乙酰半胱氨酸抑制人肺成纤维细胞增殖及胶原合成机制的初步探讨

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)抑制人肺成纤维细胞增殖和胶原合成的机制.方法 分离培养人肺成纤维细胞,并以肺泡上皮来源的细胞系A549作为对照.将细胞分为对照组(不加任何处理)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)组(TGF-β_1为5μg/L)、NAC组(NAC为20 mmol/L)和联合组(5μg/L的TGF-β_1刺激24 h后换用不同浓度NAC继续作用24 h).用不同浓度NAC处理后,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;采用TGF-β_1刺激后加用NAC刺激,逆转录-PCR法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化,Western blot法检测cyclin E、α-肌动蛋白及信号转导与转录激活因子-3(STAT-3)蛋白的表达.结果 5、10、20、40 mmol/L的NAC对人肺成纤维细胞生长均有明显抑制作用,呈剂量依赖关系,而20 mmol/L的NAC对A549细胞无明显作用.10、20、40 mml\L的NAC可使G_0/G_1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低.经TGF-β_1刺激后,成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达明显增加,而NAC可抑制TGF-β_1诱导或未经诱导的Ⅰ型前胶原表达.TGF--β_1可诱导cyclin E和α-肌动蛋白的表达,其相对密度分别为0.98±0.09和1.56±0.23,20 mmol/L的NAC能明显抑制cyclin E的表达,其相对密度为0.52±0.04,但却小能抑制α-肌动蛋白的表达.TGF-β_1组和NAC组α-肌动蛋白的表达(相对密度分别为1.56 ±0.23和1.63±0.20)无明显差别.结论 NAC能够抑制人肺成纤维细胞cyclin E蛋白的表达,使细胞增殖阻滞于G_1期,从而抑制成纤维细胞发生增殖,抑制其胶原合成.对TGF-β_1刺激前后α-肌动蛋白的表达无明显抑制作用.     

姜黄素对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨姜黄素诱导大鼠肺成纤维细胞的细胞凋亡作用及其相关的分子机制.方法 20只雄性6周龄SD大鼠采用随机数字表法分为生理盐水组和博来霉素组,在博来霉素组大鼠的气管内注入博来霉素制作肺纤维化模型,生理盐水组大鼠注入等渗生理盐水作为对照.于实验第28天处死大鼠,留取肺组织进行病理学检查和肺成纤维细胞分离、原代培养及传代.将体外培养的生理盐水组大鼠肺成纤维细胞(NLF)和博来霉素组大鼠肺成纤维细胞(MLF)分别用不同浓度(5、10、20和40 μmol/L)的姜黄素孵育,原位缺口末端标记(TUNEL)法鉴别凋亡细胞,流式细胞仪测定凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、Caspase-8蛋白的表达,Envision免疫组织化学二步法检测凋亡中相关基因Caspase-9蛋白表达的变化.结果 MLF在分别用5、10、20和40 μmol/L姜黄素作用12 h后,细胞凋亡指数分别为(30.17±0.53)%、(37.20±0.25)%、(45.12±0.31)%和(51.90±0.27)%,明显高于未用姜黄素孵育的阴性对照组的(4.59±0.19)%,差异有统计学意义(F=2943.2,P<0.01);Caspase-3蛋白表达阳性率分别为(53.1±0.7)%、(60.5±0.6)%、(69.1±0.9)%和(74.9±0.7)%,明显高于阴性对照组的(5.5±0.8)%,差异有统计学意义(F=3380.3,P<0.01);Caspase-8蛋白表达阳性率分别为(37.2±0.5)%、(46.8±0.4)%、(56.5±0.3)%和(67.3±0.3)%,明显高于阴性对照组的(4.6±0.6)%,差异有统计学意义(F=5193.4,P<0.01);Caspase-9蛋白表达阳性率分别为(39.38±0.88)%、(47.51±0.24)%、(57.75±0.63)%和(68.36±0.29)%,明显高于阴性对照组的(4.92±0.34)%,差异有统计学意义(F=2186.7,P<0.01).NLF在姜黄素作用12 h后细胞凋亡指数和Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达阳性率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(F值分别为0.975、1.521、1.527和0.935,均P>0.05).结论 姜黄素可诱导肺纤维化大鼠肺成纤维细胞的细胞凋亡,其机制可能与激活Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白有关.     

维生素A类对大鼠肝贮脂细胞3T3细胞增殖及前胶原Ⅲ表达的影响

目的 研究维生素类物质对离体培养的肝纤维化相关细胞增殖活性及前胶原ⅢmRNA表达的影响。 方法 不连续密度梯度离心法分离纯化大鼠肝贮脂细胞。~3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性,细胞原位杂交,检测细胞前胶原ⅢmRNA表达水平。 结果 10~(-5)mol/L及10~(-4)mol/L的视黄酸分别抑制3T3细胞及贮脂细胞增殖活性(P<0.05及P<0.01),10~(-5)mol/L视黄酸单细胞水平抑制3T3细胞前胶原ⅢmRNA表达。视黄酸棕榈酯对细胞增殖活性无明确作用。 结论 维生素A(视黄酸)对离体肝纤维化相关细胞具有一定抗纤维化效应。     

轻度氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路

目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管外膜成纤维细胞凋亡的作用以及非诺贝特是否通过Sirt1途径调控TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞凋亡。方法原代培养血管外膜成纤维细胞,Western blot检测Sirt1在细胞中的表达,免疫荧光对Sirt1进行定位。预先1 h加入不同剂量的非诺贝特(25、50和100μmol/L),再用TNF-α(20μg/L)刺激细胞24 h。用MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测Sirt1激动剂白藜芦醇,Sirt1抑制剂尼克酰胺和Sirtinol对血管外膜成纤维细胞Sirt1表达的影响。细胞加入非诺贝特(50μmol/L),1 h后加入白藜芦醇(20μmol/L)、尼克酰胺(10mmol/L)和Sirtinol(25μmol/L),1 h后再加入TNF-α(20μg/L)刺激24 h,流式检测细胞凋亡。结果 Sirt1在血管外膜成纤维细胞中有表达且主要位于细胞核中。与正常组比较,TNF-α能促进细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0.01),非诺贝特能够剂量依赖性抑制TNF-α诱导的细胞增殖和凋亡(P<0.01)。白藜芦醇能够上调细胞S...     

血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,四氮唑盐比色法检测细胞增殖,流式细胞分析技术测定细胞周期,逆转录—聚合酶链式反应测定心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果①1.0μmol/L血管紧张素Ⅱ作用24h,心脏成纤维细胞的四氮唑蓝比色分析法吸光度值(0.24±0.01)较无血清对照组(0.14±0.01)明显增加(P<0.01);0.001~1.0μmol/L血管紧张素(1-7)和1.0μmol/L血管紧张素Ⅱ共同干预后吸光度值逐渐降低,分别为0.20±0.01、0.19±0.01、0.13±0.01、0.16±0.03,均显著低于血管紧张素Ⅱ组(P<0.01)。②血管紧张素Ⅱ组心脏成纤维细胞的S期百分率(14.0%±0.9%)和增殖指数(23.4±1.8)较对照组(5.4%±0.7%和10.8±2.4)明显增高(P<0.01);0.1μmol/L血管紧张素(1-7)干预后S期百分率(8.5%±0.7%)和增殖指数(16.2±2.0)较血管紧张素Ⅱ组降低(P<0.01)。③血管紧张素Ⅱ刺激后心脏成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为较对照组明显增高(P<0.01);给予0.001~1.0μmol/L血管紧张素(1-7)和1.0μmol/L血管紧张素Ⅱ共同干预后,胶原表达水平浓度依赖性的下降,均显著低于血管紧张素Ⅱ组(P<0.05)。结论血管紧张素(1-7)具有抑制血管紧张素Ⅱ浓度增加引起的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。     

大黄素对人胰腺癌细胞BxPC3增殖及凋亡基因表达的影响

目的 探讨大黄素对人胰腺癌细胞BxPC3的生长抑制作用及其对细胞周期、凋亡率和凋亡相关基因表达的影响.方法 用MTT法测定不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素对体外培养的BxPC3细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法检测BxPC3细胞bax、bak、bad、bid mRNA表达.结果 0(对照组)、10、20、40、80 μmol/L大黄素处理BxPC细胞后,细胞存活率分别为(97.42±2.45)%、(78.58±3.11)%、(62.39±2.19)%、(51.68±2.92)%、(34.30±4.04)%;G0/G1期细胞比例分别为(51.22±0.64)%、(53.88±0.72)%、(55.39±1.12)%、(58.17±1.48)%、(63.72±1.52)%;S期细胞分别为(42.87±0.67)%、(39.68±0.58)%、(34.60±1.06)%、(31.88±1.48)%、(27.26±1.67)%;细胞凋亡率分别为(19.16±1.69)%、(31.78±2.21)%、(47.03±3.39)%、(55.92±5.39)%、(62.78±3.19)%;bax、bak、bad、bid mRNA表达水平呈剂量依赖性增高(F=55.649,P<0.01;F=19.403,P<0.05;F=29.009,P<0.05;F=39.546,P<0.01).结论 大黄素能抑制体外培养的BxPC3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调bax、bak、bad、bid mRNA表达有关.     

氧化苦参碱对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的作用及机制

目的:探讨氧化苦参碱对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞凋亡的诱导作用及机制。方法:以不同终浓度(0、5、10、20mmol/L)氧化苦参碱处理MM U266细胞。分别采用MTT法、瑞特染色、流式细胞仪及western blot检测MM U266细胞增殖、细胞凋亡形态、细胞凋亡及其凋亡因子(Bax、Bcl-2)蛋白表达。结果:氧化苦参碱(5、10、20mmol/L)可显著抑制MM U266细胞增殖,呈剂量依赖性。20 mmol/L氧化苦参碱作用48h,MM U266细胞呈现典型凋亡形态学改变。氧化苦参碱(5、10、20mmol/L)作用48h后,MM U266细胞凋亡率分别为(11.5±1.4)%、(24.7±2.5)%、(43.6±3.4)%,呈剂量依赖性。氧化苦参碱(5、10、20mmol/L)作用MM U266细胞48h,可上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,并呈现剂量依赖性。结论:氧化苦参碱可诱导MM U266细胞凋亡,调控凋亡因子Bax、Bcl-2的表达是其可能作用机制。     

N-乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用

目的 了解N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制.方法 用过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞,建立内质网氧化应激凋亡模型,用NAC进行干预.通过四甲基偶氮唑盐、DNA梯度分析,Western blot、流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)的产生等方法,了解NAC对H2O2诱导HepG2细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白的表达以及ROS产生的影响.结果 用不同浓度H2O2(0、1、3,5 mmol/L)诱导HepG2细胞6 h后,发现随着H2O2浓度增加,细胞活力下降,凋亡率增加,分别为0.7%±0.5%、26.4%±1.8%、29.7%±1.2%、51.2%±9.4%;细胞凋亡信号蛋白表达增加,ROS产生增多,分别为14.0%±0.5%、95.2%±0.1%、97.5%±0.25%、98.3%±0.2%;在3 mmol/L时出现典型内质网氧化应激凋亡形态学改变.用NAC(10、20 mmol/L)干预后发现,NAC可明显提高细胞活力、细胞凋亡率由29.7%±1.2%降至23.3%±4.7%和14.3%±1.2%,细胞凋亡过程中凋亡信号蛋白的表达减少、细胞内ROS的产生率由97.5%±0.2%降至52.2%±0.8%和51.2%±2.9%.结论 NAC能对氧自由基反应有直接抑制作用,阻断内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡,减轻肝细胞损伤.     

T3对人外周血淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体表达及细胞凋亡的影响

目的研究不同浓度T3对体外培养的人外周血淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达及细胞凋亡的影响。方法密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞,加入不同浓度T3,作用5d后,流式细胞仪检测淋巴细胞表面TRAIL的阳性率及细胞凋亡。结果(1)随T3浓度增加,TRAIL表达量增加,在1.0×10-12mol/L与1.0×10-11mol/L浓度T3刺激下,TRAIL阳性率分别为(16.78±3.84)%、(18.11±3.04)%,两组间差异无统计学意义(P>0.05),T3在1.0×10-10、1.0×10-9、1.0×10-8mol/L时,TRAIL阳性率分别为(23.02±2.28)%、(28.01±1.37)%、(32.43±3.96)%,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(2)T3浓度从0mol/L增至1.0×10-12、1.0×10-11、1.0×10-10、1.0×10-9、1.0×10-8mol/L,淋巴细胞凋率分别为:(5.13±0.89)%、(12.53±2.00)%、(15.51±2.45)%、(18.66±1.02)%、(22.76±2.43)%、(28.76±3.32)%,不同浓度组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论T3促进淋巴细胞TRAIL的表达及凋亡,提示在Graves病中T3可能通过TRAIL途径诱导淋巴细胞凋亡,推测此机制可能参与了Graves病的发病。     

N-乙酰半胱氨酸对毒胡萝卜素诱导的HepG2细胞内质网氧化应激凋亡的影响

目的 了解N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用.探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制.方法 用毒胡萝卜素(TC)诱导HepG2细胞,建立内质网应激凋亡模型,用NAC进行干预.噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪、DNA梯形电泳检测凋亡率及活性氧(ROS),Western印迹检测葡萄糖调节蛋白(GRP)78、Caspase-12酶原及ADP聚合酶(PARP)表达.多样本间均数采用方差分析.结果 用2μmol/L TG诱导HepG2细胞0、24、36和48 h,随诱导时间延长,细胞活力逐渐下降;GRP 78、Caspase-12酶原及PARP表达增高;凋亡率逐渐增加.分别是0.7%±0.5%、27.6%±6.3%、29.7%±3.03%和47.9%±3.5%(P<0.05);ROS产生逐渐增加,分别是14.0%±0.5%、36.1%±300%、38.2%±6.0%和48.3%±12.4%(P<0.05);诱导36、48 h后细胞出现典型DNA梯形条带.10 mmol/L、20 mmol/L NAC分别与2/μmol/L TG共同温育HepG2细胞后发现,NAC可明显提高细胞活力;抑制GRP 78、Caspase-12酶原及PARP表达,细胞凋亡率分别降至14.0%±1.3%和11.0%±0.3%;细胞内ROS的产生减至34.7%±0.8%与31.5%±2.9%.结论 TG作为一种内质网特异的钙离子ATP酶抑制剂,能触发HepG2细胞内质网氧化应激凋亡;而NAC作为巯基合成的前体.直接抑制氧自由基反应,阻断内质网氧化应激介导的细胞凋亡,减轻肝细胞损伤,达到临床治疗肝功能衰竭的作用.     

利拉鲁肽治疗非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病患者血脂、血管内皮功能和肝纤维化指标的变化*

目的 探讨应用利拉鲁肽治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)合并2型糖尿病(T2DM)患者血脂、血管内皮功能和血清肝纤维化指标的变化。方法 2014年1月～2018年12月我院收治的NAFLD合并T2DM患者90例,被随机分为对照组45例和观察组45例,分别给予二甲双胍或二甲双胍联合利拉鲁肽治疗12周。检测空腹血糖(FPG)、餐后 2 h 血糖(2hPPG)和糖化血红蛋白(HbA1c),使用高分辨超声诊断仪检测肱动脉内径变化,记录血管舒张内径达到最大值所需的时间(T₁)和舌下含化硝酸甘油后血管达最大内径所需的时间(T₂),计算肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能(EDR)和硝酸甘油介导的内皮非依赖性血管舒张功能(END)。采用放射免疫分析法检测血清透明质酸(HA)、 层粘连蛋白(LN)、 IV型胶原(CIV)和 III型前胶原(PIIIP)。结果 在治疗结束时,观察组和对照组FPG分别为(7.3±1.9)mmol/L对(8.6±1.8)mmol/L,2hPPG分别为(9.8±2.3)mmol/L对(11.4±2.2)mmol/L,HbA1c水平分别为(7.2±1.0)%对(8.3±1.2)%,差异显著(P＜0.05);血清TC分别为(4.8±0.9)mmol/L对(5.6±1.2)mmol/L、TG分别为(1.5±0.4)mmol/L对(2.0±0.6)mmol/L、LDL-C分别为(2.0±0.6)mmol/L对(2.9±0.7)mmol/L和HDL-C分别为(1.6±0.3)mmol/L对(1.3±0.2)mmol/L,差异显著(P＜0.05);T₁分别为(56.1±6.5)s对(62.9±5.8)s,EDR分别为(7.8±1.0)%对(5.2±0.8)%和END分别为(21.3±2.9)%对(17.2±2.5)%,差异显著(P＜0.05);血清HA分别为(70.3±9.2)ng/ml对(85.9±10.3)ng/ml, CIV分别为(50.2±0.7)ng/ml对(67.3±0.9)ng/ml和PIIIP分别为(6.2±0.6)ng/ml对(8.3±0.5)ng/ml,差异显著(P＜0.05)。结论 应用利拉鲁肽治疗NAFLD合并2 型糖尿病患者能有效降低血糖,改善血管内皮功能,纠正脂代谢紊乱,对预防糖尿病患者大血管并发症可能有益。     

重组2型腺相关病毒-转化生长因子β3对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织病理学和Ⅰ型胶原表达的影响

目的 通过重组2型腺相关病毒(rAAV2)和基因转导,探讨转化生长因子(TGF)β 3对人鼠肝纤维化的影响. 方法构建并验证rAAV2-TGF 3.实验人鼠随机分为正常对照组、模型组、阴性对照组和TGF β 3干预组.40%的四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型.在四氯化碳诱导前l周,将rAAV2 TGF β 3 注入大鼠尾静脉,造模8周后处死人鼠,取肝脏组织做HE染色观察肝脏组织学改变,Masson染色观察胶原纤维分布,免疫组织化学染色观察Ⅰ型胶原的表达,对胶原纤维的阳性面积比和Ⅰ型胶原的平均吸光度值进行半定量分析.多组数据问比较采用单因素的方差分析,若各组总体方差齐同,采用SNK-q检验,若方差不齐,采用Durmett'S T3检验. 结果 HE染色结果显示,rAAV2-TGF β3干预后,肝组织纤维间隔增生减少;Masson染色结果显示,人鼠胶原纤维主要分布在血管和汇管区及狄氏间隙,TGF β 3干预组大鼠肝内的胶原纤维阳性面积比为7.7%±1.5%,明显低于模型组的13.2%±2.2%和阴性对照组的12.3%±1.5%(q值分别为9.456和8.217,P值均<0.01).免疫组织化学染色结果显示,Ⅰ型胶原主要表达在血管和汇管区及狄氏间隙,TGF β 3干预组大鼠肝内的Ⅰ型胶原的表达为0.185±0.033,明显低于模型对照组的0.252±0.042和阴性对照组的0.230±0.029(口值分别为6.228和4.346,P值均<0.01).结论 TGF β 3可明显减轻实验人鼠的肝纤维化程度和组织学损伤,降低Ⅰ型胶原的表达.     

吡喹酮异构体对肝星状细胞系LX⁃2增殖及活化的作用

目的　观察左旋吡喹酮（L⁃PZQ）和右旋吡喹酮（D⁃PZQ）体外对人肝星状LX⁃2细胞系增殖及活化的作用差异。方法　利用转化生长因子⁃β（TGF⁃β）刺激激活LX⁃2细胞;采用CCK⁃8法检测以0 ~ 50 μg/mL梯度浓度吡喹酮刺激24 h后的LX⁃2细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫印迹试验检测15 mg/mL吡喹酮刺激LX⁃2细胞24 h 后的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃平滑肌肌动蛋白（α⁃SMA）基因表达水平和48 h后蛋白表达水平,以分析LX⁃2细胞活化情况。结果　L⁃PZQ和D⁃PZQ两药物各浓度组LX⁃2细胞存活率差异均有统计学意义（F = 6.119、79.180,P均< 0.05）;药物浓度< 30 μg/mL时,L⁃PZQ和D⁃PZQ对激活型LX⁃2增殖能力均无显著影响（P均> 0.05）;L⁃PZQ浓度> 50 μg/mL和D⁃PZQ浓度> 40 μg/mL时,均对激活型LX⁃2增殖能力产生抑制作用（P均< 0.05）;D⁃PZQ浓度为40 μg/mL和50 μg/mL时,对激活型LX⁃2增殖的抑制作用均强于L⁃PZQ（t = 3.419、8.776,P均< 0.05）。空白组、TGF⁃β诱导组、L⁃PZQ组和D⁃PZQ组LX⁃2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因（F = 21.55、79.99、46.70,P 均< 0.05）和蛋白表达水平（F = 20.12、30.29、32.93,P 均< 0.05）差异均有统计学意义。L⁃PZQ对激活型LX⁃2细胞中Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因表达水平具有显著抑制作用（P均< 0.05）,但对Ⅰ型胶原基因表达水平及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA蛋白表达水平均无显著影响（P均> 0.05）;D⁃PZQ对激活型LX⁃2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因和蛋白表达水平均有显著抑制作用（P均< 0.05）;D⁃PZQ对激活型LX⁃2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α⁃SMA基因表达抑制作用强于L⁃PZQ（P均< 0.05）。结论　L⁃PZQ和D⁃PZQ对LX⁃2细胞增殖及活化均有一定抑制作用,且D⁃PZQ的抑制作用强于L⁃PZQ。     

甲状腺激素对成年大鼠海马内突触结合蛋白Ⅰ表达的影响

目的 观察不同甲状腺激素水平对大鼠海马突触结合蛋白Ⅰ(syt Ⅰ)蛋白表达水平的影响.方法 复制雄性SD大鼠成年期甲状腺功能减退症(甲减)、甲状腺功能亢进症(甲亢)模型,用放射免疫法测定血清甲状腺激素T3、T4水平,用免疫组织化学超敏链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(S-P)法分析海马CA1区、CA3区和齿状回(DG)Syt Ⅰ蛋白的表达.结果 甲减组大鼠血清T3、T4水平[(0.34±0.12)、(41.03±11.37)nmol/L]明显低于对照组[(0.65±0.15)、(55.20±10.68)nmol/L,P<0.01或<0.05];甲减组Syt Ⅰ免疫反应产物阳性颗粒较对照组也明显减少,尤以海马CA1、CA3区锥体细胞层、放射层及DG区颗粒细胞层减少明显,Syt Ⅰ免疫反应产物,甲减组海马CA1区多形层(0.048±0.007)、细胞层(0.299±0.035)、放射层(0.042±0.007)、腔隙分子层(0.038±0.006)和CA3区的细胞层(0.085±0.019)、放射层(0.040±0.011)、腔隙分子层(0.038±0.006)及DG区颗粒细胞层(0.076±0.019)均较对照组(0.068±0.014、0.376±0.053、0.053±0.008、0.056±0.009,0.118±0.026、0.052±0.010、0.053±0.009、0.099±0.015)明显减少(P<0.01或<0.05).甲亢组大鼠血清T3、T4水平[(1.43±0.30)、(157.18±19.95)nmol/L]明显高于对照组(P<0.01).CA1区细胞层(0.322±0.050)、放射层(0.039±0.006)、腔隙分子层(0.042±0.006)和CA3区细胞层(0.098±0.034)、放射层(0.046±0.013)、腔隙分子层(0.046±0.010)及DG区颗粒层(0.085±0.024)、分子层(0.042±0.009)Syt Ⅰ免疫反应产物也较对照组减少(P<0.05或<0.01).结论 甲状腺激素水平增高或降低均可导致成年大鼠海马内SytⅠ蛋白表达减少.     

Effects of salvianolic acid-A on NIH/3T3 fibroblast proliferation, collagen synthesis and gene expression

AIM:To investigate the mechanisms of salvianolic acid A (SA-A) against liver fibrosis in vitro.METHODS:NIH/3T3 fibroblasts were cultured routinely, and incubated with 10(-4) mol/L-10(-7)mol/L SA-A for 22h. The cell viability was assayed by (3)H proline incorporation, cell proliferation by (3)H TdR incorporation, cell collagen synthetic rate was measured with (3)H proline impulse and collagenase digestion method.The total RNA was prepared from the control cells and the drug treated cells respectively, and alpha(1) I pro-collagen mRNA expression was semi-quantitatively analyzed with RT-PCR.RESULTS:10(-4)mol/L SA-A decreased cell viability and exerted some cytotoxiciy,while 10(-5)mol/L -10(-7)mol/L SA-A did not affect cell viability, but inhibited cell proliferation significantly, and 10(-6)mol/L SA-A had the best effect on cell viability among these concentrations of drugs. 10 (-5)mol/L -10(-6)mol/L SA-A inhibited intracellular collagen synthetic rate, but no significant influence on extracellular collagen secretion. Both 10(-5)mol/L and 10(-6)mol/L SA-A could decrease alpha(1)I pro-collagen mRNA expression remarkably.CONCLUSION:SA-A had potent action against liver fibrosis. It inhibited NIH/3T3 fibroblast proliferation, intracellular collagen synthetic rate and type I procollagen gene expression, which may be one of the main mechanisms of the drug.     

二甲双胍对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨二甲双胍对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响及其机制。方法 用不同浓度(0mmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L)二甲双胍分别处理TPC-1细胞24h。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力；采用Annexin Ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度二甲双胍对TPC-1细胞凋亡的影响，同时在40mmol/L组加入腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C，观察其对TPC-1细胞凋亡的影响；采用Western blot法检测磷酸化AMPK（p-AMPK）及Caspase-9蛋白的表达。结果 与0mmol/L组比较，1mmol/L及5mmol/L组的TPC-1细胞增殖能力无明显改变（P＞0.05）；而10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L二甲双胍均可明显抑制TPC-1细胞的增殖能力，且呈剂量依赖性（P＜0.05）。与0mmol/L组比较，不同浓度二甲双胍均可明显增加TPC-1细胞凋亡率（P＜0.001）；而加入Compound C后，40mmol/L组TPC-1细胞凋亡率较前明显下降（P＜0.001）。与0mmol/L组比较，1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L组p-AMPK、Caspase-9表达量增加。结论 二甲双胍可诱导甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡，且二甲双胍诱导TPC-1细胞凋亡的过程可能与激活AMPK通路有关，可能由Caspase-9介导。     

急性心肌梗死应用阿托伐他汀强化治疗的临床研究

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)患者早期应用阿托伐他汀40 mg/d的有效性及安全性.方法 对我院心内科冠心病监护病房2003年1月至2007年6月的1102例AMI患者于人院24 h内给予阿托伐他汀40 mg/d,患者平均住院(10.17±1.83)d.对出院时低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)<2.0 mmol/L,谷丙转氨酶(ALT)或谷草转氨酶(AST)升高超过正常值3倍以上的患者服用剂量减半,即阿托伐他汀20 mg/d,比较用药前、出院时及随访治疗期间血脂指标、高敏C反应蛋白(hs-CRP)及肝功能变化情况.结果 (1)治疗后总胆固醇(TC)、LDL-C和载脂蛋白B(ape B)比治疗前均有显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05).其中LDL-C由(3.24±1.04)mmol/L下降至出院时的(2.27±2.00)mmol/L,随访3个月时进一步下降到(1.48±0.78)mmol/L;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)由(1.45±0.38)mmol/L下降到出院时的(1.20±0.30)mmol/L至随访3个月时升至(1.65±1.79)mmol/L,各组间比较均P<0.05.(2)hs-CRP阿托伐他汀治疗前、出院时及随访1个月时分别为(49.71±50.46)mg/L、(8.80±17.66)mg/L和(2.61±2.30)mg/L,各组比较均P<0.05.(3)出院时ALT>120 U/L有124例(11.25%),AST>120 U/L有26例(2.4%).共502例患者返院随访复查.随访1个月时ALT>120 U/L仅为4例;随访3个月时无ALT>120 U/L的患者.结论 AMI患者早期应用阿托伐他汀40 mg/d治疗是有效和安全的.     

As2O3联合Aspirin对诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的:观察As2O3与Aspirin联合应用对肝癌细胞Bel-7402的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养肝癌Bel-7402细胞,Aspirin、As2O3不同浓度孵育细胞.倒置显微镜观察细胞形态学改变,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测As2O3和Aspirin单独及联合应用对Bel-7402细胞增殖情况的影响,流式细胞术观察细胞凋亡情况,并通过流式软件分析细胞周期变化.结果:As2O3及Aspirin对肝癌Bel-7402细胞生长均呈不同程度的抑制,且呈浓度依赖性.二者联合具有协同作用,药物联用组抑制率均显著高于单独应用同等剂量As2O3组和Aspirin组(P<0.05).2.0μmol/LAs2O3与0.2mmol/LAspirin联用组与2.0μmol/LAs2O3单药组相比,凋亡率从5.64%±0.56%提高到7.35%±0.62%,差异具有统计学意义(P<0.05).且通过对两组细胞周期检测发现,G1期细胞从40.52%±0.64%下降到32.03%±0.97%,G2期及S期细胞分别从9.57%±0.82%、50.41%±0.32%上升到13.66%±0.82%、54.37%±0.69%,Aspirin能显著增强As2O3诱导细胞集中于S及G2期的作用,从而增强其促凋亡作用.结论:Aspirin能增强As2O3诱导细胞凋亡的作用,该作用可能与影响细胞周期有关.