基因芯片技术与涂片培养技术对诊断儿童结核病的比较研究

目的  探讨结核杆菌DNA微阵列芯片技术用于诊断儿童结核病的临床应用价值。 方法  采集住院儿童的70份临床诊断结核病及50份非结核病患儿的标本,每份标本分别进行抗酸染色、分枝杆菌培养以及结核杆菌DNA微阵列芯片检测,比较DNA微阵列芯片检测结果与抗酸染色镜检和分枝杆菌培养的结果。 结果  DNA微阵列芯片检测结核病患儿分枝杆菌的敏感性为24.3%(17/70),涂片抗酸染色敏感性为17.1%(12/70),分枝杆菌培养敏感性为20.0%(14/70),3种方法特异性均为100.0%(50/50)。DNA微阵列芯片检测结果与抗酸染色或分枝杆菌培养结果之间差异无统计学意义。 结论  DNA微阵列芯片技术对诊断儿童结核病有一定参考价值,为儿童结核病的诊断提供了新思路。     

DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因的研究

目的采用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌INH耐药基因,为临床诊治提供实验依据。方法应用DNA微阵列芯片法和改良罗氏培养加比例法药敏试验对疑似结核病患者的150份痰液标本进行检测,并对检测的结果进行比较分析。结果 150份痰液标本的涂阳率为60.0%(90/150),DNA微阵列芯片法检测到结核分枝杆菌阳性率为62.7%(94/150),改良罗氏培养法阳性率为60.0%(90/150),比例法药敏试验异烟肼的耐药率为43.9%(36/82),异烟肼的kat G/inh A基因总突变率为35.1%(33/94);以改良罗氏培养加比例法药敏试验为标准,DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌阳性、异烟肼耐药性和敏感性的符合率分别为97.7%、86.1%和100.0%。结论 DNA微阵列法可快速准确地检测大部分疑似结核病临床标本的kat G和inh A基因突变,可用于临床耐药性的检测从而指导临床用药,也可用于临床诊断中的推广。     

微阵列芯片技术在耐多药结核病临床诊断中的应用研究

目的 探讨微阵列芯片技术在耐多药结核病（multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB）临床诊断中的应用。方法 收集2020年6月至2021年5月经滨州市中心医院确诊的245例住院肺结核患者的标本（痰液标本125例和痰培养分离菌株120例）。痰液标本同时采用DNA微阵列芯片技术和传统培养法检测其结核杆菌阳性率。痰液标本和分离菌株均采用DNA微阵列芯片技术进行肺结核耐多药检测和分枝杆菌菌种鉴定。结果 125例痰液标本经DNA微阵列芯片技术和痰培养法检测,阳性率分别为58.4%（73/125）和24.8%（31/125）,两种方法比较差异有统计学意义（2=14.520,P<0.001）。采用DNA微阵列芯片技术检测125例痰液标本和120例分离菌株,共检出结核分枝杆菌复合群192例,非结核分枝杆菌7例。结核分枝杆菌复合群192例检出耐药者41例,其中耐异烟肼15例,耐利福平19例,同时耐两种药物7例。非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌4例,堪萨斯分枝杆菌2例,鸟分枝杆菌1例。结论 DNA微阵列芯片技术检测周期短,能同时进行结核分枝杆菌耐多药检测和菌种鉴定,对MDR-TB的早期诊断和治疗有较大的临床应用价值。     

蛋白芯片法诊断结核病的临床应用评价

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片诊断结核病的临床应用价值。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测63例结核病患者的血清标本,25份肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本,并与抗酸菌涂片镜检法相比较。结果结核分枝杆菌蛋白芯片诊断肺结核的敏感性和特异性分别为68.25%(43/63)和88%(22/25),阳性预测值为93.48%(43/46),阴性预测值为52.38%(22/42),阳性检出率为52.27%(46/88),显著高于抗酸菌涂片镜检法阳性率(23.86%,21/88)。结论结核分枝杆菌蛋白芯片诊断结核病,具有简便、快速,敏感性较高和特异性强等优点,是临床辅助诊断结核病的有效方法。     

蛋白芯片法诊断结核病的评价

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片诊断结核病的结果。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测122例结核病患者的血清标本,29份肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本,并与抗酸菌涂片镜检法相比较。结果结核分枝杆菌蛋白芯片诊断肺结核的敏感性和特异性分别为68.85%(84/122)和93.10%(27/29),阳性预测值为97.67%(84/86),阴性预测值为41.53%(27/65),阳性检出率为56.95%(86/151),显著高于抗酸菌涂片镜检法阳性率(24.59%,30/122)。结论结核分枝杆菌蛋白芯片诊断结核病,具有简便、快速,敏感性较高和特异性强等优点,是临床辅助诊断结核病的有效方法。     

蛋白芯片法检测结核抗体在儿童结核病中的诊断价值

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片诊断儿童结核病的临床应用价值。方法应用结核蛋白芯片法检测90例结核病患儿和40例非结核病患儿的血清标本。结果蛋白芯片法检测结核的灵敏度为46.7%(42/90),特异性为90%(36/40)。结论蛋白芯片法检测儿童结核病灵敏度一般,但特异性高,可作为临床辅助诊断儿童结核病的方法之一。     

抗酸染色与金胺O荧光染色对结核菌检出的对比观察

目的探讨抗酸染色与金胺O荧光染色在结核病中的诊断价值。方法选取698例结核病门诊就诊病人的痰液,收集其痰液制作标本,采用痰涂片抗酸染色法和金胺O荧光染色法检测所有标本中结核杆菌的阳性检出情况,统计分析两种诊断方法对结核病的诊断价值。结果金胺O荧光染色检测结核杆菌的阳性检出率为29.4%,痰涂片抗酸染色法检测结核杆菌的阳性检出率20.1%,前者明显优于后者,差异具有统计学意义(P0.05)。结论金胺O荧光染色法对结核分枝杆菌的阳性检出率高于抗酸染色法,荧光染色过程简单,镜检过程所涉及的视野少,更易于临床操作。     

荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

目的:评价荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌DNA检测中的应用价值,为临床检测提供依据。方法:对2011年7月-2013年8月在我院住院治疗的78例结核病患者,采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法对患者的同一份痰标本进行检测,比较分析检测差异。结果:荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌的效果明显优于抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养检测,荧光定量PCR检测的阳性率最高,为73.1%。结论:应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA操作简单、诊断快捷、灵敏度较高,可作为结核病的常规诊断方法,值得在临床推广应用。     

BACTEC MGIT960 system快速分离结核杆菌的效果评价

目的:评价BACTECMGIT960system(结核菌快速培养仪)快速分离结核杆菌效果。方法:采用《临床技术操作规范结核病分册》规定的改良罗氏培养基分离临床标本,同时平行的用美国BD公司生产的结核菌快速培养仪分离临床标本进行对照,比较其分离抗酸分枝杆菌的阳性率、培养所需用的时间,以评价其分离率及其分离效果。结果:结核菌快速培养仪对330份临床标本总的分离阳性率为48.1%(159/330),改良罗氏法对182份临床标本进行分离,总的分离率为18.1%(33/182),对114份患者的痰标本用传统的改良罗氏培养基和结核菌快速培养仪进行平行接种(接种前对同一份标本按各自标本处理程序进行),结果传统的改良罗氏培养的阳性率为13.2%(15/114),结核菌快速培养仪培养分离的阳性率为41.2%(47/114),后者明显高于前者(P<0.01)。阳性结果出现时间前者最早的为18d,平均23.5d,后者最早4d,平均9d,两者差异有显著性意义(P<0.05)。结论:应用结核菌快速培养仪分离培养结核分枝杆菌可以明显提高分离抗酸杆菌的阳性率和缩短培养时间,便于早诊断早治疗结核病。     

噬菌体裂解法和抗酸染色法快速检测结核分枝杆菌的比较

目的比较分析噬菌体裂解法和抗酸染色法对结核病的诊断价值。方法采用噬菌体裂解法和抗酸染色法,同时检测150份临床确诊结核病患者的痰液标本。结果噬菌体法阳性率为63.3%(95/150),涂片法为40%(60/150),两法比较有显著性差异(P<0.01)。结论噬菌体裂解法检测结核病患者的痰液标本中的结核杆菌具有敏感性高和特异性强的特点,同时还能区分标本中是否有活菌的存在,对结核病诊断和治疗可提供有价值的依据,具有较高的应用和推广价值。     

免疫法测结核抗体与痰涂片镜检法的比较

目的比较免疫法检测结核抗体与痰涂片镜检法找结核杆菌,评价其方法学的优越性。方法应用结核分枝杆菌抗体(Ig G)试剂盒检测结核Ig G抗体和痰涂片镜检法找结核杆菌,并对结果进行分析。结果血清结核抗体诊断结核病的敏感性为64.4%(143/222),特异性为98.5%(197/200),阳性预测值为97.9%(143/146),阴性预测值为71.4%(197/276),抗酸菌涂片镜检法敏感性为16.2%(36/222),血清结核抗体的敏感性显著高于抗酸菌涂片镜检法,差异有统计学意义(P0.05)。在结核病组中,痰涂片阳性患者,血清结核抗体阳性率为83.3%(30/36);痰涂片阴性患者,血清结核抗体阳性率为60.8%(113/186)。结论血清结核抗体诊断结核病,具有快速、简便,敏感性高和特异性较强等优点,是临床早期诊断结核病的有效方法。     

结核杆菌检验在临床的应用价值

目的探讨结核杆菌检验在临床的应用价值,以便为结核病的诊断与治疗提供理论依据。方法以五种检测方法(包括普通PCR、抗酸染色涂片法(AFS)、金标抗结核抗体检测法(DICA)、免疫磁珠-抗酸染色涂片法(IMC-AFS)和普通IMC-PCRELLSA)检测2017年1月至2018年1月本院收治的结核分枝杆菌痰培养为阳性的76例作为阳性对照(实验组),选取同时期结核分枝杆菌痰培养为阴性的76例非结核病患者作为阴性对照(对照组)的阳性率与阴性率。结果从对照组与实验组检测结果来看,IMC-PCR-ELLSA的特异性和敏感性最高,均为100.00%;IMC-AFS特异性为32.08%,敏感性位96.30%次之。结论从五种检测方法的敏感性与特异性来看,IMC-PCR-ELLSA具有快速、灵敏、特异、可定量等优势,检测效果最佳,有良好的临床应用价值。     

三种方法检测结核分枝杆菌的比较

目的比较PCR技术与抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,及在临床诊断中的应用价值。方法对108例临床确诊的结核病患者、90例结核性胸膜炎患者的痰标本和50例非结核患者痰标本应用PCR法、痰涂片抗酸染色法和改良罗氏培养法检测,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为44.4%,改良罗氏培养法阳性率为57.4%,PCR技术检测阳性率为80.5%。结论 PCR技术是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

对195例临床可疑结核病经常规培养和涂片抗酸染色阴性的标本行PCR技术检测。结果51例结核杆菌DNA呈阳性（26．2）144例阴性。阳性患者行抗结核治疗有效；阴性患者随访50例．未见假阳性、假阴性。提示应用PCR检测结核杆菌较常规方法具有准确、灵敏的特点，在结核病诊断中有重要意义。     

扩增插入序列IS986检测痰中的结核杆菌

应用聚合酶链反应（PCR）技术建立了扩增结核杆菌（TB）特异重复序列IS986部分基团的方法，对7种抗酸分枝杆菌、6株非结核菌进行检测，结果仅人型结核杆菌、牛型结核杆菌及BCG扩增出245hp特异条带。用50μll％TritonX－100裂解废液中结核杆菌，而快速制备TB－PCR样品，应用此法检测了106份肺结核痰标本，总阳性事为56．6％，明显高于抗酸染色的阳性率互7．9％（P＜0．005），也高于BACTEC460TB系统培养结核杆菌阳性率44．3％．此结果表明，PCR具有较好的敏感性和特异性，可辅助结核病的早期快速诊断．     

斑点免疫金渗滤法检测血清抗结核分枝杆菌抗体

目的探讨斑点免疫金渗滤法(DIGFA)检测血清抗结核分枝杆菌抗体及其临床意义。方法用DIGFA检测73例结核病患者和50例非结核病患者血清中的抗结核分枝杆菌抗体,并同时进行痰涂片抗酸染色查结核分枝杆菌,分析比较两者的检出结果。结果DIGFA检测血清抗结核分枝杆菌抗体阳性率为82.2%,痰涂片抗酸染色查结核杆菌阳性率为24.7%,两法比较差异显著(P<0.005)。结论DIGFA操作简单,检测迅速,检出率高,不需要贵重仪器设备,能快速测定抗结核抗体,是一种较为理想的临床结核病辅助诊断方法。     

五种检测方法在结核病诊断中的应用评价

目的评估涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、XPert MTB/RIF法、结核分枝杆菌RNA荧光定量PCR法、结核分枝杆菌DNA荧光定量PCR法在结核病诊断中的应用价值。方法对374例疑似肺结核病患者、120例肺结核患者及70例非结核病患者的痰液标本分别用涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、XPert MTB/RIF、TB-RNAPCR、TB-DNA PCR进行结核分枝杆菌检测,将检测结果进行分析和比较。结果涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、XPert MTB/RIF、TB-RNA PCR、TB-DNA PCR检测374例疑似肺结核病患者痰液标本阳性率分别为6.68%、13.37%、20.05%、19.25%、22.73%,其中XPert MTB/RIF、TB-RNA PCR、TB-DNA PCR检测阳性率差异无统计学意义(χ2=1.51,P0.05),TB-RNA PCR阳性率高于改良罗氏培养基培养法(χ2=4.75,P0.05),改良罗氏培养基培养法高于涂片抗酸染色法(χ2=9.28,P0.05)。五种方法检测120例肺结核患者及70例非结核病患者的敏感性分别为20.83%、35.00%、50.83%、47.50%、54.17%,特异性分别为100.00%、100.00%、98.57%、100.00%、98.57%。结论 XPert MTB/RIF、TB-RNA PCR、TB-DNA PCR与涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法相比,具有敏感、快速、可定量的特点,可以作为结核病辅助诊断的有效检测方法。     

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核杆菌的临床应用及其评价

目的　对聚合酶链反应 ( PCR) -微孔板杂交法检测结核杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法　收集 1130份临床标本 ,分别用抗酸染色、培养、PCR电泳及 PCR微孔板杂交法进行结核杆菌检测 ,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果　 10 0份临床证实无结核病的体液标本经抗酸染色和 PCR电泳 ,分别有 1例和 2例假阳性 ,但经培养和 PCR微孔板杂交法未查出阳性 ;其余 10 30份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果 ,以 PCR微孔板杂交阳性检出例数最高 ( 481/ 10 30 ) ,其次为 PCR电泳 ( 40 6 / 10 30 )、培养 ( 36 5 /10 30 )以及抗酸染色 ( 2 5 6 / 10 30 ) ;χ2 检验结果显示 ,PCR微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较均呈显著或极显著性差异 ( P<0 .0 0 83及 P<0 .0 0 17)。结论　 PCR-微孔板杂交方法是特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法 ,具有推广应用价值     

DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐利福平基因的研究

目的用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因,为临床诊治提供实验依据。方法收集2013年6月—2015年6月1 005份痰标本,采用直接涂片检测结核分枝杆菌情况,阳性样本分别用改良罗氏培养基培养和DNA微阵列芯片法进行鉴定,分析耐药基因情况。结果 1 005份痰标本的涂阳率为40.3%(405/1 005)。DNA微阵列芯片法的阳性率为98.0%(397/405),明显高于改良罗氏培养基培养法(44.2%,179/405),P0.01。DNA微阵列芯片法结果显示,有90株(24.9%,90/361)结核分枝杆菌发生利福平耐药,其中33株(占36.7%)发生单纯rpo B基因突变,54株(占60.0%)发生rpo B和kat G基因突变,3株(占3.3%)发生rpo B和inh A基因突变;rpo B基因最常见的突变位点依次为531、526、516、511,突变频率分别为44.4%、25.6%、10.0%、5.5%;突变频率最高的三种突变类型依次为:531位点(C-T)占54.0%(29/90),531位点(C-G)占11.1%(10/90)及526位点(C-T)占11.1%(10/90);单位点突变和二位点联合突变分别有81株(占90.0%)和9株(占10.0%)。结论 rpo B基因突变是导致肺结核患者RFP耐药的分子基础,其突变位点呈多样性。     

荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的价值

目的分析使用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测结核分支杆菌的应用价值。方法收集首都医科大学附属北京同仁医院临床各科室各类结核病或疑似结核病患者检测标本178例,使用FQ-PCR法进行结核分枝杆菌脱氧核糖核酸检测,标本同时进行抗酸染色显微镜下观察。结果 FQ-PCR法和抗酸染色涂片法对不同来源标本检测结核分枝杆菌的结果存在较好的一致性(Kappa=0.615,P<0.01)。使用FQ-PCR法检测结核分枝杆菌的阳性检出率为12.9%,抗酸染色涂片法的阳性检出率为6.2%,二者比较差别有统计学意义(χ2=4.682,P<0.05)。结论 FQ-PCR法检测标本中的结核分枝杆菌的灵敏度高于传统的抗酸染色涂片法,可作为结核病病原学诊断的优先方法。