3种培养基中芽囊原虫生长状况观察

目的观察芽囊原虫在不同培养基中的生长状况,筛选合适的芽囊原虫培养方法。方法将10份芽囊原虫阳性粪便分别接种至Jone’s液、vitro液、1640 3种培养基中培养,选取生长情况良好、虫密度高的一份粪便传代培养后等量接种至3种不同的培养基中,每24 h计数虫体数量一次,连续观察10 d,并观察芽囊原虫的形态学变化和生长情况。结果10份粪便分别接种至3种培养基中培养,48 h后发现1640和Jone’s液中的虫密度高于vitro液。同一份粪便接种至3种不同培养基中连续观察10 d,结果表明3种培养基中虫体生长呈规律变化,均在接种后3、6、9 d出现生长高峰;Jone’s液中芽囊原虫密度最高。vitro液中观察到的虫体形态最清晰,且富有活力;Jone’s液中能观察到虫体多种繁殖状态。结论Jone’s液适于芽囊原虫的生长繁殖,可作为首选培养基;vitro液可作为观察芽囊原虫生长情况的首选培养基。     

3种培养基体外培养人芽囊原虫的效果观察

目的　观察人芽囊原虫在 3种培养基中的生长繁殖情况 ,以探讨最佳的培养方法。　方法　从大学生粪便中分离人芽囊原虫 ,转种至 3种不同培养基 ,定时观察人芽囊原虫的生长繁殖情况 ,根据原虫密度评价培养效果。　结果培养 96h后 ,Locke’s鸡蛋血清 (LES)双相培养基中的人芽囊原虫密度最高 ,改良Jones单相液体培养基次之 ,Locke’s琼脂血清 (LAS)双相培养基原虫密度最低 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;观察 3种培养基中的原虫密度高峰持续时间分别为 3 60h、96h和 72h ,最长存活时间分别为 5 5 2h、3 3 6h和 168h。　结论　Locke’s鸡蛋血清双相培养基较适用于人芽囊原虫体外增殖培养。     

人芽囊原虫体外纯培养法的改良及形态观察

以琼脂取代蛋白对传统的洛克氏液-鸡蛋-血清(Locke’s egg serum,LES)双相培养基进行改良,联合采用LES双相培养基、改良LES双相培养基(m LES双相培养基)、IMDM液相培养基和IMDM固相培养基建立人芽囊原虫的体外纯培养的标准流程,并观察虫体在不同培养基中的形态特征和生长情况。结果显示,人芽囊原虫在4种培养基中均以空泡型和颗粒型的形态为主,培养后镜下未见细菌生长。在mLES双相培养基中的生长速度最快,培养后第2天原虫数为3.09×10~6,达到中对数期。原虫在LES双相培养基、mLES双相培养基和IMDM液相培养基中的生长对数期的分裂时间分别为(49.72±1.35)、(24.16±2.53)和(36.3±1.5)h。提示联合采用LES双相培养基、mLES双相培养基、IMDM液相培养基和IMDM固相培养基可建立人芽囊原虫的无菌纯培养体系。     

阴道毛滴虫在两种培养基中的生长与形态观察

目的 通过对改良肝浸汤培养液及RPMI1640培养基内阴道毛滴虫生长情况的观察,选择适合教学和科研的培养基。 方法 用临床分离的阴道毛滴虫标本,分别接种至改良肝浸液及RPMI1640两种培养基内进行培养,pH值为5.6~5.8,通过计数了解生长情况并观察阴道毛滴虫的形态。 结果 肝浸汤培养液中培养48 h,阴道毛滴虫达到生长高峰,虫体呈现出多分裂相,虫体变大、呈圆形,内含4~12个细胞核,细胞膜外缘可见数丛鞭毛。RPMI1640培养基中阴道毛滴虫72 h达到生长高峰,虫体密度约为肝浸液高峰期的2／3,未见多分裂现象,虫体与生理盐水涂片中阴道毛滴虫形态、大小相近。 结论 改良的肝浸液培养基适于阴道毛滴虫的药物试验及其他实验项目的研究,RPMI1640培养基更适用于教学、标本的制作及实验室保种工作。     

人芽囊原虫在199单相培养基中的体外培养

目的观察199单相培养基对人芽囊原虫(Blastocystishominis)的体外培养情况。方法采用199单相培养基对B.hominis进行体外连续培养,比较不同pH值、血清种类及接种量等条件下虫体生长繁殖情况及影响因素。结果B.hominis在199培养基中最适培养条件为:10%~20%小牛、人或马血清;接种量不小于1×105原虫/管;青、链霉素于37℃条件下厌氧培养;pH为7.0、7.5及8.0时,B.hominis繁殖高峰分别为第4、8天,第3、6、9天和第2、4、7、9天。结论使用199单相培养基可以对B.hominis进行体外长期培养。     

mLES法培养人芽囊原虫的实验观察

目的建立一种简便、灵敏的可用于人芽囊原虫(Blastocystis hominis,Bh)感染诊断实验室方法。方法比较改良洛氏-鸡蛋-血清双相培养法(modified Locke-egg serum medium culture method,mLES培养法)与碘液直接涂片法对Bh的检出率;比较普通洛氏-鸡蛋-血清双相培养基(Locke-egg serum medium culture method,LES培养法)与mLES培养法中Bh形态、最低检出限、生长曲线及厌氧条件形成时间。结果检查397份临床粪便标本,mLES培养法Bh阳性率为5.54%(22/397),碘染法阳性率为1.01%(4/397),差异有统计学意义(P0.01)。中央空泡型是Bh存在两种培养基中的主要形态。mLES培养法48hBh最低检出限(10~2/5ml)优于LES培养法(10~3/5ml),重复测量方差分析表明组内Bh密度在不同时间点有差异、时间与分组交互作用及培养基种类的差异有统计学意义(P0.05);除了第6d,其余各时间点两种培养基中人芽囊原虫生长密度差异均有统计学意义(P0.05),mLES培养法前3dBh密度高于LES培养法。mLES培养法先于普通培养基达到厌氧环境。结论 mLES培养法简便、灵敏,可用于诊断Bh的体外培养检查。     

人芽囊原虫的形态观察及致病性研究

为探讨人芽囊原虫的形态及其致病性,采用３０°斜面鸡蛋培养基对人芽囊原虫进行体外培养,在光学显微镜和扫描电镜下观察其形态和致病性。在形态观察中可见空泡型、阿米巴型和颗粒型 ３ 种形态,并证实有出芽生殖和颗粒形虫体增殖现象。以不同数量培养４８ ｈ 的圆形空泡型虫体感染小白鼠观察其致病性。结果显示, Ｄ 组（空白对照组）和 Ａ 组（感染数为 １０４ ／只）在肠粘膜上未发现虫体; Ｂ组（感染数为２０４ ／只）和 Ｃ组（感染数为 ３０４ ／只）在肠粘膜上发现虫体并能够致肠粘膜损伤,提示对肠粘膜损伤的轻重程度与人芽囊原虫感染数量有关。     

中药牛至油、鸦胆子对人芽囊原虫的体外杀灭作用

目的通过观察牛至油、鸦胆子对人芽囊原虫的体外杀灭作用,筛选治疗人芽囊原虫感染有效药物及浓度。方法从腹泻患者新鲜粪便中分离人芽囊原虫,分别用含牛至油和鸦胆子1640培养基培养,药物设200、400、800、1600、3200和6400μg/ml组。于加药24h和72h作虫体计数,评价药物效果,试验设甲硝唑药物对照组和不加药空白对照组。结果牛至油1600、3200μg/ml作用72h、6400μg/ml作用24h,虫体全部死亡,最适杀虫体浓度为800μg/ml;鸦胆子6400μg/ml24h虫体全部死亡,最适杀虫浓度为1600～3200μg/ml;甲硝唑40μg/ml72h、≥80μg/ml24h虫体全部死亡。结论牛至油和鸦胆子具有体外杀灭人芽囊原虫作用。且牛至油的杀虫效果强于鸦胆子。     

班氏丝虫和马来丝虫感染期幼虫体外培养的进一步研究

在4种培养系统中,马来丝虫Ⅲ期幼虫在改良RPMI1640、20%小牛血清和人胚肾细胞系为饲养层的培养系统中生长发育良好,可以从Ⅲ期幼虫蜕皮2次发育到童虫,最长存活时间为54d。在单纯改良RPMI1640、TC199和20％小牛血清中培养,从Ⅲ期幼虫发育到童虫的最长存活时间为42d。班氏丝虫Ⅲ期幼虫在上述2种培养系统中,分别存活57和36d,从Ⅲ期幼虫蜕皮进入Ⅳ期幼虫和童虫。对马来丝虫幼虫体外培养蜕皮时间、虫体大小与沙鼠体内发育情况进行了比较。     

利什曼原虫前鞭毛体体外生长动力学研究

目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在体外培养条件下的生长增殖情况，确定其最适体外培养条件。方法分别使用RPMI1640和M199复合培养液，观察温度、pH及新生小牛血清对硕大利什曼原虫、热带利什曼原虫、婴儿利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、杜氏利什曼原虫前鞭毛体体外增殖速度与增殖周期的影响。结果当培养温度为26℃时，杜氏利什曼原虫前鞭毛体在含和不含新生小牛血清、pH中性、偏碱和偏酸的PMI1640或M199复合培养基中，早期均能生长，且生长周期相对较长，其他种株利什曼原虫前鞭毛体在无血清或偏碱培养基中生长缓慢，增殖周期缩短；培养温度为37℃时，各种株利什曼原虫前鞭毛体均发生沉积，增殖停滞，不同程度地向无鞭毛体转化并发生死亡。结论使用复合培养液培养利什曼原虫前鞭毛体，温度、pH和新生小牛血清均可显著影响增殖速度和生长周期。各种株利什曼原虫前鞭毛体在相同培养条件下增殖速度和生长周期存在差异，可能与其遗传背景不同有关。     

两种培养基对病原性耶尔森氏菌检测的效果观察

目的 观察VYE和IN培养基检查病原性Yersinia(耶尔森氏菌)属菌的作用效果。方法 通过VYE和IN培养基培养后挑选可疑菌落进行生化鉴定实验，鉴别病原性Yersinis属菌。结果 VYE培养基检出率比IN培养基高，二并用于病原性Yersinia属菌很容易与非病原性Yersinia属菌区别。结论 VYE和IN两种培养基并用，方法简便易行，建议推广应用。     

钩端螺旋体EMJH培养基实验室应用

目的 探索柯氏培养基和EMJH培养基在培养钩端螺旋体菌的差异及在钩体病防治上应用价值。方法 观察2种培养基在15群15型钩体培养菌培养过程形态、数量、自凝现象等差异,并对健康人临床疑似钩体病人和暴发流行钩体病人血清进行 MAT试验抗体检测。结果 EMJH培养基接种钩体后第2 d就大量生长繁殖,而柯氏培养基1周后才达繁殖高峰,钩体MAT试验也显示EMJH培养基培养的钩体菌敏感性较柯氏培养基培养菌高。结论 EMJH培养基可用于快速分离钩体,有利于早期确定钩体病的流行和实验室研究。     

土拉杆菌无血培养基的研究

本文报告了土拉杆菌无血培养基。通过该培养基质量的初步试验证明,对土拉杆菌的变异、抗原性、凝集原性均无影响。培养基中葡萄糖含量在1％时产菌浓度最高。细菌活存率与卵黄培养基无区别。该培养基适用于土拉杆菌的培养和菌苗生产。     

Formation of buckminsterfullerene (C60) in interstellar space

Buckminsterfullerene (C(60)) was recently confirmed as the largest molecule identified in space. However, it remains unclear how and where this molecule is formed. It is generally believed that C(60) is formed from the buildup of small carbonaceous compounds in the hot and dense envelopes of evolved stars. Analyzing infrared observations, obtained by Spitzer and Herschel, we found that C(60) is efficiently formed in the tenuous and cold environment of an interstellar cloud illuminated by strong ultraviolet (UV) radiation fields. This implies that another formation pathway, efficient at low densities, must exist. Based on recent laboratory and theoretical studies, we argue that polycyclic aromatic hydrocarbons are converted into graphene, and subsequently C(60), under UV irradiation from massive stars. This shows that alternative--top-down--routes are key to understanding the organic inventory in space.     

一种新的空肠弯曲菌培养基的研究

空肠弯曲菌(空弯菌)在FBPCA和Skirrow培养基上,经42℃24和48小时及37和42℃48小时培养,FBPCA上的菌落数接近,均高于Skirrow培养基。100份鸡粪标本42℃24与48小时的检出率,FBPCA无显著性差异(P>0.05),但均显著地高于Skirrow培养基(P<0.005,P<0.05)。 结果提示FBPCA优于Skirrow培养基,可在42℃24小时及37℃48小时分离空弯菌,空弯菌生长较快,菌落大,数量多,且制备简易、价廉。     

4种检测解脲支原体单管培养基的比较试验观察

本文对四种培养基稳定性和特异性进行了系统的比较分析,同时将四种培养基用于检测临床标本中的ＵＵ比较,福建三强公司生产的“ＵＵＳＭ”单管培养基的稳定性和特展异性均优于其它单管培养基。８０份临床标本的ＵＵ检测中可见“ＵＵＳＭ”阳性率最高,而污染率为０％,基本解决了抑制标本中污染细菌这一难题,而其它的三种试剂均存在着一些缺点。而“ＵＵＳＭ”单管培养基抑制菌力强,污染率低,稳定性、特异性、敏感性均较高,值得临床推广应用。     

利用7H12B液体培养基快速鉴别人型和牛型结核分支杆菌

应用含ＴＣＨ１μｇ／ｍｌ的７Ｈ１２Ｂ培养基检测人型和牛型参比株各１株，１３种常见非结核分支杆菌参比株各１株，临床标本检出的１５６株结核分支杆菌，１２株非结核分支杆菌。结果与含ＴＣＨ５μｇ／ｍｌ的罗琼氏培养基鉴定结果完全一致，且所需时间明显缩短，仅需２～４天。     

钩端螺旋体C-70培养基的研制

本文报道C-70培养基对四个型的钩端螺旋体菌种的培养与检定。所培养的菌种,形态正常,运动活泼。以1％种子量(菌液浓度10亿/ml)接种时,培养7天,即能达到生长高峰期。生长浓度比原4·1培养基提高4.5～11.6倍(由原来1.5～2亿/ml提高到10亿/ml左右)。反向炭凝试验测定钩体抗原效价也高出4～64倍(由原来1:128～256++提高到1:1024～8196++)。制成菌苗后,物理性状良好,安全试验符合钩体菌苗制检规程合格标准,抗原经30倍稀释(含菌0.33亿/ml)作保护力试验,免疫动物100％保护。     

钩端螺旋体复方明胶培养基的研制

本文报道了钩端螺旋体(以下简称钩体)生长速度快、浓度高的一种新型综合培养基;该培养基制备方法简便,可经反复高压蒸汽灭菌,保存期长。所试验的钩体菌株包括标准株(56601、56605、56608)、地方株(波摩那群:罗株、澳洲群上34株)和水生林(Patoc Ⅰ株),培养5至7天可达生长高峰;钩体在该培养基中经过三年的传代培养,未发现抗原性变异。     

Robust cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells via temporal modulation of canonical Wnt signaling

Human pluripotent stem cells (hPSCs) offer the potential to generate large numbers of functional cardiomyocytes from clonal and patient-specific cell sources. Here we show that temporal modulation of Wnt signaling is both essential and sufficient for efficient cardiac induction in hPSCs under defined, growth factor-free conditions. shRNA knockdown of β-catenin during the initial stage of hPSC differentiation fully blocked cardiomyocyte specification, whereas glycogen synthase kinase 3 inhibition at this point enhanced cardiomyocyte generation. Furthermore, sequential treatment of hPSCs with glycogen synthase kinase 3 inhibitors followed by inducible expression of β-catenin shRNA or chemical inhibitors of Wnt signaling produced a high yield of virtually (up to 98%) pure functional human cardiomyocytes from multiple hPSC lines. The robust ability to generate functional cardiomyocytes under defined, growth factor-free conditions solely by genetic or chemically mediated manipulation of a single developmental pathway should facilitate scalable production of cardiac cells suitable for research and regenerative applications.