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1.
目的研究Bcl-xL基因特异性RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞株体外增殖能力和凋亡的影响。方法构建靶向Bcl-xL的小干扰RNA(siRNA)表达载体,转染PC-3细胞后,采用半定量RT-PCR和Western blot法检测转染前后Bcl-xL mRNA及蛋白表达水平的改变;采用噻唑兰(MTT)法检测细胞生长增殖情况;TUNEL试剂盒测定细胞的凋亡情况。结果靶向Bcl-xL的序列特异性的siRNA可以有效地抑制PC-3细胞Bcl-xL基因的表达。转染靶向Bcl-xL的siRNA表达质粒可以显著抑制PC-3细胞的增殖(P<0.001),诱导细胞凋亡(P<0.001)。结论Bcl-xL基因特异性RNA干扰可以显著抑制前列腺癌PC-3细胞的体外增殖并诱导细胞凋亡。 相似文献
2.
目的 探讨发夹状shRNA封阻c-myc基因,抑制人结直肠癌Colo320细胞增殖、生长的状况。 方法 针对原癌基因c-myc构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞。荧光定量RT-PCR检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA表达,Western blot检测c myc、hTERT蛋白表达水平。Southern blot检测端粒的长度,PCR-ELISE法检测端粒酶活性。3H-thymidine实验分析DNA合成和细胞增殖。 结果 转染细胞增殖、生长皆受到抑制。同时,c-myc和hTERT的mRNA和蛋白表达显著下降,端粒的长度明显缩短,端粒酶活性降低。 结论 c-myc 的shRNA对人结直肠癌Colo320细胞的增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用,并呈剂量依赖关系。 相似文献
3.
目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamina 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,通过RT—PCR和Westerll Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果:成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P〈0.05),并能有效抑制PC-3增殖活性(P〈0.05)。结论:应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性,为肿瘤的生物学治疗提供新思路。 相似文献
4.
目的探讨靶向人端粒酶反转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对人鼻咽癌细胞株CNE-2 hTERT表达的影响,及其对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的效应。方法构建表达绿色荧光蛋白(EGFP)基因和靶向hTERT基因短发夹RNA的重组腺病毒质粒,观察其对鼻咽癌细胞株(CNE-2)的转染效果,RT-PCR检测hTERT mRNA表达水平,Western blot检测hTERT蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡状况。结果Adv-EGFP-shTERT重组腺病毒质粒转染率可达90%以上,成功转染CNE-2细胞24 h后,hTERT mRNA的表达水平显著下降,转染48 h后,hTERT蛋白表达明显下调,细胞增殖活性受到显著抑制,细胞凋亡率可达23.0%。结论腺病毒载体介导靶向hTERT基因的RNA干扰,能显著抑制端粒酶反转录酶表达,进而抑制端粒酶活性,抑制CNE-2细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌的基因治疗研究提供了理论基础。 相似文献
5.
目的 探讨shRNA靶向干扰钠氢交换调节因子(NHERF)1后对前列腺癌细胞PC-3M生物学行为的影响.方法 将pSuper.puro NHERF1 shRNA质粒和阴性对照质粒pSuper.puro luciferase shRNA分别转染人PC-3M前列腺癌细胞,经嘌呤霉素筛选,建立稳定低表达NHERF1的PC-3M细胞株.经Western印迹验证后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞增殖活性,采用划痕实验检测NHERF1-shRNA对前列腺癌PC-3M细胞迁移能力的影响,采用流式细胞仪检测NHERF1-shRNA对PC-3M细胞凋亡的影响,采用Western印迹检测NHERF1-shRNA对凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达的影响.结果 转染NHERF1-shRNA组比未转染及空载组细胞的增殖能力明显降低(F=62.63,P=0.004);转染NHERF1-shRNA组比未转染及空载组细胞的迁移率明显降低.相比于未转染PC-3M细胞和转染阴性对照质粒细胞,转染NHERF1-shRNA组细胞的凋亡百分比明显增加[(2.55±0.92)%和(11.98±3.28)%],达4倍以上(t=-2.392,P=0.001);Bcl-2蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达升高.结论 靶向NHERF1的序列特异性shRNA可抑制PC-3M细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡. 相似文献
6.
Livin异构体特异性shRNA对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:应用构建成功的Livin异构体(BIRC71,BIRC72)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体转染Hela细胞,探讨其对Livin基因的沉默效应及诱导Hela细胞凋亡的作用。方法:采用脂质体转染法转染Hela细胞,荧光实时定量PCR、Western blotting检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因拷贝数和蛋白表达的变化,将shRNA表达载体流式细胞术检测不同时间(24、48、72h)的细胞凋亡率。结果:真核表达载体的转染效率48h较24、72h高;转染pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin拷贝数明显减少(P〈0.05),蛋白质表达水平显著降低(P〈0.05);流式细胞术检测24、48、72h凋亡率,转染LivinshRNA组细胞的凋亡率显著高于对照组(P〈0.05),随时间延长(24→72h)凋亡率相应增加。结论:靶向Livin的shRNA真核表达载体可以有效特异地阻断Livin基因的表达,明显诱导宫颈癌细胞凋亡。 相似文献
7.
[目的]利用RNA干扰(RNAi)技术观测其对白血病K562细胞cyelin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒.通过壳聚糖介导转染K562细胞,Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化;集落形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclinD1基因的shRNA表达质粒(pshRNA-419和pshRNA-575)经壳聚糖转染后,能显著抑制cyelin D1基因表达;抑制K562细胞增殖,影响其集落形成能力;细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡明显。而m—pshRNA-790质粒并无上述生物学效应:[结论]cyclinD1基因表达下调可抑制K562细胞生长影响细胞周期分布并诱导细胞凋亡提示,因可能是白血病治疗的一个有效靶点。 相似文献
8.
用RNAi沉默survivin基因表达对前列腺癌细胞系PC3的影响 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达,并研究survivin基因沉默后对PC3细胞产生的影响。方法:用真核转录载体pSilencer^TM3.1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体pSilencer3.1-SVVl、pSilencer3.1-SVV2和pSilencer3.1-SVV3,并用脂质体法转染前列腺癌细胞系PC3,通过RT—PCR、蛋白印迹实验检测survivin的表达变化,并用流式细胞术、MTT法检测转染后PC3细胞的凋亡、细胞周期、细胞生长速度、对顺铂的敏感性等方面的变化。结果:重组载体pSilencer3.1-SVV2和pSilencer3.1-SVV3有效地阻断了PC3细胞中survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达(P〈0.01)。重组载体转染PC3细胞后,与对照组相比,细胞的凋亡增加了10%~15%;细胞生长速度明显变慢,其细胞数在84h时与对照组相比减少约30%;G1期细胞增加了10%。G2期和S期细胞减少了5%以上。加入顺铂后,pSilencer3.1-SVV2、pSilencer3.1-SVV3重组质粒转染的PC3细胞的存活数下降了35%~45%,细胞凋亡则增加了10%-14%。结论:初步证明了survivin基因在前列腺癌细胞分化增殖、抗凋亡等方面所扮演的重要角色,为进一步阐明survivin基因与前列腺癌的关系以及以survivin基因为靶点的前列腺癌基因治疗研究奠定了基础。 相似文献
9.
目的应用小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)抑制乳腺癌MCF-7细胞hTERT的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和凋亡的效应。方法体外化学合成针对hTERT基因的siRNA序列,在脂质体介导下转染MCF-7细胞,实时定量PCR检测hTERTmRNA表达水平,Westernblot检测hTERT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡状况,MTT法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比均可有效抑制hTERT的表达,hTERTsiRNA转染MCF-7细胞48h后,siRNAl-siRNA3组hTERTmRNA表达分别为(35.3±4.2)%、(30.7±2.8)%、(31.3±3.6)%,与阴性对照组(96.4±2.8%)相比,差异有统计学意义。MTT结果显示MCF-7细胞增殖能力显著降低,转染48h后,siRNAl~siRNA4细胞抑制率分别为(57.6±3.6)%、(61.3±4.3)%、(65.6±6.3)%和(3.1±4.5)%,细胞克隆形成能力下降,凋亡率明显增加。结论体外化学合成的hTERTsiRNA可以有效地抑制MCF-7细胞hTERT的表达,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 相似文献
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目的:探讨AKRlC3基因沉默对前列腺癌PC3细胞增殖与转移以及多西紫杉醇药物敏感性的影响。方法:通过脂质体转染的方法将GAPDH-pGIPZshRNA和AKRIC3-pGIPZshRNA瞬时转染前列腺癌PC3细胞。实验分为对照组、阴性对照组(GAPDH-pGIPZshRNA)和实验组(AKRlC3-pGIPZshRNA)。通过蛋白质印迹法检测转染72h后PC3细胞中AKRIC3蛋白的表达;细胞计数法检测各组前列腺癌PC3细胞的生长曲线及多西紫杉醇对各组细胞的抑制作用;划痕实验检测各组前列腺癌PC3细胞的迁移能力。结果:shRNA转染前列腺癌PC3细胞48h后荧光显微镜下细胞发绿色荧光。蛋白质印迹法结果表明,实验组AKRIC3蛋白表达下降,相对表达量为(5.71±0.03)%,明显低于阴性对照组(9.75±0.08)%和对照组(9.55±0.05)%,F=44.050,P〈0.001。同时PC3细胞生长速率变慢,对多西紫杉醇的药物敏感性增加,实验组耐药IC50(27.81±0.02)nmol/L明显低于对照组(60.26±0.03)nmol/L和阴性对照组(59.94±0.05)nmol/L,F-823200.711,P〈0.001。实验组细胞迁移能力下降。结论:前列腺癌PC3中AKRIC3基因的沉默能有效影响肿瘤细胞增殖、迁移和对多西紫杉醇药物的敏感性,提示AKRIC3有望成为前列腺癌治疗的靶基因。 相似文献
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Histone deacetylase inhibitors suppress telomerase reverse transcriptase mRNA expression in prostate cancer cells. 总被引:17,自引:0,他引:17
Mitsuhiro Suenaga Hiroshi Soda Mikio Oka Akihiko Yamaguchi Katsumi Nakatomi Ken Shiozawa Shigeru Kawabata Takashi Kasai Yasuaki Yamada Shimeru Kamihira Chuwa Tei Shigeru Kohno 《International journal of cancer. Journal international du cancer》2002,97(5):621-625
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目的:构建含Survivin基因启动子的、肿瘤特异性Survivin、Livin共沉默RNAi载体,研究该载体在前列腺癌细胞中的RNA沉默作用。方法:运用分子克隆技术,选取Survivin、Livin基因RNAi特异性序列,构建以Survivin、Livin基因为靶点的、含Survivin启动子的CGM30 miR-30 shRNA载体。经测序验证,用脂质体法转染PC-3细胞,RT-PCR、免疫印迹实验检测Survivin、Livin的表达变化,并用流式细胞术检测转染后PC-3细胞的凋亡变化。结果:构建的共沉默RNAi重组载体转染PC-3细胞后,Survivin、Livin基因在mRNA和蛋白水平上的表达均明显下调(P<0.01),且转染后的细胞凋亡增加了约15%,而正常前列腺上皮BPH-1细胞中则无此作用。结论:成功构建了含Survivin启动子、特异性沉默Survivin、Livin基因表达的RNAi共沉默载体CGM30-SP-svv-liv,转染该重组质粒后可促进肿瘤细胞的凋亡。 相似文献
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目的:探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法:收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况。选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO。应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响。结果:miR-181b在前列腺癌组织中高表达。转染miR-181b ASO使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱。结论:miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用。 相似文献
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