基于UHPLC-Q-TOF-MS技术的中药补骨脂化学成分表征与鉴定

建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS),结合自建化学成分数据库,系统开展中药补骨脂化学成分的表征与鉴定。通过单因素实验依次对色谱分离条件(固定相、柱温、流动相、洗脱梯度)和质谱监测的关键参数(毛细管电压、喷嘴电压、Fragmentor)进行了优化,最终采用BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈,流速0.4 mL·min^-1,柱温30℃,在正、负离子模式下采用Auto MS/MS进行数据采集。通过对照品比对、二级质谱裂解碎片解析、自建数据库检索以及文献分析等,从中药补骨脂中共鉴定或初步推导了83种化合物,包括58种黄酮类、11种香豆素类、4种萜酚类、10种其他类。其中有16种化合物通过与对照品比对获得鉴定,10种化合物可能尚未从补骨脂中报道。该研究对补骨脂中的化学成分进行快速定性分析,为阐释其物质基础、促进质量控制提供了有益参考。     

基于异喹啉生物碱质谱裂解规律推断博落回茎中的生物碱

目的:快速分析博落回茎中的生物碱成分。方法:应用高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱对博落回茎的生物碱进行分析,根据一级质谱的分子离子和二级质谱的碎片离子,结合博落回中异喹啉类生物碱的质谱裂解规律,推断博落回茎中的生物碱结构。结果:从博落回茎中推断出11个生物碱的结构,分别为木兰箭毒碱(Magnocurarine,1),网脉番荔枝碱(Reticuline,2),金黄紫堇碱(Scoulerine,3),轮环藤酚碱(Cyclanoline,4),13-甲氧基小檗碱(13-methoxyberberine,5),四氢巴马丁(Tetrahydropalmatine,6),原阿片碱(Protopine,7),别隐品碱(Allocryptopine,8),N-甲基氢化小檗碱(N-methylcanadine,9),血根碱(Sanguinarine,10),白屈菜红碱(Chelerythrine,11),其中化合物1~6及9首次在博落回中报道。结论:经验证,基于异喹啉生物碱质谱裂解规律推断博落回茎中生物碱的方法可行。     

基于UPLC-Q-TOF-MS的砂糖橘皮化学成分分析

目的:通过超高效液相色谱串联-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术对砂糖橘果皮化学成分进行快速分析和鉴定。方法:采用Aglient Zorbax Extend C_(18)色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱进行色谱分离,流速0.6 m L·min~(-1),柱温35℃,进样体积0.5μL。飞行时间质谱,采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,质量扫描范围设置为m/z 100~1 000,运行时间24 min,使用质谱分析软件Peak view中的目标化合物筛查法,结合保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定和推测成分。结果:在所设定的LC-MS条件下,结合对照品及文献报道的质谱数据对砂糖橘果皮的甲醇提取液分析,共分离鉴定了31个成分,包括5个黄酮碳苷,6个黄酮氧苷,17个多甲氧基黄酮,1个生物碱和2个多酚类化合物。结论:研究中建立的检测方法简便、准确,为快速鉴定分析化学成分提供一种有效的分析方法,并比较全面地阐明了砂糖橘果皮化学组成,这为砂糖橘果皮成为供开发利用的柑橘资源提供科学依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS代谢组学技术研究炮制前后何首乌化学成分变化

目的 利用代谢组学分析方法对比分析市售生首乌和制首乌化学成分的差异。方法 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)方法,通过主成分分析和偏最小二乘判别分析等方法对比分析市售生首乌和制首乌化学成分的差异。结果 市售生首乌和制首乌化学成分差异较大,共鉴别45个差异化学成分,主要为蒽醌、二苯乙烯和鞣质等。结论 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS代谢组学技术从整体角度分析了市售生首乌和制首乌的化学成分差异,为其炮制机理的阐释和临床应用奠定基础。     

基于色谱质谱联用技术的中医痰湿体质的代谢组学研究

目的:寻找中医痰湿体质血清标志性代谢物及其引起的代谢通路变化,结合糖脂代谢、胰岛素抵抗指数等指标,探讨中医痰湿体质形成、发展等各阶段的病理特征以及中医关于"肥人多痰湿"的发病机制。方法:收集正常组平和质、超重组非痰湿质和痰湿质、肥胖组痰湿质的血清样本,分析比较4组间体脂参数(体重指数BMI、腰围WC、腰臀比WHR)、血脂(TG、CHOL、HDLC、LDLC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(Homa-IR),并分别与中医痰湿体质积分作相关性分析。应用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(HPLC-Q-TOF/MS)的代谢组学技术为基础、使用多元数据统计分析寻找痰湿体质的血清差异代谢物,进一步探讨中医痰湿体质内在的病理学特征及相关疾病的发病机制。结果:BMI、WC、WHR、TG随着组别依次呈现逐渐增大的趋势,HDL-C则逐渐减小,肥胖组痰湿质的FINS、Homa-IR指数显著高于正常组平和质(P<0.01);全组中医痰湿体质积分与BMI、WC、WHR、TG水平呈显著正相关(P<0.05);与HDL-C水平呈显著负相关(P<0.01);超重组非痰湿质显著性差异表达血清代谢物有8种,超重组痰湿质有9种,肥胖组痰湿质有9种(P<0.05)。结论:痰湿质肥胖症存在着显著的体脂分布异常、脂代谢紊乱、胰岛素水平过高、高胰岛素抵抗等病理特征,提示中医痰湿体质是肥胖症的易患体质;中医痰湿体质存在显著性差异表达血清代谢物。     

基于UPLC-Q-TOF-MS 技术快速分析裂叶独活中香豆素类成分

目的以超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用（UHPLC-Q-TOF/MS）技术建立裂叶独活中香豆素 类化学成分的快速定性分析方法。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18 色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）; 以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱;流速：0.25 mL·min-1;柱温：40 ℃;进样量：2 μL。 采用电喷雾离子源正离子TOF MS 全扫结合IDA-MS2 扫描模式收集样品质谱数据。应用PeakView 软件中Xic Manager、Formula Finder 等模块分析计算,并根据对照品裂解规律、相关文献和各色谱峰的二级碎片离子,鉴 定裂叶独活中香豆素类化合物。结果从裂叶独活中共鉴定出34 个香豆素类化合物,其中29 个为该植物相关 文献的首次报道。结论裂叶独活中不同类型香豆素具有独特的裂解规律。所建立的裂叶独活香豆素类化学成 分定性分析的方法准确、可靠、高效,适用于香豆素类成分快速鉴定,可为裂叶独活成分及其药效物质基础研 究提供参考。     

UPLC-QqQ/MS法检测阿胶强骨口服液阿胶及杂皮源成分

目的:建立阿胶强骨口服液中阿胶及掺杂皮源成分的专属性检测方法。方法:用序列分析用胰蛋白酶对阿胶强骨口服液及掺入不同杂皮胶的伪品中胶类成分进行酶解,采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ/MS),选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8→612.4及牛皮源特征肽A特征离子对m/z 641.3→726.2作为检测离子对,离子化模式为ESI+,进行多反应监测。同时,建立阿胶强骨口服液中马皮胶成分红外谱检测法,结合质谱法鉴别掺伪马皮胶样品。结果:3批购买的阿胶强骨口服液保留时间均与阿胶对照药材一致,在7.7 min出峰,未出现与牛皮胶溶液对应的牛皮特征色谱峰。6批掺入不同杂皮胶(牛皮胶、猪皮胶和马皮胶)中2批马皮胶自制口服液检测出阿胶对照特征峰;2批牛皮胶口服液样品检测出牛皮源特征峰。红外光谱结果显示马皮胶自制口服液在1400～1700 cm^-1处吸收峰较特异,可与其它胶质进行区别,补充阿胶强骨口服液对马皮源成分的鉴别。结论:该检测方法专属性强,可用于阿胶强骨口服液中阿胶及杂皮源成分的检测,为阿胶强骨口服液质量标准提升提供了新的思路和方法。     

基于UPLC-Q/TOFMS技术的隔药饼灸合募配穴治疗UC大鼠的尿液代谢组学研究

目的:运用代谢组学用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF MS)技术探讨隔药饼灸合募配穴治疗溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)的作用机制。方法:27只SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药饼灸合募配穴组,采用DSS水溶液饮用法制备UC大鼠模型。隔药饼灸合募配穴组每次每穴各灸2壮,1次/d,共灸14次。治疗结束后,搜集各组尿液,UPLC-Q/TOF MS分析检测,主成分分析(PCA)分析和偏最小二乘法分析(PLS-DA)对数据进行处理,运用Metlin(http://metlin.scripps.edu/)、KEGG(http://www.kegg.jp)、HMDB(http://www.hmdb.ca)、Metabo Analyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)数据库和网站,确认潜在生物标志物,分析代谢物通路。结果:正、负离子模式下,正常组、模型组、隔药饼灸合募配穴组3组大鼠尿液在PLS-DA数据模型下分离趋势良好。隔药饼灸合募配穴可有效回调UC模型大鼠6个差异代谢物L-Cysteine(半胱氨酸)、Atraric acid、Tocopheronic acid、Dibutyl malate(二丁基苹果酸盐)、L-Tyrosine(酪氨酸)、L-Pipecolic acid(哌啶酸)表达,主要参与Phenylalanine,tyrosine and tryptophan biosynthesis(苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸代谢)、Tyrosine metabolism(酪氨酸代谢)等氨基酸代谢通路。结论:隔药饼灸合募配穴治疗UC可能主要与氨基酸代谢有关。     

运用代谢组学技术研究发现炮制引起大黄多成分变化

利用代谢组学技术,对大黄全成分进行对比分析,研究生熟大黄各类化学成分的变化。应用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF)联用技术,获取大黄生品和熟品的色谱和质谱信息,采用多元统计分析技术对提取的324个特征峰进行比较分析。炮制大黄非靶向代谢组学研究中,发现大黄生品和熟品化学成分明显不同,与生大黄相比,炮制后有127个成分发生显著变化,其中125个成分含量降低,2个成分升高。该研究鉴定了其中的10个化合物,另外推测了其他23个成分的结构类型,其中15个为鞣质类,8个为蒽醌类,炮制均使它们含量降低。炮制大黄靶向代谢组学研究发现炮制使芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚含量降低。炮制显著影响大黄中多种成分的含量,代谢组学研究能够比较全面地揭示这种变化。     

Q-TOF及IT-TOF质谱技术在天然产物及其复杂代谢物鉴定中的应用及展望

天然产物在生物体内通常发生广泛代谢,且由于其代谢途径的多样性与复杂性,天然产物代谢物鉴定仍然存在很大的技术挑战。本文综述了复杂基质中代谢物鉴定的质谱技术和分析策略,通过比较目前广泛用于代谢物鉴定的质谱技术的优缺点,以及国内外在代谢物鉴定方面成果,重点讨论和展望了四级杆-飞行时间质谱仪（Q—TOF）、离子阱-飞行时间质谱仪（IT-TOF）技术在天然产物复杂代谢物鉴定方面的巨大优势。根据天然产物的代谢规律,基于质谱技术发展相应的代谢物鉴定策略,Q—TOF与IT-TOF技术的突破和发展将在中药复杂组分及其代谢产物分析领域中发挥重要作用。     

基于特征肽段的鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别研究

目的:基于特征肽段建立鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别方法。方法:针对鹿茸的主要成分蛋白质,采用胰蛋白酶对正品鹿茸(梅花鹿、马鹿)及伪品鹿茸(驯鹿)进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)进行测定,结合数据分析软件,以主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对3种鹿茸样品的液质数据进行分析,找出驯鹿的专属性特征肽。利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ/MS)进一步验证驯鹿特征肽段的专属性,同时基于特征肽段建立正品鹿茸的特征图谱。结果:确定了伪品鹿茸的2个特征肽段并建立了正品鹿茸的特征图谱。结论:伪品鹿茸的2个特征肽段可用于正品鹿茸中混有伪品鹿茸的专属性鉴别,建立的正品鹿茸的特征图谱方法重复性好、操作简便,可用于鹿茸及其混伪品种的鉴别。     

我国阿胶原料动物驴的种质资源概况△

阿胶属于传统中药之一,应用历史悠久、疗效卓著,用量逐年大幅度增加,驴皮是其基本原料.驴的养殖历史悠久,经长期自然与人工选择,其种质资源丰富,各地均有独具特色的地方品种.驴的品种不同,形态特征、适应能力、生育特性等均有明显差异.本文对全国各地驴的地方品种进行了系统梳理,总结了其分布区域、形态特征、生育特点等内容,旨在为选育优良品种、实现规范化养殖,提高和稳定驴皮产量与质量,促进驴养殖业及阿胶产业的可持续发展提供参考.     

基于LC-MS/MS技术同时定量分析片仔癀中特征胰酶水解肽

目的：阐明片仔癀中的蛋白组,定量分析其中的特征胰酶水解肽,以提高片仔癀的质量控制水平。方法：优化总蛋白提取条件,采用二辛可宁酸(BCA)法测定总蛋白含量,利用鸟枪法蛋白组学表征片仔癀的蛋白组,并进一步选择含量较高、稳定性好、长度适宜的特征多肽作为目标分析物,采用在线能量分辨质谱法(online ER-MS)优化特征肽的离子对及最佳碰撞能,建立反相液相色谱-选择反应监测(RPLC-SRM)定量分析方法,测定11批片仔癀中目标多肽的含量。结果：利用UniProt数据库从片仔癀中共鉴定了来源于200个蛋白的343个肽段,以酶和骨架蛋白为主;筛选得到ALSSALHER、TLLEGEESR和VAPLGEEFR 3个特征肽,以其作为目标分析物进行定量分析,online ER-MS优化3个特征肽的定量参数离子对分别为m/z 492.3→799.4、517.3→819.4和509.3→637.3,碰撞能分别为25.0、24.4、28.6 eV。方法学验证符合定量要求,3个多肽类成分在各批片仔癀样品中均被检出(ALSSALHER:0.06～0.44μg·g^–1;TLLEGEESR:...     

液相色谱-串联质谱法鉴定大鼠血浆中的山莨菪碱及其代谢物

 目的液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(LC-MSn)联用法鉴别大鼠血浆中的山莨菪碱及其主要代谢物。方法取单剂量灌胃20 mg山莨菪碱的大鼠血样,甲醇沉淀蛋白,采用LC-MS及LC-MSn等方法分析血样。和空白血样及山莨菪碱相比较,根据血样中代谢物相对分子质量的变化(ΔM)及其多级质谱数据,鉴定并阐述其结构。结果在服药后的大鼠血样中发现6种代谢物,分别为6β-羟基托品、N-去甲基6β-羟基托品、脱水山莨菪碱、苯氧化山莨菪碱、N-氧化山莨菪碱以及托品酸。结论该方法灵敏,快速,简便,适合于药物及其代谢物的快速鉴定。     

基于特征蛋白的僵蚕配方颗粒鉴定方法

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立僵蚕配方颗粒的鉴定方法。方法:采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分离不同加工方式的僵蚕样品蛋白,对提取方法、缓冲液pH、料液比、反应温度、反应时间、专属性、适应性进行考察。同时利用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析寻找稳定且丰度较高的蛋白作为鉴定僵蚕配方颗粒的蛋白标志物。结果:SDS-PAGE最佳提取条件为取僵蚕样品适量,按料液比1∶10加入0.1 mol·L^(–1) NaAc缓冲液(pH=5),30℃振荡提取1.5 h。可分离出特征性条带约40~50 kDa,该条带主要为僵蚕基原动物家蚕Bombyx mori Linnaeus的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白、抗糜蛋白和抗胰蛋白等,可作为僵蚕鉴别的蛋白标记。根据SDS-PAGE分析条带的相对分子质量大小、蛋白在僵蚕药材和提取物中的特异性和稳定性,确定Serpin类丝氨酸蛋白酶抑制剂为鉴定僵蚕配方颗粒的特异性蛋白。结论:基于差异蛋白建立了可用于僵蚕配方颗粒生成过程的质量控制、僵蚕配方颗粒的SDS-PAGE蛋白鉴定的指纹图谱方法。     

基于质谱的蛋白质激酶-小分子相互作用研究进展

蛋白质激酶在生命过程中起着关键的调节作用,蛋白质激酶的异常往往会导致恶性疾病如癌症的发生。靶向蛋白质激酶的小分子抑制剂为相关疾病的治疗提供了切实可行的方案,因此研究蛋白质激酶-小 分子的相互作用对于靶向药物的开发具有重要作用。质谱作为一种高精度、高通量、高灵敏度的分析仪器,在 蛋白质-小分子相互作用研究领域的应用得到了快速发展。本综述总结了质谱技术应用于蛋白质激酶-小分 子相互作用研究的主要策略和最新进展,探讨比较各种方法的优缺点。基于质谱的分析方法将有助于从分子 水平上深刻揭示蛋白质激酶-小分子的相互作用机理,为靶向药物的设计开发提供新的思路。     

大黄化学成分的液相色谱-质谱联用鉴别

目的 建立快速、准确鉴别大黄化学成分的液相色谱-质谱方法.方法 采用HPLC-MS技术,对大黄的主要化学成分进行分离、鉴别、结构分析.结果 根据负离子模式下获得各色谱峰质谱数据,参照文献,对主要色谱峰进行指认,共鉴别了25个化合物,其主要化学成分是多酚、蒽醌及其苷类化合物.结论 HPLC-MS可提高中药化学成分的分析效率,有利于化合物结构鉴别,可作为中药大黄化学成分的鉴定方法.     

基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术的黄芪注射液中化学成分分析

目的:基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(Ultra-performance Liquid Chromatography Quadrupole Time-of-flight Mass Spectrometry,UPLC/Q-TOF-MS)对黄芪注射液物质基础进行了全面的研究,建立及黄芪注射液中有关成分的快速准确的分析方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C_(18)色谱柱(3 mm×100 mm,1. 8μm),以含0. 1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0. 4 m L/min;电喷雾源(ESI),Q-TOF-MS作检测器,正、负离子模式检测;甲醇稀释样品;与对照品保留时间、母离子及碎片离子精确分子量,比对准确定性。结果:共鉴定黄芪注射液中的46个化合物,包括氨基酸,黄酮,皂苷,核苷和烟酸等。结论:建立了黄芪注射液中的复杂化学成分的快速检测和评价方法,为其的质量控制及工艺改进提供参考。     

基于液质联用法测定乌头碱类生物碱在大鼠体内药代动力学研究

目的：建立同时测定大鼠血浆样品中乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱含量的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并用于制草乌给药后,3种成分在大鼠体内的药代动力学研究。方法：以小檗碱为内标,采用Shim-pack Velox SP-C18(100 mm×2.1 mm, 2.7μm)色谱柱,流动相为水-甲醇-乙腈(0.05%甲酸),流速0.3 mL/min,质谱采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,选择反应监测(MRM)方式。血浆样品采用有机试剂沉淀蛋白法。结果：乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱成分的线性关系良好(r≥0.999 0),日内和日间精密度符合生物样品分析要求,相对标准偏差(RSD)均小于15%。结论：此方法灵敏度高、专属性强,适用于测定乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱的浓度以及药代动力学研究。     

基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术的洋川芎内酯H在大鼠体内的代谢产物分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术对洋川芎内酯 H 在大鼠体内的代谢产物进行分析鉴定。方法 SD大鼠灌胃给药后,收集其血浆、尿液、胆汁和粪便,并对样品进行前处理。采用ThermoAccucore C₁₈色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6 μm),以体积分数0.1%乙酸-水(A相)-乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱。根据准分子离子峰和碎片离子信息,结合对照品与文献报道,对大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中的原型成分及其代谢产物进行鉴定。结果 最终在大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中共检测到32个代谢产物,包括24个Ⅰ相和8个Ⅱ相代谢物。结论 洋川芎内酯 H 主要的体内代谢反应包括氧化、氢化、去羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、半胱氨酸结合、谷氨酰胺结合以及相关的复合反应等。本研究应用高分辨液质联用技术阐明了洋川芎内酯 H 在大鼠体内的代谢产物,为今后药效学和药理学研究奠定了基础。