五聚素3基因甲基化在食管鳞癌中的作用

目的研究食管鳞癌组织中五聚素3(PTX3)基因的表达,以及基因启动子区甲基化状态对其表达的影响。方法应用半定量逆转录PCR(RT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)、免疫组织化学的方法对癌旁食管黏膜组织和食管鳞癌组织进行检测,分析PTX3基因mRNA的表达、基因启动子区甲基化状态和PTX3蛋白阳性表达与食管癌临床病理特征的关系。结果 25%(5/20)食管鳞癌组织和90%(18/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因表达,PTX3mRNA在食管癌与癌旁组织之间的表达差异有统计学意义(χ2=17.289,P<0.001)。80%(16/20)食管鳞癌组织和25%(5/20)正常食管黏膜组织存在PTX3基因CpG岛超甲基化,提示PTX3基因超甲基化与食管癌发生之间有关联(χ2=12.13,P<0.001)。PTX3蛋白在食管癌组织中表达的阳性率为30.38%(24/79),癌旁食管组织PTX3蛋白阳性表达率为84.81%(67/79)(P<0.001)。随着食管癌临床分期增加,PTX3蛋白阳性表达率逐渐降低。结论 PTX3基因启动子高甲基化是PTX3表达失活的主要原因,在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,PTX3基因启动子甲基化可作为食管鳞癌预后评估的潜在肿瘤标志物。     

食管鳞癌患者血浆与肿瘤组织DNA甲基化检测的应用价值

目的 研究食管鳞癌患者肿瘤组织和血浆多基因甲基化状态及其对食管鳞癌诊断的应用价值.方法 用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对癌旁正常组织、患者术前1d、术后7d血浆游离DNA中腺瘤性息肉瘤基因(adenomatous polyposis coli,APC)、维甲酸受体β2基因(retinoic acid receptor-beta2,RARβ2)、上皮细胞钙黏蛋白基因(E-cadherin,CDH1)、细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂4A家族p16基因(cyclin-dependent kinase inhibitor4A,p16INK4α)、Ras相关家族蛋白1A基因(ras association domain family member 1A,RASSF1 A)甲基化,选取同期60名年龄、性别匹配的健康志愿者血浆DNA作对照.用x2检验分析各类组织与血浆标本中5个基因DNA甲基化率的差异;血浆与食管鳞癌组织标本DNA甲基化的相关性用Spearman相关分析;绘制受试者操作特征(receive operating characteristic,ROC)曲线评价单基因与5个基因联合检测诊断食管鳞癌的敏感度、特异度.结果 食管鳞癌组肿瘤组织中的APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A基因甲基化阳性率分别为44.7％ (34/76)、72.4％(55/76)、72.4％( 55/76)、86.8％( 66/76)、55.3％ (42/76),均显著高于对应癌旁正常组织[6.6％(5/76)、3.9％ (3/76)、3.9％ (3/76)、3.9％ (3/76)、2.6％( 2/76),x2值分别为29.01、75.39、75.39、105.34、57.18,P均＜0.001].食管鳞癌组术前血浆中5个基因的甲基化阳性率分别为42.1％(32/76)、63.2％ (48/76)、63.2％ (48/76)、71.1％ (54/76)、50.0％( 38/76),均显著高于健康对照组[3.3％ (2/60)、3.3％(2/60)、1.7％( 1/60)、3.3％ (2/60)、1.7％ (1/60),x2值分别为26.88、51.62、55.01、63.48、38.30,P均＜0.001].食管鳞癌患者血浆与肿瘤组织中5个基因甲基化的符合率均较高(Kappa值分别为0.679、0.791、0.791、0.542、0.895,P均＜0.001).血浆中APC、RARβ2、CDH1、p16INK4α、RASSF1A基因甲基化单项诊断食管鳞癌的敏感度分别为42.1％( 32/76)、63.2％(48/76)、63.2％( 48/76)、71.1％ (54/76)、50.0％( 38/76),特异度分别为96.7％( 58/60)、96.7％(58/60)、98.3％ (59/60)、96.7％( 58/60)、98.3％( 59/60);ROC曲线下面积(AUC)分别为0.694[95％可信限(CI)0.606～0.782]、0.799( 95％ CI 0.723 ～0.875)、0.807( 95％ CI 0.733～0.882)、0.839(95％ CI0.769～0.908)、0.742(95％ CI 0.659～0.824);5个基因联合检测血浆甲基化的敏感度为80.3％ (61/76),特异度88.3％ (53/60),ROC曲线AUC为0.843(95％ CI 0.773～0.913).联合检测的敏感度显著高于APC、RASSF1A单项检测(x2值分别为23.30、15.33,P均＜0.001),但与RARβ2、CDH1、p16INK4α的敏感度差异无统计学意义(x2值分别为5.48、5.48、1.75,P值分别为0.019、0.019、0.186);联合检测与单项检测的特异度差异无统计学意义(x2值分别为1.922、1.922、3.348、1.922、3.348,P均＞0.05).结论 食管鳞癌患者血浆与肿瘤组织中抑癌基因甲基化符合率均较高,血浆中5个基因甲基化联合检测诊断食管鳞癌与单基因检测相比无显著优势,但前者敏感度高于后者.     

信号转导子和转录激活子3与其靶基因对食管鳞癌细胞的调控作用

目的探讨信号转导子和转录激活子3及其靶基因对食管鳞癌细胞的调控作用。方法采用免疫组化方法检测60例食管鳞癌组织中Stat3、c-Myc和Bcl-2在蛋白水平的表达情况。结果食管鳞癌组织中Stat3、c-Myc和Bcl-2的表达均明显高于正常食管黏膜组（P〈0.05）;Stat3随着细胞的不断活化呈高表达。Stat3与c-Myc、Bcl-2的表达呈正相关（P〈0.05）。结论 Stat3的持续性活化可能在食管癌变发生过程中起重要的调控作用。     

TSLC1、caspase-3在食管鳞状细胞癌中的表达

目的:通过检测TSLC1、caspase-3蛋白在食管鳞状细胞癌和癌旁正常组织中的表达水平,从而探讨两者在食管鳞状细胞癌发生、发展中的作用。方法:收集45例食管鳞状细胞癌组织标本及其癌旁正常组织标本,应用免疫组化方法对TSLC1、caspase-3蛋白的表达进行测定。结果:在食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中TSLC1的表达阳性率分别为37.8%(17/45)和82.2%(37/45),两者相比差异具有统计学意义(P<0.05);caspase-3的阳性表达率分别为44.4%(20/45)和75.6%(34/45),两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。TSLC1和caspase-3在食管鳞状细胞癌组织中表达呈正相关(r=0.303,P=0.033)。结论:TSLC1与caspase-3蛋白在食管鳞状细胞癌的发生发展中起重要作用,可能成为食管鳞状细胞癌的分子标记物或食管鳞状细胞癌治疗的新分子靶点。     

survivin和PTEN基因蛋白在食管鳞状细胞癌的表达及临床意义

目的：探讨食管鳞状细胞癌组织中survivin和PTEN基因蛋白表达与食管鳞状细胞癌生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学方法，检测65例食管鳞状细胞癌组织中survivin和PTEN蛋白表达水平。结果：在食管鳞状细胞癌中survivin和PTEN表达阳性率分别为61．5％（40／65）和58．5％（38／65）。survivin和PTEN表达均与肿瘤分化、浸润、淋巴结转移和预后相关（P〈0．05）。结论：survivin和PTEN异常表达与食管鳞状细胞癌的病理生物学行为密切相关，可作为是预测食管鳞状细胞癌转移潜能和评估食管鳞状细胞癌患者预后的客观指标。     

肾癌组织中Tim-3基因的甲基化分析

目的分析肾癌组织中Tim-3基因启动子的甲基化情况,探讨Tim-3甲基化在肾癌发生中的可能作用。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）检测20例肾癌组织和3例癌旁组织中Tim-3基因启动子甲基化状态,分析检测结果。结果肾癌组织中有11例（55%）检测到了Tim-3基因甲基化表达,相应癌旁组织中没有检测到Tim-3基因甲基化表达。结论肾癌组织中Tim-3基因启动子发生甲基化,Tim-3基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关。     

维甲酸受体-β基因和死亡相关蛋白激酶基因启动子区甲基化与食管鳞状细胞癌关系研究

目的观察维甲酸受体-β（retinoic acid receptor β,RARp）基因、死亡相关蛋白激酶（death—associated protein kinase,DAPK）基因在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中启动子异常甲基化状况,探讨其在ESCC发生中的可能作用及早期诊断价值。方法95例ESCC患者的癌组织（ESCC组）、癌旁组织（癌旁组）及正常组织（对照组）,3组采用实时荧光定量甲基化特异性PCR法检测RAR—β及DAPK的甲基化状态。结果ESCC组、癌旁组、对照组RAR—β基因启动子区CpG岛甲基化发生率分别为46．3％、26．3％和11．6％,DAPK基因启动子区CpG岛甲基化发生率分别为47．3％、22．1％和12．6％,ESCC组RAR—β基因和DAPK甲基化发生率高于癌旁组与对照组（P〈0．05）;ESCC组RAR—β基因甲基化在年龄上差异有统计学意义（P〈0．05）,RAR—β基因和DAPK基因甲基化在肿瘤位置、分化程度、转移及浸润深度上差异无统计学意义（P〉0．05）。结论RAR—β和DAPK基因高度甲基化是ESCC组织的遗传学改变之一,可能参与了ESCC的发生、发展过程。     

基于表达谱芯片技术的食管鳞状细胞癌相关差异基因的筛选及功能研究

目的利用食管鳞状细胞癌细胞相关基因芯片数据,筛选与食管癌显著相关的关键基因,并对关键基因所在的模块进行功能研究。方法从基因表达数据库 GEO 数据库中下载数据 GSE17351（数据共10个样本,正常和食管鳞状细胞癌样本组织各5个）,利用 R软件包做数据预处理和差异表达分析,选取差异表达基因（FDR ＜ 0.05及差异值 ＞2或＜ -2）。然后对差异表达基因进行生物信息学分析,首先投入 String 在线分析工具获得差异表达基因的蛋白-蛋白相互作用网络（score ＞0.9）,统计网络中各个节点的度,挑选出最关键的主效基因（hub基因）。然后利用Cytoscape软件插件 Mcode对整个网络进行网络模块化,并通过插件Bingo（P value＜ 0.05）对hub基因所在的模块进行功能注释,推测模块中影响基因特异性表达导致食管癌的机制和方式。结果通过比较正常和患病者食管鳞状细胞癌表达数据,筛选到600个差异表达的基因,构建了包含268对差异表达基因产物蛋白对的相互作用网络。找到最关键 hub 基因 TOP2A。得到1个包括hub基因在内由5个差异表达基因组成的模块,模块功能最显著富集在染色体分离和浓缩;发现与多种癌症相关的基因TOP2A共同起染色体活动基因 NCAPG。结论食管鳞癌的发生与最关键基因 TOP2A的异常表达有关,推测与之功能发生作用的基因 NCAPG 基因通过与 TOP2A 相同的机制和方式（染色体中前期活动）影响着癌症特异性基因的表达。     

喉鳞状细胞癌中p16INK4a基因甲基化状况及表达

目的研究喉鳞状细胞癌p16^（INK4a）基因启动子区域5′CpG岛的甲基化状况,探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测30例喉鳞状细胞癌及15例远离肿瘤的正常喉黏膜中p16^（INK4a）基因启动子区域5′CpG岛的甲基化状况,并应用免疫组化EnVision法检测p16^（INK4a）蛋白的表达情况。结果30例喉鳞状细胞癌中p16^（INK4a）基因启动子区5′CpG岛甲基化率76.7%（23/30）;p16^（INK4a）蛋白缺失率为93.3%（28/30）。15例正常喉黏膜中未检测到p16^（INK4a）基因异常甲基化,而且其相应蛋白表达均为阳性。p16^（INK4a）基因甲基化状况与其蛋白表达和临床分期密切相关。结论p16^（INK4a）基因5′CpG岛异常甲基化在喉鳞状细胞癌中频率很高,可能在喉癌发生、发展中扮演重要角色;而且这可能是一个早期事件,其临床早期诊断和基因治疗意义均值得进一步深入探讨。     

miR-130a、RUNX3在食管鳞癌中表达的相关性及其临床意义

【目的】探讨miR-130a、重组人Runt相关转录因子3(RUNX3)在食管鳞癌中表达的相关性及其临床意义。【方法】本院接受手术治疗的84例食管鳞癌患者,取患者手术时癌组织为研究对象,相应的癌旁组织为对照。采用qRT-PCR检测组织中miR-130a表达水平;采用Westernblot法及免疫组化法检测组织中RUNX3蛋白表达。对所有患者进行随访,探讨miR-130a与RUNX3表达对食管鳞癌患者预后的影响。【结果】与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中miR-130a表达水平较高(P<0.05),RUNX3蛋白表达水平较低(P<0.05)。食管鳞癌组织中miR-130a与RUNX3蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。miR-130a和RUNX3蛋白表达水平与T分期、组织分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-130a高表达患者中位生存时间显著短于miR-130a低表达患者(P<0.05);RUNX3低表达患者中位生存时间显著短于RUNX3高表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析表明,T分期T3~T4期、有淋巴转移、miR-130a高表达、RUNX3低表达是食管鳞癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。【结论】食管鳞癌癌组织中miR-130a表达水平上调、RUNX3蛋白表达水平下调,二者与食管鳞癌患者预后不良密切相关,且miR-130a高表达、RUNX3低表达的食管鳞癌患者发生预后不良的风险较大。     

CD44v5 mRNA在新疆维吾尔族、汉族食管鳞癌中的表达及其临床病理学意义

目的:探讨新疆维吾尔族和汉族食管鳞癌中CD44v5 mRNA的表达情况以及与临床病理特征之间的关系.方法:利用RT-PCR技术检测食管鳞癌组织60例(维族、汉族各30例),及其对应的正常食管上皮组织60例中CD44v5 mRNA表达的情况.结果:CD44v5 mRNA在维吾尔族食管鳞癌组织及正常组织中的阳性表达率分剐为86.67%和46.67%(P=0.003):在汉族食管鳞癌组织及正常组织中的阳性表达率分别为96.67%和50.00%(P=0.000);但在两民族间的表达差异无统计学意义(P=0.930):CD44v5 mRNA的表达与TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05).结论:CD44v5 mRNA表达与食管癌发生发展有关,可作为食管癌转移及预后不良的生物学指标.     

食管胃重复癌3例

1 病历摘要 例1：女，52岁。进行性吞咽困难5个月，纤维胃镜及病理检查确诊为食管中段鳞状上皮细胞癌、胃窦部黏液腺癌。经颈、右胸、腹部三切口行食管癌切除、胃次全切除、结肠代食管、结肠胃吻合、胃空肠吻合术。术后痊愈。     

食管癌中p16基因甲基化的研究进展

食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,食管癌的发生是一个多步骤,多因素参与的复杂的生物学过程,涉及遗传学与表观遗传学信息的改变。DNA甲基化是最重要的一种表观遗传修饰方式,高甲基化所致基因转录失活,     

Rb基因产物蛋白在食管鳞癌中表达的回顾研究

目的 探讨食管鳞癌中Rb基因产物蛋白（pRb)的表达情况。方法 免疫组织化学方法检测pRb在食管鳞癌组织中的表达。结果 70例食管鳞癌中，pRb表达阳性率为64．3％，pRb表面强度与组织学分级恶性程度呈正相关。pRb表达阳性组与阴性组在生存率上差异显。结论 pRb表达与食管鳞癌组织学分级及预后有关。因此，可为临床提供评价食管鳞癌生物学行为及判断预后的参考。     

食管鳞癌中E-cadherin的表达及其临床意义

目的 探讨食管鳞癌标本中E-cadherin(以下简称E-cad)的表达与其生物学行为的关系.方法 采用免疫组化PV-6000法检测E-cad在58例食管鳞癌术后病理标本和20例正常食管组织中的表达.应用SPSS13.0版软件包进行系统分析.结果 E-cad在食管鳞癌中的表达低于正常食管组织,其表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、临床分期及分化程度密切密切相关.结论 E-cad的异常表达是判断食管鳞癌的生物学行为及患者预后的重要因素.     

Wnt通路抑制因子SFRP5在皮肤鳞癌组织的甲基化状态及其作用

目的检测皮肤鳞癌组织中Wnt通路抑制因子SFRP5甲基化状态及其与临床病理的关系,以探讨SFRP5在皮肤鳞癌发生发展中可能的作用机制。方法运用Mass ARRAY质谱仪Epi TYPER甲基化方法检测皮肤鳞癌组织、癌旁组织和正常皮肤组织各40例样本中SFRP5基因启动子甲基化状态。结果对皮肤鳞癌组织、癌旁组织、正常皮肤组织中SFRP5共2个Cp G片段11个Cp G位点1 142个(86.52%)Cp G单位的甲基化率进行非参数秩和检验,在皮肤鳞癌与正常组织相比中检测到6个(6/11,54.54%)Cp G位点甲基化率差异具有统计意义(P<0.05),其甲基化率在皮肤鳞癌高于正常对照组。癌旁组织与正常组织相比,有6个(6/11,54.54%)Cp G位点甲基化率差异具有统计意义(P<0.05),其甲基化率在癌旁组织高于正常对照组织。其中Cp G 1_5位点甲基化率在不同病理级别具有统计学差异(P<0.05),CSCCⅢ级>CSCCⅡ级>CSCCⅠ级。结论 SFRP5在皮肤鳞癌中呈现高甲基化率,可能参与了皮肤鳞癌的发生与发展过程。     

CDH13基因在食管癌细胞株EC1和EC109中的甲基化研究

目的:探讨食管癌细胞中CDH13基因启动子区甲基化状态,以及5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用对CDH13基因甲基化状态及其表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理前后分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测食管癌细胞EC1和EC109中CDH13基因启动子区甲基化状态,Western blot检测CDH13蛋白表达水平的变化。结果:CDH13基因在EC1中呈半甲基化,在EC109中呈完全甲基化。5-Aza-CdR可逆转食管癌细胞中CDH13基因甲基化,恢复其蛋白的表达。结论:CDH13基因异常甲基化可能是其在食管癌中失活的重要方式,应用5-Aza-CdR可逆转甲基化状态,并恢复CDH13表达。     

基于GEO和TCGA数据筛选和鉴定食管鳞状细胞癌关键枢纽基因

[目的]基于GEO和TCGA数据库中的食管鳞状细胞癌的转录组数据,利用生物信息学方法筛选和鉴定食管鳞状细胞癌的关键枢纽基因.[方法]下载GEO中食管鳞状细胞癌数据集GSE17351和TCGA中的食管鳞状细胞癌RNA-seq数据,利用R软件Limma程序包筛选差异表达基因;利用ClusterProfiler程序包对差异基...     

急性冠脉综合征患者血清五聚素3水平及与近期预后的相关性研究

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清五聚素3(PTX3)的水平及对近期预后判断的意义。方法随机选取2013年12月至2014年8月心内科住院的冠心病患者156例,其中稳定性心绞痛(SA)患者38例,ACS患者118例,包括不稳定性心绞痛(UAP)患者64例,急性心肌梗死(AMI)患者54例;采用ELISA法检测各组入院时血清PTX3水平及ACS组患者正规治疗7天后血清PTX3水平。在出院6月后对患者进行随访,了解患者近期预后,对PTX3水平与预后做相关性分析。结果 ACS组患者PTX3水平显著高于SA组患者(SA组:874.56±128.25 pg/ml,UAP组:1354.74±254.94 pg/ml,AMI组:1 474.27±278.18 pg/ml),(P0.05);ACS组7天后PTX3水平较入院时明显降低(UAP组入院时:1 354.74±254.94 pg/ml,7天后:1 035.37±249.13 pg/ml,AMI组入院时:1 474.27±278.18 pg/ml,7天后:1 067.35±264.58 pg/ml)(P0.05);血清PTX3、hs-CRP、LDL-C与ACS患者近期预后相关(P0.05)。结论 ACS患者血清PTX3表达升高,且提示近期预后不良。