细菌检测方法研究进展

传统上,细菌的检测方法先将标本进行培养,分纯,配制成一定浊度的细菌浓度,再进行各种不同生化反应,最后综合所获得的生化结果实现对细菌的鉴定。该方法影响因素多、操作繁杂、仪器设备要求高、检测周期长、对技术人员专业技能要求高,甚至因个别细菌生长的特殊要求而无法得到鉴定结果。目前,特异酶的使用、质谱技术的应用和生物传感器等新型技术的应用,使得细菌的检测方法在鉴定技术、免疫技术以及分子生物学方面也取得了新的进步,进而大幅缩短细菌鉴定周期,实现了无需分纯即可鉴定细菌和实现了高通量检测细菌。     

肠侵袭性大肠埃希菌血清型菌株侵袭力的鉴定方法

肠侵袭性大肠埃希菌 (EIEC)生物学特性酷似志贺菌 ,传统的主要鉴定依据是细菌生化反应特征和血清型 ,并用动物实验确证其毒力。但细菌血清型结果并不足以鉴定EIEC[1 ] ,而Sereny实验需饲养实验动物 ,应用不便。检测与菌株侵袭力有关的基因则是鉴定EIEC侵袭力的简便方法[2 ] 。本研究对杭州地区分离的属EIEC血清型的大肠埃希菌株 ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术检测与侵袭力有关的ipaH基因 ,同时进行菌株生化特性分析和Sereny实验 ,并与志贺菌株的试验结果进行比较 ,以探讨分子技术检测侵袭力基因、Sereny实验检测侵袭力表型、菌株特…     

血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏试验的评价

目的 比较直接法与常规法对血培养阳性标本进行细菌鉴定及药敏试验的一致性,探讨直接法菌种鉴定及药敏试验的可行性.方法 将血培养仪报警的阳性标本涂片革兰染色镜检,依据染色结果选择不同鉴定卡,直接上机进行菌种鉴定及药敏试验,同时将阳性标本转种平板分离培养,分纯后的菌落按常规法上机鉴定及药敏试验,并对两种方法检测结果进行比较.结果 两种方法细菌鉴定总一致率为93.5％,其中G-菌鉴定一致率为95.4％,G球菌一致率90.9％;药敏试验总符合率达94.6％.结论 直接法菌种鉴定及药敏试验明显缩短了检测时间,且与常规法检测结果符合率高,为临床尽早抗感染治疗提供了重要依据.     

应用通用寡核苷酸芯片技术检测病原菌的初步研究

常规的细菌检测通常包括细菌的分离培养、染色和生化鉴定 ,常规方法通常需要 2 4ｈ左右才能获得较确切的结果 ,会延迟正确的诊断和治疗 ,因此对于临床而言 ,建立一种快速且特异性强的微生物检测方法是十分必要的。生物芯片是一种新兴的高通用技术 ,在面积较小的载体 ,如玻片上可以实现对多种目标基因的同时检测[1 ] 。本研究对利用寡核苷酸芯片技术实现病原菌的通用检测的可能性进行了探讨。一、材料与方法1 .试验菌株 :标准菌株由本所菌种保藏中心提供 ;细菌模板ＤＮＡ提取按照ＮａＩ裂解 玻璃粉吸附法进行[2 ] 。2 .引物及探针设计 :2条通…     

细菌微量快速生化鉴定方法学研究

目的建立细菌微量快速生化鉴定系统,用于临床实验室细菌学的快速诊断。方法应用所研制的27种微量快速生化反应试剂与传统试管方法检测208株临床分离菌及8种质控菌株生化反应符合率,依据杭州24 h的JY Z-15E及JY Z-11E肠杆菌生化编码鉴定管的项目要求组合了该法的肠杆菌15种(RE 15n)及肠杆菌11种(RE 11n)生化鉴定试验条,用208株临床分离菌及8种质控菌菌株进行鉴定试验。结果27种细菌微量快速生化反应试剂与传统试管法生化反应总符合率为93.5%~100%。对208株临床分离菌及8株质控菌的菌种鉴定,其完全符合率15种(RE 15n)为99.9%,11种(RE 11n)为100%。8种质控菌株鉴定完全正确。结论用细菌微量快速生化反应系统鉴定细菌,具有简单、快速的特点,无需特殊设备,成本低廉,所得结果准确、可靠,能够满足临床需要。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在快速检测病原菌中的研究进展

摘要：传统的临床微生物学检验依赖于长时间的对病原菌的分离、培养及复杂的生化鉴定,有些病原微生物的生化反应不典型则难以准确鉴定。分子生物学技术如PCR技术要求较高,常规实验室不易开展。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）作为一种跨学科的检测新技术,在细菌和真菌的快速鉴定、细菌的耐药性检测、流行病学分析方面呈现出较传统鉴定法较多的优势。     

Vitek 2 Compact系统鉴定临床少见疑难细菌的应用及评价

目的回顾分析室间质评1304号菌株的鉴定过程,评价Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact系统)在临床少见疑难细菌鉴定中的应用。方法采用传统的细菌形态学检查、手工生化反应及Vitek 2 Compact系统等多种手段对1304号菌株进行鉴定分析,同时用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪对最终鉴定结果进行佐证。结果 1304号菌株为革兰阴性小杆菌,氧化酶试验阳性,初次上机鉴定结果为支气管炎鲍特菌,鉴定率99%,转种分纯后2次上机鉴定结果为低分辨,粪产碱杆菌占51%,类产碱假单胞菌占49%,补充硝酸盐还原试验,结果为阴性,报告最终鉴定结果为粪产碱杆菌,质谱鉴定得分值为2.158,与最终结果相符。结论 Vitek 2 Compact系统鉴定临床少见疑难细菌有一定局限性,遇到少见疑难细菌应该用多种方法加以确定,综合分析以免造成错误鉴定。     

一起沙门氏菌食物中毒的病原学分析

目的用传统的鉴定方法和细菌生化鉴定系统检测手段相结合,对一起食物中毒进行病原学分析。方法按照GB／T47892003（（食品卫生微生物学检验》和WS／T13—1996（（沙门氏菌食物中毒诊断标准及处理原则》进行检验分离病菌,用传统方法结合细菌生化鉴定仪检测手段,同时测定患者血清效价,结合流行病学调查、临床资料分析中毒原因。结果在两份食品中分离到可疑菌,经传统生化分型和血清学试验,采用ATB细菌鉴定仪鉴定,为韦太夫雷登沙门氏菌。测定4份患者血清效价,恢复期滴度均高于急性期4倍以上。结论综合流行病学调查、l临床资料和实验室检测结果,证实本起食物中毒由韦太夫雷登沙门氏菌引起。     

肠杆菌科细菌生化鉴定系统的研制及评价

目的 研制肠杆菌科细菌生化鉴定系统并对其性能进行评价。方法 将自行研究的生化基质置聚苯乙烯条中脱水制干组合成鉴定条，辅以细菌编码技术对13株标准菌株、56株质控菌株和127株临床菌株进行鉴定，并与AP120E和微量生化管方法鉴定结果进行比较。结果该系统鉴定13株标准菌株和56株质控菌株的准确率达98．5％，与AP120E同时鉴定127株临床菌株符合率达96．8％（P〉0．05），与微量生化管方法比较，生化反应结果的符合率达97％（P〉0．05）。结论 该系统能准确、快速、简单、经济地鉴定肠杆菌科细菌。     

自动微生物分析快速链球菌生化鉴定系统鉴定猪链球菌的检测结果评价

目的采用自动微生物分析快速链球菌生化鉴定系统(ATBRapid32Strep)鉴定链球菌,并与国际公认细菌鉴定精标方法API20Strep(链球菌鉴定生化系统)比较,评价检测速度和准确性,使临床微生物室能正确使用ATBRapid32Strep鉴定系统,快速、准确鉴定出各种链球菌,及时为临床提供病原学依据。方法从患者血液、脑脊液,猪心、猪肉等标本中分离出形似链球菌的细菌再次分离分纯,转种于血平板上,置CO2培养箱,35℃24h培养后,用ATBRapid32Strep和API20Strep、传统手工方法分别对18株细菌进行鉴定和药敏试验。结果ATBRapid32Strep鉴定出16株猪链球菌Ⅱ型,2株牛链球菌Ⅱ型;API20Strep鉴定出17株猪链球菌Ⅱ型,1株不能鉴定;传统手工鉴定18株均为D群非肠球菌。这18株菌对氯霉素、克林霉素、红霉素、左氧氟沙星、青霉素、奎奴普叮/达福普叮、头孢噻肟、复方新诺明、万古霉素均敏感,对四环素耐药。结论ATBRapid32Strep4h能鉴定出猪链球菌,与API20Strep鉴定符合率为94.4%,是一种操作简单、快速、准确的细菌鉴定系统,能快速为临床提供感染性疾病病原学信息,满足临床医生和微生物检验人员工作需要。     

细菌rDNA分类鉴定的方法学研究

目的 研究细菌rDNA快速鉴定方法.方法 以细菌16S rDNA、16S-23S rDNA基因间隔区（ISR）和常见细菌耐药基因为对象,通过改进标本中细菌DNA提取方法,指纹分析、直接测序与多重聚合酶链反应（PCR）技术,建立快速细菌分子鉴定方法.结果 细菌属种不同表现出独特的16S-23S rDNA ISR指纹,在分析软件指导下进行初步细菌鉴定和亲缘关系研究;16S rDNA和16S-23SrDNA ISR序列可确定细菌种与型;序列分析与生化鉴定一致.多重PCR可解决葡萄球菌16S rDNA与mecA基因、产超广谱β内酰胺酶菌16S rDNA与TEM和SHV基因同步检测.结论 细菌rDNA分类方法,提高了非培养细菌的鉴定能力.     

MALDI-TOF 质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用

目的：探讨两种质谱仪 Biotyper MS 和 Vitek-MS 系统在临床常规分离细菌鉴定中的应用价值。方法收集沈阳军区总医院2012年3月至2013年1月分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物和痰液等标本的临床常见菌细菌149株（包括14个菌属和30个菌种）。同时采用两种 MALDI-TOF-MS 系统对上述菌株进行鉴定,结果与 Vitek2 compact 常规生化鉴定进行比较,对3种方法检测结果不一致菌株用16S rRNA 测序进行确认。结果在149株常见细菌中,Bruker Biotype 属和种的正确鉴定率分别为98％和96％,Vitek-MS 属和种的正确鉴定率分别为97％和95％。两者均无错误鉴定菌株。结论对该组常见细菌,两种质谱仪鉴定结果比较差异无统计学意义（P ＞0．05）,均呈现出优异的鉴定水平,适合用于临床微生物的常规鉴定。     

M46CN Campylobacter乳胶凝集试验检测弯曲菌的评价

摘要：目的：评价M46CN Campylobacter乳胶凝集试验检测弯曲菌的性能。 方法：用M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对临床373份粪便标本及其48 h培养分离菌进行直接检测和鉴定,以API Campy生化鉴定、革兰染色、氧化酶和动力试验（简称常规鉴定）结果为标准,评价M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对标本直接检测和分离菌鉴定结果的性能。 结果：M46CN Campylobacter乳胶凝集试验对373份粪便标本进行直接检测,阳性61例,阴性312例,其检测敏感性为80.8％,特异性为99.3％,阳性预测值为96.7%,阴性预测值为 95.5％,诊断效率为95.7%。与标准方法鉴定结果相比,经Kappa一致性检验,Kappa=0.854 7,u=16.596 1,P<0.01。对373份粪便标本的分离菌进行鉴定,Campylobacter阳性73例,阴性300例,其检测敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率均为100%。 结论：M46CN Campylobacter乳胶凝集试验直接检测粪便标本与标本培养后经标准生化反应鉴定结果具有良好一致性,对培养物中弯曲菌鉴定与标准的生化鉴定结果完全符合,其敏感性和特异性高,适合临床常规鉴定弯曲菌属细菌使用。     

传统方法在临床细菌学鉴定中的作用

微生物分析仪的使用加强了传统细菌学鉴定的薄弱环节 ,同时通过细菌形态、染色性等确认 ,保证了仪器鉴定的准确性。近十年来 ,随着检验医学的发展 ,临床细菌学检验日益受到重视 ,我们应充分发挥传统方法和先进仪器的优势 ,促进临床细菌学检验技术的进一步提高。1.分离培养是临床细菌学不可缺少的基本技术 ,是获得纯培养物 (纯菌 )的必要手段 ,即使自动化仪器再先进也只能对纯菌做出鉴定。对细菌生长繁殖特性的观察也是必不可少的。需氧菌、兼性厌氧菌和厌氧菌通过常规培养方法容易区别 ,否则容易把兼性厌氧菌当厌氧菌鉴定。细菌对营养的要求…     

全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验比较

目的探讨全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验的临床应用价值和与常规法(转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏试验)的符合率。方法将血培养阳性标本的培养液混匀于专用接种水中,再接种于专用鉴定扳上直接上机做细菌鉴定和药敏试验,并与转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏结果进行比较。结果74份血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果符合率达94.4%以上,血培养阳性的标本直接上机与转种菌落上机的药敏试验结果符合率>95%。而直接法比常规法提前了近24h。结论对血培养阳性标本进行直接鉴定及药敏试验缩短了检验时间,为菌血症的治疗争取了时间,而且与常规法的实验结果符合率高。     

MALDI-TOF质谱仪在临床常见细菌鉴定中的应用

目的 探讨两种质谱仪Biotyper MS和Vitek-MS系统在临床常规分离细菌鉴定中的应用价值。方法 收集沈阳军区总医院2012年3月至2013年1月分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物和痰液等标本的临床常见菌细菌149株(包括14个菌属和30个菌种)。同时采用两种MALDI-TOF-MS系统对上述菌株进行鉴定,结果与Vitek2compact常规生化鉴定进行比较,对3种方法检测结果不一致菌株用16Sr RNA测序进行确认。结果 在149株常见细菌中,Bruker Biotype属和种的正确鉴定率分别为98%和96%,Vitek-MS属和种的正确鉴定率分别为97%和95%。两者均无错误鉴定菌株。结论 对该组常见细菌,两种质谱仪鉴定结果比较差异无统计学意义(P>0.05),均呈现出优异的鉴定水平,适合用于临床微生物的常规鉴定。     

细菌污染对酶促动态负反应测定影响

酶促动态负反应是酶活性测定方法之一,其灵敏、特异、重复性好和简便易行适于常规分析。随着生化自动分析仪和干粉酶试剂在基层检验科普遍应用,酶促动态负反应在酶类测定应用比重逐年上升,成为目前生化测定应用中最多方法。干粉酶试剂复港过程要求用去离子、无菌、无微粒高纯水。困于认识不足或条件困难,基层人员在复溶过程有可能遭受细菌污染,从而影响酿类测定的质量。为了了解细菌污染酶试剂对酶促动态负反应的影响,本文对AST测定作了观察。现报告如下：1材料和方法1．1细菌培养检测对象本科仪器测定项目复溶试剂、仪器液路系统液…     

MALDI-TOF MS在中段尿样本细菌直接检测中的应用

目的运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定系统对中段尿样本中的细菌进行直接快速检测,以建立快速的细菌检测方法便于临床应用。方法 692例中段尿样本接种于固体培养基上,利用MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对单个菌落进行鉴定;同时对尿液样本进行前处理后直接进行质谱分析。结果 692例中段尿样本中,98例单一菌感染且细菌数104CFU/m L的样本应用MALDI-TOF MS直接检测出74株菌,检出率达75.5%,其中大肠埃希菌39株,检出率达79.6%;粪肠球菌23株,检出率为100.0%;摩根摩根菌5株,检出率为100.0%。64例样本为2种菌混合感染,采用MALDI-TOF MS直接检测出44例样本中的1种优势细菌。质谱直接检测尿液的鉴定结果与单菌落质谱鉴定结果及Vitek 2 Compact鉴定结果完全一致,符合率为100.0%。结论 MALDI-TOF MS可用于直接检测尿液样本中的细菌,检出率高,结果可靠;MALDI-TOF MS对混合菌感染的样本有一定鉴定能力;该方法可比常规尿培养鉴定方法提早42 h报告鉴定结果,是对临床尿液样本细菌鉴定的一大革命性进步。     

全自动细菌鉴定仪直接鉴定血培养阳性标本的临床应用

目的探讨全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定和药敏试验的临床应用价值及其与常规法（转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏试验）的符合率。方法将血培养阳性标本的培养液混匀于专用接种水中，接种于专用鉴定板上直接上机做细菌鉴定和药敏试验，并与转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏结果进行比较。结果86例血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果差异无统计学意义（P〈0．01），血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机的药敏试验结果符合率大于95．5％。而直接法比常规法约提前24h。结论对血培养阳性标本进行直接鉴定及药敏试验缩短了检验时间，为菌血症的治疗争取了时间，且与常规法的实验结果符合率高。     

MALDI-TOF MS在临床微生物检测中的应用

目的探讨应用基质辅助激光解吸电离飞行时间技术质谱(MALDI-TOF MS)在临床微生物快速检测中的应用价值。方法收集新疆昌吉回族自治州人民医院近两年的分离菌株525株,分别分离自痰、尿、血液、分泌物、脓液等临床标本,其中革兰阴性(G-)细菌225株,革兰阳性(G+)细菌225株,酵母菌75株。将MALDI-TOF MS与VITEK2 Compact全自动微生物分析系统(VITEK2 Compact)鉴定结果进行比较。结果 G-细菌鉴定符合率为96.4%(217/225),G+细菌鉴定符合率为94.2%(212/225),酵母菌鉴定符合率为94.7%(71/75)。结论 MALDI-TOF MS技术快速、简便、准确且价格低廉,在快速鉴定临床常见病原菌方面,尤其是在危重症患者的快速检测方面具有广阔的应用前景,为临床救治争取了宝贵的时间。然而目前该技术的应用仍有一定的局限性,其检测的准确性受被测菌纯度、实验操作等影响,且对某些菌种的鉴定准确性不高,对病毒检测的过程较复杂[1],因此MALDI-TOF MS技术仍需进一步的探索研究。