苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖及乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖和乙酰肝素酶基因表达的影响。方法不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HO-8910PM增殖情况;免疫细胞化学方法和原位杂交方法检测苏拉明作用前后HO-8910PM乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达变化。结果MTT结果显示50、100、200、300、400、500、600μg/ml浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率(GI)分别是13.1%、22.6%、35.1%、43.7%、54.3%、64.8%、70.9%(P0.01),不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义(P0.01)。对照组比较苏拉明作用48h后,HO-8910PM细胞乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖;同时下调乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达;提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

紫花牡荆素体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:探讨紫花牡荆素(casticin)体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的效应及其机制。方法:MTT法检测casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制;Hoechest33258染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测casticin处理HO-8910细胞的凋亡率;Western blotting分析caspase-3、CyclinB1、p21蛋白表达变化。结果:casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。经casticin作用48h后HO-8910细胞表现出典型的凋亡形态特征,并剂量依赖性地增加亚二倍峰,降低CyclinB1蛋白表达,增高caspase-3和p21表达。结论:casticin通过降低CyclinB1表达、活化p21和caspase-3抑制HO-8910细胞增殖并诱导凋亡。     

透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系中表达及其与紫杉醇敏感性的关系

目的探讨透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中的表达和定位及其与紫杉醇敏感性之间的关系。方法 2007年2月至2008年12月在哈尔滨医科大学附属三院研究所应用荧光定量RT-PCR技术和免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微镜分别检测人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中HABP1 mRNA和蛋白的表达以及其在细胞中的定位,MTT法分析各卵巢癌细胞系对紫杉醇的敏感性。结果 HABP1 mRNA在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达水平分别是OVCA420的3.7、2.8和2.1倍(P值均<0.05),HO-8910LM和OVCA420中HABP1 mRNA的表达水平无统计学差异(P值>0.05),激光共聚焦显示5种人卵巢癌细胞系中HABP1蛋白的表达变化趋势与mRNA水平基本一致,其中SKOV3、OVCA429和HO-8910PM细胞系中HABP1蛋白在细胞核周的表达量明显高于OVCA420和HO-8910LM。MTT分析显示,SKOV3、OVCA429、OVCA420、HO-8910PM和HO-8910LM细胞对紫杉醇的中效浓度分别是:0.047μmol/L、0.221μmol/L、0.723μmol/L、0.092μmol/L和0.672μmol/L,相关分析显示HABP1 mRNA表达水平与卵巢癌细胞对紫杉醇的中效浓度之间的相关系数为-0.888,P<0.05。结论 HABP1的表达与卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性呈显著正相关,其机制可能是由于其在细胞中的分布位置不同所致,HABP1可作为筛选卵巢癌化疗药物的指标之一。     

卵巢上皮性癌细胞转移相关蛋白的比较蛋白组学分析

目的筛选卵巢上皮性癌（卵巢癌）转移相关蛋白,进一步探讨卵巢癌的转移机制。方法以卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卯巢癌细胞系HO-8910PM为研究对象,采用比较蛋白组学的研究技术（双向电泳、质谱分析）,筛选两个细胞系中差异表达的蛋白质。结果高转移细胞系HO-8910PM与卵巢癌细胞系HO-8910比较,共出现了21个差异表达蛋白质点,其中16个蛋白质点表达上调,5个蛋白质点表达下调。21个差异表达蛋白质点有17个被鉴定,并分为7大类,即锌指蛋白、钙结合蛋白、DNA修复及合成蛋白、细胞调节蛋白、细胞代谢相关蛋白、细胞信号和传导蛋白及细胞表面抗原。结论卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的蛋白质表达存在明显差异。     

双氢青蒿素对卵巢上皮性癌发展和转移的影响

目的：研究双氢青蒿素（DHA）对体外培养的卵巢上皮性癌高度转移细胞株HO-8910pm黏附、侵袭能力以及体内生长的影响,并探讨其相关分子作用机制。方法：用不同浓度DHA处理HO-8910pm,采用基质胶贴壁黏附法检测DHA对癌细胞体外黏附能力的影响;用跨膜小室模型和划痕实验检测DHA对癌细胞侵袭和迁徙能力的影响。用裸鼠的HO-8910pm原位接种卵巢癌模型,检测DHA对卵巢癌侵袭和转移的影响。Western blot法检测DHA对癌细胞聚焦黏附激酶（FAK）磷酸化、MMP-2和MMP-9的体外影响。结果：（1）DHA作用于HO-8910pm细胞后,细胞增殖能力显著抑制,体外黏附和侵袭能力显著下降;（2）体内实验中,DHA可显著抑制卵巢癌腹膜转移;HO-8910pm细胞p-FAK和MMP-2蛋白水平降低,但MMP-9蛋白水平无显著降低。结论：DHA对卵巢上皮性癌细胞的增殖、黏附、侵袭能力及肿瘤转移有-定的抑制作用,其具体机制可能与抑制p-FAK、MMP.2表达水平有关。     

选择复制性腺病毒M4对卵巢癌细胞系OV2008的体外治疗作用及初步机制探讨

目的:研究选择复制性腺病毒M4对卵巢癌细胞系OV2008的体外治疗作用并初步探讨其机制。方法:选择复制性腺病毒M4感染卵巢癌细胞系OV2008后,MTT法检测M4对OV2008细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测M4对OV2008细胞凋亡的影响;PI法检测M4对OV2008细胞周期的影响,W estern blot法检测感染M4后STAT3蛋白以及其下游靶蛋白表达的改变。结果:选择复制性腺病毒M4能明显抑制OV2008细胞的增殖(P<0.05),并且能促进OV2008细胞的凋亡(P<0.05),PI法检测发现M4可以引起细胞G2-M期阻滞。W estern blot检测发现感染M4后STAT3蛋白及其靶蛋白survivin,Cyclin D1,Bcl-xl,p-STAT3的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:M4在体外对卵巢癌细胞系OV2008有非常好的治疗效果,其机制可能是因为M4能封闭卵巢癌细胞系中的STAT3基因,从而进一步促使p-STAT3蛋白以及其下游靶蛋白survivin,Bcl-xl,Cyclin D1等的表达降低,最终导致OV2008细胞的凋亡。     

黏附分子CD146对Vorinostat诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响

目的:探讨黏附分子CD146对组蛋白去乙酰化酶抑制剂Vorinostat诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响。方法:通过实时聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹(western blotting)法检测卵巢癌细胞A2780和SKOV3中CD146在组蛋白去乙酰化酶抑制剂Vorinostat作用下的变化情况。通过流式细胞仪(FACS)及细胞克隆形成实验检测CD146单克隆抗体AA98对Vorinostat诱导卵巢癌细胞凋亡和抑制克隆形成的影响,金氏公式法分析联合用药效果。通过Western blotting法比较Vorinostat单药及AA98与Vorinostat联用对卵巢癌细胞中蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/m TOR)信号通路及下游分子的影响。结果:在卵巢癌细胞中黏附分子CD146在Vorinostat作用下被显著性诱导表达,高表达的CD146可能与卵巢癌化疗敏感性有关。CD146单克隆抗体AA98与Vorinostat联用显著增加了卵巢癌细胞的凋亡率,降低了细胞克隆形成能力,差异有统计学意义(P0.05)。金氏公式计算表明两药具有协同效应。AA98可明显降低Vorinostat引起的AKT/m TOR通路活化作用,降低卵巢癌细胞中磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4E-BP1)及磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-S6K1)的蛋白表达水平(P0.05)。结论:Vorinostat使CD146显著上调,从而降低了卵巢癌化疗敏感性,CD146单抗可能通过逆转和抑制Vorinostat引起的AKT/m TOR通路活化作用,Vorinostat联合CD146单抗对卵巢癌细胞具有明显的协同杀伤效力。     

微小RNA-7抑制人卵巢癌细胞株增殖及侵袭能力的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)对低转移人卵巢癌细胞株HO-8910、高转移人卵巢癌细胞株HO-8910pm增殖及侵袭转移能力的影响。方法:检测两种细胞株的miR-7表达情况,构建miR-7质粒,通过lipofectmin 2000瞬时转染miR-7低表达的细胞株,通过实时PCR检测转染前后细胞株miR-7以及EGFR mRNA表达情况,Western blot法检测EGFR蛋白表达。细胞划痕实验、transwell实验检测细胞体外迁移及侵袭能力;CCK-8检测增殖能力变化。结果:HO-8910细胞miR-7表达为HO-8910pm的(2.517±0.508)倍;转染后HO-8910pm的miR-7表达提高了(8.015±0.1805)倍,同时抑制EGFRmRNA及蛋白表达,抑制侵袭、迁移、增殖能力(P<0.05);而miR-7表达相对高的HO-8910体外迁移、侵袭及增殖能力均低于HO-8910pm。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制HO-8910、HO-8910pm的增殖及侵袭转移能力,miR-7可能为临床治疗卵巢癌提供新靶标。     

RNAi沉默CD147基因对卵巢癌细胞HO-8910pm生物学行为的影响

目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNA i)技术,利用构建的稳定转染CD147 shRNA表达质粒载体的HO-8910pm/pGE-1 CD147shRNA细胞株观察卵巢癌细胞系HO-8910pm CD147基因的沉默作用及生物学效应。方法:用免疫细胞化学法、激光共聚焦检测HO-8910pm细胞CD147的表达;MTT法绘制细胞生长曲线,观察裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的成瘤性。结果:pGE-1CD147shRNA转染人卵巢癌细胞系后,CD147的表达受到高效且特异的抑制,细胞侵袭力减弱,荷瘤裸鼠成瘤力下降,抑瘤率达58.8%(P<0.01)。结论:RNA i沉默CD147基因可影响卵巢癌的侵袭和成瘤,有可能成为治疗卵巢癌的新途径。     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。     

树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫的实验研究

目的 观察人外周血树突状细胞(Dendritic cells,DC),体外能否诱导抗卵巢癌免疫应答。方法 用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)从健康女性外周血分化诱导DC,以源于人卵巢癌细胞系HO-8910的肿瘤抗原粗提物冲击致敏DC,将致敏DC、同源淋巴细胞和卵巢癌细胞共育,观察负载抗原DC体外诱导淋巴细胞对HO-8910细胞的杀伤作用,同时设不同类型肿瘤细胞(Eca-109和PC-12)作为对照。MTT法测定细胞杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞HO-8910肿瘤抗原脉冲致敏的DC能诱导淋巴细胞特异性地杀伤卵巢癌细胞。结论 用GM-CSF、IL-4和TNF-α从人外周血诱生的DC能从卵巢癌细胞HO-8910冻融物有效递呈抗原并诱导出高效而特异的抗卵巢癌免疫反应。     

喜树碱药物NSC606985抗卵巢癌细胞活性及其机制的研究

目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20～400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。     

siRNA干扰Id1表达对卵巢癌化疗耐药性的影响

目的:利用siRNA技术降低细胞分化抑制因子(Id1)在卵巢癌细胞SKOV3、HO-8910中蛋白水平的表达,并探讨其对化疗耐药性的影响.方法:利用Id1-siRNA干扰Id1 RNA水平的表达,采用蛋白印迹实验检测卵巢癌细胞SKOV3、HO-8910中Id1蛋白水平的表达;转染siRNA后,实验细胞的培养液中加入顺铂,部分复孔在加入顺铂的同时各自加入细胞化学通路抑制剂BHA、Sp600125、Necrostain、z-VAD-fmk,培养48小时后分别利用MTT、LDH检测细胞的生存率、死亡率.结果:①卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910中均有Id1蛋白水平的表达.②Id1 -siRNA组中Id1蛋白水平的表达比空白对照组、阴性对照组中的表达明显降低.③Id1 -siRNA组细胞死亡率明显低于空白对照组、阴性对照组.④z-VAD-fmk组细胞死亡率明显低于顺铂组,其余各组无明显变化.结论:Id1 -siRNA干扰Id1 RNA水平的表达,降低Id1蛋白水平的表达,通过调节下游的凋亡通路,能有效降低卵巢癌细胞株对顺铂的耐药性.     

醋酸甲羟孕酮和蛋白酶体抑制剂对卵巢癌细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)和蛋白酶体抑制剂(MG132)对不同孕激素受体(PR)表达卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8法检测MPA、MG132单独作用后HO-8910和SKOV3细胞的增殖情况,筛选出合适的药物作用浓度和作用时间。将细胞分为对照组、MPA组、MG132组、MPA+MG132组,采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;倒置显微镜下观察形态学变化;免疫组化检测PR表达;Western blot检测PR-A、PR-B表达。结果:MPA对HO-8910细胞的增殖抑制作用明显强于SKOV3细胞,而MG132对两种细胞的作用相似。联合用药时,MG132可增强MPA对SKOV3细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并且伴随着明显的形态学改变,而在HO-8910细胞中不存在此作用。免疫组化及Western blot结果显示,与对照组相比,MG13、MG132+MPA组PR、PR-A和PR-B表达均提升(P<0.05)。结论:MG132可增强MPA对SKOV3细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,这可能与PR、PR-A和PR-B表达增加有关。     

微小RNA-7调控EGFR抑制上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)调控人上皮性卵巢癌(EOC)细胞上皮间质转化,抑制肿瘤侵袭转移的作用及机制。方法:选取EOC细胞株HO-8910pm、ES-2,用li-pofectmin 2000体外瞬时转染miR-7质粒,分别通过实时PCR和Western blot检测转染前后细胞株miR-7及EGFR蛋白表达情况;Western blot法检测转染前后细胞株上皮标记β-catenin、间质标记Vimentin及EGFR下游信号通路AKT、ERK蛋白磷酸化水平;实时PCR检测转染前后EMT相关转录因子Snail、Slug、ZEB1、ZEB2的表达。Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测转染前后细胞体外侵袭能力。结果:转染miR-7质粒后,HO-8910pm细胞miR-7的表达水平提高了(8.015±0.181)倍,ES-2细胞miR-7表达提高了(28.03±1.253)倍;EGFR蛋白表达均显著下降;转染后细胞的侵袭能力显著下降,HO-8910pm与ES-2的侵袭抑制率分别为62.33%、71.32%;转染后两种细胞的β-catenin蛋白表达均升高,而Vimentin蛋白表达降低;转录因子Snail、Slug的表达较未转染前显著降低(P<0.05),转染前后ZEB1、ZEB2无显著差异;转染后细胞p-AKT,p-ERK1/2表达均下降。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制其下游AKT和ERK1/2信号通路的活化以及逆转EMT,从而抑制EOC细胞的侵袭转移能力。     

卵巢癌细胞侵袭转移相关转录因子表达分析

目的:分析并比较卵巢癌细胞中与肿瘤转移、侵袭相关的转录因子。方法:采用细胞划痕及小室跨膜实验比较卵巢癌细胞HO-8910及其高转移株HO-8910PM的转移侵袭能力差异;采用高通量转录因子活性检测芯片(DNA/蛋白结合芯片)分析并比较两种细胞中转录因子的活化情况,明确与肿瘤侵袭、转移相关表达的转录因子;用转录因子酶联免疫活性分析方法验证芯片检测结果。结果:细胞划痕实验及侵袭实验表明HO-8910PM比HO-8910细胞转移侵袭能力强,在345个转录因子中共筛选出与肿瘤侵袭、转移相关的31个表达差异转录因子。HO-8910PM细胞与HO-8910细胞相比,表达上调的有13种,下调的有18种。v-Maf仅表达于HO-8910PM,HLF仅表达于HO-8910。结论:v-Maf、HLF等31种转录因子可能参与了卵巢癌侵袭转移的相关机制。     

血小板活化因子促进卵巢癌细胞增殖相关机制初步研究

目的:探讨血小板活化因子(PAF)对卵巢癌细胞增殖的影响及其相关机制。方法:用不同浓度PAF及阻断剂作用于浆液性卵巢癌细胞株OVCA 429及黏液性卵巢癌细胞株RMUG-L,MTT法测定细胞增殖情况,Western blot法测定EGFR、Src、FAK、Paxillin及相应磷酸化蛋白表达。免疫共沉淀(Co-IP)测定PAFR与EGFR的相互作用。结果:PAF促进PAFR阳性卵巢癌细胞株OVCA 429细胞增殖,可被各种PAFR阻断剂阻断,诱导PAFR阳性细胞EGFR磷酸化,而对PAFR阴性细胞株无这一作用。PAF作用后未能检测到PAFR与EGFR直接相互作用。PAF可诱导下游Src、FAK及Paxillin蛋白的磷酸化。结论:PAF促进PAFR阳性卵巢癌细胞增殖是受体依赖的。PAFR激活后可同时激活EGFR,导致关键蛋白Src磷酸化,后者进而活化FAK与Paxillin,进一步激活下游蛋白,从而促进细胞增殖。     

榄香烯增加人卵巢癌和宫颈癌细胞对紫杉醇反应性的研究

目的:研究榄香烯(Ele)增加人卵巢癌和宫颈癌细胞对紫杉醇(PTX)的反应性,探讨Ele联合紫杉醇化疗的潜在临床价值。方法:用MTT法分别测定Ele和PTX单独作用,以及用EleIC10浓度联合PTX作用HO-8910卵巢癌细胞和HeLa宫颈癌细胞的生长抑制作用,并用IC50值及敏感指数(SI)作出评价。结果:Ele和PTX单独作用HO-8910和HeLa细胞的生长抑制作用均呈浓度依赖性,Ele/HO-8910和Ele/HeLa的IC50值分别为149.26±15.25μmol/L和214.41±17.21μmol/L;PTX/HO-8910和PTX/HeLa的IC50值分别为39.68±7.16μmol/L和100μmol/L;Ele和PTX对HeLa细胞的细胞毒作用均显著低于对HO-8910细胞(P0.01);EleIC50+PTX/HO-8910和EleIC50+PTX/HeLa的IC50值分别为33.06±1.98μmol/L和52.75±4.20μmol/L,SI分别为0.83和0.53,与PTX单用比较,EleIC50+PTX增加了PTX对HO-8910和HeLa细胞的细胞毒作用(P0.05,P0.01),而且对HeLa细胞的作用更显著。结论:低剂量Ele可诱导HO-8910和HeLa细胞对PTX的反应性和显著增加PTX的细胞毒作用,尤其对紫杉醇极不敏感的He-La细胞具有较高的选择性。     

抵抗素促进子宫内膜癌细胞生长作用机制的探讨

目的:研究抵抗素对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其对子宫内膜癌细胞PI3K/Akt信号传导通路的作用。方法:CCK-8法检测不同浓度抵抗素(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml)对Ishikawa和KLE两种子宫内膜癌细胞系增殖的影响。Western blot法检测不同浓度抵抗素作用下PI3K/Akt信号通路的变化及PI3K/Akt信号通路抑制剂对抵抗素活化PI3K/Akt信号通路作用的影响。结果:抵抗素能促进两种子宫内膜癌细胞系Ishikawa和KLE的生长,并呈时间和浓度依赖性。抵抗素可促进两种子宫内膜癌细胞系中PI3K/Akt信号通路的激活。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY29004可减弱抵抗素诱导的Akt磷酸化水平。结论:抵抗素能促进子宫内膜癌细胞增殖,这种作用可通过激活PI3K/Akt信号通路来实现。     

Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及意义

目的:检测Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达,探讨其在卵巢癌发生和发展中的作用及意义。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞系(OVCAR8,OVCAR5,OVCAR4,OVCAR3,SKOV3,OV2008,C13,A2780S和A2780CP)中Dyrk1B蛋白表达,以及Dyrk1B抑制剂AZ191对卵巢癌细胞Dyrk1B蛋白表达的影响。MTT比色法和流式细胞术检测AZ191对卵巢癌细胞增殖能力和细胞凋亡的影响。选取我院近7年收治的上皮性卵巢癌患者119例,免疫组化SP法检测Dyrk1B蛋白在卵巢癌组织中的表达。结果:Dyrk1B蛋白在多种卵巢癌细胞系中普遍表达,AZ191可明显降低其在卵巢癌细胞中的表达;AZ191对各种卵巢癌细胞系的增殖能力均产生浓度依赖性的抑制作用(P0.05),并可诱发细胞凋亡,其凋亡率均随抑制剂浓度的增加而增高;Dyrk1B在卵巢癌组织中亦呈高表达,表达率为90.8%。结论:Dyrk1B在上皮性卵巢癌组织和细胞中均有表达,Dyrk1B抑制剂AZ191下调卵巢癌细胞Dyrk1B蛋白表达的同时,明显抑制细胞的增殖和诱发细胞凋亡。提示Dyrk1B可能在卵巢癌的发生和发展中起关键作用,有望成为临床分子靶向治疗卵巢癌的新靶点。