川芎内生真菌PCR-DGGE分析条件的建立和优化

目的采用PCR-DGGE反应技术体系分析川芎内生真菌的群落结构。方法以栽培的川芎根茎为材料,利用PCR-DGGE技术,对基于ITS区的PCR-DGGE体系的变性剂梯度范围、电泳时间进行了优化。结果最佳变性剂梯度的范围为45%～80%,最佳电泳时间为160 min。结论所用方法简便快捷,为进一步研究川芎内生真菌的群落结构分析奠定了基础。     

涠洲岛海水中可培养细菌的溶藻活性初探

目的 选取3种海洋赤潮甲藻为研究对象,从广西涠洲岛海域来源细菌中筛选出高效溶藻的菌株,研究菌株的溶藻效果和初步作用机制,为开展赤潮的防治工作奠定基础。方法 采用细菌发酵液与甲藻共培养来测定菌株的溶藻活性,检测藻细胞中丙二醛和抗氧化相关酶系统的响应规律,分析甲藻胞外溶解性有机物组成,并通过KEGG和CAZy数据库预测目标菌株合成溶藻物质的能力。结果 从24株细菌中筛选到15株对至少一种甲藻表现出溶藻活性的菌株,总阳性率为62.5%,菌株M026对3种甲藻均表现出显著的溶藻效果。添加10%的M026发酵无菌滤液,共培养3 d后,3种甲藻细胞死亡率均高达95.0%。生理生化响应表明,在M026发酵无菌滤液胁迫下,甲藻细胞膜脂过氧化损伤严重,3种抗氧化相关酶(SOD、CAT和APX)活性先增加后下降,且三维荧光光谱检测到藻细胞内溶产物为类富里酸和类蛋白类物质。通过全基因组分析,菌株M026含有溶藻活性的次级代谢产物生物合成基因,及多种降解植物细胞壁的酶。结论 菌株M026可作为微生物溶藻菌剂的候选菌株。     

根管治疗后疾病感染根管内细菌的PCR-DGGE分析

目的利用PCR-DGGE方法分析应用变性梯度凝胶电泳技术,分析比较未经治疗和根管治疗失败的慢性根尖周炎患牙根管内的菌群结构。方法收集临床诊断为慢性根尖周炎的病例19例,包括未治疗患牙9例和根管治疗失败患牙10例。利用变性梯度凝胶电泳技术比较分析不同临床疾病状态患牙根管内细菌菌群结构的不同。结果每个样本中均可检测到细菌菌群的存在。未经治疗和根管治疗失败的慢性根尖周炎DGGE条带数差异有统计学意义(P<0.05)。聚类分析以及PCA分析结果发现治疗后和未经治疗的根尖周病患牙感染根管内的微生物菌落结构相互之间是有着明显区别的。结论未经治疗与根管治疗失败的慢性根尖周炎根管内细菌菌丛存在明显差异;不同种属细菌的联合作用是导致根管治疗失败的主要原因。     

200例血培养标本的细菌分布和耐药情况分析

目的了解本院血培养阳性标本中分离的病原菌分布及耐药情况,指导临床合理使用抗生素。方法对本院200例血培养标本所进行的细菌培养及药敏检测进行回顾性分析。结果共检出阳性血培养标本25例,菌株28株,其中革兰阳性菌17株、阴性菌11株,占总数的60.7%和39.3%,革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌为主,对万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南较敏感,革兰阴性菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主,对亚胺培南、头孢哌酮-舒巴坦、氨曲南较敏感。结论血培养分离的病原菌以革兰阳性菌为主,抗生素耐药率高,临床应加强疑为败血症患者的血培养标本检测,尽早准确合理应用抗生素,提高治愈率。     

血培养阳性标本直接细菌鉴定与药敏结果的临床分析

目的探究血培养阳性标本直接细菌鉴定与药敏结果的临床应用。方法回顾性分析2013年3月至2015年3月我院收治的98例发热并全身伴有感染患者临床资料进行研究,在对标本进行培养上需要利用专用接种水,同时与患者的血液相溶合,借助鉴定板做好接种工作,在鉴定上借助直接法进行,分离培养阳性标本,借助常规手段对分纯后的菌落进行药敏以及上机实验,将结果进行对比。结果在借助直接法以及常规法进行检验时,达到97.14%的细菌鉴定总符合率,达到96.30%的革兰阴性菌符合率,达到97.5%的革兰阳性球菌符合率,对比两种细菌检验结果,准确率均较高。结论借助血培养阳性标本直接细菌鉴定以及药敏试验的方法,对早期菌血症有较高的准确率,临床价值较高。     

浙江天目山和建德地区产银杏中内生真菌多样性的比较研究

目的比较银杏内生真菌在浙江天目山地区和建德地区以及在同一地区雄株与雌株银杏中的种群结构。方法利用PDA培养基对采集自天目山地区和建德地区以及天目山地区雄株和雌株的银杏内生真菌分别进行分离、纯化,根据菌株群落的培养特征及5.8S和ITS区片段序列相似性比较和系统发育分析,进行菌株鉴定。结果从天目山地区和建德地区分别分离得到440、382株内生真菌。天目山地区内生真菌归属到9目、14科、19属、28种;建德地区内生真菌归属到8目、10科、11属、26种。银杏各组织部位内生真菌的数量和种类按由多到少排序:枝条>树皮>叶。天目山地区雄株银杏内生真菌在定殖率和菌株个数上均高于雌株银杏。结论银杏内生真菌具有极其丰富的物种多样性,天目山地区银杏内生真菌在种类和数量上均多于建德地区。天目山地区雌雄株银杏在菌种种类和数量上存在差异,雄株银杏内生真菌在菌种数量上具有一定的优势。     

基于高通量测序技术的濒危植物黄瑞香Daphne giraldii Nitsche根部内生真菌多样性研究

通过研究濒危植物黄瑞香根部真菌种类的多样性,为濒危植物黄瑞香真菌库的建立及筛选促进黄瑞香生长和提高其活性成分祖师麻甲素含量的内生真菌提供科学依据.以甘肃、山西两省的9份野生黄瑞香植株为研究对象,利用Illumina高通量测序技术对其测序并进行生物信息学分析,共获得632 766条有效序列,包括348个OTU,4门,20...     

HPLC测定川芎中的总阿魏酸

目的 建立测定川芎药材中总阿魏酸的方法.方法 采用HPLC-DAD法,色谱柱为Kromails C18(250 mm× 4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-1%冰醋酸(18:82)梯度洗脱;流速1.0 ml·min-1;柱温30℃;检测波长32nm.结果 总阿魏酸0.053～0.478μg线性关系良好,平均回收率100.92%,RSD=1.74%.结论 所建方法简单可靠,易于操作,重复性好.     

RP-HPLC法测定川芎CO_2超临界流体萃取物中丁烯基苯酞的含量

目的测定川芎二氧化碳超临界流体萃取物中丁烯基苯酞的含量。方法采用HPLC法。色谱条件为色谱柱:Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇体积分数为10%异丙醇水溶液(体积比为60∶40);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:235 nm;柱温:40℃。结果丁烯基苯酞在7.28~72.8μg.mL-1内线性关系良好(r=0.999 5),平均回收率为99.7%(RSD=2.72%,n=6)。3批样品中丁烯基苯酞的含量质量分数分别为4.86%(RSD=1.25%,n=3)、5.00%(RSD=1.87%,n=3)和4.81%(RSD=1.87%,n=3)。结论HPLC法可以测定川芎二氧化碳超临界流体萃取物中丁烯基苯酞的含量,供试品中丁烯基苯酞与其他组分的色谱峰分离度良好。     

毛细管区带电泳法测定岩陀中岩白菜素的含量

目的建立毛细管区带电泳法测定岩陀药材中岩白菜素的含量。方法岩陀药材用甲醇超声提取,采用未涂渍熔融石英毛细管(75μm×48.5 cm,有效长度40 cm),以25 mmol·L-1硼砂溶液为缓冲液,运行电压15 kV,温度25℃,内标为肉桂酸,检测波长为240 nm,运行时间10 min。结果岩白菜素与内标及其他成分能达到基线分离,在9.990⁴99.5μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系,Y=0.013 9X+0.005 6,r=0.999 6,检测限为4.995μg·mL-1(S/N=3),定量限为9.990μg·mL-1(S/N=10),平均加样回收率为101.1%(RSD=1.9%,n=6),低、中、高浓度日内、日间精密度RSD均<5%(n=3)。结论此方法可用于岩陀药材中岩白菜素的含量测定及质量控制,具有简便快速、准确可靠、试剂消耗量少的优点。     

非水毛细管电泳法测定延胡索中延胡索乙素的含量

目的：建立非水毛细管电泳法,分离测定延胡索中延胡索乙素的含量。方法：以５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸钠甲醇液含２ｍｏｌ／Ｌ醋酸为分离缓冲液。结果：本法在延胡索乙素浓度为５～４０μｇ／ｍｌ范围内具有良好的线性关系和重现性,且无需预处理。回收率９７４２％,ＲＳＤ＝１６８％。结论：本法准确、快速、简便。     

非共价涂层毛细管电泳法测定黄连及其炮制品中3种生物碱的含量

目的建立同时测定黄连药材中小檗碱、巴马汀和药根碱含量的毛细管电泳方法。方法采用聚凝胺-聚丙乙烯磺酸钠涂层毛细管柱(33 cm×50μm I.D.,有效长度为24.7 cm),运行缓冲液为500 mmol.L-1Tris-甲醇(体积比为70∶30)缓冲溶液(8 mol.L-1,磷酸调节pH 7.5),分离电压为22 kV,检测波长为230 nm,温度为20℃,压力自动进样(5 000 Pa×6 s),阴极检测。结果在所选电泳条件下,黄连中的生物碱组分在4.5 m in内得到良好分离,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱的线性范围分别为199.8~1 998、48.45~484.5和47.3~473 mg.L-1,线性关系良好,加样回收率分别为102.8%、100.2%和97.7%。结论该方法可应用于黄连药材中生物碱的分析测定。     

Polymorphisms of SLC22A9 (hOAT7) in Korean Females with Osteoporosis

Among solute carrier proteins, the organic anion transporters (OATs) play an important role for the elimination or reabsorption of endogenous and exogenous negatively charged anionic compounds. Among OATs, SLC22A9 (hOAT7) transports estrone sulfate with high affinity. The net decrease of estrogen, especially in post-menopausal women induces rapid bone loss. The present study was performed to search the SNP within exon regions of SLC22A9 in Korean females with osteoporosis. Fifty healthy controls and 50 osteoporosis patients were screened for the genetic polymorphism in the coding region of SLC22A9 using GC-clamped PCR and denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE). Six SNPs were found on the SLC22A9 gene from Korean women with/without osteoporosis. The SNPs were located as follows: two SNPs in the osteoporosis group (A645G and T1277C), three SNPs in the control group (G1449T, C1467T and C1487T) and one SNP in both the osteoporosis and control groups (G767A). The G767A, T1277C and C1487T SNPs result in an amino acid substitution, from synonymous vs nonsynonymous substitution arginine to glutamine (R256Q), phenylalanine to serine (F426S) and proline to leucine (P496L), respectively. The Km values and Vmax of the wild type, R256Q, P496L and F426S were 8.84, 8.87, 9.83 and 12.74 µM, and 1.97, 1.96, 2.06 and 1.55 pmol/oocyte/h, respectively. The present study demonstrates that the SLC22A9 variant F426S is causing inter-individual variation that is leading to the differences in transport of the steroid sulfate conjugate (estrone sulfate) and, therefore this could be used as a marker for certain disease including osteoporosis.     

梯度电泳制备肝素寡糖

低分子肝素是通过酶解或化学降解的方法得到分子量较小的普通肝素片断,较普通肝素抗凝血作用小,出血等不良反应发生率低,是一类很有价值的药物。本文采用聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳对低分子质量肝素进行纯化,从凝胶中回收肝素寡糖片段,并通过高效凝胶渗透色谱法测定回收样品的相对分子质量。结果制备得到平均M_r约为3019的肝素寡糖,构建了梯度电泳制备肝素寡糖的方法     

毛细管电泳高频电导法测定威灵仙中熊果酸的含量

目的:建立以毛细管区带电泳、高频电导法测定威灵仙中熊果酸含量的方法。方法:采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(60cm×75μmID,有效长度56cm),以1.2mmol·L-1三乙胺-HCl(pH10.60)、0.24mmol·L-1β-环糊精为运行缓冲液,分离电压为12.5kV,重力进样10s(高度20cm)。结果:熊果酸检测浓度在5.55～111.0mg·mL-1范围内与对照品同内标峰面积的比值呈良好的线性关系(r=0.9993);平均回收率为96.0%,RSD=1.39%(n=6)。结论:本法简便、准确、快速、重现性好,可用于威灵仙中熊果酸的含量测定。