去垢剂浓度对灌流法制备脱细胞肺支架效果的影响

目的比较不同浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)和3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)对制备脱细胞肺支架效果的影响。方法选用SD大鼠21只,鼠龄8～9周,体质量200～300 g。采用蠕动泵灌洗系统,分别用磷酸盐缓冲溶液(对照组)及3种不同浓度的两种去垢剂(0.1%SDS、0.2%SDS、0.3%SDS、4 mmol/L CHAPS、8 mmol/L CHAPS、12 mmol/L CHAPS 6个实验组)对大鼠肺脏进行灌洗制备脱细胞肺支架,并且在此过程中每隔0.5 h拍照截取肺组织图片;再分别测定各组脱细胞肺支架残留DNA的量及观察各组胶原质3及纤维连接蛋白的免疫荧光染色。结果随着灌洗时间的延长,各实验组大鼠肺脏透明度均逐渐增高。且脱细胞后肺都保持着肺泡、支气管等基本结构。不同浓度的同一种试剂灌洗后脱细胞肺支架大体形态观无明显差别。随着去垢剂浓度的增加,各SDS组及各CHAPS组DNA残留量分别为(20.41±4.85) ng/mg、(24.90±3.73) ng/mg、(27.92±5.11) ng/mg、(114.14±7.82) ng/mg、(118.93±10.84) ng/mg、(121.04±6.46) ng/mg,对照组为(177.77±9.37) ng/mg,各实验组与对照组之间差异均有统计学意义(P 0.05),各实验组之间差异无明显统计学意义(P 0.05)。标记胶原质3和标记纤维连接蛋白的免疫荧光染色结果显示,各实验组4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)蓝染的细胞核均模糊、分散,对照组DAPI蓝染的细胞核较完整。实验组及对照组红染的阳性标记物胶原质3及纤维连接蛋白分布较分散。结论不同浓度下的SDS和CHAPS对制备脱细胞肺支架有着一定的影响。     

两种不同去污剂制备肺去细胞支架的对比

目的:比较离子型洗涤剂十二烷基磺酸钠(SDS)与脱氧胆酸钠针对肺去细胞支架制备的性能,寻找一种合适的肺去细胞方法以得到模拟可以促进细胞附着和分化天然细胞外基质的肺功能架构。方法:SD大鼠随机分成正常对照组、去细胞SDS组、去细胞脱氧胆酸钠组,分别取心、肺联合体,两组去细胞组均经右心室置入留置针至肺主动脉。去细胞SDS组使用肝素、Triton X-100、SDS溶液和去离子水依次灌注;去细胞脱氧胆酸钠组使用肝素、Triton X-100、脱氧胆酸钠溶液和去离子水依次灌注。各组分别采用扫描电镜观察支架结构;H-E染色、Masson三色染色观察残留细胞、细胞核成分;免疫荧光染色观察肺组织层黏连蛋白、纤维连接蛋白保留情况,并进行DNA含量测定。结果:扫描电镜显示去细胞SDS组支架肺泡结构较去细胞脱氧胆酸钠组完整;H-E染色显示去细胞SDS组肺支架未见明显细胞及细胞核成分残留,去细胞脱氧胆酸钠组可见少量细胞核成分残留;Masson染色显示去细胞SDS组弹性纤维保留优于去细胞脱氧胆酸钠组;免疫荧光显示去细胞SDS组层黏连蛋白和纤维连接蛋白结构较去细胞脱氧胆酸钠组完整,保留度较高;去细胞SDS组DNA含量为(35.28±8.20)ng/mg,明显低于去细胞脱氧胆酸钠组(52.33±7.67)ng/mg,差异有统计学意义。结论:两种去污剂均可有效清除肺内细胞成分,较好地保留细胞外基质,其中SDS溶液灌注法优于脱氧胆酸钠溶液灌注法。     

猪小肠黏膜下层脱细胞支架的制备及组织学评价

目的评价不同浓度的十二烷基磺酸钠(SDS)处理猪小肠黏膜下层(SIS)的脱细胞效果,筛选最佳脱细胞浓度,为组织工程化角膜上皮的制备提供支架材料。方法配制0.1%、0.2%、0.3%、0.5%SDS随机分成A、B、C、D 4组,分别脱细胞处理SIS 15min、30min、1h、2h(n=20),同时观察SIS的大体形态变化,HE和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察脱细胞前后SIS的生物学特性,并对脱细胞支架进行基因组DNA分析(n=5)。结果脱细胞SIS肉眼观察呈乳白色、半透明的膜状物,具有一定的弹性、韧性及透光性;HE和DAPI染色光学显微镜观察结果显示,A组及B组处理30min时SIS生物支架无细胞及DNA残留,组织结构保留完整,胶原纤维间孔隙率增加;A组及B组处理30min脱细胞率可达90%以上。结论 0.1%及0.2%SDS处理30min条件下脱细胞效果较好,能更好地降低SIS的免疫原性,是SDS脱细胞处理SIS比较理想的浓度时间条件,为组织工程化角膜上皮的构建奠定理论基础。     

人体脱细胞脂肪组织的制备及组织学评价

目的 通过为人体吸脂来源的脂肪组织脱细胞,评估脱细胞脂肪组织的组织学成分,探讨其作为组织工程支架材料的可能性。 方法 采用改良的脱细胞方法为5例人吸脂来源的脂肪组织脱细胞,观察制备过程的大体形态,对脱细胞脂肪进行HE染色、Masson染色、Gomori染色、油红O染色、DAPI染色,并对脱细胞组织中残留的DNA、胶原蛋白及糖胺聚糖含量进行定量检测。 结果 本实验制备的脱细胞脂肪,外观呈不透明的乳白色,无固定形态。HE染色和DAPI染色无可见细胞成分残留,Masson染色可见胶原纤维,Gomori染色可见网状纤维存在,油红O染色无可见脂质残留。组织中残留的DNA含量微小,胶原和糖胺聚糖含量均有所保留。结论 应用结合物理化学和酶学的脱细胞方法,可以为人体的吸脂来源脂肪组织脱细胞,得到的脱细胞组织去除了脂肪组织中的细胞及脂质成分,保留了脂肪组织细胞外基质的组成成分。     

经液氮保存具有活性的同种生物瓣脱细胞支架的制备

目的为体外构建组织工程瓣提供脱细胞的同种生物瓣支架材料,并建立相应的技术方法。方法选取经液氮保存、具有活性的同种生物带瓣管道作为实验材料,用含十二烷基硫酸钠(SDS)的Tris低渗缓冲液脱去同种带瓣管道存在的细胞;固定剂固定后,分别行HE染色、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜和扫描电镜观察、摄片。结果用质量浓度为0.03%SDS的Tris低渗缓冲液与同种瓣膜共同孵育48h,完全脱去了表面的内皮细胞(ECs),又较完整地保留了胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质主要成分,其形态学结构在脱细胞前后无明显改变;瓣叶中心部位有部分成纤维细胞存留。而对于脱主动脉壁细胞,质量浓度为0.1%SDS更合适。结论质量浓度为0.03%～0.1%SDS的低渗缓冲液对制备脱细胞的同种生物瓣支架效果较佳,有利于同种瓣再内皮化时种植细胞的粘附和扩增,可进一步应用于组织工程瓣体外构建的研究。     

甲状腺脱细胞生物支架的制备及鉴定

目的 采用十二烷基硫酸钠（SDS）浸泡联合平板振荡制备兔甲状腺脱细胞生物支架,并对脱细胞支架进行评估。方法 20只新西兰大白兔随机分为正常对照组和脱细胞组,每组10只,脱细胞组兔甲状腺组织浸泡于1%SDS溶液后放置于37.0 ℃恒温振荡器中振荡24 h,去离子水振荡清除支架内残留去细胞试剂及DNA成分。对支架进行HE染色、DNA含量检测、扫描电子显微镜检查以及免疫荧光染色进行鉴定。 结果 甲状腺脱细胞支架DNA含量显著低于正常甲状腺组织（P<0.01）,DNA清除率达90%以上;经检测甲状腺脱细胞支架内无DNA成分残留,同时较为完整地保存了支架3D空间结构及蛋白成分。 结论 浸泡法联合平板振荡法可有效清除甲状腺细胞成分,较为完整地保留支架空间结构及蛋白成分。     

灌注法制备离体大鼠心脏脱细胞基质

目的 探索制备离体大鼠心脏脱细胞生物支架材料的新方法,为心脏组织工程研究提供三维立体天然支架.方法 取30只成年SD大鼠心脏,运用冻融加化学萃取的组织工程学方法 (胰蛋白酶、十二烷基硫酸钠和曲拉通X-100)处理离体大鼠心脏,同时观察心脏大体形态及颜色变化,并对脱细胞支架进行基因组DNA分析;HE染色,免疫荧光法,扫描和透射电镜进一步检测鉴定脱细胞支架的生物学特征.结果 心脏脱细胞支架外观透明,包膜完整,维持心脏三维立体结构,肉眼可见心脏内脉管系统;脱细胞支架DNA残留量不及对照组的3%;HE染色、扫描和透射电镜结果 显示,心脏脱细胞生物支架去细胞彻底,细胞外基质网状结构保留完整;免疫荧光结果 表明,胶原、弹性蛋白等细胞外支架成分保留较完整,未见明显细胞核成分残留.结论 运用冻融加化学萃取法所制备的离体心脏脱细胞生物支架去细胞彻底,细胞外基质保留较完整,是较为理想的心脏三维立体生物支架材料.     

肺上皮样血管内皮瘤18例临床病理学观察

目的探讨肺上皮样血管内皮瘤(pulmonary epithelioid hemangioendothelioma, PEHE)的临床病理特征及预后。方法分析2011年8月至2018年12月郑州大学第一附属医院PEHE 18例, 进行常规HE染色, 免疫组织化学染色, 总结临床病理特征, 并随访患者生存情况。用荧光原位杂交(FISH)法对18例进行CAMTA1基因检测, 对3例免疫组织化学TFE3阳性病例进行TFE3基因检测。结果 18例PEHE中, 男11例, 女7例, 男女比例为1.6∶1.0, 年龄36～68岁, 平均年龄52岁。12例(12/18)为肺内单发结节, 6例(6/18)为双肺多发结节。7例(7/18)有肺外其他器官受累。17例(17/18)患者有呼吸系统症状, 1例(1/18)患者表现为腹痛。大体均表现为灰白色结节, 界限不清。镜下观察:黏液或者软骨样的基质中见上皮样的细胞排列呈条索状或者小巢状,可见胞质内空泡。免疫组织化学染色显示肿瘤表达CD31(18/18)、CD34(16/18)、ERG(18/18)、Fli-1(18/18), 5例(5/18)局灶表达广谱细胞...     

两种方法制备脱细胞血管材料在动物体内免疫反应的比较

文题释义：去垢剂：又称表面活性剂，是一类既具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取中应用较多。  巨噬细胞的极化：巨噬细胞可分化为包括M1、M2a、M2b、M2c在内的极化表型，其中的M2表型巨噬细胞在组织修复和伤口愈合中发挥了重要作用。M1型巨噬细胞可促进单核巨噬细胞的聚集，分泌大量促症因子包括白细胞介素12、白细胞介素6、肿瘤坏死因子等，然而M2型可以分泌大量抗炎症因子，诱导巨噬细胞清除凋亡细胞及组织修复的作用。背景：去垢剂作为目前较成熟的脱细胞方法，具有操作简便、破坏小、实验条件容易控制等优点，有研究将不同的去垢剂联合应用于脱细胞中取得了不错的效果。 目的：对比两种去垢剂联合方案脱细胞的效果，以及两种脱细胞血管材料植入动物皮下后的免疫反应。 方法：采用两种方案对猪颈动脉进行脱细胞处理，一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%脱氧胆酸钠混合溶液内处理72 h(SDS+SDC组)，另一组置于1%十二烷基硫酸钠与1%Triton X-100混合溶液内处理72 h(SDS+Triton X-100组)，脱细胞后分别进行组织学分析、扫描电镜分析、力学分析与DNA含量检测。将两组脱细胞血管材料分别植入SD大鼠背部皮下，术后1，2，4，8周取出移植血管材料，进行苏木精-伊红染色与免疫荧光染色。实验已通过江南大学实验动物伦理委员会批准。 结果与结论：①组织学分析显示，SDS+SDC组方案有效去除了细胞成分，较完整的保留了细胞外基质结构，脱细胞效果优于SDS+Triton X-100组；②SDS+SDC组DNA含量明显低于SDS+Triton X-100组(P < 0.05)，两组爆裂强度与缝合耐受强度比较差异无显著性意义(P > 0.05)；③扫描电镜显示，SDS+Triton X-100组细胞外基质破坏程度大于较SDS+SDC组；④皮下植入实验中，术后1周时两组颈动脉材料周围均可见大量炎性细胞浸润，术后8周时SDS+SDC组脱细胞材料周围已无炎性细胞浸润，SDS+Triton X-100组脱细胞材料周围仍可见明显的淋巴细胞浸润；SDS+Triton X-100组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M1型分化，SDS+SDC组脱细胞材料主要诱导巨噬细胞向M2型分化；⑤结果表明相对比1%十二烷基硫酸钠联合1%Triton X-100脱细胞处理方案，1%十二烷基硫酸钠联合1%脱氧胆酸钠脱是较有前景的脱细胞细胞处理方案。ORCID: 0000-0002-3120-0203(尹晶) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程     

心脏脱细胞支架的制备及其生物相容性

目的:优化心脏脱细胞支架的制备方法,评价所制备的脱细胞支架的基本生物学特征。方法:联合应用十二烷基硫酸钠(SDS)和聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)对大鼠心行逆行主动脉灌流制备心脏脱细胞支架。同时,将间充质干细胞(MSCs)接种到支架上构建细胞支架复合体,采用H-E染色及扫描电镜分别对制备支架及复合体进行评价。结果:心脏脱细胞支架大体呈半透明囊状。组织学染色及扫描电镜观察示支架呈多孔网状或束状结构,未见细胞核残留。荧光显微镜观察示MSCs沿支架纤维黏附生长,未见明显坏死细胞。结论:本研究运用灌流法成功制备脱细胞彻底且细胞外基质保留较完整的心脏脱细胞支架,既拥有天然三维结构且具有良好的生物相容性。     

犬和大鼠AECM的比较及组织相容性的研究

目的比较犬和大鼠脱细胞神经细胞外基质材料(acellular extracellular matrix,AECM)的组分和免疫原性,为临床周围神经损伤修复提供适宜的移植体。方法采用优化的化学萃取脱细胞方法制备犬和大鼠AECM,通过光电镜观察、变色酸2R-亮绿染色、免疫组织化学染色和SDS-PAGE对AECM的结构成分检测,并检测AECM埋植于皮下的免疫排斥反应。结果犬和大鼠AECM均较好的保留了基底膜管结构完整性,髓鞘碎片染色强度,两种AECM中层粘连蛋白和S-100阳性产物的积分光密度值(IOD)无显著性差异。SDS-PAGE可见犬和大鼠AECM均有较明显的生长相关蛋白条带,髓鞘蛋白条带消失。HE染色观察异种AECM埋植后仅引起较弱的免疫排斥反应。结论应用优化的化学萃取脱细胞方法制备的犬和大鼠AECM,均具有良好的仿生性和组织相容性,是修复周围神经缺损的适宜移植物。     

猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究

目的　 灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究三种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响。 方法　取健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1% Triton X-100和1% SDS溶液完成去细胞化。两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析。 结果　家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性, Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显著性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而三种支架组之间PCNA/DAPI值无显著性差异。 结论　本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备三者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。     

脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料的制备及其免疫原性评价

目的:制备脱细胞绵羊带瓣静脉支架材料,通过探讨其对BALB/c小鼠体液免疫和细胞免疫的影响,以此评价该脱细胞基质的免疫原性,进而为脱细胞组织工程支架的安全性提供实验依据.方法:正常成年绵羊带瓣股静脉2cm长的片段,联合使用弱碱、非离子去垢剂及核酶进行脱细胞处理.H-E染色观察细胞组分残留及细胞外基质完整性.免疫组织化学...     

脱细胞真皮基质补片修复滇南小耳猪胆管损伤☆

背景：目前胆管缺损的修复效果不佳,脱细胞真皮基质已广泛用于烧伤、疝修复、口腔黏膜及软组织修复等。 目的：观察脱细胞真皮基质修复滇南小耳猪胆管损伤的效果。 方法：将滇南小耳猪建立胆管损伤动物模型,建模成功后按修复方式分为胆肠吻合组、膨体聚四氟乙烯组及脱细胞真皮基质组,胆肠吻合组进行胆肠吻合修补,膨体聚四氟乙烯组及脱细胞真皮基质组分别用膨体聚四氟乙烯补片和脱细胞真皮基质补片制成直径稍宽管状进行修补。 结果与结论：治疗后2~4个月,脱细胞真皮基质组的总胆红素低于其他2组(P < 0.05);免疫组织化学染色显示,治疗后1~4个月,其转化生长因子β1表达均高于其他2组(P < 0.05),表达随时间增加而降低(P < 0.05)。脱细胞真皮基质组胆总管吻合口及周围组织出现胆道上皮、腺体、血管及平滑肌等再生。脱细胞真皮基质组治疗后未出现胆道狭窄、感染及排斥反应发生。结果证实,脱细胞真皮基质可生理性修复胆道并重建其功能,并发症少,生物相容性较好。 关健词：脱细胞真皮基质;补片;胆管损伤;转化生长因子β1;猪;生物相容性;细胞外基质材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.12.012     

基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在内源性神经干细胞迁移中的作用

背景：神经干细胞具有体外、体外迁移的特性,但关于其迁移的具体机制还不十分清楚。 目的：探讨基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在神经干细胞体内迁移中的作用。 方法：制备脑皮质微量注射脂多糖脑损伤大鼠模型,于建模后3,5,7 d灌注取脑,采用冰冻切片免疫组织化学方法,动态监测基质细胞衍生因子1和nestin表达的时相变化。 结果与结论：免疫组织化学染色观察显示：基质细胞衍生因子1随时间推移表达的量逐渐增多。Nestin阳性细胞有明显向外延伸和迁移的迹象,尖端指向脂多糖注射区。结果可见基质细胞衍生因子1趋化体内表达其特异性受体的内源性神经干细胞向脂多糖注射区迁移。     

肺郎格汉斯细胞组织细胞增生症的病理诊断及鉴别诊断

目的 探讨肺郎格汉斯(Langerhans)细胞组织细胞增生症诊断和鉴别诊断。方法 常规HE染色及免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法染色观察7例肺郎格汉斯细胞组织细胞增生症的形态学及S-100、CD68、CD1a免疫组织化学表达特点并分析其临床资料。结果 7例均可见明确郎格汉斯细胞性肉芽肿改变,并可见中等量炎细胞浸润、局灶间质纤维化及灶性坏死。免疫组织化学阳性检出情况分别为S-100 7／7、CD68 3／7、CD1a 5／5。结论 临床及影像学检查(X线及CT)怀疑郎格汉斯细胞组织细胞增生症患者应尽早行开胸或胸腔镜肺活组织检查,病理学确诊对肺郎格汉斯细胞组织细胞增生症的治疗和控制其发展有很重要作用,免疫组织化学S-100及CD1a染色对鉴别诊断有意义。     

灌注法制备肺脱细胞基质

 背景：对组织器官进行脱细胞,细胞外基质在经过去除细胞和可溶性蛋白处理之后,可维持正常的器官外形及组织结构基质成分。 目的：利用灌注法制备肺脱细胞基质。 方法：将40只Wistar大鼠随机均分为2组,常规麻醉处理后打开胸腔,获得完整的肺组织,实验组利用Langendorff灌注模型构建大鼠全肺脱细胞基质支架,对照组不予以特殊处理。动态观察和记录实验组肺脏颜色和形态变化,分别从2组大鼠肺脏不同部位获取小块组织,利用电子显微镜进行组织学观察,观察两组的Weigert弹力纤维联合Von Gieson结缔组织染色和苏木精-伊红染色情况。 结果与结论：经1%脱氧胆酸钠溶液灌注后,实验组大鼠肺脏颜色逐渐发生改变,表现为从内至外呈分段分叶状逐渐变为白色半透明状,并可观察到清晰肺叶结构,最终肺脏呈现出均一的白色半透明状。经Weigert弹力纤维联合Von Gieson结缔组织染色和苏木精-伊红染色发现,对照组新鲜肺组织切片中含有大量细胞,其中包括毛细血管和成纤维细胞及内皮细胞等,细胞呈整齐排列状,具有完整的肺泡结构,弹性纤维结构清晰,胶原纤维也呈整齐排列状,结构较为紧凑;实验组肺组织细胞基本已消失,仍具有完整的肺泡形态结构,但呈较为疏松的状态且裂隙增大,弹性纤维保存良好,胶原纤维呈较疏松排列状。表明利用灌注法课可有效构建大鼠全肺组织基质支架。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

组织工程血管基质的制备与改性

目的：完全脱除猪胸主动脉细胞，对脱细胞血管基质进行改性，增强基质的力学强度，制备组织工程血管支架材料。方法：取家猪的新鲜去除外膜胸主动脉20根，随机分成4组，分别采用胰蛋白酶、TritonX-100及十二烷基硫酸钠（SDS）作为脱细胞试剂对猪胸主动脉进行脱细胞处理，并对脱细胞后的血管基质进行改性，采用HE染色、弹力纤维染色、力学性能测试，以评价脱细胞效果以及材料的力学性能。结果：采用1％TritonX-100单独作用84h既能完全脱除细胞，同时又可完整保留血管基质的三维结构，对胶原纤维、弹力纤维的损伤小，是一种较理想的脱细胞方法。对脱细胞后的基质进行冷冻干燥及真空热交联处理，能有效提高材料的机械强度，冷冻干燥24h后真空120℃下热交联处理12h所获得的材料的机械强度最好，断裂强度可达到1．70MPa。结论：以脱细胞血管基质经冷冻干燥和真空热交联处理后，可以作为血管组织工程的支架材料。     

冷冻保存同种异体软骨移植修复膝关节软骨缺损(英文)

背景:采用传统方法冻存后,关节软骨细胞存活率低,且软骨表层与深层的软骨细胞存活率差别较大,移植物易发生退行性变,导致手术失败。目的:经打孔梯度降温冻存膝关节软骨后并行异体移植,观察打孔梯度降温冻存对兔关节软骨的影响。方法:自2月龄新西兰白兔膝关节股骨膑面取骨软骨移植物,随机分为3组:实验组在软骨面以3mm×3mm矩阵打孔,梯度降温冷冻保存。以非打孔经梯度降温冷冻保存组、非打孔超低温冷冻保存组为对照。复温后移植到成年新西兰白兔相应膝关节缺损部位,观察各组移植物大体形态学、组织化学、免疫组织化学染色效果的差别。结果与结论:实验组、非打孔经梯度降温冷冻保存组大体形态学、组织化学、免疫组织化学染色效果均明显优于非打孔超低温冷冻保存组。实验组与非打孔经梯度降温冷冻保存组效果差别不明显,但实验组明显加强了对中间层软骨组织的保护程度。提示关节软骨的梯度降温冷冻保存效果优于快速降温冷冻保存;关节软骨打孔冷冻保存对深层细胞有一定的保护作用,提高了软骨细胞存活率,延缓了移植软骨组织的退变过程。     

水通道蛋白-4在大鼠急性脑缺血再灌注脑组织中的表达

目的:探讨水通道蛋白-4(AQP4)在急性脑缺血再灌注脑组织中的表达规律。方法:线栓法建立右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分为假手术组、栓塞组和再灌注组。对脑组织病理观察、TTC染色,免疫组织化学、原位杂交组织化学、荧光定量PCR和免疫印迹检测。结果:栓塞组在右侧基底节区见细胞器肿胀、细胞体积增大,但细胞膜和血脑屏障结构完整,TTC染色缺血面积明显增加。所有再灌注组右侧基底节区的细胞肿胀减轻,再灌注早期组可见轻度血管源性水肿,TTC染色缺血面积逐渐缩小。AQP4基因和蛋白的表达量明显下降,分别与栓塞组比较均存在显著性差异。再灌注后各组AQP4基因和蛋白表达明显下降,但均高于假手术组。结论:无论是脑缺血或是再灌注,AQP4的表达均与细胞内水肿的程度一致,再灌注早期可出现血管源性水肿,再灌注越早脑细胞越容易恢复正常。