人胚雪旺细胞组织工程神修复坐骨神经缺损的实验研究

目的探索人胚雪旺细胞作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性.方法通过组织工程方法用PLGA导管和polyglactin 910纤维负载人胚雪旺细胞预先构置好人工神经,然后用于修复大鼠20 mm的坐骨神经缺损,并与神经切断后原位缝合以及用单纯的PLGA导管进行修复的实验组进行对照.通过活体肢体功能观察、靶器官肌肉测量、电生理检测、辣根过氧化物酶示踪、连续组织切片图像分析以及透射电镜等检查神经再生情况.结果人工神经修复组神经再生良好,效果接近于神经原位缝合组,明显优于单纯的PLGA导管修复组.结论人胚雪旺细胞构建的人工神经可以修复20mm的周围神经缺损.     

外周神经缺损的组织工程修复方法的实验研究:首次成人雪旺细胞的体外培养

目的探索成人雪旺细胞的体外培养,及外周神经的组织工程修复方法.方法将切除的成人副神经,埋于裸鼠皮下预处理15d,酶消化后体外培养,用差速贴壁、消化、及阿糖胞苷孵育,进行纯化,免疫组化方法鉴定,计算第二代细胞的生长曲线和倍增时间.结果成人副神经预处理后可培养出具良好增殖活性的雪旺细胞,纯度可达95%以上;第二代细胞倍增时间为3d.结论成人外周神经经模拟瓦氏变性处理,可成功体外培养获得雪旺细胞.     

应用组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的：探讨组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经缺损的可行性。方法：应用预制的组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经15mm缺损。术后12周，分别进行显微解剖观察，再生轴突神经电生理测定，再生轴突生长和成熟情况的组织学观察及其图像分析处理。结果：组织工程化周围神经移植体结构完整，组织相容性良好：组织工程化周围神经移植组与自体神经移植组相比相对动作电位幅值恢复率差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。再生轴突在组织工程化周围神经移植体内生长良好，并可见较好的髓鞘结构形成。组织工程化周围神经移植组与自体神经移植组相比再生轴突密度恢复率差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：组织工程化周围神经可修复大鼠坐骨神经15mm缺损；     

雪旺细胞与周围神经组织工程

雪旺细胞(SchwannCell,SC)是周围神经系统特有的胶质细胞,不仅是支持保护轴突、维持周围神经的正常功能与良好微环境的重要因素,而且在周围神经损伤、再生与修复中也起着关键作用.目前多从幼年动物周围神经或成年动物瓦勒变性神经获取、培养SC,并与聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)等材料粘附、复合,预构成含SC的人工神经导管,引导轴突再生.但组织工程化人工神经、修复临床周围神经缺损的研究仍有待深入.     

应用组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:探讨组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经缺损的可行性。方法:应用预制的组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经15mm缺损。术后12周,分别进行显微解剖观察,再生轴突神经电生理测定,再生轴突生长和成熟情况的组织学观察及其图像分析处理。结果:组织工程化周围神经移植体结构完整,组织相容性良好。组织工程化周围神经移植组与自体神经移植组相比相对动作电位幅值恢复率差异无显著性意义(P>0.05)。再生轴突在组织工程化周围神经移植体内生长良好,并可见较好的髓鞘结构形成。组织工程化周围神经移植组与自体神经移植组相比再生轴突密度恢复率差异无显著性意义(P>0.05)。结论:组织工程化周围神经可修复大鼠坐骨神经15mm缺损。     

骨髓基质细胞诱导为雪旺细胞修复周围神经缺损

骨髓基质细胞（bone marrow stroma cells，BMSCs）是来源于骨髓基质的一种间充质细胞，来源丰富，可以解决雪旺细胞来源不足的缺点。骨髓基质细胞在体外诱导为神经细胞，诱导后进行培养。用特异性抗体检测细胞内蛋白。（1）利用新方法制作组织工程化的神经，为临床解决失神经肌肉的不可逆萎缩提供新的思路。（2）利用细胞诱导的方法，为组织工程化神经的临床应用提供研究基础。     

骨髓间充质细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损

背景:许旺细胞是周围神经组织工程的种子细胞,但体外分离、培养、纯化许旺细胞较困难.脱细胞同种异体神经移植物具有较强的修复外周神经缺损的能力,且可诱导骨髓间充质细胞分化为类许旺细胞,理论上骨髓间充质细胞可替代许旺细胞作为种子细胞应用于周围神经组织工程.目的:观察骨髓间充质细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损的效果,评估骨髓间充质细胞作为种子细胞修复周围神经缺损的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-07/12在大理学院基础医学院实验室完成.材料:将30只SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组10只.骨髓间充质细胞+异体移植组将骨髓间充质细胞复合脱细胞同种异体神经移植物培养的组织工程神经与两断端用10/0无创线端端吻合;异体移植组将脱细胞同种异体神经移植物桥接;自体移植组将切断的坐骨神经旋转180°端端吻合.方法:运用骨髓间充质细胞构建的组织工程神经修复大鼠10 mm坐骨神经缺损,移植后12周通过坐骨神经功能指数、腓肠肌湿质量恢复率、S-100免疫组织化学染色、电镜等方法观察移植物修复效果.主要观察指标:复合物培养时观察细胞形态的变化;移植后观察坐骨神经功能指数及腓肠肌湿质量恢复率;通过甲苯胺蓝染色观察新生髓鞘形成和轴突生长及神经纤维的分布情况,结合透射电镜及S-100蛋白免疫组织化学染色,观察许旺细胞生长和神经纤维再生情况.结果:坐骨神经功能指数及腓肠肌湿质量恢复率的检测结果显示骨髓间充质细胞+异体移植组优于异体移植组(P<0.05).骨髓间充质细胞+异体移植组复合物中S-100的表达明显高于异体移植组,有髓神经纤维数量、有髓纤维直径和髓鞘厚度均大于异体移植组(P< 0.05),修复效果接近自体移植组.结论:骨髓间充质细胞构建的组织工程神经修复周围神经缺损的效果优于单纯的脱细胞同种异体神经移植物,骨髓间充质细胞作为种子细胞在周围神经组织工程中具有较强的应用价值.     

神经导管联合人雪旺细胞修复大鼠外周神经损伤的研究

目的:探讨神经导管联合人雪旺细胞修复大鼠外周神经损伤的作用。方法:60只大鼠建立外周神经损伤模型,随机分为自体神经移植组、单纯导管修复组、联合修复组各20只,分别采取自体神经移植、单纯导管修复、雪旺细胞联合神经导管修复治疗,治疗后13周测定坐骨神经功能指数(SFI)、Jitter值,甲苯胺蓝染色观察再生神经中段髓鞘化轴突。结果:治疗后第13周,自体神经移植组的SFI和Jitter值小于联合修复组,联合修复组的SFI和Jitter值小于单纯导管修复组,差异均有统计学意义(P0.05);修复后,自体神经移植组、单纯导管修复组、联合修复组的髓鞘厚度分别为(3.01±0.27)、(2.22±1.10)、(2.63±1.17)μm,联合修复组的髓鞘厚度小于自体神经移植组,大于单纯导管修复组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:神经导管联合人雪旺细胞修复大鼠外周神经损伤有效。     

新生兔雪旺细胞体外培养及纯化的实验研究

目的优化雪旺细胞(SCs)的体外培养条件,在去除成纤维细胞(FCs)沾染后,应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进SCs的增殖以获取大量、纯净SCs应用于神经组织工程。方法采用高浓度胶原酶分次消化分离SCs,使用阿糖胞苷、Geneticin去除FCs,待基本为纯净的SCs后,再用bFGF促进其分裂增殖。结果经S-100染色鉴定,SCs纯度可达到98%以上。结论文章所用的方法是培养和促进SCs增殖较为理想的方法。     

新生兔雪旺细胞体外培养及纯化的实验研究

目的 优化雪旺细胞（SCs)的体外培养条件，在去除成纤维细胞（FCs)沾染后，应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)促进SCs的增殖以获取大量、纯净SCs应用于神经组织工程。方法 采用高浓度胶原酶分次消化分离SCs，使用阿糖胞苷、Geneticin去除FCs，待基本为纯净的SCs后，再用bFGF促进其分裂增殖。结果 经S－100染色鉴定，SCs纯度可达到98％以上。结论 章所用的方法是培养和促进SCs增殖较为理想的方法。     

应用人工神经修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

目的观察应用复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-壳聚糖导管修复大鼠周围神经损伤的效果。方法成年Wistar大鼠25 只分为假手术组(n=10)、单纯损伤组(n=5)和人工神经修复组(n=10)。假手术组仅暴露坐骨神经5 mm,单纯损伤组暴露坐骨神经并切断,人工神经修复组以复合bFGF-壳聚糖导管桥接缺损。术后对实验动物的坐骨神经进行大体观察,对运动进行行为观察,以及组织化学和免疫组织化学方法评价神经再生情况和靶肌肉恢复情况。结果术后5 周,与单纯损伤组相比,人工神经修复组运动功能有一定程度恢复。人工神经修复组再生的坐骨神经已经通过bFGF-壳聚糖导管越过缺损并与远端相连接。免疫组织化学方法显示,坐骨神经再生段可观察到神经微丝(NF)阳性和S-100 阳性纤维。应用Masson 染色方法,可观察到人工神经修复组腓肠肌去纤维化程度相对于单纯损伤组有明显改善。结论应用bFGF-壳聚糖导管能有效修复周围神经损伤并使大鼠运动功能得到改善。     

FK506对人胚雪旺细胞体外迁移活性的影响

目的：研究FK506促进周围神经再生的作用机制。方法：将人胚坐骨神经植块分4组：0．1μg／ml、1μg／ml和10μg／ml的FK506药物组以及空白对照组，比较各组雪旺细胞从植块中迁出的时间、96h迁移范围和MTT活性。结果：FK506药物组人胚雪旺细胞较早从植块中迁移出来，96h迁移范围明显大于对照组，但不同药物浓度组之间无明显差异。结论：FK506能促进体外培养的人胚雪旺细胞迁移并抑制成纤维细胞生长，这种作用在较低浓度时也能产生明显效果。     

成年兔雪旺细胞与医用组织引导再生胶原膜联合培养后植入体内的实验研究

目的：探索用组织工程方法构建人工神经的可行性。方法：应用医用组织引导再生胶原膜作为支架与成年兔雪旺细胞培养2周,以雪旺细胞胶原膜复合物的形式修复自体神经缺损,8周后对所获得的组织工程神经移植物进行形态学研究。结果：成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好并均匀分布于支架表面,形成bungner带,且基质分泌旺盛,神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收,结论：雪旺细胞可以在医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,本研究为组织工程方法修复长段神经缺损打下基础。     

Fibronectin促进周围神经再生的实验研究

目的：探讨局部应用Fibronectin（FN）对周围神经再生的影响。方法：将34只SD大鼠分为4组,1～3组每组10只,手术切除双侧10mm坐骨神经并用硅胶管套接,左侧套管内注入FN10μg;右侧注入生理盐水作为对照。术后1、3、4个月分别进行电生理和组织学检查。第4组另4只鼠于术后3个月行辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪检查。结果：FN治疗组术后1、3、4个月时的电生理和形态学检查结果均明显优于对照组。术后HRP逆行示踪检查发现相应节段的治疗组脊髓前角和背根神经节标记神经元明显多于对照组。结论：FN可促进周围神经损伤后的再生。     

超声评价骨髓间充质干细胞在外周神经缺损修复中的价值

目的通过超声评价骨髓间充质干细胞(mesenchyal stem cells,MSCs)在外周神经缺损修复中的价值。方法利用壳聚糖包被中药单体川芎嗪制备的缓释微球和胶原蛋白混合构建组织诱导性神经导管,应用大鼠MSCs予体外诱导,选择Wistar大鼠8只,随机分为MSCs组和无MSCs组,分别在连接后7 d、30 d和90 d时应用超声跟踪观察缺损神经的生长修复情况。结果 MSCs组神经导管内的缺损神经生长早于无MSCs组,MSCs组神经导管内的缺损神经纤维数量多于无MSCs组,MSCs组神经导管降解快于无MSCs组。结论 MSCs能显著促进缺损神经的修复。而超声对于评价MSCs在周围神经缺损修复中的作用具有重要价值。     

坐骨神经损伤模型的量化研究

目的:对SD大鼠坐骨神经钳夹伤模型进行量化研究,确定不同压力对坐骨神经造成的损伤程度,建立符合SunderlandⅤ度分类法中坐骨神经损伤模型。方法:对JZ06Cr 14 cm止血钳进行压力测定,采用JZ06Cr 14 cm止血钳进行造模,将32只4周龄健康清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,正常对照组(8只)及压力组(1扣压力亚组、2扣压力亚组、3扣压力亚组各8只),分别于造模后30 min检测各组神经传导速度(NCV),并取神经进行HE染色观察。结果:止血钳压力测定显示止血钳1扣压力约16 N,2扣压力约为31N,3扣压力约为46 N。1扣压力亚组的坐骨神经传导速度与正常对照组相比差异有统计学意义(P0.05),形态学显示神经纤维平行排列,结构致密,轴突、髓鞘、神经内膜束膜都完好无破裂;2扣压力亚组的NCV与正常对照组、1扣压力亚组之间相比差异均有统计学意义(P0.05),形态学可见神经纤维断裂,神经内膜发生部分损害,结构紊乱;3扣压力亚组的部分NCV无法测出,并与其他各组之间差异均有统计学意义(P0.05),形态学可见神经纤维断裂,神经外膜与束膜均保持完整。结论:约16 N压力坐骨神经钳夹伤模型符合SunderlandⅠ度损伤;约31 N压力坐骨神经钳夹伤模型符合SunderlandⅡ或Ⅲ度损伤;约46 N压力坐骨神经钳夹伤模型符合SunderlandⅢ度损伤。     

Upgraded Nerve Growth Factor Expression Induced by Low-Intensity Continuous-Wave Ultrasound Accelerates Regeneration of Neurotometicly Injured Sciatic Nerve in Rats

Low-intensity ultrasound (LIU) can stimulate injured nerve regeneration but the mechanism is still unclear. We investigated the stimulating effect and its mechanism of continuous-wave LIU on neurotometic injury of sciatic nerve. The right sciatic nerves of 64 adult Wistar rats were first crushed and then exposed (32 rats) or sham-exposed (32 rats) to LIU at the crush site. The LIU had a spatial averaged and temporal averaged intensity of 0.25W/cm² operated at 1.0 MHz for 1 min every other day. At various stages (the second, fourth, sixth and eighth weeks) after LIU exposure, the sciatic nerve function index (SFI), the sensory nerve conduction velocity (SNCV), the expression of nerve growth factor (NGF) and sample histology were studied. It was found that the density of nerve fibers with myelin sheath, SFI, SNCV and NGF expression of the treatment group were higher than that of control group (p < 0.05). It has been determined that LIU treatment can accelerate the regeneration and functional recovery of neurotometic injured sciatic nerve at earlier stages after injury, the upgraded expression of NGF induced by LIU may be the primary mechanism of the acceleration effects. (E-mail: wangzhibiao@haifu.com.cn)     

感觉性和运动性神经膜细胞的培养研究

目的对感觉性和运动性神经来源的神经膜细胞进行培养和鉴定,并通过神经生长因子(NGF)的表达间接地研究两种细胞的差别,探讨对神经特异性再生的影响。方法立体显微镜下对SD乳鼠后根神经和股神经运动支进行取材,经2.5g/L胰蛋白酶+0.3g/LIV型胶原酶联合消化,用高糖型DMEM/F12(含100g/LCS)对感觉神经源性和运动神经源性的神经膜细胞进行培养,并经抗S100荧光组织化学染色鉴定。双抗体夹心间接ELISA法测量两种神经膜细胞培养基中NGF的表达。结果培养的两种神经膜细胞经荧光染色证明均为神经膜细胞,光镜观察并手工计数显示两种细胞纯度均超过95%,未见形态学差异,但NGF的表达量和表达模式差异均有显著性意义(F=45.3681,P=0.000)。结论本实验方法可以获得高纯度的感觉性和运动性神经源性神经膜细胞,两者的生物学功能有差异。     

电针对DPN大鼠坐骨神经神经生长因子调节作用的实验研究

目的探讨电针治疗糖尿病周围神经病变（DPN）调节作用的机制。方法采用链脲佐菌素（STZ）制备DPN大鼠模型，将大鼠随机分为正常组、模型组、西药组和电针组；电针组取大鼠足三里、肾俞穴进行电针治疗，通过免疫组化和荧光定量PCR技术检测坐骨神经神经生长因子（NGF）蛋白和mRNA的表达。结果模型组、西药组和电针组大鼠NGF蛋白和mRNA的表达明显低于正常组（P〈0．05～0．01）；电针组大鼠治疗后坐骨神经NGF蛋白和mRNA表达上调，明显高于模型组（P〈0．01）。结论电针足三里、肾俞穴能够使DPN大鼠坐骨神经NGF蛋白和mRNA表达上调，促进坐骨神经修复。