丙戊酸钠对骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1作用及其机制的研究

本研究探讨丙戊酸钠（sodium volproate,VPA）对骨髓增生异常综合征细胞SKM-1的作用及其机制。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测VPA对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术检测不同浓度VPA作用后细胞凋亡的比例;采用RT-PCR技术检测c-flipl、c-flips及dlk1 mRNA表达的变化。结果发现,VPA对于SKM-1细胞生长具有抑制作用,且随时间的延长及浓度增高而增强;流式细胞术检测显示,细胞凋亡率随着VPA浓度的增加而增加;VPA可使SKM-1细胞中c-flipl、c-flips及dlk1mRNA表达明显降低,且随着VPA浓度增加而加重。结论：VPA可以通过促进细胞凋亡抑制SKM-1细胞增殖,c-flipl、c-flips及dlk1基因表达的改变可能在这一过程中发挥了重要作用。     

维生素K2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2（VK2）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制，采用流式细胞术Annexin—V^FITC／PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变。用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达，用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示：细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性（P〈0．05），且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少（P〈0．05），G0／G1期细胞逐渐增多（P〈0．01），细胞被阻滞在G0／G1期，并且在G0／G1期前出现明显的亚G1峰，即凋亡峰；抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调（P〈0．05），而促凋亡基因bax表达无明显变化（P〉0．05）；caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡，同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。     

丙戊酸钠协同阿霉素抑制骨髓增生异常综合征细胞株增殖并诱导其凋亡

本研究探讨丙戊酸钠(SVPA)协同阿霉素(ADM)抑制骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1增殖并诱导其凋亡的作用.采用细胞形态学方法观察小剂量SVPA和ADM处理后细胞形态的政变,应用(MTT)比色法检测SVPA及ADM对细胞生长的抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡.结果表明不同浓度的ADM(0.039μg/ml、0.078μg/ml、0.156 μg/ml、0.317 μg/ml和0.4 μg/ml)与0.25 mmol/L SVPA联合作用于MUTZ-1细胞72小时后,细胞抑制率分别为(23.46±1.12)%、(49.87±0.84)%、(52.37±1.05)%、(78.43±4.34)%和(82.47±1.04)%,明显高于单用ADM时的(5.08±0.79)%、(12.32±2.39)%、(23.65±1.34)%、(43.33±2.38)%和(47.85±1.46)%(P＜0.05).单用0.25 mmol.L SVPA时对细胞生长无影响(P＞0.05).SVPA联合ADM作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态学特征;SVPA和ADM联合作用后细胞的凋亡率比单独使用ADM明显增加,并呈浓度依赖性,与对照组相比有显著的统计学意义,其中以0.078μg/ml浓度ADM为最佳抑制浓度.结论小剂量的SVPA能增敏ADM诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUT-Z-1发生凋亡.     

2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究2-甲氧基雌二醇（methoxyestradiol,2-ME）诱导骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多型（MDS-RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的机制,将不同浓度的2-甲氧基雌二醇分别与MUTZ-1细胞在体外培养,同时设二甲亚砜和空白对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定2-ME对MUTZ-1细胞的生长抑制率,瑞氏-姬姆萨染色后观察2-ME引起细胞的形态学改变,流式细胞术分析细胞周期和凋亡率的变化,贝克曼全自动生化分析仪（synchron clinical system LX20）检测培养上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LD）的变化,DNA凝胶电泳验证2-ME诱导的细胞凋亡。结果表明：2-ME对MUTZ-1细胞的增殖具有明显的抑制作用,该细胞凋亡率明显升高,并呈现时间和剂量依赖性,经统计学处理与对照组相比较有显著性差异（P〈0.05）。4μmol/L2-ME作用MUTZ-1细胞12小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征;2-ME作用24小时后MUTZ-1细胞出现G2/M期阻滞;培养上清液中LD含量与对照组相比明显升高,差异具有显著性（P〈0.05）;4μmol/L2-ME作用MUTZ-1细胞48小时后,DNA凝胶电泳可见明显的DNA梯形条带。结论：2-ME对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1有较强的抗肿瘤效应,可能与细胞G2/M期阻滞引起的细胞凋亡有关;2-ME是一种有发展潜力的治疗骨髓异常综合征的药物。     

雷帕霉素诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡及机制研究

为了观察雷帕霉素(RAPA)对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖的抑制、凋亡作用并探讨其相关的机制,用MTT法检测RAPA对MUTZ-1细胞增殖的影响;流式细胞术分析MUTZ-1细胞Annexin V/PI、caspase3、细胞周期、PTEN、p-Akt和p-mTOR蛋白的表达。结果表明,RAPA能显著抑制MUTZ-1细胞增殖,呈剂量和时间的量效关系(24、48和72小时的r=0.67,0.61和0.72)。RAPA作用MUTZ-1细胞24-72小时,G0/G1期细胞较对照组明显增高(p0.01),随着药物浓度增加而增多(r=0.94、0.93和0.92),细胞周期阻滞在G0/G1期。Annexin V+PI-细胞较对照组增多(p0.01),且随着浓度的增高而增多(r=0.91、0.94和0.96)。PTEN表达荧光强度与对照组比较显著增高(p0.01),随着药物浓度增高表达增强(r=0.93),p-Akt和p-mTOR表达的荧光强度与对照组比较显著降低(p0.05),随着药物浓度增高而表达减低(r=0.95和0.91)。结论:RAPA与靶分子mTOR作用,抑制PTEN/PI3K-Akt/mTOR信号转导通路,诱导MUTZ-1细胞凋亡。     

M-FISH用于骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1复杂核型的检测分析

本研究的目的是观察伴有5号染色体缺失的MDS细胞株MUTZ-1细胞的遗传学变化.首先采用R显带技术对染色体标本进行核型分析,再以vysis Spectra VysionTMM-FISH作为探针,检测并分析其复杂异常核型.结果表明M-FISH分析显示有明显的高频率染色体的易位、插入、断裂与重接、缺失、数目增多;染色体分析揭示核型为50,xx,der(1)t(1;2),ins(1;14),+der(2)t(2;19),der(3)t(3;5),der(3)(3522),5q-,der(6)t(3;6),der (7)(18717),+8,+der(9)t(1;9),der(10)t(1;10),+11,+12,der(?13)(101358),der(14)t(8;14),der(14)t(14,15),der(15)t(15;21)×2,+17,+18,-21,-22.结论MDS细胞株MUTZ-1在M-FISH检测下有显著复杂的核型变化;M-FISH能增加高度复杂的异常染色体检测的准确性,有助于MDS的诊断和预后评估.     

羟基喜树碱诱导人骨髓增生异常综合征细胞系MUTZ-1细胞凋亡及机制的研究

骨髓增生异常综合征（MDS）是造血干细胞克隆增生性疾病，近来发病率有上升趋势，需要不断探索有效的治疗药物。从珙桐科植物喜树中分离出的羟基喜树碱（HCPT）可诱导多种肿瘤细胞凋亡，对MDS的治疗未见相关报道。我们初步研究了HCPT对MDS细胞系MUTZ-1细胞的凋亡诱导作用及机制，以期为临床MDS治疗提供一定参考。     

纳米三硫化二砷对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1作用的实验研究

目的 探讨纳米三硫化三砷(As2S3)与传统剂型As2S3对人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1的生长抑制作用及其可能的机制.方法 用MTT法比较两种剂型的As2S3对MUTZ-1细胞的生长抑制作用;透射电子显微镜技术分析细胞形态和超微结构的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和周期的改变;发光比色法分析caspase-3活性.结果 2、4、8、16 μmol/L两种剂型As2S3分别处理MUTZ-1细胞48 h后,纳米As2S3对细胞的抑制率分别为48.9%、75.9%、89.4%和96.5%,而传统剂型As2S3组分别为14.5%、25.4%、34.7%和51.5%,两组相比差异有统计学意义(P值均<0.01);纳米As2S3组细胞凋亡率分别为(12.9±1.9)%、(19.2±2.2)%、(30.1±2.5)%和(45.9±2.3)%,而传统剂型As2S3组分别为(5.3±1.8)%、(11.1±2.6)%、(19.3±2.3)%和(25.5±2.5)%,两组相比差异也有统计学意义(P值均<0.01);纳米As2S3组G2/M期细胞比例、caspase-3活性明显高于传统剂型As2S3组(P<0.01),且以上各指标均呈浓度-时间依赖性.结论 两种剂型As2S3对MUTZ-1细胞均有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与G2/M期细胞阻滞以及caspase-3活化有关;与传统剂型的As2S3相比,纳米As2S3有更强的抗肿瘤作用.     

survivin、XIAP在骨髓增生异常综合征患者及其细胞株MUTZ-1中的表达及意义

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者及MDS-RAEB细胞株MUTZ-1凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP的表达和高三尖杉酯碱(HHT)诱导MUTZ-1细胞凋亡的作用机制.方法以47例初发MDS患者及15名异基因骨髓移植志愿供者为研究对象,应用RT-PCR方法检测survivin、XIAP mRNA表达;采用流式细胞术分析MDS-RAEB细胞系MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化,RT-PCR技术检测survivin、XIAP在MUTZ-1中的表达;研究survivin反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)和HHT对细胞增殖、凋亡的影响.结果 MDS患者survivin mRNA 总阳性率高于正常对照组(分别为38.3%和0,P<0.01),高危组(RAEB、RAEB-t、CMML)阳性率高于低危组(分别为53.6%和16.7%,P<0.05).MDS患者及正常对照均表达XIAP,但表达水平不同,其中低危组XIAP mRNA(0.74±0.24)低于正常对照组(1.01±0.28)(P<0.05),高危组XIAP mRNA表达(1.55±0.34)高于低危组及正常对照组(P值均<0.01).HHT能诱导MUTZ-1细胞凋亡,凋亡率与作用浓度和时间呈正相关,细胞被阻滞在G2期;HHT作用MUTZ-1细胞6?h后细胞内survivin 表达下调,而XIAP表达无明显变化.survivin AS-ODN能明显抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡,并提高MUTZ-1细胞对HHT的敏感性.结论凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP表达在MDS的不同阶段的改变可能与MDS的发生及发展有关.HHT能诱导MUTZ-1细胞凋亡,且能使凋亡蛋白抑制因子survivin mRNA下调,可能是HHT诱导MUTZ-1细胞凋亡的机制之一.     

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征

细胞凋亡与骨髓增生异常综合征肖志坚郝玉书骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是一组起源于髓系定向干细胞或多能造血干细胞的异质性克隆性疾患［１］，主要特征是无效造血和高危演变为急性髓系白血病（ＡＭＬ）。近年不少作者研究了细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）与ＭＤＳ的...     

三氧化二砷诱导MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控研究

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导人类骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型（MDS—RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控机制，采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP—ELISA）检测端粒酶活性；RT—PCR法检测端粒酶逆转录酶（hTERT）、TRF1（TTAGGG repeat binding factor 1）、TRF2（TTAGGG repeat binding factor 2）、bcl-2、bax等基因mRNA水平的表达；磷脂酰丝氨酸（PS）转位等方法检测细胞凋亡，结果表明：1—8μmol／L As2O3诱导MUTZ-1细胞凋亡呈时间、浓度依赖关系。在该浓度范围内，As2O3可下调细胞端粒酶活性。且端粒酶活性下调与凋亡细胞阳性率呈明显负相关（r=一0．938，P=0．018）。MUTZ-1细胞经As，01作用后，hTERT基因mRNA表达下调，并与端粒酶活性变化呈正相关（r=0．783，P=0.022），但As2O3对TRF1及TRF2基因mRNA表达没有明显影响.MUTZ-1细胞端粒酶活性受抑制同时，伴有bcl-2 mRNA表达下调及bcl-2／bax比值下降结论：As2O3可能通过抑制细胞端粒酶活性及hTERT表达，诱导MUTZ-1细胞凋亡。As2O3抑制MUTZ-1细胞端粒酶活性可能是诱导该凋亡机制之一。     

藤黄酸对MUTZ-1细胞生长抑制作用及其机理研究

本研究旨在探讨藤黄酸对高危组骨髓增生异常综合征（MDS）细胞的生长抑制作用及其机制。以人MDS-RAEB细胞株MUTZ-1细胞为研究对象,采用MTT法测定增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,用RT-PCR检测bax／bcl-2基因表达。结果表明,藤黄酸对MUTZ-1细胞有生长抑制作用,在0．2-0．8μg/ml浓度范围内随着药物浓度的增加MUTZ-1细胞的增殖抑制率增高;流式细胞学检测发现,藤黄酸浓度0、0．4、0．6、0．8μg／ml引起的MUTZ-1凋亡率分别为（5±0．5）％、（13±0．5）％、（37±0．7）％和（56±0．6）％,而且凋亡率随着药物浓度增加而增加（P〈0．05）。bcl-2基因表达程度随藤黄酸剂量增加而减弱,而baxmRNA表达无明显变化。结论：藤黄酸通过诱导MUTZ-1细胞凋亡、下调bcl-2基因表达而抑制该细胞生长,这可能是藤黄酸抗肿瘤的主要机制之一。     

丙戊酸钠抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡与分化

为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标;应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示:VPA能明显抑制HL-60的增殖;经2mmol/L VPA处理24-48小时后,HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体;Annexin V阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%;流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰;G1期细胞由51.1%增加至84.6%,S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/L VPA作用1周后,促进HL-60细胞向中幼粒、晚幼粒阶段分化,NBT阳性细胞百分率为(47±2)%。结论:VPA能明显抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其分化及凋亡。     

非生长因子依赖的MDS细胞系的建立及其生物学特性研究

本研究的目的是从骨髓增生异常综合征-慢性粒-单核细胞白血病(MDS—CMML)病人获取骨髓细胞，建立非生长因子依赖的细胞株。该细胞株在不添加任何生长因子的含15％胎牛血清的RPMI 1640和DMEM混合培养液中进行了培养，并分别从细胞株的形态、细胞表面抗原分子、细胞增殖、分化、凋亡等方面检测其生物学特性。结果表明：在不添加任何生长因子的培养条件下该细胞株可以长期存活和生长，并能向单核及巨核细胞分化。结论：成功建立了一株非生长因子依赖的MDS—JSN04(MDS-江苏南京04)细胞株，并阐明了其部分生物学特性。     

亚硒酸钠和三氧化二砷诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡机制的比较

为比较亚硒酸钠（Na2SeO3）和三氧化二砷（As2O3）诱导NB4细胞凋亡的作用机制，本研究应用MTT实验、DNA琼脂糖电泳，细胞内DNA含量检测研究细胞生长抑制和细胞凋亡，用化学发光法，化学比色法检测细胞内活性氧和还原型谷胱甘肽，用流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位，结果显示：5μmol/L亚硒酸钠和1μmol/L三氧化二砷作用24小时后均能诱导NB4细胞凋亡。在诱导细胞凋亡的过程中，亚硒酸钠和三氧化二砷组均伴有细胞内活性氧水平的提高和线粒体膜电位下降，但在亚硒酸钠组还伴有细胞内还原型谷胱甘肽下降，用N乙酰半胱氨酸提高细胞内还原型谷胱甘肽后，增强了硒诱导NB4细胞细胞和氧化应激的作用，但是抑制了砷诱导细胞凋亡和氧化应激的作用。结论：亚硒酸钠和三氧化二砷同样可以诱导NB4细胞的凋亡，但是二的作用机制可能存在差异。