4.31±0.45)g、(6.47±0.71)g、(6.23±0.76)g.VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为41.8%、5.2%.VEGF反义寡核苷酸能明显抑制VEGF蛋白表达及VEGF mRNA的表达.结论 原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长.     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。     

Survivin ASODN诱导胃癌细胞凋亡并增强OPT化疗敏感性的研究

目的 探讨转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对BGC-823细胞survivin mRNA表达及细胞增殖,凋亡和对羟基喜树碱(OPT)化疗敏感性的影响.方法 脂质体转染survivin ASODN,MTT检测生长抑制率,流式细胞术(FCM)及电镜检测细胞凋亡,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 Survivin ASODN能抑制BGC-823细胞生长,促进其凋亡,并呈剂量依赖性.电镜下见BCC-823细胞呈早期凋亡改变.OFT处理组survivin mRNA表达明显高于对照组和ASODN OPT组(P<0.05).结论 Survivin ASODN可以抑制BGC-823细胞Survivin表达,诱导癌细胞凋亡并抑制其增殖.Survivin ASODN对OPT化疗有增敏作用,即使是多次给予OFF者仍可增敏.     

survivin反义寡核苷酸转染对人乳腺癌细胞系MCF 7生长及对长春瑞滨的增敏作用

目的探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对乳腺癌细胞系MCF 7的诱导凋亡、抑制增殖和对长春瑞滨的增敏作用。方法采用脂质体介导survivin ASODN转染乳腺癌细胞系MCF 7,半定量RT PCR方法检测survivin基因mRNA表达,Western blot方法检测survivin基因蛋白表达,AnnexinⅤ/PI双染法通过流式细胞仪检测细胞凋亡率变化,PI染色通过流式细胞仪检测细胞周期时相变化,MTT比色法检测转染细胞的生长抑制情况及对长春瑞滨的敏感性,电镜观察反义转染对乳腺癌细胞系MCF 7的凋亡诱导作用。结果survivin反义复合物下调MCF 7细胞的survivin mRNA和蛋白表达,并呈剂量依赖性。细胞周期被阻滞于G2/M期,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,反义组细胞生长抑制率明显上升（P＜0.05）。透射电镜下转染组细胞呈凋亡晚期变化。600?nmol/L反义转染组长春瑞滨的IC50值为(3.7±0.42)μg/mL,正常组为(7.1±0.68)μg/mL,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论survivin反义寡核酸可有效下调MCF 7的survivin mRNA及蛋白表达水平,抑制增殖,诱导凋亡,并增强其对化疗药物长春瑞滨的敏感性。     

Wilms肿瘤基因反义寡苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 了解Ｗｉｌｍｓ肿瘤基因（ＷＴ１）反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对白血病细胞凋亡的作用。方法 应用ＷＴ１ＡＳＯ以及足叶乙甙（ＶＰ－１６）作用Ｋ５６２、ＨＬ－６０细胞系,然后应用流式细胞仪测定ＤＮＡ含量以确定白血病细胞的凋亡数。结果 Ｋ５６２细胞系经ＷＴ１ ＡＳＯ作用２４ｈ和６０ｈ后细胞凋亡数分别为１４．６％和２６．８％;而ＷＴ１有义寡核苷酸（ＳＯ）组分别为３．１％（２４ｈ）和３．９％（６０ｈ）;加入少     

反义硫代寡核苷酸对786-O细胞survivin基因的表达及生长抑制作用

目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/LASODN转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF 7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系,RT-PCR检测survivin mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin ASODN可有效下调survivin表达水平,抑制细胞的生长,并呈时间剂量依赖关系;流式细胞术示,24h反义转染组细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h）,survivin mRNA 表达增高,利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡,增加肿瘤耐药机会;反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制,对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后,下调survivin的表达,细胞凋亡增加,提高了对药物的敏感性。