双抗体夹心ELISA测定血清促红细胞生成素

建立了一种灵敏的测定血清促红细胞生成素（ＥＰＯ）的ＥＬＩＳＡ夹心法。该法应用于人重组促红细胞生成素免疫家兔获得的，并经亲和层析纯化的多克隆抗ＥＰＯ，与各种血液组份和细胞因子无交叉反应性。     

促红细胞生成素ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

[目的]建立一种检测血清促红细胞生成素（EPO）的双抗体夹心ELISA方法,建立试剂盒,并且对其临床检测方法学进行研究。[方法]EPO抗体包被96孔板,以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。[结果]最佳包被抗体浓度为1：600,最佳抗原工作浓度为1：100,酶标抗体工作浓度为1：5000。标准曲线的回归方程为Y=0．017x＋0．3002,相关系数r=0．9710。灵敏度为0．46mU／ml,高低浓度样品平均回收率分别为106．74％、104．78％,批内变异为3．04％～7．96％,批间变异则为1．38％～12．92％。[结论]该方法建立了一种定量检测EPO的ELISA试验,敏感性、特异性、准确度均良好,提供了临床上快速、准确、方便检测EPO的工具。     

EIAgen铁蛋白酶免检测试剂盒(双抗体夹心法)

规格90人份 一、用途 EIAgen铁蛋白试剂盒是采用固相酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测人体血清和血浆中铁蛋白浓度的试剂.     

测定人红细胞嘧啶5′核苷酸酶含量的双抗体夹心ELISA方法

为了进一步探讨嘧啶5′核苷酸酶(P5′N)缺乏症的发病机制,我们利用P5'N的特异性底物尿苷一磷酸(UMP)作为配基,制备尿苷一磷酸-己二酰肼-琼脂糖4B(UMP-ADH-Sepharose 4B)亲和层析柱,结合硫酸铵分级分离和沉淀、离子层析及亲和层析等方法提纯人红细胞P5′N.将所得P5′N免疫家兔,获得兔抗人抗体.以兔抗人P5′N抗体为包被抗体,辣根过氧化物酶(HRP)-兔抗人P5′N抗体为显示抗体,经方阵法、抗原阻断试验及抗原替代试验后,建立定量测定人红细胞的P5'N双抗体夹心酶联免疫吸附实验.实验结果显示,所得兔抗人红细胞P5′N抗体效价为14,所建双抗体夹心ELISA法灵敏度为5 ng/ml,其阻断率大于95%,而取代率小于30%.同时,测定正常人红细胞P5′N含量为(71.77±10.98)ng/mg NHP.该法特异性强,敏感性高,可检测最低含量为5-20 ng/ml的P5'N含量,在临床上能适应大样本测定.     

EIAgen乙型肝炎表面抗原酶免检测试剂盒(双抗体夹心法)

规格90人份 一、用途 EIAgen第3代酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎表面抗原HBsAg试剂盒用于定性检测人血清和血浆中HBsAg,可用于血液样本的筛查和乙型肝炎病毒(HBV)感染患者的随访.仅作为体外诊断之用.     

ELISA双抗原夹心法与TRUS法检测梅毒抗体的比较

梅毒是由梅毒螺旋体 ( Treponema Pallidum,TP)感染引起的性传播性疾病 ,可侵犯全身多种器官 ,产生多种症状和体征 ,危害程度极高。梅毒可通过性传播、胎盘传播 ,也可经血液传播 ,因此 ,做好血液的梅毒安全性检查 ,提高梅毒的检出率对于控制梅毒蔓延极为重要。本站应用 EL ISA双抗原夹心法试剂作为血液梅毒抗体的检测试剂 ,使检出率作者单位 :32 30 0 0　浙江省丽水市中心血站大为提高 ,现以 TPHA确诊试剂为参考 ,将 ELISA双抗原夹心法试剂与 TRUST法试剂检测梅毒及非梅毒血清标本的结果报告如下。材料与方法1　材料1 .1　试剂 :E…     

双抗体夹心ELISA检测人胎儿血红蛋白体系的建立

目的建立一种定量检测人胎儿血红蛋白(HbF)的双抗体夹心ELISA方法。方法用抗人HbF单抗作为捕获抗体,加入待测抗原,检测抗体为兔抗人HbF多克隆抗体,最后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG。结果本检测体系灵敏度约为0.039μg/ml,测量范围0.039-24.66μg/ml,特异性强,重复性好,100份血标本的检测结果与高效液相色谱法结果符合率高。结论建立了一种可用于检测人外周血HbF的双抗体夹心ELISA方法,有望为临床上诊断某些与HbF有关的疾病提供帮助。     

抗BSA多克隆抗体和单克隆抗体筛选及双抗体夹心ELISA法的建立与验证

目的建立高灵敏度检测生物制品中牛血清白蛋白（BSA）残留量的双抗体夹心ELISA法并验证。方法筛选高亲和力、高纯度的抗BSA单克隆抗体作为包被抗体,高纯度、高效价、特异性高的兔抗BSA多克隆抗体为酶标抗体,采用双抗体夹心ELISA法,以系列含量的BSA标准品作为标准,制作标准曲线,对样品中所含BSA进行定量检测;并对该方法各项指标进行验证。结果优化确定了ELISA试验条件,回归曲线相关系数r≥0．99;对BSA最低检测限为1．25ng／ml;准确性试验回收率为90％-106％;精密性变异系数为6．1％～8．4％;与豚鼠、小鼠、兔、鸡血清均无交叉反应。结论该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好。方法可靠,易于操作,适用于生物制品的BSA残留量定量检测。     

ELISA双抗体夹心法检测尿中游离轻链及初步临床应用

游离轻链能自由通过肾小球基底膜，在肾小管被重吸收回血循环，正常人尿中仅有极少量轻链。多发性骨髓瘤、肾功能不全、肾炎、糖尿病及肝硬化等疾病时，尿中游离轻链含量均有不同程序升高，故尿轻链检测对上述疾病的诊断，尤其是糖尿病肾病的早期辅助诊断有较大的临床意义［１］。１材料和方法１．１标本来源待测标本均来自本院确诊的住院病人及体检正常的健康人，并于－２０℃低温保存。１．２试剂及仪器兔抗人游离ｋ，λ轻链抗体购自Ｂａｃｋｍａｎ公司，酶标记的抗体购自Ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ ＳｉｔｅＬｉｍｉｔｅｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ。…     

检测IL—6的ELISA试剂盒的研制

建立了检测白细胞介素６（ＩＬ－６）的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法。通过初步应用,检测血清和培养上清,结果表明,该方法特异性强,敏感度高,重复性好,可用于临床检验及基础医学研究。     

狂犬病毒核蛋白抗原ELISA定量法的建立及初步验证

目的建立检测狂犬病疫苗各工序产品中核蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA法。方法以兔抗狂犬病毒多抗为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的抗狂犬病毒核蛋白单抗作为酶标记抗体,对狂犬病毒核蛋白抗原含量进行定量测定,并对该方法进行初步验证。结果此方法线性相关系数大于0.97;最佳线性范围为0.000625～0.01IU/ml,定量限度为0.000625IU/ml;准确性为102%～109%;变异系数(CV)为7.2%～9.4%;与小牛血清、牛血清清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、流感疫苗纯化液、乙脑疫苗纯化液、甲肝疫苗纯化液等均无交叉反应。结论该方法特异性强,灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好,可用于狂犬病疫苗各工序产品中核蛋白抗原的定量检测。     

ELISA检测新生儿脐带血S100B蛋白

目的了解新生儿S100B蛋白水平.方法用双抗体夹心ELISA法检测了45名正常足月新生儿脐带血S100蛋白含量.结果正常足月新生儿脐血S100B为1.19±0.16 μg/L,参考范围0.88～1.50μg/L,男女性别无显著性差异.结论新生儿脐血S100B与脑成熟有关.     

血管性血友病因子前肽双抗体夹心法检测及临床应用

目的建立血浆血管性假血友病因子前肽(vWFpp)的测定方法,并检测152例健康体检者及36例冠心病患者和38例同龄正常对照组的血浆vWFpp水平。方法采用酶联免疫吸附分析(ELISA)双抗体夹心法对152例体检者和36例冠心病患者血浆vWFpp进行测定。结果152例体检者vWFpp水平为496.44±167.24μg/L。50～60岁年龄组vWFpp显著高于40岁以下年龄组(P<0.01)。男女间vWFpp水平差异无统计学意义(P>0.05)。男51～60岁年龄组与16～20,21～30,31～40岁的3个年龄组vWFpp水平差异都具有显著的统计学意义(P<0.05);152份体检者血浆样品vWFpp水平与年龄的相关性分析显示,vWFpp水平与年龄呈显著的正相关关系(r=0.444,P=0.000)。冠心病组vWFpp水平为1051.6±331.9μg/L,与同年龄段对照组vWFpp水平485.2±119.4μg/L比较具有显著性差异(P<0.001)。结论该法测定血浆vWFpp具有特异、快速、灵敏的优点,具有良好的临床应用前景。     

A组轮状病毒VP7基因表达及ELISA检测的方法研究

目的纯化原核系统中表达的A组轮状病毒VP7基因,建立间接ELISA方法,为进一步大量表达VP7基因,构建基因工程疫苗和建立快速临床检测奠定基础。方法反转录并扩增VP7基因,连接到载体中,转换乳酸杆菌,诱导并纯化重组蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备抗血清,并建立间接ELISA方法。结果成功获得VP7基因的扩增片段,筛选阳性克隆,得到大小为28 kD的大量表达蛋白。确定了间接ELISA法的最佳反应条件和工作浓度。结论构建的重组乳酸杆菌能够大量表达VP7蛋白,纯化的VP7蛋白有很好的免疫原性,制备的抗血清用于ELISA方法能够得到准确的检测结果。     

缺血性脑卒中患者血清红细胞生成素与同型半胱氨酸水平改变及其意义

目的：探讨首发缺血性脑卒中患者血清同型半胱氨酸（Hcy）、红细胞生成素（EPO）水平的变化及其临床意义。方法检测120例首发缺血性脑卒中患者血清 Hcy和 EPO水平,并与120例同期门诊健康体检者的检测结果进行比较,应用 Logistic回归分析及Pearson相关分析判断血清 Hcy和 EPO水平与首发缺血性脑卒中的关系,ROC曲线分析 Hcy和EPO的临床性能。结果缺血性脑卒中血清 Hcy和 EPO含量分别为23.1±12.6μmol/L和32.4±11.2 mIU/L;对照组含量分别为10.4±2.8μmol/L和17.6±5.2 mIU/L;观察组含量明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）;Pearson相关分析显示缺血性脑卒中患者血清中 EPO与 Hcy水平明显正相关（r＝0.427,P＜0.05）,Logistic回归分析显示,缺血性脑卒中与血清 Hcy含量正相关（P＜0.05）,与 EPO不相关（P＞0.05）。结论血清 Hcy,EPO水平升高与缺血性脑卒中发病相关,并且 Hcy为缺血性脑卒中发生的危险因素。     

白念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要：目的：建立检测白念珠菌烯醇化酶（enolase, Eno）的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。 方法：将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建立检测Eno的ELISA法,对方法的精密度、特异性、最低检测限等指标进行评价。用该法检测白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母等不同真菌培养上清中Eno水平。 结果：Eno浓度为20 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间变异系数(CV)分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%;最低检测限为1.25 ng/mL。本法可从白念珠菌37 ℃培养24 h后的上清中检出Eno,Eno含量与白念珠菌菌丝含量呈正相关。本法对近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。 结论：建立的检测白念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA方法有较好的特异性,可用于评价Eno检测在侵袭性白念珠菌感染中的诊断价值。     

人组织激肽释放酶6双抗夹心ELISA方法的建立及临床初步应用

目的通过制备的人组织型激肽释放酶6(hK6)单克隆抗体(mAb),建立双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,并用于胃癌诊断。方法采用该实验室保存的hK6重组蛋白,免疫BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术制备特异性的mAb,经鉴定纯化、酶标记后,建立双抗夹心ELISA方法,检测胃癌患者血清中hK6水平,并联合检测血清中的癌胚抗原(CEA)水平,探讨hK6作为胃癌生物标记的可行性。结果成功建立了检测血清中hK6的双抗夹心ELISA方法,并确定该方法包被抗体的最适浓度为5μg/mL,酶标记抗体的最佳稀释比例为1∶2 000。该方法检测各组血清中的hK6水平,与胃溃疡组hK6水平[(3.59±1.02)ng/mL]和健康体检组hK6水平[(3.35±0.67)ng/mL]比较,胃癌组hK6水平[(5.78±1.66)ng/mL]明显高于其他两组,差异有统计学意义(P0.05);而胃溃疡组与健康体检组hK6水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。胃癌患者hK6和CEA检测的阳性率分别为69.70%和45.46%,两者联合检测的阳性率为78.79%。结论成功建立了hK6双抗夹心ELISA检测方法;hK6是较好的胃癌血清肿瘤标记物,同时检测hK6与CEA可提高胃癌的检出率,减少漏诊的发生,有助于胃癌的诊断。     

双抗体夹心ELISA法检测嗜酸性粒细胞阳离子蛋白

目的 制备嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)双抗体夹心ELISA法检测试剂盒.方法 葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗ECP单克隆抗体,过碘酸钠法进行抗ECP多克隆抗体HRP标记,制备ELISA试剂盒,进行条件优化和实验效能评价,检测过敏性皮肤病患者ECP水平.结果...     

ELISA中和(竞争)抑制法检测HBeAb试剂盒共系统检测HBeAg结果分析

目的 探讨用中和(竞争)抑制法检测HBeAb EIA[(预包被纯化乙肝e抗体(HBeAb]商品试剂盒共系统检测乙肝e抗原(HBeAg)的可行性及结果判定方法.方法 用中和(竞争)抑制法检测HBeAbELISA试剂盒共系统检测1000份随机血清(浆)标本HBeAb与HBeAg,并与常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒检测HBeAg作平行对照.结果 ELISA共系统检测HBeAg,其阳性检测孔显色较HBeAg阴性参比对照孔明显加深,甚至比HBeAb阴性对照孔还深(或明显加深),易于目测;其比色判定临界值(COV)易于设定(或使用.HBeAg临界值血清或HBeAb阴性对照),与常规ELISA检测HBeAg比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的x2检验:相关检验均为P＜0.005,v=1,a=0.05;优劣检验依次为HBeAg临界值血清①P＞0.900,v=1,a=0.05;HBeAb阴性对照②0.100＞P＞0.050,v=1,a=0.05;ELISA共系统检测HBeAgCOV③0.100＞P＞0.050,v=1,a=0.05;但x12＜x22＜x32).结论 用中和(竞争)抑制法检测HBeAbELISA商品试剂盒能够兼测HBeAg,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒,实用价廉,值得推广.     

丙型肝炎病毒抗体检测试剂在高危人群中的应用评价

目的 对研制的丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测试剂（双抗原夹心法）在高危人群中的应用进行评价,并与间接法进行比较。方法 收集河北省固安县丙型肝炎高发地区A村38份、B村47份,共85份样品,采用研制的抗-HCV检测试剂（双抗原夹心法）及间接法同时测定样品抗-HCV,对检测结果不符的样品用HCV-RIBA补充试剂进行确认。结果 85份样品中,间接法检测阳性76份（89．41％）,阴性9份;双抗原夹心法检出阳性73份（85．88％）,阴性12份。有3份间接法检测弱阳性,而双抗原夹心法检测为阴性,经HCV-RIBA补充试剂确认2份为阴性,1份仅1条带阳性,再经病毒核酸定量检测为（1．2～4．8）×10^2copies／ml,HCVRNA测定为阴性。结论 研制的双抗原夹心法抗-HCV检测试剂的灵敏度与间接法相同,特异性优于间接法。