let-7在小鼠哮喘模型气道炎性反应中的作用及机制

目的 观察let-7家族微RNA抑制剂(anti-let-7)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎性反应的影响,并探讨let-7参与哮喘形成的机制.方法 32只小鼠按随机数字法分为4组(n=8),即正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、干预对照组(C组)和干预组(D组).其中B、C和D组用鸡卵蛋白(OVA)免疫,建立哮喘模型,A组以生理盐水替代OVA处理.D组小鼠激发前注射anti-let-7以抑制内源性let-7表达,C组小鼠注射乱序siRNA对照.比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞计数,肺组织中let-7e以及BALF中白细胞介素-10(IL-10)含量；体外用anti-let-7转染肺癌细胞A549,并检测细胞中let-7e表达和细胞培养上清中IL-10的含量；荧光素酶报告法检测let-7e是否直接靶向IL-10.结果 与A组相比,B组和C组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增加[(20.32±5.33)×109/L和(24.74±6.69)×109/L比(7.12± 1.88)×109/L,(6.45±2.5)×109/L和(7.12±2.66)×109/L比(0.04±0.01)×109/L,均P＜0.01]；肺组织中let-7e水平明显升高(分别为3.83倍和3.27倍,均P＜0.01).与C组比较,D组BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少[(13.85±3.74)× 109/L比(24.74±6.69)×109/L,(2.15±1.13)×109/L比(7.12±2.66)×109/L,均P＜0.05]；肺组织中let-7e显著降低[(0.45±0.22)比(3.28±0.45),P＜0.01],同时BALF中IL-10水平明显升高[(4.68±0.85)比(1.70±0.29),P＜0.01].此外,在肺癌细胞A549 中转染anti-let-7,let-7e表达显著下降[(0.22±0.03)比(1.00±0.11),P＜0.01],同时培养上清中IL-10明显上升[(2.58±0.35)比(1.00±0.15),P＜0.01].体外let-7e过表达显著降低IL-10报告载体的荧光素酶活性[(0.59±0.06)比(1.00±0.03),P＜0.01],而对突变的IL-10报告载体没有抑制作用.结论 anti-let-7对哮喘小鼠气道炎性反应具有明显的抑制作用,其作用机制可能与let-7直接靶向并抑制IL-10有关.     

香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠CD4+IL-17+辅助性T细胞的影响

目的 探讨香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠肺实质、外周血中CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)的影响。方法 将40只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为4组：对照12周组(C12)、对照24周组(C24)、烟雾暴露12周组(S12)、烟雾暴露24周组(S24),每组10只。香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型。HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔(Lm)和肺泡破坏指数(DI);酶联免疫吸附法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-17、干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺实质中IFN-γ和TNF-α水平;流式细胞术检测小鼠肺实质、外周血中CD4+ IL-17+T(Th17)细胞占CD4+T细胞的百分比;免疫荧光PCR法检测小鼠肺实质、外周血中RORγt和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系。结果 (1)S12组和S24组Lm为(39.19±3.51) μm和(46.87±7.16) μm,DI为39.13±1.57和45.16±3.13,均明显高于C12组和C24组(32.60±3.21) μm和(32.38±3.73) μm及28.23±1.62和28.86±2.07,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(均P＜0.05)。(2) S12组和S24组BALF中IL-17、IFN-γ及TNF-α水平[(119.72±10.72) ng/L和(296.40±14.00) ng/L、(129.7±22.2) ng/L和(251.1±62.4) ng/L,(17.35±1.60) ng/L和(36.35±1.43) ng/L]较C12组和C24组[(52.06±4.70) ng/L和(51.89±6.82) ng/L、(85.8±26.8) ng/L和(88.9±11.5) ng/L,(6.41±0.90) ng/L和(5.85±0.92) ng/L]明显增高;在肺实质中,S12组和S24组IFN-γ及TNF-α水平[(1124.3±174.4) ng/L和(1342.7±206.1) ng/L,(77.2±13.7) ng/L和(101.7±19.0) ng/L]亦较C12组和C24组[(946.2±81.9) ng/L和(1027.2±188.3) ng/L,(62.1±16.1) ng/L 和(64.4±15.1) ng/L]明显增高;且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(3)S12组和S24组肺实质中Th17细胞比例[(3.27±1.12)％和(7.19±2.24)％]明显高于C12组和C24组[(1.80±0.75)％和(1.99±0.59)％];S12组和S24组外周血中Th17细胞比例[(1.96±0.61)％和(3.82±1.26)％]亦明显高于C12组和C24组[(0.90±0.37)％和(0.97±0.32)％];且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(4) S12组和S24组肺实质中RORγt和IL-17 mRNA表达量（1.73±0.35和4.52±1.15,4.00±0.87和83.43±21.01）较C12组和C24组（0.83±0.21和0.90±0.36,0.80±0.22和0.64±0.31）明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中,S12组和S24组RORγt和IL-17 mRNA表达量(1.48±0.32和2.75±0.79,201.25±5.49和416.22±99.64)亦较C12组和C24组(0.59±0.25和0.75±0.36,24.90±5.49和22.28±4.24)明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(5)烟雾暴露组中,外周血和肺实质的Th17细胞比例均与Lm、DI值显著正相关(r值分别为0.767、0.772;0.722、0.706,均P＜0.05)。结论 Th17细胞在香烟暴露肺部炎症、肺气肿小鼠外周血及肺内表达增高,并伴活性的增强,且随烟雾暴露时间延长而增强,提示香烟暴露肺气肿小鼠Th17细胞上调可能是导致小鼠肺内及全身炎症反应放大的原因之一。     

γ-促分泌酶抑制剂对哮喘小鼠肺组织COX-2与NF-κB表达的影响

目的探讨γ-促分泌酶抑制剂对哮喘模型小鼠肺组织环氧合酶-2(COX-2)与核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。用卵蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘小鼠模型。免疫组织化学方法和ELISA方法检测各组小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达。结果哮喘组小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达水平显著高于正常对照组(P0.01),但是在应用γ-促分泌酶抑制剂处理后,哮喘组小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达水平显著下调(P0.01)。结论静脉注射γ-促分泌酶抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织COX-2与NF-κB的表达。     

PDTC对肝纤维化大鼠核转录因子-κB、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原表达影响研究

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对二甲基亚硝胺(DMN)所致肝纤维化大鼠肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col-1)表达的影响及其意义。方法雄性SD大鼠38只,随机分为A、B、C组。A组为正常对照组,B、C组再各自随机分为2周及4周组并腹腔注射DMN诱导大鼠肝纤维化模型,C组造模同时给予PDTC灌胃。应用化学发光凝胶电泳迁移率(EMSA)检测肝组织NF-κBp65活性;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织NF-κBp65和Col-1的mRNA表达;应用免疫组化检测NF-κBp65、α-SMA和Col-1的表达。结果 B组及C组NF-κBp65活性及其mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积均明显高于A组(P<0.01或P<0.05),且随着时间的延长,4周组高于2周组(P<0.01或P<0.05);同期比较发现C组NF-κBp65活性及其mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积均明显低于B组(P<0.01或P<0.05)。NF-κBp65活性与NF-κBp65 mRNA表达、Col-1 mRNA表达、NF-κBp65免疫组化阳性细胞数、α-SMA及Col-1阳性面积呈正相关(r=0.747,0.780,0.779,0.658,0.780,P均<0.01)。结论 NF-κB与大鼠肝纤维化密切相关;PDTC可能通过抑制NF-κB的活性及α-SMA、Col-1表达从而产生抗肝纤维化作用。     

体外不同比例再生肝细胞与结肠癌细胞的共培养

目的 观察体外与不同比例再生肝细胞共培养对结肠癌细胞增殖潜能及肝再生相关因子的影响.方法 70%肝切除大鼠模型术后24 h采用原位胶原酶灌流法分离获得有活性的再生肝细胞,分别以10:1(A组)、1:1(B组)与人结肠癌细胞株SW480共培养,对照组为单独培养的结肠癌细胞(C组).培养后第24和72 h,通过3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺人法比较各组培养后的增殖能力,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及肝细胞生长因子(HGF)的浓度.结果 培养后24 h 3组间3H-TdR掺人率和EGF、IGF-1、HGF的浓度差异无统计学意义(P>0.05),72 h A、B两组的3H-TdR掺入率(15.9±1.4,13.2±1.5)和EGF[(722.9±55.4)ng/L,(498.2±41.5)ng/L]、IGF-1[(755.2±35.7)ng/L,(538.1±37.5)ng/L]明显高于C组(P<0.05),且A组高于B组(P<0.05).HGF的浓度在培养后第24、72小时差异均无统计学意义(P>0.05).结论 与再生肝细胞共培养的结肠癌细胞增殖能力增强,其机制可能与来自于肝细胞内的生长信号增加结肠癌细胞EGF和IGF-1的表达有关.     

小鼠心肌缺血再灌注损伤后NF-κB磷酸化状态及炎症因子的表达水平

目的探讨小鼠心肌缺血再灌注损伤后核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)磷酸化状态及炎症因子的表达水平.方法15只小鼠采用冠脉结扎再灌注法建立小鼠心肌缺血再灌注模型(观察组),另选15只小鼠作为对照组.再灌注损伤4h后,处死小鼠,HE染色分析心肌组织病理变化.取心肌组织采用Western blot分析NF-κB信号通路变化,采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immu-nosorbent assay,ELISA)分析两组小鼠外周血和心肌组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的表达水平.结果观察组小鼠心肌缺血再灌注后,可见心肌组织中炎症细胞大量浸润.与对照组比较,观察组小鼠心肌细胞细胞核中NF-κB水平显著增加,细胞质中p-IκBα水平显著增加,差异具有统计学意义(F值分别为30.497和17.501,P值均<0.05).观察组小鼠外周血中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平较对照组显著上调[(373.12±25.19)pg/mL比(178.53±16.01)pg/mL,(919.43±29.88)pg/mL比(119.15±18.09)pg/mL,(519.44±20.14)pg/mL比(136.65±12.41)pg/mL,t值分别为25.250、88.735和62.670,P值均<0.05],心肌组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平较对照组显著上调[(100.52±10.23)pg/mL比(19.32±4.87)pg/mL,(159.44±12.43)pg/mL比(34.65±8.33)pg/mL,(159.39±14.29)pg/mL比(20.48±8.32)pg/mL,t值分别为27.757、32.300和32.536,P值均<0.05],差异均具有统计学意义.结论心肌缺血再灌注后NF-κB处于激活状态,导致下游炎症因子大量释放,增加了心肌细胞负担.     

碱性成纤维细胞生长因子和骨髓间充质干细胞构建的组织工程心脏瓣膜赖氨酰氧化酶的表达

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和骨髓间充质干细胞(MSC)构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)及其赖氨酰氧化酶(LOX)的表达.方法 贴壁培养法分离、培养和纯化大鼠MSC,取第3代种植于去细胞瓣叶支架上.分别将瓣叶置于含10 μg/L bFGF的培养液(A组)、普通培养液(B组)中构建TEHV,大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV为C组,培养14 d后,采用Amplex red荧光法检测各组中的LOX蛋白含量,RT-PCR检测LOX mRNA表达.结果 B组的LOX蛋白含量和mRNA表达[(0.137±0.003)mg/L,2.08±0.03]高于A组[(0.124±0.002)mg/L,0.87±0.01]和C组[(0.127±0.002)mg/L,0.90±0.01](P<0.05),A、C两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 bFGF可能通过降低MSC的LOX表达,使MSC构建的TEHV达到与肌成纤维细胞构建的类似.     

维生素D3对肺炎支原体感染小鼠肺组织NF-κB及MMP-9表达的影响

目的探讨维生素D3(VD3)对肺炎支原体感染小鼠肺组织核转录因子κB(NF-κB)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法 45只BALB/c小鼠随机分成对照组、MP感染组与VD3组。模型组与VD3组小鼠采用滴鼻法进行MP感染。取肺组织制作病理切片,HE染色观察组织病理学变化,Western blot方法与Real time PCR方法分别检测各组小鼠肺组织NF-κB及MMP-9蛋白与mRNA的表达水平。结果 MP感染BALB/c小鼠7 d后,肺组织有大量炎性细胞浸润,给予VD3处理后,炎性明显减轻。MP感染组BALB/c小鼠肺组织NF-κB及MMP-9蛋白与m RNA的表达水平显著高于对照组(P0.01);给予VD3处理后,感染MP的BALB/c小鼠肺组织NF-κB及MMP-9蛋白与mRNA的表达水平显著降低(P0.01)。结论 VD3能够降低感染肺炎支原体感染小鼠的肺内炎性反应,其作用机制可能与降低NF-κB及MMP-9表达有关。     

盐酸戊乙奎醚抑制脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织中PMN扣押和NF-κB活化

目的：观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠中性粒细胞(PMN)肺内扣押及对肺组织核因子κB（NF-κB）活化的影响。方法： SD大鼠随机分为对照组、LPS模型组（静脉注射5 mg/kg LPS）、LPS+PHC高、中和低(3.0、1.0和0.3 mg/kg)3个剂量组，每组8只，用比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性，进行支气管肺泡灌洗液(BALF)PMN计数，蛋白免疫印迹法检测肺组织NF-κB的表达。结果： PHC显著降低ALI大鼠肺组织MPO活性、BALF中PMN计数比例（均P＜0.05)；ALI组大鼠肺组织磷酸化NF-κB的表达显著高于正常对照组（P＜0.05)；PHC高、中剂量组能显著抑制大鼠肺组织磷酸化NF-κB表达高于ALI模型组（均P＜0.05)；在造模后不同的时点观察，PHC对磷酸化NF-κB表达的作用有差别，以造模后6 h时最能有效抑制磷酸化NF-κB上调。结论： PHC能抑制LPS诱导ALI大鼠PMN在肺内扣押和肺组织NF-κB活化，PHC抑制LPS诱导PMN肺内扣押可能与抑制NF-κB活化有关，后者有待进一步验证。     

T-bet质粒基因转染对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液白细胞介素13和内皮素1的影响

目的 观察气道内T-bet质粒基因转染对哮喘小鼠气道肺泡灌洗液白细胞介素13(IL13)、内皮素1(ET-1)的影响.方法 C57BL/6J小鼠32只,完全随机分为4组(n=8),即哮喘模型组(A组)、正常对照组(B组)、空质粒干预组(C组)和模型T-bet质粒干预组(D组).用卵白蛋白(OVA)抗原溶液小鼠腹腔注射致敏,滴鼻造模.B组用生理盐水代替卵白蛋白,C组和D组卵白蛋白激发48 h前,分别经鼻滴入50μg空质粒或重组T-bet质粒.免疫印迹检测和酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠的支气管肺泡灌洗液中IL-13、ET-1的水平.结果 哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中Th2因子IL-13和ET-1水平比正常对照组升高[(2.32±0.40)ng/L比(0.38±0.16)ng/L,(40.07±6.52)ng/L比(14.16±0.51)ng/L,均P＜0.05];模型T-bet质粒干预组BALF中Th2因子IL-13和ET-1水平[(1.16±0.19)和(23.08±2.59)ng/L]比哮喘模型组降低(均P＜0.05).结论 气道内转染T-bet质粒能有效下调小鼠BALF中Th2因子IL-13及ET-1水平.     

右美托咪定改善感染性休克大鼠急性肺损伤及对TLR9/NF-κB通路表达的影响

目的用,并探讨其可能的机制。方法将SD大鼠分为假手术组(Sham),模型组(LPS)和DMED治疗组(LPS+DMED);称重并计算各组大鼠肺系数、肺组织湿/干重比(W/D)和含水量;HE染色检测各组大鼠肺组织病理变化;ELISA检测各组大鼠肺组织IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白的表达;免疫荧光化学法染色各组大鼠肺组织NF-κB(p65)的表达;Western blot法检测TLR9和NF-κB(p65)的蛋白表达。结果与LPS组比较,DMED明显降低感染性休克大鼠的肺系数、肺组织湿/干重比(W/D)和含水量,改善感染性休克大鼠肺组织病理变化,显著降低IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平,减弱肺组织中NF-κB(p65)的活化,抑制TLR9和NF-κB(p65)的蛋白表达。结论 DMED对感染性休克大鼠急性肺损伤的保护作用,与减轻炎症因子和抑制TLR-9/NF-κB信号通路相关。     

预防性应用依达拉奉对烟雾吸入性损伤大鼠的肺保护作用

目的探讨依达拉奉(edaravone)在烟雾吸入性损伤中对肺的保护作用。方法将32只雄性Sprague-Dawle大鼠采用随机数字表法随机分为4组,每组8只。分别为正常对照组(A组),致伤空白组(B组),致伤依达拉奉预防组(C组),致伤依达拉奉治疗组(D组)。除A组外,其余各组大鼠制作重度烟雾吸入性损伤模型。C组致伤前10min给予腹腔注射依达拉奉9mg/kg,D组致伤后30min给予腹腔注射依达拉奉9mg/kg,B组致伤后30min给予等量0.9%氯化钠溶液,A组无处理。伤后6h留取各组大鼠股动脉血液样本5mL,离心取血清检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量;留取肺组织制备肺组织匀浆后测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、肺髓过氧化物酶(MPO)活性。取部分右肺组织经4%甲醛溶液固定后做病理苏木精-伊红(HE)染色切片光镜观察。结果与B组相比,D组TNF-α[(311.8±7.90)pg/mL vs (399.3±8.03)pg/mL]、IL-6[(229.3±7.01)pg/mL vs (367.2±22.67)pg/mL]、MDA[(4.27±0.06)nmol/mg vs (6.30±0.09)nmol/mg]、MPO[(46.22±0.44)U/g vs (72.68±1.14)U/g]显著降低,差异有高度统计学意义(P﹤0.01),SOD[(148.53±2.18)U/mg vs (100.05±1.03)U/mg]及IL-10[(264.7±5.37)pg/mL vs (232.3±7.62)pg/mL]增高,差异有统计学意义(P﹤0.05);C组较B组上述变化更明显,差异有高度统计学意义(P﹤0.01)。光镜下C组和D组较B组肺组织炎细胞浸润减少,肺水肿减轻。结论依达拉奉可能通过抑制自由基的产生及减少部分炎性介质的生成对烟雾吸入性肺损伤起到保护作用,且提前用药效果较好。     

缺血后处理抑制大鼠肠缺血再灌注后肺组织核因子-κB活化及ICAM-1的表达

目的:研究缺血后处理(Ⅰ-postC)对大鼠肠缺血/再灌注(Ⅱ/R)后肺组织核因子-κB(NF-κB)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨Ⅰ-postC对Ⅱ/R后肺的保护作用及机制。方法:32只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、Ⅱ/R组、肠缺血后处理(Ⅱ-postC)组和肢体缺血后处理(LⅠ-postC)组,以无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉45 min,再灌注2 h建立小肠I/R模型,采集动脉血进行血气分析,测定肺系数判定组织水肿情况,光镜下观察肺组织病理学改变,测定肺组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)及髓过氧化物酶(MPO)活性,检测肺组织NF-κB p65和ICAM-1的表达。结果:(1)与Ⅱ/R组比较,Ⅱ-postC组和LⅠ-postC组PaO2升高而PaCO2降低(P0.05),肺系数减小(P0.01)且肺组织病理变化减轻;(2)Ⅱ-postC和LⅠ-postC均显著抑制Ⅱ/R所致的肺组织SOD活性降低和MDA含量升高(P0.05或P0.01),降低肺组织MPO活性(P0.01),并下调肺组织NF-κB p65和ICAM-1的表达(P0.05或P0.01)。结论:缺血后处理可减轻肠I/R大鼠的肺损伤,其机制可能与抑制NF-κB活化,进而减少ICAM-1介导的中性粒细胞浸润有关。     

Th17及Tc17细胞在博来霉素致系统性硬化病小鼠模型外周血、皮肤和肺组织中的表达

目的 研究T辅助细胞17(Th17)及T细胞毒细胞17(Tc17)在博来霉素致系统性硬化病(SSc)小鼠模型外周血、皮肤和肺组织的表达及意义.方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组(A组),博莱霉素注射4周无或轻度肺纤维化(PF)组(B组),明显PF组(C组).观察小鼠皮肤、肺部炎症和纤维化(Ashcroft评分)病变,流式细胞计数检测外周血、皮肤和肺部CD4+、CD8+、CD4+IL-17+Th17、CD8+IL-17+Tc17细胞的比例,荧光定量PCR(RT-PCR)检测小鼠皮肤和肺部维甲酸相关孤独受体(RORγt)、白细胞介素(IL) -17A mRNA的表达,ELISA检测外周血IL-17的含量,并分析这些指标的相关性.结果 皮肤羟脯氨酸含量和PF评分C组[(3.07±1.26) μg,/mg和4.0±1.41]、B组[(2.43±0.61) μg/mg和1.50±0.76]较A组[(1.45±0.40) μg/mg和0.60±0.70]明显增加,C组肺羟脯氨酸的含量较A组和B组明显增多(P均＜0.05).与A组比较,B组和C组外周血、皮肤和肺组织CD4+细胞数明显增多,CD8+细胞数明显减少,Th17细胞比例明显增加,C组外周血、肺组织、B和C组皮肤Tc17细胞明显增加(P均＜0.05);B组和C组外周血、肺组织和皮肤Th17/CD4+CD8+[ (1.41±0.36)％、(1.79±0.77)％],[(2.58±1.07)％、(5.23±2.34)％]和[(3.50±1.20)％、(4.02±1.32)％]较A组(0.71±0.25)％、(1.15±0.59)％、(0.99±0.46)％明显增加,Tc17/CD4+CD8+肺组织C组(1.62±0.53)％较A组(1.00±0.47)％,皮肤B组(1.70±0.70)％和C组(1.63±0.63)％较A组(1.11±0.34)％明显增高(P均＜0.05).与A组比较,B组和C组皮肤、C组肺组织IL-17A、RORγt mRNA的表达量、外周血IL-17含量明显增高(P均＜0.05).外周血Th17细胞、[L-17含量与肺部炎症、PF评分、肺和皮肤羟脯氨酸含量、皮肤炎症密切正相关(P＜0.01);皮肤和肺部Th17和Tc17细胞分别与皮肤和肺部炎症和纤维化评分、皮肤和肺部羟脯氨酸的含量密切正相关(P均＜0.01).结论Th17和Tc17细胞在SSc小鼠模型外周血、皮肤、肺组织的比例增高,且以Th17细胞为主,其表达与皮肤、肺部炎症和纤维化病变密切相关,并可通过分泌IL-17参与SSc的发病.     

缺氧诱导因子-1α在肥胖哮喘大鼠肺组织中的表达及意义

目的观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肥胖哮喘大鼠中的表达并探讨其作用。方法将40只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常体质量对照组(A组)、正常体质量哮喘组(B组)、肥胖对照组(C组)、肥胖哮喘组(D组)。正常体质量组大鼠给予基础饲料,肥胖组大鼠给予高能饲料以建立肥胖大鼠模型。鸡卵清蛋白(OVA)致敏、激发,建立哮喘模型。对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞进行计数。ImagePro Plus软件测定气管壁总面积(WAt),并以基底膜周长(Pbm)标准化,结果以气管壁厚度(WAt/Pbm)表示。免疫组织化学染色检测肺组织中HIF-1α的表达。ELISA测定血清中HIF-1α的水平。采用Pearson相关分析法分析HIF-1α的表达水平与BALF中白细胞总数、气管壁厚度的相关性。结果 D组大鼠BALF中白细胞总数为(98.0±5.5)×104/mL,较A组(24.7±3.3)×104/mL、B组(87.8±7.1)×104/mL、C组(26.1±3.8)×104/mL升高(P0.05);D组大鼠WAt/Pbm为(9.91±0.56)m2/m,较A组(6.11±0.99)m2/m、C组(5.99±0.83)m2/m升高,与B组(8.60±0.53)m2/m差异无显著性意义;D组大鼠肺组织中HIF-1α的阳性细胞表达率为(19.44±0.96)%,较A组(2.19±0.91)%、B组(18.25±1.29)%、C组(2.56±0.89)%升高;D组的大鼠血清及BALF中HIF-1α浓度分别为(29.107±1.576)ng/mL、(0.511±0.011)ng/mL,较A组(19.380±1.506)ng/mL、(0.280±0.008)ng/mL,B组(23.961±1.565)ng/mL、(0.397±0.011)ng/mL,C组(20.782±2.034)ng/mL、(0.281±0.010)ng/mL升高;HIF-1α表达水平与BALF中白细胞总数、WAt/Pbm呈正相关。结论HIF-1α在肥胖哮喘大鼠血清及肺组织中的表达明显增加,与BALF中白细胞总数、气管壁厚度呈正相关。     

NF-κB参与七氟烷预处理所致延迟性抗大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 观察七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的延迟性保护作用,探讨NF-κB参与保护作用的机制.方法 雄性SD大鼠随机分为:对照组(CON组);缺血再灌注组(I/R组);七氟烷延迟性组(SWOP组);七氟烷对照组(SEVO组);PTN(NF-κB特异性阻断剂)组;DMSO组以及PTN+ SWOP组.用TTC染色法测定心肌梗死范围;Western blot法检测NF-κB(P65,P50)蛋白表达.结果 与I/R组相比SWOP组梗死范围减小,且该作用可被PTN所阻断;SWOP组缺血前NF-κB(P65,P5O)蛋白表达(56±4,58±3)高于CON组(34±4,40 ±1);I/R和SWOP组再灌注后NF-κB(P65,P50)蛋白表达均上调,SWOP组蛋白上调幅度低于I/R组.结论 七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用;NF-κB可能参与了其延迟性保护机制.     

不同肝血流阻断法对原发性肝癌合并肝硬化患者肝功能的影响

目的探讨第一肝门血流阻断(Pingle)法与半肝入肝血流阻断法对原发性肝癌合并肝硬化患者肝功能的影响。方法回顾性分析我院2013年1月至2016年12月手术治疗的42例原发性肝癌合并肝硬化患者临床资料,根据不同肝血流阻断方法,将患者分为A组(24例)与B组(18例),A组给予Pringle法,B组给予半肝入肝血流阻断法,观察2组患者各项手术指标及肝功能指标情况。结果 A组患者术中出血量(510±70)mL多于B组的(405±50)mL,2组比较差异有统计学意义(P0.05);B组患者术后1 d、5 d丙氨酸转氨酶(220±50、92±40)u/L、总胆红素(25±8、18±8)umol/L及前白蛋白(180±28、198±50)mg/L,A组丙氨酸转氨酶(342±68、160±58)u/L、总胆红素(41±13、28±10)μmol/L及前白蛋白(138±23、167±45)mg/L,2组比较差异有统计学意义(P0.05);2组手术时间及术后并发症发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论与Pringle法相比,半肝入肝血流阻断法能够有效减少原发性肝癌合并肝硬化肝切除术中的出血量,并可加快肝功能恢复。     

高磷对维持性血液透析透患者微炎性反应和氧化应激的影响及机制

目的探讨高磷对维持性血透患者微炎性反应及氧化应激的影响及机制。方法实验分A组(正常人对照组),B组(维持性血透患者组即Maintenance hemodialysis,MHD),C组(不同磷酸二氢钠浓度剂量组1.5 mmol/L、C2 2.5 mmol/L及C3 5.5 mmol/L),D组(5.5 mmol/L磷酸二氢钠作用不同时间组D1 6 h、D2 12 h及D3 24 h)和E组(无磷酸二氢钠作用空白组E1 6 h、E2 12 h及E3 24 h组)。用real-time PCR及Western blot分别检测外周血单个核细胞NF-κB P65及NOX2/gp91的表达。ELISA检测血浆及细胞培养液上清IL-6含量,硫氮巴比妥酸法检测MDA含量。结果 MHD组PBMC中NF-κBP65、NOX2 mRNA及phospho-NF-κBP65、NOX2蛋白表达及血浆IL-6、MDA水平明显高于正常组;磷酸二氢钠作用下,培养液上清IL-6、MDA产生呈剂量、时间依赖性增加(P<0.05)。NF-κB P65 mRNA、phospho-NF-κBP65蛋白和NOX2/gp91 mRNAN及蛋白水平表达呈剂量、时间依赖性上调(P<0.05);NF-κB P65mRNA及phospho-NF-κB P65蛋白表达与培养液上清IL-6产生呈正相关,NOX2/gp91mRNA及蛋白表达与培养液上清MDA产生呈正相关。结论高磷可能通过活化NF-κBP65、NOX2/gp91信号通路介导炎性介质、氧化应激产物产生增加,高磷血症可能为MHD患者微炎性反应状态和氧化应激状态的危险因素。     

哮喘大鼠IKK/NF-κB信号通道与抗氧化性的关系及银杏叶提取物的调控

目的:探讨哮喘大鼠IKK/NF-κB信号通道与丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的关系及银杏叶提取物（Egb）的调控。 方法:36只SD雄性大鼠随机分为正常组（C组）、哮喘组（A组）、Egb组（E组）。用原位杂交法和免疫组化检测肺组织IκB激酶mRNA（IKKβ mRNA）及核转录因子（NF-κB）P65亚基活性；硫代巴比妥酸法和二硝基苯甲酸法测定血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的MDA和GSH的浓度。 结果:A组肺组织IKKβ mRNA及NF-κB P65表达均显著高于C组（均P＜0.01），E组则均显著低于A组（均P＜0.01）；A组血清及BALF中MDA浓度显著高于C组（均P<0.01），E组则显著低于A组（均P<0.01）；A组血清及BALF中GSH的浓度显著低于C组（均P<0.01），E组则显著高于A组（均P<0.01）。 结论:哮喘大鼠肺组织IKKβ mRNA、NF-κB P65表达显著增强，与抗氧化性降低有关，Egb能有效抑制IKK/NF-κB信号通道。