HMGA1基因小分子RNAi对卵巢癌转移抑制的实验研究

目的:探讨高迁移率蛋白家族A1(high mobility group A1,HMGA1)基因小分子干扰RNA对卵巢癌转移抑制的机理.方法:RT-PCR一步法检测3种不同的卵巢癌细胞株中HMGA1、E钙黏蛋白mRNA的表达水平;设计并合成HMGA1 siRNA,转染HO8910PM细胞:半定量RT-PCR分析法观察HMGA1 siRNA转染对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞株体外侵袭、运动的抑制作用.结果:RT-PCR半定量分析结果显示:OVCAR-3细胞中HMGA1 mRNA表达量相对较低(0.64±0.13),而E-钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR-3细胞中有表达;HO8910PM细胞稳定转染HMGA1 siRNA后,转染组、对照组HMGA1 mRNA表达水平分别为0.16±0.08、0.47±0.11(P＜0.01),E 钙黏蛋白mRNA表达水平分别 为0.38±0.07、0.09±0.05(P＜0.01);体外运动实验显示,跨膜细胞数转染组明显低于对照组(P＜0.05);重组细胞基底膜侵袭实验显示,穿透基底膜细胞数转染组明显低于对照组(P＜0.01).结论:HMGA1基因与卵巢癌转移密切相关,HMGA1 基因siRNA 可上调卵巢癌细胞中E钙黏蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的运动和侵袭,为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点.     

hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的：探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTFG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法：利用阳离子转染试剂将hPTTG1siRNA转染A2780细胞．荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果：hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为（76．8±4．1）％;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论：hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

VEGFR-3 siRNA对人结肠癌细胞黏附力和侵袭一眭的抑制作用

目的：探讨VEGFR-3对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的影响。方法：构建携靶向VEGFR-3基因siRNA（small interfering RNA）表达载体，转染人结肠癌LoVo细胞，半定量RT—PCR和Westernblotting检测转染前后LoVo细胞VEGFR-3mRNA和蛋白表达的变化，基质-黏附实验检测细胞转染后的黏附能力，细胞侵袭实验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变。结果：携靶向VEGFR-3基因siRNA的表达载体成功构建，RT—PCR检测转染siRNA后LoVo细胞VEGFR-3mRNA表达水平降低；Westernblotting检测转染siRNA后72hLoVo细胞VEGFR-3蛋白表达下降，其表达相对值由（1．26±0．19）降至（0．39±0．12）（P〈0．05）。转染siRNA72h后LoVo细胞的黏附能力显著下降[（0．626±0．047）vs（0．407±0．029），P〈0．05]；LoVo细胞穿膜细胞数（6．38±3．25）明显低于空白对照组（24．82±3．44）、非特异性对照组（23．58±3．73）（P〈0．05）。结论：siRNA能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应，下调VEGFR-3基因的表达，进而抑制LoVo细胞的黏附能力和侵袭性。     

乙酰肝素酶基因转染SKOV3细胞对细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响

背景与目的：乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是能降解细胞外基质和基底膜的β-D-葡萄糖醛酸内切酶。HPA在人类正常组织局限于胎盘和免疫器官有表达，但在许多恶性肿瘤中有高水平的表达，促进了肿瘤的侵袭和转移。本文探讨乙酰肝素酶基因转染卵巢癌SKOV3细胞后对细胞生长、黏附、侵袭能力的影响。方法：以携带HPA基因的质粒（pCDNA3．0-HPA）经脂质体介导转染SKOV3细胞。RT—PCR法检测转染后HPAmRNA表达水平；MTT法检测SKOV3细胞生长曲线及细胞与细胞外基质的黏附；同质黏附试验和细胞分离试验检测细胞间的黏附和分离能力；利用transwell小室检测卵巢癌细胞SKOV3细胞的侵袭能力；流式细胞仪测细胞周期；免疫组化法检测卵巢癌细胞中HPA蛋白表达。结果：与对照组和空载组比较，转染组HPA mRNA水平上调，差异有显著性（t=-128．726，-96．959，P〈0．01）；细胞周期中S期指数明显增多；细胞生长曲线显示细胞生长速度增快；对细胞外基质的黏附率明显升高（t=11．824，11．234，P〈0．01）；同质黏附率降低（t=-14．455，-18．348，P〈0．01）；细胞分离率增强（x^2=869．847^b，796．068^b，P〈0．01）；穿透重组基底膜的细胞数目显著增高（t=11．964。12．263，P〈0．01）；细胞浆中的HPA蛋白表达显著上升。结论：转染HPA基因可以促进卵巢癌细胞的生长增值，增强卵巢癌细胞的侵袭转移能力。     

乏氧状态干扰Snail对人肺腺癌细胞转移潜能影响及其机制探讨

目的：观察乏氧状态下干扰锌指转录因子Snail对人肺腺癌SPCA1细胞侵袭的影响及其上皮一间质转化（epi—thelial mesenehymal transition,EMT）相关分子机制。方法：应用靶向人Snail基因的小干扰RNA（Snail siRNA）转染常氧（19％O2）肺癌细胞,48h后将细胞置乏氧（0．5％O2）培养箱培养,乏氧24h后采用Real—Time PCR检测细胞SnailmRNA表达,蛋白质印迹法检测Snail和EMT表型分子E一钙黏素蛋白表达,Transwell小室评价细胞侵袭能力。结果：与常氧细胞（设为1）相比,乏氧诱导肺癌SPCAl细胞Snail mRNA（5．31±0．73）和蛋白（4．82±0．67）表达均显著增加,P均〈0．05。与乏氧对照siRNA组（设为1）比较,LOX siRNA转染后乏氧SPCAl细胞SnailmRNA和蛋白表达分别为0．26±0．08和0．28±0．03。将常氧细胞侵袭力和E-钙黏素表达设为1,则乏氧细胞侵袭力和E-钙黏素表达分别为1．85±0．13和0．45±0．04,与常氧细胞存在显著差异,P值均〈0．05。下调Snail表达后,乏氧细胞侵袭力和E-钙黏素表达分别为0．90±0．08和1．81±0．09,与乏氧对照s．RNA组存在显著差异,P值均〈0．05。将乏氧对照siRNA细胞侵袭力和E-钙黏素表达设为1,则SnailsiRNA组侵袭力和E-钙黏素分别为0．50±0．03和2．04±0．17,P值均〈0．05。结论：乏氧状态下干扰Snail降低肺癌细胞侵袭,其机制可能与增加E-钙黏素蛋白表达有关。     

siRNA沉默caveolin-1基因对胰腺癌细胞迁徙和侵袭影响及其机制的探讨

目的：探讨caveolin-1对胰腺癌细胞PANCl在体外迁徙和侵袭的影响并初步探讨其机制。方法：用siRNA技术抑制胰腺癌PANCl细胞中caveolin-1的表达,构建细胞株PANCl／siRNA作为实验组,空载体细胞株PANCl／shuffle作为对照组。蛋白质印迹法检测细胞内caveolin-1和MMP_7的表达。流式细胞仪分析细胞失巢凋亡指数,黏附实验检测细胞黏附定植的能力,侵袭小室实验检测细胞迁徙和侵袭的能力。结果：PANCl／siRNA细胞的caveolin-1表达被抑制,表达量低于PANC1／shuffle和PANC1细胞株（P〈0．01）;PANCl／siRNA细胞的抗失巢凋亡的能力强于PANcl／shuffle细胞,凋亡指数分别为（（9．24±1．61）％US（17．32±1．79）％,P〈0．01）,PANC1／siRNA的黏附能力强于PANC1／shuffle（0．867±0．153VS0．523±0．072,P〈0．01）;PANC1／siRNA迁入膜内的细胞数多于PANC1／shuffle（142．6±24．35US106．5±10．81,P〈0．05）,PANC1／siRNA细胞侵袭破坏基质胶进入膜内的能力强于PANCl／shuffle（88．9±8．07 S61．3±7．23,P〈0．01）;PANCl／siRNA中MMP-7表达量明显高于PANCl／shuffle（P〈0．01）。结论：caveolin-1通过对MMP-7的调控抑制PANC1细胞的体外迁徙和侵袭。     

靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移

背景与目的：GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节做管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移。本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA（shorthairpinRNA,shRNA）对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及存体转移能力的影响。方法：以人GPR48mRNA编码区中两条不同序列作为RNA十扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞,新霉素抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆。采用RT-PCR和Westernblot检测GPR48的表达变化。通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化：分别将转染和未转染GPR48shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及怖部转移情况。结果：RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下捌80％：与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少（28．3±1．5和17．6±1．5VS．94．4±15．7,P〈0．01）。裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少（1．3±0．2和1．5±0．4VS．7．8±1．8,P〈0．01）。结论：shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达．有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移。     

CXCR4小干扰RNA对人大肠癌细胞SW480迁移能力的抑制作用

目的：探讨CXC族趋化因子受体4（CXC chemokine receptor4，CXCR4）小干扰RNA对人大肠癌细胞株SW480迁移能力的抑制作用。方法：将与CXCR4mRNA互补的小干扰RNA（siRNA）及阴性对照Non-silencingdsRNA以阳离子脂质体包埋后转染人大肠癌细胞株SW480，采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测转染后SW480细胞CXCR4mRNA表达的变化，采用Western blotting检测转染细胞CXCR4蛋白表达的变化，采用Transwell迁移实验检测大肠癌细胞SW480迁移能力的变化：结果：与正常对照组和Non—silencing dsRNA相比，siRNA各浓度组对SW480细胞CXCR4mRNA和蛋白的表达均有明显的抑制作用（P〈0．01），其抑制效应具有浓度依赖性（P〈0．01）。与正常对照组和Non—silencing dsRNA相比，siRNA各剂量组对肿瘤细胞迁移有明显抑制作用（P〈0．01），其抑制效应具有剂量依赖性（P〈0．01）；siRNA在终浓度为50、100和200nmol／L时对SW480细胞的迁移抑制率分别为20．5％、37．5％和52．9％。结论：CXCR4小干扰RNA通过下调CXCR4mRNA和蛋白的表达显著抑制人大肠癌细胞SW480的迁移，并呈剂量依赖性。     

EZH2 基因在卵巢癌发生发展中的作用及其临床病理意义*

目的:探讨EZH 2 基因对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响,及其在卵巢癌组织中的表达与临床病理学意义。方法:运用EZH 2 小干扰RNA（siRNA ）转染卵巢癌OVCAR- 3 细胞株,Western blot方法分析OVCAR- 3 细胞中EZH 2 的蛋白表达;MTT 实验检测细胞增殖水平,Transwell 小室实验检测细胞侵袭和转移能力。另外,应用RT-PCR 和免疫组织化学法分别检测EZH 2 在卵巢癌组织中的mRNA 和蛋白表达情况。结果:与阴性对照组相比,EZH 2 siRNA 能明显降低OVCAR- 3 细胞的EZH 2 蛋白表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖能力（P=0.032）;转染EZH 2 siRNA 的OVCAR- 3 穿膜细胞数,在侵袭实验中,siEZH 2 组为29.3 ± 5,与对照组（51± 6.8）比较,差异有统计学意义（P=0.027）;在迁移实验中,siEZH 2 组的迁移细胞数为51.6 ± 7.7,显著低于对照组（72.3 ± 11.7,P=0.036）。 RT-PCR 检测发现,卵巢癌组织中的EZH 2 mRNA 表达水平明显高于正常组织。在免疫组化实验中,61.0%的卵巢癌组织呈EZH 2 蛋白高表达,而且与卵巢癌的T 分期、N 分期以及FIGO分期显著正相关（P<0.05）。 另外,单变量生存分析发现EZH 2 高表达与卵巢癌患者短生存期密切相关（P=0.007）;多变量分析显示EZH 2 是卵巢癌的独立预后参数（P=0.047）。 结论:EZH 2 在卵巢癌的发生与进展中发挥着重要的作用,而且EZH 2 高表达是卵巢癌患者预后不良的独立分子指标。      

小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响

 目的　探讨靶向基质全属蛋白酶-2（MMP-2）基因的RNA干扰（RNAi）技术对卵巢癌OVCAR-3细胞MMP-2的沉默作用,以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响。方法　合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果　与阴性对照组相比,OVCAR-3细胞在转染siRNA-MMP-2后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA表达量分别下降了73.8 %、78.8 %和78.4 %（均P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了72.6 %、81.2 %和76.4 %（均P＜0.05）,以48 h作用最强;细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化（P＞0.05）;60 min和90 min时的黏附抑制率分别为55.0 %和44.8 %（均P＜0.05）;细胞的侵袭和迁移能力分别下降29.7 %和35.8 %（均P＜0.05）。结论　siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR-3细胞的黏附、侵袭和迁移能力,而对其生长无明显影响,MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点。     

熊果酸对卵巢癌细胞转移的抑制作用

目的 熊果酸(UA)对人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭及趋化运动的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞黏附能力的影响;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭及运动的影响;采用RT-PCR和Western blot方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白的表达的影响。结果 在黏附试验中,不同浓度熊果酸作用细胞24h后,抑制率分别为44.03%、46.62%和55.11%,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度的熊果酸在体外作用24h后可以显著抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力,穿膜细胞数与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01)。熊果酸处理后细胞趋化运动能力降低与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度熊果酸作用24小时后,HO-8910PM细胞MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达量明显低于正常对照组(P＜0.05),Western blot结果显示:HO-8910PM细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量受到明显抑制(P＜0.05)。结论 熊果酸抑制人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭和转移的生物学行为,其作用机制可能与熊果酸显著抑制MMP-2、MMP-9表达水平有密切关系。     

LRP16基因过表达对卵巢癌细胞H08910生长及E-钙黏着素的影响

目的：探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株H08910生长的影响。方法：将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3．1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株H08910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Westernblot方法检测E-钙黏着素（E—cadherin）蛋白的表达。结果：LRP16基因过表达对H08910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的H08910细胞的E-钙黏着素（E—cadhefin）蛋白表达水平明显下降。结论：LRP16基因对卵巢上皮癌细胞H08910的增殖无影响,但使E-钙黏着素（E—cadhefin）表达明显下降。     

TGF-β1促进卵巢癌细胞转移机制的研究

目的探讨转化生长因子-β1促进卵巢癌细胞转移的机制。方法应用RT—PCR、WesternBlot和明胶酶实验等方法检测了卵巢癌细胞HO-8910和HO-8910PM中TGF—B1对MMP-2、MMP-9表达及分泌的调节作用;通过免疫组化方法检测了121例标本（包括31例正常卵巢组织、45例卵巢癌卵巢原发灶组织和45例卵巢癌转移灶组织）中TGF—B1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果结果显示TGF-β1主要上调了低转移细胞系HO-8910中MMP-2和MMP-9的表达和分泌;免疫组化结果表明卵巢癌原发灶组织中MMP-2的表达高于正常卵巢组织（P〈0．05）;TGF-β1、MMP-2和MMP-9在卵巢癌转移灶中的表达均明显高于原发灶（P〈0．01）;且TGF-β1与MMP-2和MMP-9的表达均存在相关性（P〈0．05）。结论TGF-β1主要通过上调MMP-2和MMP-9的表达和分泌促进了卵巢癌细胞的转移。     

高迁移率族蛋白A2在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：探讨高迁移率族蛋白A2（high mobility group proteinA2,HMGA2）在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义。方法：采用逆转录-多聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹法（Western Blot）检测HMGA2在体外培养的子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织标本和18例正常子宫内膜组织标本中的表达。结果：HMGA2-mRNA在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa中均有表达;在Ⅰ期、Ⅱ期子宫内膜癌患者中表达的阳性率分别为8．3％（1／12）、88．9％（8／9）,HMGA2-mRNA表达的阳性率与手术-病理分期有关（P=0．000,P〈0．05）,在高分化腺癌、中低分化腺癌的组织标本中表达阳性率分别为66．7％（4／6）、33．3％（5／15）,HMGA2-mRNA表达阳性率与子宫内膜癌细胞的分化程度无关（P=0．331,P〉0．05）;HMGA2-mRNA在18例正常子宫内膜组织标本中无一例表达;Western Blot的结果与RT—PCR的结果相符合。结论：HMGA2基因可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用。     

HMGA1在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

[目的1探讨高迁移率族蛋白A1（HMGAl）在卵巢上皮性癌中的表达及其临床茬义。[方法]应用RT—PCR技术和免疫组化法检测38例卵巢上皮性癌组织中及44例正伴卵巢组织中HMGAlmRNA和蛋白的表达情况。[结果]HMGAImRNA和蛋自在卵巢上咸性癌组织中的阳性表达率均明显高于正常卵巢组织（P〈0．01）。HMGAI蛋白在组织学分纫G3癌组织中的阳性表达率高于在G1、G2级（P〈0．05）,在有淋巴结转移、脉管浸润的癌组够中的阳性表达率高于无淋巴结转移、脉管浸润的癌组织（P〈0．05）。[结论]HMGAl在卯葬癌组织中呈高表达．高水平HMGA1表达与肿瘤组织学分级、淋巴结转移、脉管浸润等一署列导致较差预后的临床病理因素相关．提示HMGA1的表达不仅有助于卵巢癌的诊断,也有助于预后的判断。     

ILK-ASODN对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用

目的 探讨ILK-ASODN对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用。方法 研究分为对照组和实验组。在转染后72 h采用RT-PCR和Western blot法检测细胞ILK mRNA及蛋白表达量;运用流式细胞术评价ILK-ASODN转染对肿瘤细胞周期的影响;同时将转染后的HO-8910细胞接种于裸鼠皮下,观察裸鼠体重变化、体内成瘤率、肿瘤出现的时间、肿瘤体积及重量的变化,并计算抑瘤率。结果 实验组与对照组比较,细胞的ILK mRNA及蛋白表达量显著下降、G₀/G₁期细胞明显增多,差异具有统计学意义(P＜0.01);实验组裸鼠肿瘤出现时间明显晚于对照组,肿瘤体积及重量增长速度显著减缓,差异有显著统计学意义(P＜0.01)。结论 ASODN可以阻断人卵巢癌细胞ILK基因表达,抑制细胞生长;而 ILK基因的表达沉默对裸鼠皮下移植瘤的形成具有明显抑制作用。     

MTA1在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞侵袭转移影响的研究

  目的  研究转移相关基因1(metastasis-associated-gene1, MTA1)表达与卵巢癌发生发展转移的关系, 研究MTA1对卵巢癌侵袭转移能力的影响, 并探讨抑制卵巢癌侵袭转移的潜在靶点。  方法  免疫组织化学法检测110例卵巢癌组织中MTA1的蛋白表达水平, 分析MTA1蛋白表达与卵巢癌分化程度、临床分期及与腹腔转移的关系。并通过脂质体介导方法, 将特异性siRNA表达载体psilenter2.0-MTA1-siRNA转染入人卵巢癌细胞系HO-8910PM, 采用RT-PCR以及Western blot检测特异性siRNA对MTA1mRNA及蛋白表达的抑制效果。应用划痕损伤实验及Transwell实验检测MTA1对卵巢癌细胞侵袭转移能力的影响。  结果  MTA1随卵巢癌组织学分化程度的升高而降低, 呈负相关, MTA1的表达随着FIGO分期期别的增加而增加, 呈正相关, MTA1的表达随卵巢癌腹腔转移而增加, 呈正相关。RT-PCR及Western blot结果显示, siRNA成功抑制卵巢癌细胞系HO-8910PM中MTA1的表达。划痕损伤实验显示转染后划痕损伤愈合明显减慢, 迁移率明显降低, Transwell体外侵袭实验结果显示, 转染后穿膜细胞百分率显著降低(P < 0.05)。  结论  MTA1表达水平的增高与卵巢癌的分化程度、临床分期及远处转移密切相关, 体外研究显示抑制MTA1在卵巢癌细胞中的表达, 使细胞生长、侵袭及转移能力均受到抑制, 提示MTA1在卵巢癌的远处侵袭转移过程中发挥重要作用, 可能成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。      

小分子RNA干扰Notch1基因对肾癌Caki-1细胞增殖的影响

目的：探讨Notch1在肾透明细胞癌株中的表达,采用短片段RNA（small interferhtg RNA,siRNA）干扰技术沉默肾透明细胞癌中Notch1的表达,并观察其对Caki-1增殖的影响。方法：体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2及人肾癌细胞786—0和Caki-1。实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测Notch1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测Notch1蛋白的含量。特异性Notch1 siRNA干扰肾癌Caki-1细胞,用Lipofectamine2000转染48h后,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测其中Notch1 mRNA、蛋白的表达变化,CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果：Notch1在肾癌细胞株中的表达要明显高于正常肾小管上皮细胞,差异具有统计学意义（P〈0.05）。siRNA—Notch1干扰以后可以明显降低Caki-1细胞中Notch1 mRNA和蛋白的表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）,同时检测Caki-1细胞增殖能力也随之下降（P〈0.05）。结论：Notch1在肾癌透明细胞癌中高表达,下调Notch1信号通路可以抑制肾细胞癌Caki—1的增殖,调节肾癌的生长。     

Snail is critical for tumor growth and metastasis of ovarian carcinoma

Snail, a key inducer of epithelial‐mesenchymal transition (EMT), plays an important role in cancer metastasis. To better understand the role of Snail in the metastasis of ovarian carcinoma, expression of Snail was knocked down by antisense‐Snail in the highly metastatic ovarian cancer cell line HO8910PM. Gene array analysis revealed that blocking Snail expression suppressed the activity of matrix metalloproteinases (MMPs) and upregulated TIMP3, an MMP inhibitor. These findings suggest that Snail interacts with MMP during tumor invasion and metastasis. In addition, we examined the role of Snail in an ovarian cancer orthotopic model by using the antisense‐Snail HO8910PM cell line. We found that the size of primary ovarian cancer tumor and the number of metastatic lesions were significantly reduced when Snail was knocked down. Confirming our initial findings, the activity of MMP2 was greatly inhibited in tumors from antisense‐Snail cells. Furthermore, immunohistochemical analysis on ovarian cancer progression tissue array demonstrated that the expression of Snail was significantly higher in metastatic lesions, and Snail expression correlated with the stage of ovarian cancer. Interestingly, in early‐stage tumors, Snail was localized in both the cytoplasm and nucleus. In late stage and metastatic lesions, the level of Snail was elevated, and Snail was localized to the nucleus. The expression level and nuclear localization of Snail were also inversely correlated with E‐cadherin expression. Overall, our study indicates that Snail plays a critical role in tumor growth and metastasis of ovarian carcinoma through regulation of MMP activity.     

RIN1蛋白在卵巢癌细胞和组织中的表达及其临床病理意义

目的 探讨ras及rab作用因子1（RIN1）蛋白在卵巢癌细胞的表达水平及定位,并探讨其在卵巢肿瘤组织中的表达水平及临床意义。方法 采用免疫印迹（Western blotting）法检测RIN1蛋白在人正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞株OVCAR3、SKOV3和HO8910中的表达水平及定位;检测其在17例卵巢正常组织和91例卵巢肿瘤组织中的表达并分析其与卵巢癌分期和组织分化程度的关系。结果RIN1蛋白在卵巢癌细胞 OVCAR3、SKOV3和HO8910中的相对表达量（0.3641±0.0614、0.6454±0.0835和0.7925±0.1491）高于人正常卵巢上皮细胞（0.0679±0.0269）,差异有统计学意义（P＜0.05）,且主要分布于卵巢癌细胞胞浆中。RIN1蛋白在37例良性卵巢肿瘤、10例交界性卵巢肿瘤及44例恶性卵巢肿瘤组织中相对表达量分别为0.3456±0.1870、0.5587±0.2138和0.7236±0.2232,均高于其在17例卵巢正常组织中的表达水平（0.1284±0.0982）,差异有统计学意义（P＜0.01）,且RIN1蛋白的表达随卵巢病变程度的加重而升高;RIN1蛋白表达随卵巢癌手术、病理分期及组织分化程度的演进而增加。结论 RIN1蛋白在卵巢癌细胞中高表达且定位于胞浆中;RIN1蛋白高表达与卵巢癌发生发展密切相关,其可作为卵巢癌早期诊断的一个新的肿瘤标志物,并有望成为卵巢癌治疗的新靶点。