两种精子优选法对精子活率、尾部低渗肿胀率和形态正常精子百分率的影响

目的：评价Percoll密度梯度离心和上游精子分离方法对人精子活率、尾部低渗肿胀率和形态正常精子百分率影响。方法：收集12例男性不育症患者精液样本,分别采用Percoll密度梯度离心和上游精子分离方法(简称上游法)进行精子优选,应用伊红-Y染色分析优选前后精子活率和尾部低渗肿胀率,应用改良巴氏染色法分析优选前后精子形态。结果：①Percoll法和上游法优选后精子活率和尾部低渗肿胀率均明显高于优选前（P<0.01）,两种优选法间比较精子活率和尾部低渗肿胀率差异均无显著性（P>0.05）。Percoll法和上游法优选后B-G型精子尾部低渗肿胀率均明显高于优选前（P<0.01）,两种优选法间比较B-G型精子尾部低渗肿胀率差异均无显著性（P>0.05）。②Percoll密度梯度离心法和上游法优选后形态正常精子百分率均明显高于优选前（P<0.05）,上游法优选后形态正常精子百分率明显高于Percoll法优选后形态正常精子百分率（P<0.05）。上游法优选后锥型头、无定型头和颈/中段缺陷形态异常精子百分率均明显少于优选前（P<0.05）;Percoll法优选后锥型头、无定型头和尾部缺陷形态异常精子百分率均明显少于优选前（P<0.05）;上游法优选后无定型头、颈/中段缺陷和尾部缺陷形态异常精子百分率明显低于Percoll优选后（P<0.05）。结论：Percoll法和上游法优选后精子活率、尾部低渗肿胀率和形态正常精子百分率较优选前明显改善, 此两种优选法均可广泛应用于生殖医学,其中上游法优于Percoll法。     

两种精子优化法对精子动态、形态的影响比较

目的 探讨上游法和密度梯度离心法处理精液前后精子的动态、形态变化. 方法 对78例精液标本分别行上游法和密度梯度离心法优选,处理前后均用伟力精子分析系统和Diff-Quick快速染色法进行精子动态、形态分析. 结果 经两种方法优化后精子密度、活率、活力都有显著提高(P＜0.05),同时精子畸形率有显著降低(P＜0.05). 结论 两种精子优化法均可以提高精子质量,有助于IUI(宫腔内人工授精)助孕患者达到受孕目的 .     

3种精子优化处理方法处理精液效果评价

目的：为了解上游法、Percoll梯度离心法、Isolate密度梯度离心法等精子优化处理方法处理精液的效果。方法：选取120例女性原因引起继发不孕的夫妇,将男方的精液标本按处理方法不同随机分4组,即为上游组、Percoll组、Isolate组和对照组,应用指标精子密度、a＋b级活力、正常形态率和绿色荧光精子百分率,对精液处理后的效果进行比较。结果：上游组、Percoll组和Isolate组,富集的精子a＋b级活力、正常形态率、绿色荧光精子明显高于对照组（P〈0.01）,Percoll组和Isolate组的精子密度与对照组无明显差异（P〉0.05）,但上游组的精子密度很明显低于对照组（P〈0.01） 上游组、Percoll组及Isolate组之间比较,富集的精子a＋b级活力、正常形态率没有明显差异（P〉0.05）,但精子回收Percoll密度梯度离心法和Isolate密度梯度离心法明显高于上游法（P〈0.01）,Isolate密度梯度离心法富集绿色荧光精子最多,上游法次之,Percoll密度梯度离心法最低。结论：Isolate密度梯度离心法处理精液效果较好。     

Pure Sperm梯度离心法和上游法处理精液效果的比较

目的　比较PureSperm(硅烷化硅胶悬浮液)梯度密度离心法和Earel’s液上游法处理精液在体外受精-胚胎移植(IVF -ET)中的应用情况。方法　4 5例丈夫精液密度(2 0～4 0 )×10 6/ml,a级精子比例<15 %或精液量少于1ml者用PureSperm处理,其余用Earel’s液上游法处理。结果　处理后两种方法均可以显著性提高精子的总活力、a级精子率。梯离组和上游组畸形精子率分别为:6 8 8% ,75 1% ,与处理前81 2 %比显著降低,但两种方法之间的降低程度无差别(P >0 0 5 )。梯离法在总活动精子回收率及a级精子的获得方面优于上游法(P <0 0 5 )。PureSperm组与上游组的受精率分别为6 8% ,70 1% (P均>0 0 5 ) ,无统计学差异,胚胎发育潜能:卵裂率、优胚率、着床率、临床妊娠率、流产率也均无统计学差异。结论　相对于稍差者的精液来说,用PureSperm梯度密度离心处理效果更佳;PureSperm对胚胎的毒性作用极小,不影响IVF -ET的结局,在IVF -ET技术中可以安全使用。     

利用微流控芯片技术进行人类精子优选的效果分析

目的:通过使用微流控芯片技术对男性不育症患者的精子进行选择,观察该方法优选精子的效果。方法:选择80例男性不育症患者,选择其中精子活力a级+b级<35%的患者30例,分别采用自行设计和制造的微流控芯片进行优选以及采用改良后的上游法进行优选,对于剩余50例患者采用微流控芯片法进行优选,观察优选后精子活力、畸形率等参数。结果:50例患者经过微流控芯片优选后,精子活力显著提高,精子畸形率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。对于30例中度弱精子症患者两种方法优选后精子活力显著提高、畸形率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且微流控芯片法优于改良后上游法。结论:微流控芯片法优选精子效率高、操作简便、对精子几乎无损害,适合在临床辅助生殖中普及和推广。     

3类洗涤法处理不同质量精液标本的效果比较及在IUI中的应用选择

目的:通过比较密度梯度离心法(density-gradient centrifugation,DGC)、上游法(swim-up,SU)和简单洗涤法(simple washing,SW)处理不同质量精液标本的效果,优选出最合适的宫腔内人工授精(Intrauterine insemination,IUI)精液洗涤方法。方法:选取男科实验室行精液常规检查的患者中收集精液量≥3 m L的精液标本90份,其中精子浓度15×10~6/m L的少精症患者精液标本23份,浓度与活力正常(浓度≥15×10~6/m L,PR≥32%且PR+NP≥40%)的精液标本67份,每份精液标本各取3个1 m L分别用密度梯度离心法、上游法和简单洗涤法处理。通过不同方法的洗涤处理,比较各组精子洗涤前后的浓度、活力(PR)及回收率。结果:3种处理方法洗涤后的PR较洗涤前均有显著提高(P0.05);在处理后的精子浓度方面,简单洗涤法处理要显著高于其余两类方法(P0.05);在处理后的PR和活率(PR+NP)方面,密度梯度离心法和上游法又要高于简单洗涤法(P0.05);在回收率方面,密度梯度离心法和简单洗涤法则显著高于上游法组(P0.05)。结论:在处理少精症患者精液标本时,上游法因其较低的回收率不适宜被采用;当精子浓度15×10~6/m L且精子总数小于正常值(39×10~6个)时,为保证处理后最终前向精子总数10×10~6个,精子标本不适合过多次数的洗涤处理,宜采用简单洗涤法;而只有当精液体积较大时,在保证IUI精子终浓度的同时,密度梯度离心法较简单洗涤法能更好地去除白细胞和不成熟生殖细胞等杂质,而更适宜被采用;在处理浓度活力正常精液标本时,密度梯度离心法和上游法较之简单洗涤法能获得更高的精子活力(P0.05)而更适宜被采用;同时,密度梯度离心法因较之上游法具有更高的回收率(P0.05),且具备操作易标准化和操作时间短等特点而更具实用价值。     

密度梯度离心加上游法处理对精子形态学的影响

目的 观察男性精液经密度梯度离心加上游法处理前、后精子形态学改变情况,探讨密度梯度离心加上游法对精子形态学的影响.方法 选择行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的93对不孕夫妇,男方精液在经密度梯度离心加上游法处理前、后分别进行精液常规检查,运用Diff-Quick精子形态分析法进行精子形态学分析.结果 经密度梯度离心加上游法处理后正常形态精子率显著增加,中段畸形精子率、混合畸形精子率与处理前比较有明显下降(P＜0.05).结论 经密度梯度离心加上游法处理可降低中段畸形精子率和混合畸形精子率,显著提高正常形态精子率.     

对人精子顶体反应率在优选及冷冻前后变化的实验研究

目的 旨在了解人精子顶体反应率优先及冷冻前后的变化。方法 应用甘油、甘油－卵黄、柠檬酸钠（GYC）及甘油－卵黄－柠檬酸钠－L－谷氨酰胺（GYCG）三种冷冻保护剂及上游法、Percoll密度梯度离心法及双曲管优选法，检测冻贮前后及优选前后人精子顶体反应率。结果 （1）人精子冻融后其顶体反应率在GYCG组无显著改变，而在甘油组、GYC组则明显下降；（2）在上游法、Percoll密度梯度离心法及双曲管优选法优选后顶体反应率均有显著增加。结论 冷冻复温使人类精子顶体反应率下降，GYCG对人类精子的顶体反应率有较好的保护作用；本研究中的三种优选方法均可增加精子顶体反应率。     

两种处理方法对精子顶体完整性和DNA损伤的影响

目的研究上游法和密度梯度离心法处理对精液常规参数、顶体完整性及DNA损伤的影响。方法 90例男性精液标本用上游法和密度梯度离心法处理,检测处理前后精液常规参数、精子顶体完整率及精子DNA碎片指数。结果两种方法处理后,精子浓度明显下降（P〈0.01）,精子活率、活力明显提高（P〈0.01）;正常形态精子比例和顶体完整率显著提高（P〈0.05）,DNA碎片指数显著降低（P〈0.01）,两种处理方法比较差异无统计学意义。结论两种处理方法均可以使顶体完整精子比例较处理前明显提高,DNA损伤精子比例较处理前明显降低,但两法之间无统计学差异。两种处理方法均可以不同程度优化精液质量,实验室可根据精液情况选择处理方法。     

精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响

目的:探讨精液冷冻前优化处理方式对不同精子活力的精子冷冻复苏效果的影响。方法:选取符合条件的标本50份,每份标本等分4份,以原液作为对照(A组),分别采用三种不同方式[洗涤法(B组)、上游法(C组)和密度梯度离心法(D组)]进行处理,再行精子冷冻复苏。比较不同精子活力标本在不同优化方法处理后的精子冷冻复苏率。结果:精子冷冻复苏率由高至低排序为A组C组D组B组。B组和D组精子冷冻复苏率均显著低于A组(P0.05),C组与A组比较差异无统计学意义(P0.05)。低活力(前向运动精子PR≤32%)标本中,各处理方式精子冷冻复苏率比较差异无统计学意义(P0.05)。正常活力(前向运动精子PR32%)标本中,B组精子冷冻复苏率显著低于其余三组(P0.05),A组、C组、D组三组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏率有影响,实际工作中,应根据精液的质量选择合适的精液冷冻前优化处理方式。     

精子形态学分析中染色方法的比较

目的：评价改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对形态正常精子率和顶体完整率检测结果影响。方法：分别采用改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对55例男性不育症患者精液涂片染色,计算形态正常精子率和顶体完整率。结果：①3种染色方法检测的形态正常精子率两两比较,差异均无显著性(P>0.05),瑞-吉染色法评价颈部和中段缺陷精子率及尾部缺陷精子率显著低于改良巴氏染色法和考马斯亮蓝染色法（P<0.05）。②3种染色方法检测的Ⅰ型、Ⅳ型顶体完整率两两比较,差异均无显著性 (P>0.05),改良巴氏染色法检测的Ⅱ型和Ⅲ型顶体完整率明显高于考马斯亮蓝染色法和瑞-吉染色法（P<0.05）。③3种染色方法检测的形态正常精子率间均呈显著正相关关系(r=0.535、P<0.01, r=0.601、P<0.01,r=0.329、P<0.05)。3种染色方法检测的顶体完整率间均呈显著正相关关系（r=0.604,P<0.01, r=0.682、P<0.01, r=0.446、P<0.01）。结论：3种染色方法均可作为检测人精子形态和顶体完整率实用方法,其中改良巴氏染色法更适于精子形态学分析,瑞-吉染色法更适于顶体完整率判读。     

精子DNA完整率、精子顶体完整率及反应率对补救卵泡浆内单精子注射术的影响

目的探讨精子DNA完整率、精子顶体完整率及反应率对补救卵胞浆内单精子注射（ICSI）结局的影响。方法回顾性分
析我院生殖中心行常规试管受精（IVF）失败需行补救ICSI的97对不孕不育夫妇,根据妊娠情况分为妊娠组（41例）及未妊娠组
（56例）,分析两组患者精子DNA完整率(用精子DNA断裂指数DFI表示)、精子顶体完整率及反应率对ICSI结局的影响。结果
两组患者男方年龄、睾酮值、睾丸体积、FSH值、女方年龄、获卵数均无显著差异（P>0.05）,但不育年限未妊娠组长于妊娠组,差
异有统计学意义（P<0.05）。两组患者行补救ICSI时受精率及卵裂率无显著差异（P>0.05）,但优胚率妊娠组高于未妊娠组,差异
有统计学意义（P<0.05）。两组精子DNA完整率（DFI）、顶体反应率均无显著差异（P>0.05）,但顶体完整率妊娠组高于未妊娠
组,差异有统计学意义（P<0.05）;精子DNA完整率、顶体完整率、顶体反应率分别与受精率、卵裂率、优胚率均无显著相关性（P>
0.05）。补救ICSI临床妊娠率为42.3%,双胎率为10.3%,单胎率为32.0%。结论补救ICSI是体外受精-胚胎移植受精失败后有
效的补救方案,精子顶体完整率与其妊娠结局相关。
     

不同染色方法对精子形态学评估的影响

目的:探讨Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法对精子形态学评估的异同性及相关性。方法:对80例标本分别涂片两张,利用Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法分别进行染色,并记录同一标本不同染色方法其正常精子百分率、头部缺陷精子百分率、颈部和中段缺陷精子百分率、尾部缺陷精子百分率、畸形精子形态指数(TZI)、精子畸形指数(SDI)等。结果:Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法在精子形态评估中,正常形态率、各种类型的缺陷率(头部、颈部与中段、尾部)、畸形精子指数、精子畸形指数等均无统计学意义(P>0.05)。结论:Diff-Quik染色法及改良巴氏染色法在精子形态评估中具有较为一致的结果;改良巴氏染色法虽经典,但过于繁琐;在病人多且急需出具精子形态学检验报告的情况下,可以考虑使用Diff-Quik染色法作为精子形态评估染色方法。     

梗阻性无精子症患者附睾精子DNA损伤与卵胞浆内单精子注射治疗结局的相关性研究

目的检测梗阻性无精子症(OA)患者附睾精子DNA损伤情况,并与后续卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗结局进行对照分析。方法选取OA患者121例(OA组),均拟行ICSI治疗;另选取配偶于1年内自然受孕,且精液参数正常范围的38份精液标本作对照组。OA组患者进行经皮附睾精子抽吸术后镜检分析,对照组进行常规精液分析,同时进行穿刺液/精液吖啶橙试验。以精子DNA损伤指数(DFI)<30%为正常,两组进一步分为高DFI亚组(DFI>30%)和低DFI亚组(DFI<30%)。对OA组患者后续ICSI治疗的受精率、临床妊娠率等指标进行统计分析。结果 OA组整体精子密度、前向运动精子比例显著低于对照组整体(均P<0.01);OA组两个DFI亚组间精子密度差异无统计学意义(P>0.05),但高DFI亚组前向运动精子比例显著低于低DFI亚组(P<0.01);OA组与对照组整体相比,吖啶橙(AO)试验阴性率较低(P<0.01);OA组患者的ICSI治疗结局,高DFI亚组与低DFI亚组受精率差异无统计学意义(P>0.05),而高DFI亚组临床妊娠率显著低于低DFI亚组(P<0.01)。结论 ICSI前对精子DNA进行评估十分必要。OA患者通过对诊断性经皮附睾精子抽吸术获取的附睾精子进行DNA损伤分析,是预测ICSI结局的有效方法。     

精索静脉曲张高位结扎与转流对精子的影响

目的:探讨精索静脉曲张采用高位结扎与转流对精子的影响。方法:对2009年9月～2011年10月收治的67例精索静脉曲张的患者采用精索内高位结扎与转流治疗,比较患者手术前、手术后3个月、手术后6个月精子密度、精子活动度与精子畸形率的变化。结果:患者在手术后3个月、手术后6个月的精子密度、精子活动率和精子活力均比手术前有显著的提高(P<0.05);手术后3个月精子各指标与手术后6个月比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:精索静脉曲张采用高位结扎手术能够有效提高精子质量,值得在临床推广使用。     

冷冻对供精者精子多重缺陷指数的影响

[摘要] 目的 探讨供精者精子冷冻前后多重精子缺陷指数的变化,了解冷冻保存对人精子受精能力的影响。方法 26例供精自愿者精液取出后,按照世界卫生组织推荐的方法行精液常规分析。入选精液行改良巴氏染色,记录精子头、中段和尾部缺陷,计算畸形精子指数（TZI）和精子畸形指数（SDI）。涂片后精液冷冻保存,一个月后复苏,涂片染色,再次计算TZI和SDI。结果 供精者精子冷冻前后TZI、SDI、头部缺陷率、中段缺陷率、尾部缺陷率比较差异均无显著性（P﹥0.05）。结论 冷冻过程不会造成TZI和SDI显著下降,能够较好地保留精子的受精能力。     

少精子症、弱精子症和畸形精子症患者精子凋亡率比较

目的：比较少精子症、弱精子症和畸形精子症患者精子凋亡率。方法：应用计算机辅助精液分析（CASA）对生育组(n=14)、不育组［(n=48),少精子症(精子密度<10×10^６•mL^-1)11例、弱精子症(a+b级精子百分率<50%)25例、畸形精子症(形态正常精子百分率<14%)12例］进行精液参数检测,瑞-姬染色检测精子凋亡率。结果：不育组及不育组中的少精子症组精子凋亡率均明显高于生育组（P<0.05）;弱、畸形精子症组精子凋亡〖JP3〗率与生育组比较差异均无显著性（P>0.05）。密度异常组(精子密度<20×10⁶•mL^-1)精子凋亡〖JP〗率明显高于密度正常组(精子密度≥20×10⁶•mL^-1)（P<0.05）;a+b级异常组(a+b<50%)精子凋亡率与正常组比较差异无显著性（P> 0.05）;精子形态异常组(形态正常精子<14%)凋亡率与正常组比较差异无显著性（P> 0.05）。结论：不育组精子凋亡率高于生育组,尤其是少精子症患者精子凋亡率增加更明显。