国产蛇毒激活血浆蛋白C的研究

目的:从9种国产蛇毒中筛选具有激活血浆蛋白C作用的蛇毒。方法:运用活化部分凝血活酶时间(APTT)和发色底物实验分别观察抗凝活性和酰胺酶活性,综合抗凝活性和酰胺酶活性确定蛋白C蛇毒激活作用。结果:在9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及蝮蛇毒在1.5mg/L浓度下即使人血浆纯蛋白C产生酰胺酶活性,并使APTT显著延长。结论:9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及蝮蛇毒具有激活人体血浆蛋白C成为活化蛋白C(APC)的作用。     

逆流免疫电泳法检测蛇毒

蛇毒是一种潜在的新战剂。建立一种快速、灵敏度高的分析方法具有一定的现实意义。用逆流免疫电泳法对白眉蝮蛇毒、黑眉蝮蛇毒、五步蛇毒进行了半定量分析,检定范围前两种在0.048-1.5μg,后者在0.024-1.5μg。做区分鉴别试验,在0.15-1.5μg范围内,能区分蝮蛇毒、五步蛇毒,竹叶青蛇毒和烙铁头蛇毒,但不能将黑、白眉腹蛇毒区分开。     

抗蛇毒毒素研究应用进展

抗蛇毒毒素(指从超免动物血清中提取的IgG及F(ab)_2,我国惯称抗蛇毒血清<下同>)。研究历史悠久,但制备成效价高、反应小、效果好的抗蛇毒毒索还是近二十多年的事。目前抗蛇毒毒素生产一般采用胃酶消化加盐析法提取,质量标准除特异效价外,其它项目同抗毒素标准。蛇伤治疗在我国长期以来采用传统的中草药,自70年代研制出抗蛇毒血清后,治疗蛇伤病人前进了一大步,WHO对研制蛇毒毒素和抗蛇毒毒素国际标准品比较重视,已选择了一些国家的原材料在协作标化,以下分几方面介绍。 1 国内外情况     

蝎毒和蛇毒对小鼠骨髓细胞增殖的作用研究

目的对比观察蝎毒、蛇毒对小鼠骨髓细胞增殖的影响.方法健康昆明种小鼠70只,随机分为5组:①空白对照组;②蝎毒低剂量组;③蝎毒高剂量组;④蛇毒低剂量组;⑤蛇毒高剂量组.小鼠腹腔注射,每天1次,连续给药5d.每组分别在24h、8d、15d取4只小鼠股骨骨髓进行骨髓象检查分析及骨髓有核细胞计数.结果高剂量蛇毒后,骨髓有核细胞数明显增多(p<0.01),蝎毒高剂量组比蛇毒高剂量组增多更显著(p<0.01);两低剂量组有核细胞数明显增多(p<0.05).注射蝎毒和蛇毒后均可使小鼠骨髓有核细胞中单个核细胞比例先增高后下降,而分叶核细胞比例随之升高,但蝎毒的作用更明显.结论蝎毒、蛇毒均具有促进骨髓细胞增殖、分化和成熟的作用,蝎毒的促进作用更明显.     

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶的研究 Ⅱ.酶学性质与生物毒性

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶具有乙酰胆碱酯酶的特征,有以下几点事实:1.乙酰胆碱酯是酶的最适底物;2.过量底物抑制酶活性;3.BW_(62)C_(47)、BW_(284)C_(51)是典型的真性胆碱酯酶抑制剂,对蛇毒胆碱酯酶也同样具有抑制作用。     

血小板聚集抑制剂TMVA减少异种移植急性血管性排斥反应时血栓的形成

目的：在大鼠体内观察烙铁头蛇毒血小板聚集素TMVA对异种移植急性血管性排斥反应（AVR）时血栓形成的影响。方法：采用仓鼠到大鼠心脏移植模型，观察空白对照组及TMVA实验组中移植物存活时间，病理检查及移植心组织内TXB₂及6-keto-PGF_1α含量。结果：移植物存活时间未见明显延长；TMVA实验组排斥病理表现较轻，血栓形成明显减少，移植组织内TXB₂及6-keto-PGF_1α含量两组未见明显差异。结论：TMVA能明显减少发生AVR时异种移植物血管内血栓的形成，但不能延长移植物的存活时间。     

蝎毒和蛇毒对小鼠骨髓细胞增殖的作用研究

目的　对比观察蝎毒、蛇毒对小鼠骨髓细胞增殖的影响 .方法　健康昆明种小鼠 70只 ,随机分为 5组 :①空白对照组 ;②蝎毒低剂量组 ;③蝎毒高剂量组 ;④蛇毒低剂量组 ;⑤蛇毒高剂量组 .小鼠腹腔注射 ,每天 1次 ,连续给药 5d .每组分别在 2 4h、8d、15d取 4只小鼠股骨骨髓进行骨髓象检查分析及骨髓有核细胞计数 .结果　高剂量蛇毒后 ,骨髓有核细胞数明显增多 (p <0 .0 1) ,蝎毒高剂量组比蛇毒高剂量组增多更显著 (p <0 .0 1) ;两低剂量组有核细胞数明显增多 (p <0 .0 5 ) .注射蝎毒和蛇毒后均可使小鼠骨髓有核细胞中单个核细胞比例先增高后下降 ,而分叶核细胞比例随之升高 ,但蝎毒的作用更明显 .结论　蝎毒、蛇毒均具有促进骨髓细胞增殖、分化和成熟的作用 ,蝎毒的促进作用更明显     

精制蛇毒酶对大鼠缺血后肢比目鱼肌的影响及作用机制

目的研究精制蛇毒酶对大鼠不同时段缺血后肢比目鱼肌的影响及机制。方法成年Wistar大鼠150只,显微外科技术制作大鼠后肢缺血模型,随机分为空白对照组、缺血组及精制蛇毒酶治疗组。空白组仅切开皮肤后缝合;缺血组从术后1d开始按1.2ml/kg体重于大腿肌肉分四点等量注射生理盐水,每周3次,共计2w;治疗组于大腿肌肉分四点等量注射精制蛇毒酶(1mg/ml,1.2ml/kg体重)每周3次,治疗2w;分别于术后第3d、7d、14d、21d和28d采取缺血后肢及对侧的比目鱼肌。测定各组肌肉组织含水量、线粒体游离钙浓度和线粒体通透性转运通道开放程度(用吸光度变化ΔS表示)的动态变化。结果比目鱼肌含水程度在缺血1w内升高,随后下降,精制蛇毒酶治疗组比目鱼肌含水程度在造模术21、28d后显著高于缺血组(P<0.05)。在术后第14、21d,精制蛇毒酶治疗组线粒体游离钙浓度显著低于缺血组(P<0.05);精制蛇毒酶治疗组MPTP开放程度ΔS值在第14、21、28d均显著高于缺血组(P<0.05)。结论精制蛇毒酶能维持大鼠缺血后肢比目鱼肌含水量,降低缺血腓肠肌内线粒体游离钙浓度,抑制MPTP的开放程度。     

交叉免疫电泳法鉴定蛇毒的研究

本文用交叉免疫电泳法对五种蛇毒进行区分鉴别的研究,利用各种蛇毒所得的电泳图,它们的峰形、峰数目、峰位置及各峰间相对高度比的差异进行不同蛇毒的区分鉴别。本法比较直观,特征性强,可作为标准图谱,鉴别未知蛇毒样品。     

抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的研制及初步应用

目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫扩散测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用Lowry氏法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定相对分子质量 (Mr)及鉴定抗体纯度。结果　母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0d后抗体效价超过 1∶10 0 0 0 0 ,卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97.5mg。动物体外中和试验表明 ,特异性IgY能有效中和眼镜王蛇毒 ,阻止眼镜王蛇毒对小白鼠的攻击。结论　研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其他抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制     

双价抗蛇毒IgY灌胃对眼镜蛇、蝰蛇伤小鼠的保护作用

目的： 比较双价抗蛇毒鸡卵黄抗体(IgY) 经腹腔注射或灌胃对蝰蛇、眼镜蛇伤小鼠保护作用的差异,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法：2种单一抗原按顺序依次交替注入单只鸡体内,水稀释法制备双价抗蛇毒IgY;间接ELISA法观察双价抗蛇毒IgY在体外及其灌胃后小鼠血浆中的效价,通过胃排空试验确定灌胃给药的最佳时间,在此基础上,比较双价抗蛇毒IgY腹腔注射或灌胃对蛇伤小鼠的保护作用。结果：初次免疫后28 d至第42 d,以水稀释法提取的双价抗蛇毒IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1∶12 800和1∶6 400。不同浓度的双价抗蛇毒IgY灌胃2.5-3.5 h,小鼠的胃排空率均达68.9％以上,血浆中抗体浓度亦相应达高峰。该抗体腹腔注射或提前灌胃均能极显著延长眼镜蛇和蝰蛇毒中毒小鼠的存活时间（P<0.01）,同等剂量的双价抗蛇毒IgY提高眼镜蛇伤小鼠存活率优于蝰蛇伤,而灌胃有效剂量约为腹腔注射的10倍。结论：双价抗蛇毒IgY经2种给药途径（注射、口服）均能有效保护动物免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击。     

蛇毒C型凝集素家族结构及抗原表位预测

目的:预测和设计蛇毒C型凝集素家族蛋白(CLPs)共同B细胞抗原表位肽。方法:利用expasy蛋白质数据库在线软件Align对CLPs进行序列比对。运用DNAstar和Antheprot软件对蛇毒CLP家族的二级结构和表面特性,如亲水性、表面可及性、免疫原性、柔韧性等,综合各结果预测其抗原表位。采用Swiss-model和SEPPA在线工具进行三维结构和空间表位预测。结果:蛇毒CLP家族存在多个潜在的抗原表位位点,其中46～58区和98～110区肽段为可能的B细胞表位区。结论:综合考虑以上2个肽段家族同源性和表面特征,确定N端附近的46KTWADAEKFCTEQ58为蛇毒CLP可能的共同抗原区。     

蛇毒凝集素的若干研究进展

动物凝集素的研究近年来发展很快,蛇毒凝集索的研究更是近10年的事情,本文从以下几方面介绍已发现的各种蛇毒凝集素的研究进展:蛇毒凝集素的发现、分离纯化方法和部分理化性质、活性测定、糖结合专—性、免疫学性质、一级结构特点。     

变异银环蛇的蛇毒及DNA分析研究

目的比较变异与正常银环蛇蛇毒及DNA的差异,为进一步研究银环蛇在自然界的生存、进化、分类,提供分子生物学的研究基础.方法①利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛇毒蛋白的组分;②利用随机引物扩增(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)的方法对1例变异银环蛇和10例华南常见银环蛇的DNA进行扩增.结果 SDS-PAGE结果发现变异银环蛇毒的蛋白组分与正常银环蛇基本相同,但在43KD大小的一条蛋白带含量明显减少;RAPD扩增的DNA条带有明显差异.结论①变异银环蛇的蛇毒蛋白组分含量发生改变;②该变异银环蛇与正常银环蛇DNA差异显著.     

眼镜王蛇毒单克隆抗体的制备

目的:应用眼镜王蛇毒基因疫苗,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体(mAb).方法:应用眼镜王蛇Oh-3基因真核表达质粒pIRES-Oh3,佐以脂质体制成基因疫苗,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同源Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,制备mAb.结果:获得了2株分泌抗眼镜王蛇毒mAb的杂交瘤细胞株(F5、 F11),细胞培养上清液的抗体效价分别为3.2×10-1、 6.4×10-1,腹水抗体效价分别为1.28×10-4、 2.56×10-4.结论:成功地制备了2株眼镜王蛇毒mAb.     

朝鲜求售蛇毒

朝鲜求售蛇毒朝鲜昌城贸易公司现有蛇毒出售，欲购者请直接与该公司联系和洽商。这家公司的产品为分布于朝鲜中部和北部山区的蝮蛇蛇毒，对关节炎和神经痛具有特效。公司地址：朝鲜民主主义人民共和国平壤市中区公司电话：８５０－２－３８１－４８５６传真：８５０－２－...     

双价抗蛇毒鸡卵黄抗体制备与生物活性研究

目的 通过双价抗蛇毒鸡卵黄抗体(bivalent anti-snake venom immunoglobulin yolk,双价IgY)的制备及其相关特性研究,为多价抗蛇毒IgY的制备和应用奠定基础.方法 两种单一抗原(舟山眼镜蛇、圆斑蝰泰国亚种)按顺序依次交替注入单只鸡体内,水稀释法制备双价IgY;测定双价IgY效价(间接ELISA法)、交叉免疫特性(双向免疫扩散试验)及对溶膜活性(溶膜试验)、半数致死量(LD50)的中和作用.结果 初次免疫后第28-42天,以水稀释法提取的双价IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1:12 800和1:6400.双价IgY与眼镜蛇亚科、蝰业科6种蛇毒有明显的交叉免疫反应,而与蝮亚科4种蛇毒的交叉免疫反应不明显.双价IgY能显著降低眼镜蛇、蝰蛇毒对鸡卵黄膜的溶膜作用,也能显著延长眼镜蛇和蝰蛇伤小鼠的存活时间(P<0.05),同等剂量的双价lgY提高眼镜蛇伤存活率优于蝰蛇伤.结论 双价IgY能够显著中和眼镜蛇、蝰蛇毒的溶膜和致死活性,能有效保护机体免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击.     

凝血因子X激活剂效价测定方法的建立及验证

正蛇毒中含有多种能够影响哺乳动物凝血系统的酶类,这些酶类与凝血机制级联放大反应中的各个凝血因子之间有比较严格的专一性作用,其中凝血因子X激活剂(coagulation factor X activator,FXA)是一种能够直接作用于凝血因子X(coagulation factor X,FX)的具有蛋白水解酶特性的酶类,在蝰亚科、蝮亚科、眼镜蛇科等蛇毒中分布广泛~([1])。人体正常的血液系统处于促凝-抗凝之间的动态平     

眼镜蛇伤大鼠多项指标动态变化与抗蛇毒血清的时效关系

目的: 观察蛇伤后大鼠生化血气分析及病理等动态变化,探讨其与抗蛇毒血清使用时效性的关系,为优化眼镜蛇伤的临床治疗方案提供实验依据。方法: SD大鼠注入2-4 LD₅₀舟山眼镜蛇毒造模,于注毒后不同时段(20-140 min)分别进行血液生化、血气分析、肌组织病理等检测及注入抗眼镜蛇毒血清(40-120 min,血清/蛇毒:125 kU/g)对上述指标的影响。结果: 大鼠注入4 LD₅₀蛇毒20 min后二氧化碳总量(TCO₂)、剩余碱(BE)及酸碱度(pH)逐渐下降;而心酶、肝酶及胆红素明显上升,于60及120 min各出现1个峰值,与0 min相比有显著差异(P<0.05);心肌、骨骼肌于40 min时点出现广泛浊肿变性、凝固性坏死及炎症细胞浸润。注入2 LD₅₀蛇毒动物的心酶、肝酶及胆红素指标变化趋势与4 LD₅₀剂量组相似,但其峰值出现时间相对延迟且峰值较低。在心酶出现第1个峰值前施予抗血清,蛇伤大鼠的保护率可达60%以上;但第2个峰值后施予抗血清的疗效不显著。结论: 眼镜蛇伤后的心酶、肝酶等相关指标呈双峰变化规律,第2个峰值前为使用抗血清的有效时段。     

改善血液流变性的药物疗法

众 所周知 ,高粘血症可引起微循环障碍 ,要改除微循环障碍 ,改善血液的流变性是一种重要的途径。血液是非流顿流体 ,因此在疾病时 ,血液中的诸多因素 ,可引起血液流变性异常 ,本文从药物的作用与分类等方面 ,结合血液流变学的检测指标 ,针对性地提出了具体改善血液流变性的药物疗法 ,供临床参考。1　改善血液流变性的药物归类1.1　降低红细胞聚集性亚临床肝素、多种蛇毒制剂、蛇毒清栓酶、链激酶、尿激酶、蚓激酶 (博洛克 )、低分子右旋糖酐、藻酸双酯钠、α 二氢麦角隐停。1.2　降低纤维蛋白原蛇毒素、蛇毒凝血酶、蝮蛇抗栓酶、链激酶、尿…