丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP10表达的影响

目的研究丁苯酞干预对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时点脑组织中热休克蛋白10(HSP10)表达的影响,并探讨丁苯酞对缺血性脑血管病保护作用的机制。方法采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作大鼠前脑缺血再灌注模型;H&E染色和NSE免疫组化染色神经元,观察脑组织的形态变化和记数各组神经元数目;免疫组织化学检测对照组、缺血再灌注组及丁苯酞干预组大鼠脑组织HSP10的表达水平变化。结果脑缺血再灌注后丁苯酞干预组及缺血再灌注组HSP10表达水平于再灌注后6h开始上调,3d达到高峰,丁苯酞干预组各时间点HSP10阳性表达指数均高于缺血再灌注组,丁苯酞干预组脑组织的损伤程度明显轻于脑缺血再灌注组(P<0.05)。结论丁苯酞可能通过上调大鼠缺血再灌注损伤后脑组织HSP10的表达,从而抑制前脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,减少神经元死亡,减轻缺血再灌注后脑组织的损伤。     

沙鼠脑缺血再灌注损伤后Hsp22和c-fos的表达变化

目的 探讨沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中Hsp22和c-fos的表达变化及相应的保护机制。方法 健康雄性蒙古沙鼠制作脑缺血再灌注模型,缺血10 min,再灌注6 h、1、3、7 d。采用HE染色、免疫组织化学染色法观察脑组织的病理变化,Hsp22和c-fos的表达情况。结果(1)HE染色:脑缺血再灌注组根据时间点的不同可见胶质细胞增生、肥大,细胞间质和细胞水肿,神经元坏死;(2)免疫组化:缺血再灌注损伤后Hsp22的表达上调,于第3 d达到高峰,与对照组比较有显著差异(p<0.05),第7 d开始下降但仍高于正常组和假手术组; c-fos在脑缺血再灌注后表达明显增高,于第1 d达到高峰,与对照组比较有显著差异(p<0.05),随后逐渐减少。结论 沙鼠脑缺血再灌注后脑组织Hsp22及c-fos表达上调,推测Hsp22可能通过抑制c-fos的活性而起到凋亡负性调节的作用。     

沙鼠脑缺血后脑内Smad 2和Smad 4蛋白表达的研究

目的研究沙鼠脑缺血后脑内Smad2、Smad4蛋白表达的变化。方法40只雄性沙鼠被随机分为正常对照组、假手术组和脑缺血再灌注组。用免疫组化法检测各组沙鼠脑内Smad2、Smad4蛋白表达变化。结果各组沙鼠神经元和胶质细胞胞浆内均有Smad2、Smad4蛋白阳性表达,且Smad4蛋白表达均显著多于Smad2蛋白。与正常对照组和假手术组比较,缺血再灌注6h、24h时,Smad2、Smad4蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论缺血再灌注后Smad2、Smad4蛋白表达显著上调,提示Smad2、Smad4参与了沙鼠脑缺血的发生和发展。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法将雄性Wistar大鼠30只分为假手术组、常温组和亚低温组。制作右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,观察缺血2h再灌注48h后各组大鼠脑组织学改变和HSP70及GFAP的表达。结果常温组大鼠脑皮质下神经元严重坏死,亚低温组皮质下神经元坏死严重程度明显较常温组轻,假手术组未见神经元坏死。常温组大鼠脑组织GFAP和HSP70阳性细胞较多,假手术组、亚低温组GFAP和HSP70阳性细胞少于常温组,假手术组偶见HSP70阳性细胞;图像分析显示,常温组大鼠脑组织GFAP、HSP70表达的平均光密度较假手术组和亚低温组明显增高(均P<0.01)。结论亚低温能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,降低脑组织HSP70及GFAP蛋白的表达。     

脑缺血后脑内HSP70表达的实验研究

热休克蛋白(HSP)是细胞对缺血等应激反应的敏感标记.通过建立大鼠全脑缺血模型,采用HSP70单克隆抗体LSAB免疫组化技术对脑缺血再灌注后的神经元进行了检测.发现在海马CA_3区,齿状回,尾壳核及杏仁核等处的神经元中有HSP70过量表达,并于再灌注后48h达到高峰.初步研究了HSP70在不同神经元中的分布情况,基本肯定不同神经元中HSP70的表达与神经元对缺血的耐受性有关.     

沙鼠脑缺血再灌注后PHF-1和58K-9表达的变化及美满霉素干预的影响

目的研究沙鼠脑缺血再灌注后脑内磷酸化的Tau蛋白（PHF-1）和高尔基体表面蛋白标记抗体（58K-9）表达的变化及美满霉素干预对它们表达的影响。方法采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作沙鼠脑缺血再灌注模型；50只沙鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、美满霉素干预组（美满霉素干预＋缺血再灌注）；美满霉素干预组的沙鼠在实验前1d开始腹腔注射美满霉素（剂量为45mg／kg，Bid）；缺血再灌注组、美满霉素干预组分别在缺血再灌注（IR）后6h、1d、3d、7d的各时间点分批处死动物，快速取脑组织制作标本，采用免疫组织化学方法检测各组沙鼠脑内PHF-1、58K-9的表达水平。结果（1）正常对照组与假手术组沙鼠脑组织中可见少量PHF-1的阳性表达，2组比较无差别（P〉0．05），且阳性信号主要位于神经元和胶质细胞胞浆中；缺血10min分别再灌注3d、7d后脑组织中PHF-1表达增加，7d组表达高于3d组；3、7d组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性（P〈0.01）；（2）正常对照组与假手术组沙鼠脑组织中可见大量58K-9的阳性表达，2组比较无差别（P〉0．05），且阳性信号主要位于神经元和胶质细胞胞浆中；缺血10min分别再灌注3、7d后脑组织中58K-9表达减少，7d组表达低于3d组；3、7d组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性（P〈0．01）；（3）美满霉素干预组在缺血t0min再灌注6h、1、3、7d时沙鼠脑组织中PHF-1、58K-9表达趋势同缺血再灌注组，但3、7d组PHF-1阳性率明显低于缺血再灌注组，58K-9阳性率高于缺血再灌注组，相同时间点比较差异有显著性（P〈0.01）。结论（1）沙鼠脑缺血再灌注后脑组织PHF-1表达增高，提示Tau蛋白发生高度磷酸化改变；58K-9表达减少，提示高尔基体结构与功能的损坏；（2）美满霉素干预可使沙鼠脑缺血再灌注后脑组     

西比灵对沙鼠脑缺血后脑内转化生长因子βⅠ型、Ⅱ型受体基因表达的影响

目的　研究西比灵对沙鼠脑缺血再灌注后脑内转化生长因子 βⅠ型、Ⅱ型受体 (TβRⅠ、Ⅱ )基因表达的影响。方法　制作沙鼠脑缺血再灌注模型 ,实验前给沙鼠喂食西比灵。在缺血再灌注 6小时、1天、3天、7天 ,用原位杂交法检测脑内TβRⅠ、ⅡmRNAs的表达 ,并与其他各组比较。 结果　各组沙鼠脑组织的神经元和胶质细胞胞浆均有TβRⅠ、ⅡmRNAs阳性表达。西比灵治疗组中缺血再灌注 6小时、1天、3天TβRⅠ、ⅡmRNAs表达较脑缺血组稍高 ,但无明显差异 (P >0 0 5 ) ,7天时同脑缺血组相比TβRⅠmRNAs的表达下降(P <0 0 1) ,而TβRⅡmRNAs表达增高 (P <0 0 1)。 结论　西比灵能抑制缺血再灌注后TβRⅠmRNAs的过度表达 ,避免TβRⅠ和ⅡmRNAs表达比例失调 ,可能有利于转化生长因子 β(TGFβ)的信号传递 ,有利于抵御脑缺血再灌注造成的脑损伤     

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70影响

目的探讨缺血后处理(Postcond)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,以探讨其脑保护的机制。方法成年健康SD大鼠45只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,于灌注24h后断头留取大脑皮质组织,用免疫组化、Western blot检测HSP70蛋白的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HSP70mRNA表达水平。结果局灶性脑缺血再灌注24h后脑皮质内HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达增加(P0.05)。应用缺血后处理能显著地促进脑缺血再灌注后脑组织HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达(P0.05)。结论缺血后处理促进大鼠局灶性脑缺血再灌注皮质内HSP70的表达,这可能是其脑保护作用的部分机制。     

川芎嗪对大鼠前脑缺血再灌注后MMP-9的影响

目的观察大鼠前脑缺血再灌注后MMP-9的变化及川芎嗪对其表达的影响。方法用夹闭双侧颈总动脉30min的方法,制备缺血再灌注大鼠模型,应用明胶酶谱法(SDS-PAGE enzymograph)测各组脑组织不同时间点MMP-9的表达。结果假手术组各个时间段大鼠前脑组织少量表达MMP-9;缺血再灌注6h组大鼠脑组织即有MMP-9的表达,缺血再灌注24h组、48h组大鼠脑组织大量表达MMP-9;缺血再灌注3d、5d组大鼠脑组织亦可见MMP-9的表达,但较缺血再灌注24h、48h组相比MMP-9表达减少;除川芎嗪6h组不具统计学意义外,其它时间段川芎嗪治疗组与缺血再灌注组相比MMP-9含量均降低。结论脑缺血再灌注后MMP-9的表达可上调;川芎嗪对大鼠前脑缺血再灌注后对MMP-9的表达有干预作用。     

定量评估大鼠局灶性脑缺血再灌注后少突胶质细胞的病理学变化

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后少突胶质细胞的病理学改变.方法 应用改良插线法制作大鼠脑缺血再灌注模型.应用免疫组化方法检测大鼠tau-1蛋白的表达水平,以大鼠白质缺血区tau-1蛋白表达阳性的细胞体积定量少突胶质细胞的损伤,并分析其与神经元核周体损伤的关系.结果 模型组大鼠缺血侧皮质和尾壳核可见大量缺血坏死的神经元及tau-1蛋白表达,而正常对照组大鼠未出现缺血坏死的神经元及tau-1蛋白表达增加;模型组大鼠少突胶质细胞损伤体积和神经元核周体损伤体积呈正相关(r=0.895,P＜0.01).结论 少突胶质细胞易受局灶性缺血性损伤,通过检测tau-1蛋白的表达可定量显示少突胶质细胞的损伤程度,为白质损伤的研究提供评估标准.