坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元死亡性质的探讨

目的:研究大鼠坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元的死亡性质,以便加以保护,促进神经损伤后运动功能的恢复。方法:切断大鼠右侧坐骨神经,再原位吻合,于术后不同时间取L_4～L_6节段脊髓,作石蜡切片,通过H·E染色和Hoechst33258染色,光镜下分别观察前角运动神经元胞体的形态学变化特征;作超薄切片,电镜下观察前角运动神经元胞体超微结构的变化规律。结果:光镜下,右侧脊髓前角运动神经元胞体尼氏体和细胞核染色质浓缩;电镜下,细胞膜内陷,将细胞分割成凋亡小体,然后裂解,细胞体消失;而左侧前角运动神经元胞体均一、无变化。结论:坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元有死亡,死亡性质是细胞凋亡。     

大鼠坐骨神经损伤后运动神经元死亡数量的研究

目的 :研究周围神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元胞体的死亡数量。方法 :先计算正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量是否对称 ,再切断并原位吻合右侧大鼠坐骨神经 ,左侧不作任何处理、作为对照 ,于术后不同时间取L4 ～L6节段脊髓作H·E染色 ,计算脊髓前角运动神经元胞体数量的变化。结果 :正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量呈对称分布 ;右侧坐骨神经损伤后 ,其脊髓前角运动神经元胞体数量较左侧减少。结论 :大鼠坐骨神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元的胞体有死亡 ,其死亡具有一定的特征。     

腺病毒介导脑源性神经营养因子基因转移对神经根损伤后神经元的保护和促轴突再生作用

目的：探讨腺病毒向脊髓内转移脑源性神经营养因子（BDNF）基因能否在脊髓水平修复神经根损伤。方法：在大鼠神经根切断吻合模型基础上，通过显微注射法在立体定位仪上将2μl复制缺陷型重组腺病毒载体（AxCA-BDNF)直接注入大鼠神经根损伤部相应的脊髓腹角。观察伤后脊髓尼氏染色神经元和轴突计量及形态学改变。结果：与单纯损伤组比较，注射AxCA-BDNF可明显增加神经根伤后尼氏染色阳性神经元的百分率、有髓神经纤维数目以及髓鞘厚度。结论：神经根重建结合BDNF基因治疗可明显减少神经根伤后尼氏染色神经元的死亡以及促进轴突再生，是一种新的有效的治疗神经根损伤方法。     

大鼠坐骨神经损伤后嗅球成鞘细胞对脊髓神经元的保护作用

目的：探讨嗅球成鞘细胞（OECs)对大鼠坐骨神经损伤引起的脊髓前角运动神经元死亡的保护作用，方法：30只SD大鼠随机分成对照（SAL）组和实验（OFCs)组，采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经，硅胶管内给予等渗盐水或培养成活的新生大鼠OECs，分别于伤后7，14，30d应用尼氏染色，酶组织化学染色方法，检测神经损伤侧的脊髓前角运动神经元死亡数目和胆碱酯酶（ChE)及酸性磷酸酶（ACP）的变化。结果：与SAL组比较，伤后7，14和30d,OECs组脊髓前角运动神经元死亡率分别降低了7．04％，6．44％，和9．72％（P＜0．01），脊髓前角运动神经元中ChE活性变化幅度分别降低了4．03％，4．25％和5．72％（P＜0．01），ACP的变化幅度分别下降了51％、64％和92％（P＜0．01），结论：OECs对周围神经损伤后引起的神经元死亡有较好的保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角神经元的保护作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）对坐骨神经切断后引起的脊髓前角运动神经元退行性变的影响。方法 以硅胶管套接切断的大鼠坐骨神经为实验模型,２４只大鼠随机分为２组,治疗组硅胶管内注射ＧＤＮＦ,对照组注射等渗盐水,术后２周观察大鼠后肢运动功能,并进行脊髓切片的尼氏染色、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）组织化学染色及原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法染色。结果 与对照组相比,治疗组后肢运动功能明显改善;脊髓前     

腺病毒载体介导bcl-2基因转染对周围神经再生修复的影响

目的　探讨腺病毒载体中介bcl- 2基因转染对周围神经再生修复的影响。　方法选用SD大鼠坐骨神经切断损伤模型 ,神经外膜端端对线缝合后 ,于神经缝合处远端 0 .5cm处分别注射Ad s-bcl- 2、Ad as -bcl- 2、Ad lacZ和等渗盐水。术后 4 8h、7,15和 30d常规 4 0g L多聚甲醛灌注固定 ,取脊髓L4～ 6 节段冰冻切片 ,行x -gal染色、bcl- 2免疫组化和原位杂交染色、GAP - 4 3组化染色 ;并动态观察坐骨神经功能指数 (SFI)以了解后肢恢复情况。　结果　Ad s-bcl - 2组脊髓前角运动神经元中GAP - 4 3表达均较其他组高 (P <0 .0 5 ) ,SFI恢复最好 ;Ad as -bcl- 2组神经元中GAP - 4 3的表达较其他组低 (P <0 .0 5 ) ,SFI恢复最差 ;Ad LacZ组与等渗盐水组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。　结论　腺病毒载体中介bcl- 2基因转染能促进坐骨神经损伤后再生和功能恢复。     

大鼠坐骨神经损伤急性期缓激肽在相应脊髓前角的变化规律

应用免疫细胞化学方法,结合图像分析仪,研究了缓激肽在脊髓腰骶段及L_(4～6)背根节的分布,以及坐骨神经切断后,它在相应前角运动神经元的相对含量的变化规律。结果:缓激肽分布于L_(4～6)背根节及腰骶髓灰质的第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ层神经元及脊髓白质的神经胶质细胞和神经纤维。在神经损伤的研究中,相应脊髓前角运动神经元的缓激肽含量,损伤后第15h是减少的,以后逐渐增多,至第72h仍维持在高位水平。     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓病理改变

目的　研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓的病理改变。方法　火器伤组致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点 ,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经 ,分别在光电镜下观察伤后 1天、3天 ,1周、2周、4周、12周时腰段脊髓的病理改变。结果　火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化 ,切割伤组则未见这些病理改变。结论　火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重 ,运动神经元存活数量显著减少     

大鼠坐骨神经损伤急性期激肽原在脊髓前角的变化规律

应用免疫细胞化学方法，结合图像分析仪，研究了激肽原在腰骶髓及Ｌ４～Ｌ６脊神经节的分布，以及坐骨神经切断后，其在相应的前角运动神经元的相对含量的变化规律。研究发现：激肽原分布于Ｌ４～Ｌ６脊神经节及腰骶髓灰质的第Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅸ层神经元及脊髓白质的神经胶质细胞和神经纤维。在神经损伤后，相应脊髓前角运动神经元的激肽原相对含量，在损伤后第１５ｈ是减少的。以后逐渐增多，到损伤后２４ｈ基本恢复到对照组水平，在第４８ｈ，７２ｈ，其含量明显超过对照组。     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用研究

目的：探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用。方法：采用大鼠脊髓半横切损伤模型，将实验动物分为3组：pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植组（A组），单纯雪旺氏细胞移植组（B组），损伤对照组（C组）。对脊髓切片行Nissl染色，酸性磷酸酶（ACP）组织化学染色及原位末端标记（TUNEL）法染色，并用联合行为记分（CBS）观察大鼠神经功能恢复情况。结果：A、B、C三组前角神经元存活率呈显著性差异（A＞B＞C，P＜0．01）；A组ACP变化幅度明显降低（A＜B＜C）；细胞凋亡率为C＞B＞A。大鼠神经功能恢复也出现了相同的变化趋势。结论：pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对脊髓损伤前角神经元有保护作用并促进大鼠损伤脊髓功能的恢复。     

周围神经损伤对脊髓运动神经元睫状神经营养因子表达的影响

目的 探讨周围神经损伤后脊髓运动神经元素达睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）水平的变化规律及其与神经元病理变化的相关性。方法 选用出生后３ｄ和成年大鼠各３０只,均分为对照组、伤后３,７,１４,２１,２８ｄ６组。切断不同鼠龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,行免疫组织化学染色ＣＮＴＦ阳性脊髓运动神经元,利用图像分析系统计算脊髓ＣＮＴＦ阳性运动神经元的吸光度值,从而间接反映脊髓运动神经元ＣＮＴＦ     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的 探讨胚胎脊髓（Fetal spinal cord,FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响。方法 采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型。移植供体为同种异体妊娠14天的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤——FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组。术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score,CBS）,评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5cm作嗜银梁色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况。结果 胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组组优于C组,可以较好地恢复神经元形态。CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,治疗组统计学分析与对照组间有显著性差异。免疫组织化学检查,术后8周A、B组神经中丝（neurofilament,NF）着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生。结论 脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用。     

周围神经损伤对脊髓运动神经元NT—3表达的影响

目的：探讨周围神经损伤对脊髓运动神经元神经营养因子－3（NT－3）水平变化规律及与神经元病理变化的相关性。方法：切断大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,免疫组织化学染色NT－3阳性脊髓运动神经元、图像分析计算其吸光度以反映NT－3的水平。结果：成鼠或乳鼠坐骨神经损伤后运动神经NT－3水平均很快下降,致伤后第2周降至最低水平,随后逐渐恢复,至4周仍未恢复到对照组水平;神经元病理改变过程与此相似,但乳鼠NT－3基础水平高于成鼠。结论：周围神经损伤后脊髓运动神经元NT－3水平将发生变化。运动神经元内源性NT－3水平与其病变程度呈负相关。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。     

单纯运动或感觉神经损伤在骨骼肌萎缩中的致凋亡作用

目的探讨单纯运动神经或感觉神经损伤在骨骼肌萎缩中的致凋亡作用。方法健康成年SD大鼠30只,随机分为前根切断组(切断左侧L4-L6脊神经前根)、后根切断组(切断左侧L4-L6脊神经后根)和坐骨神经切断组(切断左侧坐骨神经),每组10只。10周后取左右两侧腓肠肌,应用荧光标记、电镜技术以及免疫组化方法观察单纯运动或感觉神经损伤后骨骼肌细胞的凋亡表现及Fas/FasL的表达变化。结果失神经支配10周后,骨骼肌细胞出现各种凋亡变化,细胞核凋亡形态明显,其中后根切断组、前根切断组和坐骨神经切断组的细胞核排列密集程度依次增加,Fas/FasL表达依次增强。电镜观察可见失神经支配的骨骼肌细胞未见典型的凋亡小体,但出现凋亡前期的形态改变。结论运动神经损伤对骨骼肌萎缩的影响大于感觉神经损伤,临床治疗失神经支配的骨骼肌萎缩应优先考虑重建运动神经。     

电刺激对大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡调控基因表达的影响

目的 观察直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax基因表达的作用,探讨电刺激防治细胞凋亡的机制。方法 30只SD大鼠坐骨神经切断后,平均分为两组。实验组在相应的脊髓节段立即置入直流电刺激器,对照组置入无输出电流的刺激器,分别于术后1,4,7,14,28d取材,应用免疫组化技术,光镜下观察脊髓动物神经元bcl-2,bax的表达,并对脊髓阳性运动神经元进行计数。结果 坐骨神经切断后4,7,14d,实验组脊髓运动神经元bcl-2阳性数高于对照组;坐骨神经切断后4,7,14,28d实验组脊髓运动神经元bax阳性数低于对照组。结论 直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax的表达具有调节作用。