IFN-β基因诱导裸鼠胶质瘤Fas 表达上调及细胞凋亡的实验研究

 目的 研究β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及能否诱导胶质瘤细胞Fas表达上调,并探讨了β干扰素基因诱导细胞凋亡及Fas表达上调之间的联系. 方法 建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用以及胶质瘤细胞Fas表达情况. 结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡,胶质瘤细胞Fas表达明显高于对照组. 结论 IFN-β基因能够抑制人脑胶质瘤生长,并诱导胶质瘤细胞凋亡;IFN-β基因诱导胶质瘤细胞凋亡可能是Fas表达上调的结果.     

外源性IFN-β基因对裸鼠SHG44胶质瘤的诱导凋亡研究

目的: 探讨β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及人β干扰素裸DNA治疗人脑胶质瘤的可行性和作用机制。 方法: 建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色以及电镜,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用。 结果: IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡。 结论: IFN-β裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长并诱导胶质瘤细胞凋亡,该实验为IFN-β基因治疗人脑胶质瘤的应用奠定了初步基础。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(SIM)对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin和Bax mRNA表达的变化。结果①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93.12%,IC_(50)为(11.33±0.16)μg/ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G_1-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,Bax mRNA表达逐渐升高。结论SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀（SIM）对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法：用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐（MTY）测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测survivin和BaxmRNA表达的变化。结果：①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93．12％,IC50为（11．33±0．16）μg／ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,BaxmRNA表达逐渐升高。结论：SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：榄香烯是从姜科植物莪术中提取的抗肿瘤药物,我们应用榄香烯治疗神经胶质瘤取得了较为显著的疗效,本研究探讨榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：^3H-TdR掺入法检测榄香烯对鼠源性C6胶质瘤细胞及人源性SHG-44胶质瘤细胞的体外增殖抑制效应,Hoechst33258／PI荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：榄香烯能有效抑制C6／SHG-44胶质瘤细胞的恶性增殖,^3H-TdR掺入法检测榄香烯处理不同时间(1～4天)的IC50,C6细胞为7．33--11．02mg／L,SHC-44细胞为13．29～27．16mg／L。在相同药物浓度下,C6细胞较SHG-44细胞敏感。经榄香烯作用后,C6／SHG-44胶质瘤细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成,DNA直方图观察到特征性亚倍体峰(Ap峰),DNA凝胶电泳出现有明显的梯状条带。结论：榄香烯有显著的抗胶质瘤细胞增殖作用,并能诱导胶质瘤细胞凋亡。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2蛋白表达下调

目的　探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2表达的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法　PTEN基因体外转染SHG 44细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl 2基因的表达。结果　PTEN基因转染的SHG 44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪示细胞周期从G1 期到S期发生抑制 ,并且在G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (1 2 .9% ) ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl 2的表达也显著下调。转染空载体和未转染的SHG 44细胞无明显的凋亡表现。结论　PTEN基因可诱导SHG 44细胞凋亡 ,并下调bcl 2蛋白的表达 ,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一     

冷冻诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞发生凋亡的实验研究

目的：通过观察大鼠C6脑胶质瘤经冷冻后出现细胞凋亡，探讨冷冻对肿瘤的杀伤机制。方法：建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型，通过TUNEL法及流式细胞仪分别检测其冷冻后凋亡数目及凋亡率。结果：肿瘤经冷冻后，其中心出现坏死，而周边细胞呈现典型的凋亡形态学改变。TUNEL法检测冻后24、48和72h凋亡数目0．323、0．00167和0．037；流式细胞仪检测其冻后24、48和72h凋亡率与对照组相比，P值分别为0．0254、0．0064和0．031；冻后各时间点凋亡数目及凋亡率均显著高于对照组，P〈0．05。其中冻后48h改变尤其明显，P〈0．01，峰值时间出现在冷冻24～48h。结论：诱导细胞凋亡也是冷冻杀伤肿瘤细胞的重要机制之一，但其发生的分子机制有待于进一步深入研究。     

整合素与胶质瘤细胞凋亡

 目的　研究整合素 β1在胶质瘤细胞中的表达及在胶质瘤细胞增殖、生存方面的作用。 方法　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞整合素 β1的含量 ,以不同浓度的抗整合素 β1抗体处理在胶原蛋白I上培养的SHG4 4胶质瘤细胞 ,MTT法测定ID50 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞仪分析细胞周期改变。结果　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞表达整合素 β1,MTT曲线测定发现 ,2 0 μg/ml抗整合素 β1抗体处理SHG4 4胶质瘤细胞 4 8小时后 ,显著抑制SHG4 4胶质瘤细胞的增殖。流式细胞仪分析可检出凋亡峰。结论　整合素 β1在SHG4 4胶质瘤细胞中高表达 ,并与胶质瘤细胞增殖、生存密切相关 ,抑制整合素 β1的表达可促进胶质瘤细胞的凋亡及坏死。     

胶质瘤细胞诱导分化后的凋亡现象

目的：研究胶质瘤细胞诱导分化后的去向,籽胶质瘤诱导化疗法提供理论基础。方法：采用MTT,免疫荧光等方法鉴定二甲基甲酰胺DMF诱导胶质瘤细胞系,SHG－44的分化,用形态学,吖啶橙／溴化乙啶活细胞染色（AO／EB）,流式细胞术,Annexin V检测凋亡。结果：DMF可以引起剂量依赖性的显著诱导分化作用,从细胞形态,AO／EB染色上可以观察到细胞经1％DMF诱导分化后发生了凋亡。经流式细胞术DNA图谱定量,诱导1,5天凋记细胞占3．5％,第3天占26．8％,用检测细胞膜不对称性的Annexin V凋亡检测发现,第1．5天即可观察到12．18％,的早期凋亡细胞,并排除坏死,结论：胶质瘤细胞系SHG－44经DMF诱导分化后,将逐渐凋亡。     

人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

胶质瘤细胞诱导分化相关基因在胶质瘤组织中的表达

目的 利用已经建立的胶质瘤细胞诱导分化相关基因表达谱，筛选胶质瘤恶性进展相关基因。方法 按分子生物学实验要求，收集经病理确诊的不同恶性程度胶质瘤手术标本，应用反向多点杂交技术制作分子探针，与96个相关基因组成的小芯片杂交检测在不同恶性级别胶质瘤手术标本中的表达情况。结果共有8个基因在各个恶性级别胶质瘤中均呈高表达；有14个基因随胶质瘤恶性程度升高而表达频率呈上升趋势；有6个基因随胶质瘤恶性程度升高表达频率呈下降趋势；筛选到可能与胶质瘤恶性进展有关的新基因有DIP1、RPS7、CLK2、WWOX／FOR、GRIM-19等基因。结论 本研究制作的胶质瘤细胞分化相关基因小芯片，在不同级别胶质瘤组织标本中检测到的表达情况，可进一步用于胶质瘤恶性进展的分子机制研究。     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

冷冻诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞发生凋亡的实验研究

目的:通过观察大鼠C6脑胶质瘤经冷冻后出现细胞凋亡,探讨冷冻对肿瘤的杀伤机制。方法:建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型,通过TUNEL法及流式细胞仪分别检测其冷冻后凋亡数目及凋亡率。结果:肿瘤经冷冻后,其中心出现坏死,而周边细胞呈现典型的凋亡形态学改变。TUNEL法检测冻后24、48和72h凋亡数目0.323、0.00167和0.037;流式细胞仪检测其冻后24、48和72h凋亡率与对照组相比,P值分别为0.0254、0.0064和0.031;冻后各时间点凋亡数目及凋亡率均显著高于对照组,P<0.05。其中冻后48h改变尤其明显,P<0.01,峰值时间出现在冷冻24～48h。结论:诱导细胞凋亡也是冷冻杀伤肿瘤细胞的重要机制之一,但其发生的分子机制有待于进一步深入研究。     

整合素β1 基因在人脑胶质瘤中的表达与临床意义

 目的　检测脑胶质瘤中整合素 β1基因表达 ,阐明其临床意义。方法　应用免疫组化和原位杂交法 ,分析 53例人脑胶质瘤整合素 β1基因表达 ,对患者随访并比较其预后。结果　整合素β1蛋白阳性率 ,在 ～ 级脑胶质瘤分别为 36.3%、38.5%、72 .2 %和 81 .8% ,高级别 ( ～ )高于低级别 ( ～ ) (P<0 .0 5) ,其 m RNA表达同其蛋白表达。高表达整合素β1的患者预后较差。结论　整合素β1的高表达与脑胶质瘤分化程度低、侵袭性强密切相关 ,是预测患者预后的较好标示物。     

转化生长因子β诱导蛋白在胶质瘤中的表达及生物学功能

目的：探讨转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)在胶质瘤中的表达及其生物学功能。方法：通过从癌症基因组图谱(TCGA)、中国脑胶质瘤图谱(CGGA)和脑肿瘤分子数据库(Rembrandt)下载胶质瘤的转录组数据和相应的临床资料,分析在不同级别胶质瘤中TGFBI mRNA的表达水平,及其表达变化与胶质瘤患者预后的关系。免疫组织化学染色法检测35例胶质母细胞瘤组织和5例正常脑组织中TGFBI蛋白的表达水平。通过用慢病毒转染U87和U373细胞株构建TGFBI表达下调的胶质母细胞瘤细胞系,检测TGFBI对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡和细胞周期的影响。通过基因集富集分析(GSEA)预测TGFBI在胶质瘤发生发展中可能参与并调控的相关通路。结果：TCGA、CGGA和Rembrandt数据库的结果分析显示随着胶质瘤级别的增加,TGFBI mRNA的表达水平升高(P<0.05)。此外,TGFBI m RNA的高表达与胶质瘤患者不良预后显著相关(P<0.01)。免疫组化检测结果显示,与正常脑组织相比,胶质母细胞瘤组织中TGFBI蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。细胞学实验结果显示,T...     

Survivin基因在胶质瘤中的表达及其应用价值

Survivin即生存素,其基因由效应蛋白酶受体EPR-1 (effector cell protease receptor 1) cDNA在人类基因库杂交筛选中分离出来,定位于人类染色体17q25区,全长14.7kb,由三个内含子和四个外显子组成,编码142个氨基酸.     

雷公藤单体体外抑制胶质瘤细胞的实验研究

背景与目的：已有研究发现雷公藤具有抗肿瘤作用,本研究旨在探讨雷公藤单体对胶质瘤细胞的体外抑制作用。方法：通过MTT法测定3种雷公藤单体（甲素,红素和WilforolA)对胶质瘤细胞株SHG44,C6,U251的体外抑制作用;应用免疫组化法观察雷公藤甲素与雷公藤红素对SHG44胶质瘤细胞中Bax,Bcl-2蛋白表达的影响。结果：雷公藤二萜类单体雷公藤甲素对胶质瘤细胞有极显著的抑制作用;雷公藤三萜类单体中红素的抑制作用次之,两者均使SHG44细胞Bax表达增加,Bcl-2表达下降。结论：雷公藤甲素与雷公藤红素对胶质瘤细胞有明显的抗肿瘤作用,其作用与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,导致细胞凋亡有关。     

全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞基因的差异表达

 目的 分析全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞所致的差异表达基因,为研究胶质瘤进展的基因通路及机制提供依据。 方法 运用cDNA微阵列技术比较全反式维甲酸处理前后胶质瘤SHG-44细胞（WHO Ⅳ级）的基因表达谱,鉴定与胶质瘤进展相关的差异表达基因。随机选择数个差异表达基因进行Northern杂交以验证cDNA微阵列结果的可靠性。 结果 鉴定出42个差异表达基因,其中表达上调28个、下调14个;按功能有凋亡类、细胞侵袭与转移类、细胞周期与生长调节类、细胞骨架类、细胞代谢类等。 结论 初步揭示SHG-44细胞基因的差异表达,开展对这些基因的研究有可能阐明胶质瘤进展的基因通路及机制。     

Bcl-x mRNA 前体剪接转换寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

  目的  探讨Bcl-x mRNA前体剪接转换寡核苷酸（Bcl-x splice-switching oligonucleotides,Bcl-x SSO）对胶质瘤细胞株U251 增殖和凋亡的影响。  方法  设计靶向 Bcl-x基因下游选择性 5'端剪接位点的 Bcl-x SSO,β-globin SSO 作为阴性对照 SSO。SSO经2'-甲氧乙基（2'-O-methoxyethyl,MOE）、全硫代磷酸化（phosphorothioate,PS）修饰。采用阳离子脂质体将不同的SSO转染至U251细胞。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测Bcl-x SSO对U251细胞的增殖抑制率。流式细胞术定量检测U251细胞的凋亡率。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Bcl-x SSO对Bcl-xL、Bcl-xS mRNA表达水平的影响,Western blot方法检测Bcl-x SSO对Bcl-xL、Bcl-xS蛋白表达的影响。  结果  MTT结果显示Bcl-x SSO显著抑制U251细胞的增殖,且抑制作用呈剂量依赖性。流式细胞术检测 Bcl-x SSO 能够明显促进 U251 细胞凋亡。RT-PCR 检测 Bcl-x SSO 处理组 Bcl-xL mRNA 表达水平下降,Bcl-xS mRNA表达水平升高。Western blot检测Bcl-x SSO处理组Bcl-xL蛋白表达水平下降,Bcl-xS蛋白表达水平升高。  结论  在胶质瘤细胞U251中,Bcl-x SSO可特异性的作用于Bcl-x mRNA前体,调节其选择性剪接模式从Bcl-xL转换至Bcl-xS,进而促进U251细胞凋亡。      

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡作用的剂量和时间依赖性研究

神经胶质瘤是目前最顽固的恶性肿瘤之一,我们应用榄香烯治疗胶质瘤取得了较为显著的疗效。在临床应用中,我们发现榄香烯的治疗效果与使用途径和用药剂量有很大关系。前期体外研究已经证实,榄香烯能抑制胶质瘤细胞的恶性增殖,并诱导凋亡。我们采用流式细胞分析方法,进一步探讨榄香烯诱导凋亡与药物浓度和作用时间的关系。