心包穿刺简易装置在基因转染中的应用

目的探讨自制心包穿刺装置转染心脏的安全性、可行性。方法应用磷酸钙沉淀方法制备携带大肠杆菌LacZ基因复制缺陷的重组腺病毒(Ad-LacZ),将12头中国小型猪分为实验组和对照组,采用球囊堵塞前降支第一对角支远端,心肌梗死模型建立后即刻,采用自制简易心包腔穿刺装置经皮剑突下穿刺,成功后置中心静脉导管于心包腔内并行转染,28 d后处死。实验组:胶原酶1200 U及透明质酸酶3000 U预处理心包后,在心包腔内注射Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u;对照组:同样方法预处理心包后,在心包腔内注射生理盐水1 mL。于注射后3、7及28 d分别对缺血心肌进行染色及病理观察。结果冠状动脉造影证实前降支远端完全闭塞,病理显示心肌有缺血和梗死;实验组注射Ad-LacZ基因后第3、第7天及28d后X-gal染色有阳性细胞,以第7天最明显,对照组无阳性细胞。结论自制的心包腔简易穿刺装置将腺病毒载体转染至缺血心肌是安全的,可行的,并且腺病毒可持续表达4周。     

体内转染基因在帕金森病治疗中的应用前景

<正>近年来,帕金森病(Parkinson's Disease,PD)的基因治疗动物实验已经取得可喜成果,尽管尚无被认可的临床资料,但灵长类动物的实验成果已开始逼近临床应用。尤其是基因治疗所获得的神经支持和神经再生效果,具有不可低估的应用前景。PD的基因治疗主要通过两种途径实现:一是体外转染细胞的脑内移植(exvi-vo)。另一种是通过脑内注射在体转染靶细胞(invivo);两种途径的转染过程不同,而分子生物学基础基本一致。本文就体内转染途径和方法作一简要综述。     

降钙素基因相关肽基因体外转染人脐静脉内皮细胞

目的 观察逆转录病毒载体介导的降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ，ＣＧＲＰ）基因对人脐静脉内皮细胞的作用，探讨其应用于动脉粥样硬化和经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄基因治疗的可行性。方法 构建含有ＣＧＲＰｃＤＮＡ的逆转录病毒载体，体外转染人脐静脉内皮细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ及放射免疫法分析检测基因表达水平，应用细胞计数及流式细胞仪观察ＣＧＲＰ基因对内皮细胞生长的     

ANF基因转染人血管平滑肌肉瘤细胞及其表达的实验研究

通过对体外传代培养的人血管起源平滑肌肉瘤细胞进行直接和脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的人心钠素（ＡＮＦ）基因表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ转染,并以非同位素地高辛标记的ＲＮＡ分子探针对转染细胞中的ＡＮＦｍＲＮＡ水平进行ＲＮＡＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测,同时利用放射免疫方法测定转染细胞培养上清中的ＡＮＦ含量。结果显示,与未经脂质体Ｔｆｘ５０包裹的ｐｏＤＮＡ３／ＡＮＦ直接进行细胞转杂及低浓度质体Ｔｆｘ－５０包裹     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87凋亡的影响

目的：研究外源性抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87凋亡的影响,探索膀胱癌基因治疗的新途径.方法：将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染BIU-87细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测PTEN的表达情况,应用细胞原位凋亡检测试剂盒和流式细胞仪分别研究PTEN基因转染前、后膀胱癌细胞凋亡的变化.结果：转染PTEN基因的膀胱癌细胞系BIU-87中PTEN mRNA能稳定表达,肿瘤细胞凋亡明显增多,与对照组比较有显著性差异.结论：转染外源性PTEN基因能显著诱导膀胱癌细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的.     

IL—2和IL—3基因共转染白血病细胞的体内外生物学特性

目的：研究细胞介素２（ＩＬ－２）、白细胞介素３（ＩＬ－３）基因共转染瘤苗的体现人外生物学特性。方法：用ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）、ＩＬ－３重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－３）转染ＦＢＬ－３红白血病细胞株，观察其体外增殖能力及体内致瘤性的变化。结果：ＩＬ－１、ＩＬ－３共转染的ＦＢＬ－３细胞１周内能较稳定地分泌ＩＬ－２和ＩＬ－３，体外增殖能力无明显变化，但体内致瘤性明显下降，ＩＬ－２、ＩＬ－３共转染     

转染p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响

目的 探讨p16基因对人膀胱癌细胞周期的影响。方法 通过脂质介导的基因转移技术将野生型P16基因导入人膀胱癌细胞系T24中,绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果 与对照组相比,转染p16基因的膀胱癌细胞生长速率降低,流式细胞仪检测显示S期及增殖指数明显降低。结论 p16基因能阻止肿瘤细胞进入S期,抑制肿瘤细胞DNA的合成,对膀胱癌细胞生长起明显抑制作用。     

人胰岛素基因在NIH3T3细胞中的基因转染和表达

目的　研究人胰岛素基因在体外培养的小鼠成纤维细胞系的基因转染和表达。方法　采用壳聚糖转染法将重组的人胰岛素基因表达质粒转染鼠成纤维细胞 (NIH3T3) ,转染后 72h ,经G4 18抗性筛选出阳性克隆并培养到第 2 4d ,用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达 ,同时用ELASA法监测转染后 2 4d的细胞培养液的胰岛素水平。结果　转染PCMV .INS的NIH3T3细胞培养液的胰岛素水平明显高于未转染组 (P <0 .0 1)及PCMV转染组 (P <0 .0 1) ,未转染组与PCMV转染组细胞培养液的胰岛素水平无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论人胰岛素基因在NIH3T3细胞系的转染成功和表达说明基因治疗有望成为 1型糖尿病的重要治疗手段 ,壳聚糖是一种很有前途的胰岛素基因载体。     

基因转染技术在抗肝纤维化中应用的研究进展

基因治疗是指将外源性正常基因导入靶细胞以治疗疾病的一种方法,现阶段主要运用于肿瘤及某些特殊疾病的治疗.有研究显示,将基因治疗的转染技术用于抗肝纤维化的治疗可以逆转纤维化,或可成为治疗肝纤维化的潜在方案.本文就基因转染技术在抗肝纤维化中应用的研究进展进行综述.     

阳离子脂质介导的基因转移及其在肿瘤基因治疗中应用

随着基因治疗研究地日益深入 ,基因转移载体在基因治疗中的作用越来越重要。阳离子脂质体是近几年来发展起来的非病毒载体 ,它有许多特性 ,本文对阳离子脂质体介导的基因转移及其在肿瘤基因治疗中的应用加以综述。1　脂质体的概述　　脂质体 (ｌｉｐｏｓｏｍｅ)是自行组装成的含有双层脂质的胶状颗粒。 196 5年Ｂａｎｇｈａｍ首先用脂质体做细胞膜的模型 ,后来被用于向细胞内转运药物 ,这些药用的脂质体被称为经典的脂质体 (ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｉｐｏｓｏｍｅｓ,ＣＬｓ)。ＣＬｓ很快被肝、脾内的巨噬细胞以非特异反应的方式摄入。由…     

蛋白质组学技术和基因芯片在白血病研究中的应用

白血病是造血系统的恶性肿瘤。白血病的治疗和发病机制研究已取得显著成果,蛋白质组学与基因芯片技术在白血病的发生机制与治疗效果检测方面取得重大进展。蛋白质组学是指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学,目的在于归类蛋白质整体分布,鉴定并分析感兴趣的个别蛋白质,最终阐明它们的关系与功能。基因芯片(microarray)技术也称为基因微阵列,高通量特点使其在基因表达分析、疾病诊断和治疗、新药发现等众多领域得到广泛应用。     

TAP基因转染提高其在肿瘤细胞系的表达

目的　筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系 ,将TAP1、TAP2基因分别转染其表达下调的肿瘤细胞系 ,检测基因转染后的mRNA表达水平。方法　用RT -PCR方法检测肺腺癌细胞系Anip 973,AGZY83a ,LH - 7,BE - 1,胃癌细胞系BGC - 82 3TAP1及TAP2mRNA水平 ,筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系。用脂质体法 (LipofectaminTM2 0 0 0 )将TAP1、TAP2分别转染人肺腺癌细胞系Anip 973,经G4 18筛选 4～ 6周 ,通过RT -PCR检测TAP1及TAP2的表达。结果　Anip 973,AGZY 83a细胞TAP1、TAP2mRNA表达下调 ,LH - 7,BE - 1TAP1PCR产物均为 2条带 ,BE - 1TAP 2mRNA表达下调 ,而LH - 7与B细胞相同。转染后的Anip 973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加。结论　基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达 ,为增强MHCⅠ类分子提呈肿瘤抗原奠定了基础     

超声联合微泡促进大鼠损伤跟腱及肉芽组织局部基因转染的实验研究

目的 探讨超声联合微泡促进基因局部转染大鼠损伤跟腱及肉芽组织的最适超声转染条件。方法 建立双侧大鼠跟腱损伤模型,在大鼠双侧损伤跟腱内局部注射微泡与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒混合溶液,应用不同输出功率、占空比及超声辐照时间的超声辐照双侧损伤处跟腱,根据荧光染色及免疫组化染色下EGFP表达结果判断转染效果。根据基因转染效果最高,同时正常组织损伤坏死最小筛选出最合适的照射条件。将大鼠分为4组:①质粒+微泡+超声辐照组,②质粒+微泡组,③质粒+超声辐照组,④单纯质粒组。根据前几步所选取的条件辐照损伤跟腱,观察跟腱及肉芽组织内的EGFP表达情况及正常组织损伤情况。 结果 在超声输出功率2 W/cm2、占空比20%、超声辐照10 min条件下,跟腱及肉芽组织内EGFP表达明显,且无明显正常组织损伤。超声辐照+微泡+质粒组跟腱及肉芽组织内EGFP表达高于其余3组（P<0.05）,其余各组间差异无统计学意义。结论 在适合的超声辐照条件下,超声联合微泡能明显增强损伤肌腱及肉芽组织的基因转染效果,且不损伤正常组织,这为肌腱损伤的基因治疗的可行性提供了实验基础。     

抑癌基因联合转染对膀胱癌细胞的生长抑制作用研究

目的　探讨抑癌基因 p5 3和 Rb对膀胱癌细胞的生长抑制作用。方法　利用逆转录病毒和电穿孔法将 p5 3、Rb单独或联合导入膀胱癌细胞株 T2 4中 ,Northern杂交等证实外源目的基因的表达后 ,观测并比较不同转染后细胞的生长、增殖水平和成瘤性等。结果　获得 p5 3、Rb单独和联合转染的 T2 4细胞 ,Northern杂交等证实 T2 4细胞中 p5 3失活而 Rb正常 ,转入的外源野生型 p5 3基因和 Rb基因均被表达。与未转染的对照组 T2 4细胞相比 ,转入 p5 3的细胞其生长速率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,软琼脂克隆形成能力丧失 ;而只转染 Rb的细胞除软琼脂克隆形成能力有所降低外 ,细胞生长和增殖未受明显抑制。结论　外源野生型 p5 3能抑制 T2 4生长并降低其成瘤性 ,增加 Rb的表达对细胞生长无明显抑制作用。p5 3对 T2 4细胞的生长抑制作用与外源 Rb基因导入与否无明显关系 ,Rb表达水平正常的膀胱癌细胞其异常增殖可能与 Rb蛋白磷酸化状态的关系更为密切。     

基因治疗病毒载体的研究及应用

基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用,因此它可用来治疗一些后天性和遗传性疾病,其成功与否的关键是载体。目前应用的载体主要有包括病毒和非病毒载体,但在基因治疗中应用最为广泛的载体是病毒载体。本文就近年来病毒载体系统在基因治疗中的应用及其改进等方面的研究进行综述。     

中药及免疫治疗在白血病中的应用

白血病是肿瘤所致儿童和中青年死亡原因的第一位。目前,白血病的治疗主要包括化疗、造血干细胞移植、免疫治疗及包括中药在内的其他辅助治疗措施。其中,中药因其低毒性及综合作用等优势已在抗白血病的研究中逐逐受到重视。而免疫治疗被认为是继手术、化疗和放疗后第四大肿瘤治疗模式,目前被公认为是21世纪肿瘤综合治疗模式中最活跃、最具有发展潜力的治疗方法     

脂质体在白血病治疗中的应用进展

随着生物技术、抗体技术、物理技术等学科的发展,脂质体作为药物载体在白血病治疗中的应用日益受到人们的重视。脂质体包封药物可以延长药物的血浆半衰期,提高血药浓度,增加疗效,减小药物的毒副作用。本文就脂质体的特点、靶向性及脂质体在白血病治疗中的作用进行了探讨。     

绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究

目的研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16h即有GFP表达,7d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%)。感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性。结论重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法。     

mdr1单因素耐药白血病细胞株的构建

目的 构建mdrl单因素耐药白血病细胞株,为研究RNA干扰逆转mdr1所致耐药提供细胞模型。方法 将含mdr1 cDNA全长的真核表达载体通过脂质体转染人对化疗药物敏感的K562细胞内,G418筛选获得转基因单克隆细胞．用RT-PCR检测有无mdr1表达、流式细胞技术检测细胞表面P-gp蛋白含量、Rh123泵出实验检测P-gp功能、MTT检测细胞对药物的敏感性。结果 转mdr1基因细胞K562／mdr1能较高水平表达mdr1,明显表现出对化疗药物的耐药性。结论 通过转基因方法构建mdr1单因素耐药细胞株可为RNA干扰逆转mdr1提供更精确的细胞研究模型。