PCR检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸

ＰＣＲ检测外周血细胞中结核分枝杆菌核酸杨朝国陈川①张明清②（四川省卫生管理干部学院，成都６１００４１）关键词结核分枝杆菌核酸外周血聚合酶链反应检测结核分枝杆菌核酸的几种ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均不相同〔１～３〕，用痰样品制备ＤＮＡ较麻烦，且常常是ＰＣ...     

耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变

利福平（ＲＦＰ）耐药性的产生系由于结核分枝杆菌（结核菌）编码ＲＮＡ聚合酶β亚基（ｒｐｏＢ）的基因突变所致［１］。目前检测ｒｐｏＢ基因突变的聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，所用引物大多对结核菌特异性较差，其他分枝杆菌也能获得扩增。我们结合国外研究资料，采用...     

结核分枝杆菌四种检测方法的比较研究

结核分枝杆菌四种检测方法的比较研究陈东科张秀珍我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法、４６０ＴＢ自动检测系统快速培养法（ＢＡＣＴＥＣ法）、改良罗氏培养法（Ｌ－Ｊ法）、金胺－酚染色法４种检测方法同时检测１１５份临床患者标本中的结核分枝杆菌，并对结果进行了分析...     

应用聚合酶链反应检测胸水中结核分枝杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２８例胸水中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并将涂片镜检和分离培养作为参比方法。试验结果显示：ＰＣＲ直接检测胸水中结核分枝杆菌的灵敏为３１个菌体单位，敏感性为４２．３％，特异性为９６．８％，高于涂片镜检和分离培养的检出率（３８．２％和３５．１％）。该法具有敏感性高，特异性强和简便快速等优点，特别适合含微量结构分枝菌临床标本的检测，可用于结核性胸膜炎早期和鉴别诊断。     

应用聚合酶链反应-微孔板反相杂交技术检测结核分枝杆菌

近年来,应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测结核分枝杆菌（结核菌）的方法已被广泛应用于临床,其灵敏、快速、简便等优点得到公认［１］。但是由于受诸多因素的影响,检测结果容易出现假阳性及假阴性,给临床诊断带来困难。我们采用特异性结核菌探针,通过微孔板反相杂...     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的 探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法 参照Ｃａｍｐｂｅｌｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ有临床标本中的肺炎衣原体感染。结果 经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣     

PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因突变情况，研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直测序法分析９２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，２３株药物敏感体中，２１株ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ分析正常，２株异常。３６株耐非ＩＮＨ药物的分离株中，２０株ｋａｔＧ基因ＳＳＣ正常，１６株异常。３３株耐ＩＮＨ分     

聚合酶链反应检测结核杆菌的临床应用价值

５８例结核病患者与２８例非结核病呼吸系统疾病患者的痰中胸水标本，分别进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测结核杆菌及直接涂片找抗酸杆菌，同时用酶联法（ＥＬＩＳＡ）查血清结核抗体。对照研究表达ＰＣＲ检测结核杆菌特异性好，敏感性强，临床应用前景好。     

银染单链构象多态性技术检测结核杆菌rpoB基因突变

目的 探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平（ＲＦＰ）耐药性评估中的应用价值。方法 设计针对ｒｐｏＢ基因１８３ｂｐ扩增引物,运用聚合酶链反应－单链橡象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色方法,检测了４５株结核杆菌临床分离株,并对其中部分菌株进一步做了ＤＮＡ序列分析。结果 以药敏试验结果对照,有１６株ＲＦＰ敏感株为２６株ＲＦＰ耐药株经ＳＳＣＰ方法得到检测,阳性占９３．３％,特异性００％。对部     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

聚合酶链反应-反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种

目的 建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法以１６ＳｒＤＮＡ为靶序列,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－反向斑点杂交检测２５种分枝杆菌１１种分枝杆菌标准株、１２０株分枝杆菌临床分离株和２６份痰标本。结果 分枝杆菌、非分枝杆菌标准株经ＤＮＡ扩增,分枝杆菌均出现５７８ｂｐＤＮＡ片段,非分枝杆菌除假白喉棒状杆菌可见同样片段外,其余菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出１００ｆｇ结核分枝杆菌ＤＮ     

银染单链构象多态性技术检测结核杆菌rpoB基因突变

目的探讨分子生物学方法在临床标本结核分枝杆菌利福平（ＲＦＰ）耐药性评估中的应用价值。方法设计针对ｒｐｏＢ基因１８３ｂｐ扩增引物,运用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲＳＳＣＰ）银染色方法,检测了４５株结核杆菌临床分离株,并对其中部分菌株进一步做了ＤＮＡ序列分析。结果以药敏试验结果为对照,有１６株ＲＦＰ敏感株及２６株ＲＦＰ耐药株经ＳＣＰ方法得到检测,阳性占９３．３％,特异性１００％。对部分菌株１８３ｂｐ片断测序结果显示,ＲＦＰ敏感株无ｒｐｏＢ基因突变,耐药株均发生碱基突变,分别导致编码５３１及５２６位点的氨基酸改变。结论银染ＰＣＲＳＣＰ方法具有简便,快速,准确的特点,提高敏感性,可以对临床标本结核杆菌利福平耐药突变进行鉴定。序列分析证明结核分枝杆菌利福平耐药菌株有ｒｐｏＢ基因突变。     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

样品处理与临床PCR检测

样品处理与临床ＰＣＲ检测江凌晓综述冯永清审校（第一军医大学附属珠江医院分子生物学实验室，广州５１０２８２）关键词聚合酶链反应样品处理聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是检测特异性核酸片断的最敏感的方法之一。现已用于...     

聚合酶链反应检测肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的比较聚合酶链反应酶免法（ＰＣＲＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲＰＡＧＥ）方法检测白血病细胞端粒酶活性的临床应用价值。方法ＰＣＲＥＬＩＳＡ以地高辛标记对端粒重复片段特异的探针与ＰＣＲ变性产物杂交，通过ＥＬＩＳＡ系统检；ＰＣＲＰＡＧＥ方法直接用电泳法分离ＰＣＲ扩增端粒酶的合成产物，经溴乙啶染色，分析端粒酶活性。结果ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法能准确特异地检测白血病细胞的端粒酶活性，检测灵敏度可达１×１０２细胞数。经ＰＡＧＥ分离显示，端粒酶的ＰＣＲ产物有含５０ｂｐ等６条梯带。结论两种方法均可用于临床检测。ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法似更简单、方便一些。     

结核分枝杆菌链霉素耐药分离株rpsL基因突变的检测

目的 探讨结核分枝杆菌（结核菌）对链霉素（Ｓｍ）产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核菌Ｓｍ药物敏感性的试验方法。方法 应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染分析技术检测３２例结核菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因。结果 以结核菌标准株（Ｈ３７Ｒｖ）为对照,３２株结核菌临床分离株中,１０株Ｓｍ敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常,２２株Ｓｍ耐药株中,１６株（７２．７％）的ｒｐｓＬ     

PCR在骨与关节结核诊断中的应用价值

ＰＣＲ在骨与关节结核诊断中的应用价值北京首都医科大学附属北京友谊医院（１０００５０）张鹤宇王志义骨与关节结核由于临床表现多样，甚至手术后病理也难以发现典型的结核性改变，使诊断变得更为复杂。聚合酶链反应（ＰＣＲ）是近年来发展起来的一种体外快速ＤＮＡ扩增...     

聚合酶链反应检测胸腔积液结核杆菌DNA

聚合酶链反应检测胸腔积液结核杆菌ＤＮＡ柴辉，杨浏，鞠萍（湖北省黄石市二医院，４３５００２）我们应用ＰＣＲ技术检测４９例胸腔积液患者结核杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ）并与常规方法进行了比较。现将结果报告如下。１材料与方法１．１标本４９例均为本院结核科和呼吸...     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为肺炎衣原体感染的临床诊断提供了科学的依据     

柯萨奇B组病毒RNA PCR的改进

应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测患者血清中柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ，在反应中采用了逆转录活性的聚合酶（ＲＴ－Ｔａｑ酶），使逆转录和ＰＣＲ一次加样完成，并对心脏病患者进行了检测，现将结果报告如下。１材料与方法１．１病人来源均为本院住院病人，经临床...