人CYP2D6诱导小鼠自身免疫性肝炎动物模型的建立

目的研究模拟抗原人细胞色素P450家族2亚家族D成员6(CYP2D6)和遗传背景差异的小鼠(C57BL/6和BALB/c)对自身免疫性肝炎(AIH)动物模型建立的影响。方法 C57BL/6和BALB/c小鼠尾静脉注射腺病毒及质粒p CYP2D6,用ELISA检测血清抗CYP2D6抗体和抗肝蛋白自身抗体水平; HE染色检测肝脏AIH炎症程度,天狼猩红染色检测肝纤维化的程度;微孔板法检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)的水平。结果腺病毒促进人CYP2D6诱导C57BL/6小鼠产生抗肝蛋白自身抗体、并引起AIH和肝纤维化,而在BALB/c小鼠中,仅产生针对人CYP2D6的抗体,而无抗肝蛋白自身抗体、不产生AIH和肝纤维化。结论在腺病毒存在下,模拟抗原人CYP2D6在肝脏中的持续表达可以诱导C57BL/6小鼠产生AIH,但是无法诱导BALB/c小鼠产生AIH,不同品系小鼠的遗传背景可能影响着AIH的发生发展。     

TLR2/4配体增强的非特异性肝脏炎症对BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的影响

目的:探索非特异性肝脏炎症诱导BALB/c小鼠产生自身免疫性肝炎(AIH)的原因。方法:尾静脉注射质粒pCYP2D6、pcDNA3.1和psTLR2/4,腹腔重复注射四氯化碳(CCl_4)。ELISA检测抗CYP2D6抗体和自身抗体水平;HE染色检测肝脏炎症情况;天狼星红染色检测肝脏纤维化情况。结果:CCl_4引发BALB/c小鼠产生非特异性肝脏炎症,TLR2/4配体增强了这种炎症。停止注射CCl_4后,非特异性肝脏炎症消失,但是却促进模拟抗原人CYP2D6诱导产生自身免疫应答、自身免疫性肝炎和肝纤维化,且TLR2/4配体增强了这些变化。结论:TLR2/4增强的肝脏非特异性炎症在BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的启动和发展中可能发挥了重要作用。     

可溶性晚期糖基化终末产物受体拮抗缺血/再灌注小鼠心肌纤维化

目的 探讨可溶性晚期糖基化终末产物受体（sRAGE）对缺血/再灌注小鼠心脏炎症的影响及其机制。 方法 利用6～8周龄雄性C57BL/6小鼠构建心肌缺血/再灌注损伤模型（左前降支结扎30 min,再灌注2周）,随机分为4组,每组5只C57BL/6小鼠。通过心脏超声检测心功能,HE染色观察炎症细胞浸润情况,马松和天狼星红染色检测心肌纤维化,免疫组织化学染色检测半乳糖凝集素3（galecti-3）表达。 结果 与假手术组相比,缺血/再灌注组小鼠的心功能减退,心肌组织间有大量炎症细胞浸润,心肌纤维化面积增加,同时,心脏组织中 galectin-3 的表达增多;而给予外源性sRAGE处理后,小鼠的心功能显著改善,炎症细胞浸润减少,纤维化程度减轻,心脏组织中galecti-3的表达也显著减少。 结论 心肌缺血/再灌注损伤时,sRAGE可能通过抑制galectin-3的表达,减少小鼠心脏炎症细胞浸润,从而减轻心肌纤维化。     

miR-350-3p/IL-6/STAT3信号通路在脂肪性肝纤维化进展中的作用

目的探讨miR-350-3p/IL-6介导的STAT3/c-myc信号通路在脂肪性肝纤维化进展中的作用及相关机制。方法20只Balb/c雄性小鼠随机分为正常对照组和HFD+CCl_4组,正常对照组予以普通饮食,HFD+CCl_4组予以高脂高糖饮食并采用腹腔注射2%CCl4油溶液,每周2次,持续5周后处死小鼠,检测血清相关指标,HE及Masson染色观察肝组织形态及纤维化改变,免疫组化检测ki-67表达情况,qRT-PCR检测miR-350-3p、IL-6及肝细胞异常增生相关指标,Western blot检测STAT3/cmyc表达情况。结果与正常对照组比较,HFD+CCl_4组小鼠肝指数增加,血清中ALT与TG含量显著增加;HE及Masson染色显示HFD+CCl_4组小鼠肝脏脂质变性明显,并出现纤维沉积;在m RNA水平上,HFD+CCl_4组中miR-350-3p、IL-6显示良好的负调控关系;肝细胞异常增生相关基因PDGFRb、c-myc、TGF-β、Epcam、CD133、CD44、CD105的表达量明显高于正常对照组;Western blot结果显示,HFD+CCl_4组中p-STAT3及c-myc表达水平较正常对照组明显增加。结论高脂饮食联合CCl_4能够诱导肝脏发生纤维化病变且有肝细胞异常增生,其可能是通过miR-350-3p/IL-6介导的STAT3/c-myc信号通路发挥作用。     

CTLA—4Ig治疗C57BL／6小鼠自身免疫性肝炎的实验研究

目的 研究CTLA-4Ig在治疗C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎上的作用。方法 通过用C57BL/6近交系小鼠的肝特异性抗原与弗氏完全佐剂混合物免疫攻击小鼠,随后用CTLA-4Ig治疗,观察小鼠的临床经过、血生化、肝脏组织学改变。结果 随着免疫次数的增多,治疗组临床经过、血生化、肝脏组织学改变逐步与正常对照相似,而病理模型组与前两组有明显差异;血生化可见天冬氨酸氨基转移酶、球蛋白显著升高;肝组织学检测可见炎细胞的浸润,肝细胞的肿胀、灶性坏死甚至广泛坏死;肝组织免疫荧光检测提示有大量免疫球蛋白沉着。结论 CTLA-4Ig能有效地治疗C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎。     

重组CYP2D26主要B细胞表位在II型自身免疫性肝炎小鼠模型构建中的效应研究

目的 研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D6主要抗原表位aa262-270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应.方法 设计人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262-270 (WDPAQPPRD)的下负链寡核苷酸片段,经退火后插入表达乙肝核心蛋白 HBcAg的质粒pNP中(pNP质粒由pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成).构建成质粒pNP-AIH2;转染大肠杆菌DH5α感受态细胞;以IPTG诱导重组蛋白表达,经硫酸铵沉淀、洗涤,密度梯度离心纯化和脱盐后,肌肉注射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平,通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应.结果 SDS-PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD,与预期相符;电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在;ELISA显示,免疫小鼠血.清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应,检测到持续存在的特异抗体,滴度至少为1∶2000; western blot检测表明,抗血清在分子量约为55 kD的地方产生了一个特异的条带,与小鼠CYP2D6蛋白大小一致.与正常对照相比,实验组小鼠转氨酶水平未明显升高,肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征.结论 携带人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后,可刺激产生较强的特异抗体水平,但在观测时间内,未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应.     

影响空弯菌抗原诱导自身免疫应答的因素

利用慢性粘膜免疫应答小鼠模型,研究在空弯菌抗原(CJ-S131菌苗)诱导下,不同品系、性别的小鼠的自身免疫应答。经肠道,持续用CJ-S131菌苗免疫16周后,用ELISA或CELISA检测小鼠体内的抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体。在五个品系小鼠中,四个品系小鼠(BALB/C,ICR,KM和SMMC/B)均有一种或多种被测的自身抗体升高。其中SMMC/B和KM小鼠的EI值较高,BALB/C和ICR小鼠次之。C57BL/6和对照组无显著性差异,提示对空弯菌抗原诱导的自身免疫应答不敏感。在遗传背景的制约下,性别也影响自身抗体的产生,有三种可能:(1)自身抗体升高主要见于雌性小鼠,如雌性KM小鼠被测的各种自身抗体均有升高;(2)雌性,雄性小鼠均有一种以上自身抗体升高,如SMMC/B和BALB/C小鼠;(3)雌、雄性小鼠的自身抗体均无升高,如C 57BL/6。本文结果表明,空弯菌苗诱导的自身抗体种类和水平,受小鼠的遗传背景和性别两个因素的相互制约和影响。     

Resolvin D1预处理通过NF-κB及焦亡影响失血性休克肝损伤

目的 探讨Resolvin D1预处理对失血性休克小鼠肝脏损伤的保护作用及可能机制.方法 30只雄性C57BL/6小鼠,随机分成Sham组、HS/R组及Resolvin D1组,每组10只.血生化检测各组小鼠肝脏功能;HE染色观察肝脏形态学变化;ELISA检测炎症因子水平;Western Blot检测焦亡相关蛋白NLR...     

B细胞连接蛋白的表达抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的研究B细胞连接蛋白BLNK(B-cell linker protein)的表达对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)的影响并初步探讨其可能的机制。方法 MOG35-55多肽免疫BLNK缺陷(BLNK-deficient,BLNK-/-)鼠及C57BL/6鼠制备EAE小鼠模型,观察实验动物的临床症状及中枢神经系统的病理学变化;应用ELISA方法检测血清中的MOG特异性IgG和IgM抗体水平;采用流式细胞术检测脾脏中调节性T细胞的变化;分选的脾脏B淋巴细胞采用RT-PCR技术评价B细胞所分泌的细胞因子的变化。结果 BLNK-/-鼠临床症状评分明显高于C57BL/6鼠(P0.01);HE染色及LFB染色结果显示,BLNK-/-鼠与C57BL/C鼠比较炎症感染灶及脱髓鞘病灶明显增多。BLNK-/-鼠血清中的MOG特异性IgG和IgM抗体水平显著低于C57BL/C鼠(P0.005)。BLNK-/-鼠与C57BL/6鼠相比,脾脏中调节性T细胞百分比及B细胞所分泌的IL-10的表达明显减少,而IL-2的表达显著增高(P0.05);IFN-γ的表达水平在2组小鼠之间无统计学差异(P0.05)。结论 BLNK的表达抑制EAE,其机制可能是通过对B细胞分泌的Th1/Th2细胞因子的调节来实现。     

肝肾微粒体1型抗原的制备及纯化

在1973年,Rizzetto用间接免疫荧光法发现了与近端肾小管和肝细胞胞浆反应的自身抗体[1]。这些针对细胞内质网反应的自身抗体被命名为肝肾微粒体抗体(LKM),随后鉴定出LKM抗体有3种亚型,LKM-1、LKM-2和LKM-3。LKM-1是Ⅱ型自身免疫性肝炎(AIH)的血清学标志[2]。细胞内质网包含两个主要的酶家族,即细胞色素P450s(CYP)和UDP-glucurinidation(UGTs),它们是代谢过程Ⅰ期和Ⅱ期中的主要参与者。1989年,鉴定出细胞色素P4502D6(CYP2D6)是LKM-1的主要自身抗原。LKM-1抗原的制备