同时检测HBeAg与抗-HBe的ELISA系统

HBeAg与抗-HBe的检测,对乙型病毒性肝炎病者的转归预测,以及对乙型肝炎病毒感染者传染性的估计,目前认为均有帮助。HBeAg阳性的HBsAg携带者的传染性强,当HBeAg阳性转变为抗-HBe阳性之后,传染性降低,并预示着HBsAg趋向于清除。琼脂免疫扩散法检测e系统是敏感度不高的第一代技术,不能准确反映血清中的e系统情况。RIA或ELISA技术,能对约90%的HBsAg阳性血清,鉴定属于HBeAg阳性或抗-HBe阳性。理想的RIA法,需要使用Bolton等~(125)I试剂标     

ELISA(双抗体夹心法)共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析

目的探讨用双抗体夹心法检测HBeAgEIA商品试剂盒共系统检测抗-HBe与HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒结合配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒中的中和试剂(HBeAg)等试剂组分共系统检测1000份随机血清(浆)标本抗-HBe与HBeAg,并分别以常规ELISA检测抗-HBe与HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测抗-HBe与HBeAg易于目测;它们的比色判定临界值同常规ELISA易于设定(或使用临界值血清,检测HBeAg时也使用抗-HBe阴性对照),与常规ELISA检测比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;抗-HBe优劣检验(ELISA共系统检测抗-HBe前两项COV与抗-HBe临界值血清)均为P>0.900,υ=1,a=0.05;HBeAg优劣检验依次为HBeAg临界值血清:(1)P>0.900,υ=1,a=0.05,抗-HBe阴性对照;(2)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,ELISA共系统检测HBeAgCOV;(3)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23)。结论用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒与配套中和(竞争)抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒试剂组分重组共系统检测抗-HBe与HBeAg是可行的,两种试剂盒能够相互替代,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA试剂盒其中之一,实用价廉,值得推广。     

免疫失败儿童乙肝病毒S基因“a”抗原决定簇序列分析

目的: 探讨乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败儿童病毒S基因"a"决定簇的变异情况.方法: 对30例经乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败后血清表面抗原(HBsAg)阳性的儿童,采用聚合酶链反应方法(PCR)扩增其血清中HBV DNA S基因区,并对PCR产物直接标记测序.结果: 30例HBsAg阳性儿童有28例血清HBV DNA阳性,其中有8例出现了S基因"a"决定簇的变异,变异率为28.6%,第126位的异亮氨酸(Ile)被苏氨酸(Thr)替代2例,第134位苯丙氨酸(Phe)被异亮氨酸替代2例,第145位甘氨酸(Gly)被丙氨酸(Ala)替代4例.结论: 乙肝疫苗联合高效价乙肝免疫球蛋白母婴阻断免疫失败儿童中存在S基因"a"抗原决定簇变异.     

应用酶联免疫吸附测定法检测HBeAg和抗-HBe

目前国内多采用免疫扩散法(ID)检测乙型肝炎e抗原(HBeAg)和e抗体(抗-HBe),该法敏感度很低。我们试用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测这一系统,取得较好效果。 材料与方法 (一)材料 待测血清:106份采自住院肝炎患者,其中63份 HBsAg阳性,标准HBeAg和抗-HBe:采自乙肝病人急性期和恢复期,经WHO药盒标化,阴性对照血清:采自正常人,经Abbott RIA药盒检查,高效价抗-HBe血清:采自献血员;HBsAg偶联Seeharose 4B柱:按文献1方法提纯的HBsAg,     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。     

乙型肝炎表面抗原亚型决定簇“a”单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究中用纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)“adr”免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合。以ELISA和RIA法检测抗体,获得9孔抗-HBs阳性的杂交瘤,经过5次有限稀释,建立4株单克隆细胞。选其中一株SH_1D_9杂交瘤细胞进行体外连续传代,接种小鼠腹腔,抗-HBs滴度在组织培养上清液中为1∶10,000,小鼠腹水为1∶50,000。经特异性、稳定性鉴定,证明其抗-HBs对HBsAg具有持续的和良好的亲和性,正常人血清无交叉反应,经亚型及Ig亚类鉴定为抗-HBs“a”亚型决定簇,IgG型单克隆抗体,杂交瘤细胞染色体平均为104个。本文并对HBsAg免疫Balb/c小鼠采取的不同方案及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的实验方法加以讨论。     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg／抗HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试刑检测HBeAg及抗-HBe，结果显示单克隆抗体(MgAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1：5000，比酶标法ELISA高1倍多，与RIA相当，且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变，1年内批间变异系数为5．8％，相同标本重复检测变异系数为5．94％，是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外，研究发现一孔一期法同时测HBeAg／抗-HBe时，无论标记抗体为单克隆或多克隆，其包被只能用单克隆抗体。     

抗牛胰岛素原单克隆抗体的某些特点

应用放射免疫分析法(RIA)研究了第二、三作者在丹麦制备的6种抗牛胰岛素原单克隆抗体(McAb)的某些特点。结果表明:①6种McAb的滴度及亲和力分别为0.5～6×10~5和2.6～8.5×10~8M~(-1),RIA的灵敏度在0.15～8.0ng之间;②其中5种可与牛胰岛素原C肽结合,但与牛胰岛素未见反应,提示其抗原决定簇均位于前者的部分;③另一种McAb(007)与两者均无反应,推测其抗原决定簇可能位于连接牛胰岛素和C肽的四个氨基酸的三维空间结构区.除007与猪胰岛素原有明显交叉反应外,其余的与人和猪胰岛素原均无交叉反应.上述抗体可用于牛胰岛素原的纯化、新的免疫鉴定法的建立及区分其种属来源等方面.     

乙型肝炎病毒“a”决定簇的变异对HBsAg定量的影响

目的为了明确乙型肝炎病毒"a"决定簇的变异对乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)定量的影响。方法收集广州血液中心无偿献血者的乙肝HBsAg阳性血清标本,共41例;采用时间分辨免疫荧光法对乙肝HBsAg进行定量,根据HBsAg定量结果将标本分为两组:低HBsAg组(0.05~100 IU/mL)和高HBsAg组(100 IU/mL);提取乙型肝炎病毒DNA,采用高灵敏度巢式PCR扩增病毒DNA的S区,对S区"a"决定簇氨基酸序列进行比对。结果 41例乙肝HBsAg阳性标本中,以B基因型为主,占75.6%;C基因型占24.4%;对HBV病毒S区"a"决定簇氨基酸置换位点和置换率进行分析,没有发现低HBsAg组(0.05~100 IU/mL)和高HBsAg组(100 IU/mL)存在特异性的氨基酸置换位点。低HBsAg组与高HBsAg组S区中"a"决定簇的氨基酸置换率相比差异无统计学意义(P0.05)。结论乙肝病毒"a"决定簇的变异并不是影响HBsAg定量的主要因素。     

乙醛脱氢酶2基因G1510A多态位点等位基因的克隆及应用

目的 克隆乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因G1510A多态位点(rs671位点)的野生型和突变型等位基因,为该位点的基因分型提供参照品.方法 分别以经测序证实的rs671位点野生型纯合子和突变型纯合子样品为模板,PCR扩增跨越该位点的DNA片断,采用胶回收试剂盒纯化PCR产物,T-A克隆构建重组质粒,PCR和测序验证重组质粒是否构建成功,PCR-RFLP法检验其应用效果.结果 PCR和测序均证实目的基因被成功克隆,将重组质粒用于PCR-RFLP法基因分型之中,能正确区分样品的基因型.结论 成功构建了rs671位点的野生型和突变型等位基因重组质粒,可用作该位点基因分型的参照品.     

重组Calpain蛋白诱导抗体产生及检测日本血吸虫感染的研究

目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)产生特征；同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原，粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗，肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后，产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体，免疫4周IgG类抗体达到高峰，与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1，IgG2a，IgG2b特异性抗体也显著上升；Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100％，粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高，EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低，与肝吸虫的交叉反应率为37％。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，能够敏感地测定日本血吸虫的感染，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

单克隆抗体酶联免疫吸附测定甲胎蛋白方法的建立

应用二种抗甲胎蛋白(AFP)不同抗原决定簇的单克隆抗体分别与纤维素及酶结合,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法。应用这种方法测定18例人血清标本,结果与放射酶免疫测定比较,二者趋于一致。此外,本文对单克隆抗体的ELISA与抗血清的RIA进行了比较与讨论。     

两孔一步法同时检测HBsAg与抗-HBs的ELISA技术

以一步夹心法检测HBsAg的ELISA技术为基础,结合中和试验原理,提出了两孔一步法同时检测HBsAg与抗-HBs的ELISA技术。对已知RIA法为HBsAg阳性血清108份、抗-HBs阳性且S/N>10的血清395份、HBsAg与抗-HBs均阴性的血清167份,用本法检测,结果符合RIA法的分别为106份(符合率98.14％),385份(97.46％)和158份(94.61％),对乙肝疫苗免疫前的各类健康人血清424份及经乙肝疫苗三针免疫后1—2个月的血清359份,用本法及RIA法平行测试HBsAg与抗-HBs,结果两法总的符合率分别为89.39％(379份)87.30％(282份)。     

干扰素α2b联合迈普新治疗慢性乙型肝炎的临床疗效分析

目的:了解干扰素α2b和迈普新(胸腺肽α1)联合治疗的临床疗效。方法:68例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组。治疗组34例,同时使用干扰素α2b及迈普新26周,随后单用干扰素α2b26周;对照组34例,单用干扰素52周。疗程中定期检测谷丙转氨酶(ALT)、HBeAg、抗-HBe、HBVDNA、透明质酸酶(HA)。结果:全部患者完成1年治疗。治疗组ALT、HBVDNA、HA下降幅度、HBeAg/抗-HBe血清转换率明显高于对照组(分别为52.1%和24.9%,P=0.04;46.1%和9.4%,P=0.03;62.1%和27.6%,P=0.03;55.6%和27.9%,P=0.04)。结论:干扰素α2b联合迈普新治疗慢性乙型肝炎ALT、HBVDNA、HA下降幅度、HBeAg/抗-HBe血清转换率疗效优于单用干扰素α2b。     

慢性乙型肝炎免疫清除期患者HBsAg基因多态性研究

目的探讨慢性乙型肝炎免疫清除期患者乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）基因多态性。以寻找与乙型肝炎病毒免疫清除相关的变异位点。方法回顾性分析我院2008年2月~2011年12月感染性疾病科门诊及住院的慢性乙型肝炎免疫清除期患者10例,并设计特异性引物,于10例患者血清中扩增S基因片段,TA克隆法克隆到T载体中,随机选择克隆测序。结果共20个克隆被测序,20个克隆S蛋白发现12个不同位点的32次变异。主要集中在T细胞表位,B细胞表位及a决定簇。结论慢性乙型肝炎免疫清除期患者存在HBsAg变异,可能仍然存在HBsAg免疫耐受。     

酶免疫法检测乙型肝炎e抗原

1972年 Magnius 用琼脂双向扩散法(ID)从 HBsAg 阳性血清中发现 HBeAg 后,各国多采用这种方法检测 HBeAg 和抗-HBe。1977年国外陆续报道用血凝法、酶免疫法和放射免疫法检测。我们于1976年和1980年先后建立了检测 HBeAg 和抗-HBe 的 ID法及检测 HBeAg 的反向间接血凝法(RPHA),并在此基础上建立酶免疫法(EIA),现介绍如下:     

ELISA（双抗体夹心法）共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析

目的探讨用双抗体夹心法检测HBeAgEIA商品试剂盒共系统检测抗-HBe与HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒结合配套中和（竞争）抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒中的中和试剂（HBeAg）等试剂组分共系统检测1000份随机血清（浆）标本抗-HBe与HBeAg,并分别以常规ELISA检测抗-HBe与HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测抗-HBe与HBeAg易于目测;它们的比色判定临界值同常规ELISA易于设定（或使用临界值血清,检测HBeAg时也使用抗-HBe阴性对照）,与常规ELISA检测比色判定无显著性差异（配对计数资料比较的χ2检验：相关检验均为P〈0.005,υ=1,a=0.05;抗-HBe优劣检验（ELISA共系统检测抗-HBe前两项COV与抗-HBe临界值血清）均为P〉0.900,υ=1,a=0.05;HBeAg优劣检验依次为HBeAg临界值血清：（1）P〉0.900,υ=1,a=0.05,抗-HBe阴性对照;（2）0.100〉P〉0.050,υ=1,a=0.05,ELISA共系统检测HBeAgCOV;（3）0.100〉P〉0.050,υ=1,a=0.05,但χ^21〈χ^22〈χ^23）。结论用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒与配套中和（竞争）抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒试剂组分重组共系统检测抗-HBe与HBeAg是可行的,两种试剂盒能够相互替代,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA试剂盒其中之一,实用价廉,值得推广。     

甲醛化FDP对其对流免疫电泳灵敏度影响的初步观察

<正> 正常人血清中几乎没有纤维蛋白(原)降解产物(FDP),但在纤溶系统亢进时才有大量的FDP出现。这些FDP具有与纤维蛋白(原)相同的抗原决定簇。因而同样可与抗人纤维蛋白(原)血清产生沉淀反应。基于上述原理,可采用对流免疫电泳法对被检标本中FDP作定性和定量检查。本文采用对流免疫     

酶免疫竞争一步法和两步法检测抗-HBe的结果比较

目的比较酶免疫竞争一步法和两步法检测抗-HBe的结果。方法对一步法HBeAg和抗-HBe结果同时阳性的45份血清标本,再用两步法进行检测,比较2种方法的结果。结果一步法HBeAg和抗-HBe结果同时阳性的45份血清标本,两步法检测抗-HBe结果仅有21份阳性,差异有统计学意义。结论对于一步法HBeAg和抗-HBe结果同时阳性的血清标本,应该用两步法复检,确保检验结果准确。     

兔抗人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X抗血清的制备纯化及免疫性质探讨

以纯化的人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X(简称人LDH-X)为抗原免疫家免,制备了兔抗人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X抗血清(简称人LDH-X抗体)。用辛酸法纯化该抗体。以双扩及免疫电泳鉴定,均呈现单一沉淀线。经免疫交叉反应试验证明人LDH-X与人LDH_(1-5)同工酶有不同的免疫决定簇;纯化的人LDH-K抗体只与人睾丸匀浆、人精液呈现单一沉淀线,而与鼠睾丸LDH-X、兔及牛睾丸匀浆均无交叉反应。从而显示纯化的人LDH-X抗体具有较强的种属特异性。