一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖和凋亡

一氧化氮是重要的血管活性物质、第二信使和神经递质。近年发现一氧化氮还具有调节血管平滑肌细胞增殖和凋亡等作用，其生成多少的变化在血管重建性疾病，如肺动脉高压、高血压等的发生和发展中起着重要作用。外源性给予一氧化氮或基因治疗在这些疾病的防治中有着广泛的应用前景。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的作用及其机理。方法:本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC、用细胞计数和流式细胞仪(FCM)进行VSMC增殖和凋亡的检测。结果:(1)不同浓度AngⅡ对VSMC增殖均有显著促进作用、呈剂量依赖关系至10μmol/L时趋于饱和,AngⅡ能促进VSMC从G_0/G_1期进人S期、进行DNA合成,AngⅡ的促增殖作用为一快相作用。(2)Losartan和CGP42112A均能不同程度地取消AngⅡ对VSMC的促增殖作用。(3)100μmol/L AngⅡ能很好地诱导VSMC凋亡的发生、且随时间延长而增加,CGP42112A能阻止凋亡的发生而Losartan则不能。结论:本实验显示AngⅡ能通过ATR-1和ATR-2共同促进VSMC进入合成期、进行增殖反应,同时证实AngⅡ能诱导VSMC发生凋亡,可能主要由ATR-2介导。     

一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖和凋亡

一氧化氮是重要的血管活性物质、第二信使和神经递质。近年发现一氧化氮还具有调节血管平滑肌细胞增殖和凋亡等作用,其生成多少的变化在血管重建性疾病,如肺动脉高压、高血压等的发生和发展中起着重要作用。外源性给予一氧化氮或基因治疗在这些疾病的防治中有着广泛的应用前景。     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物. 方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入小同浓度辛伐他汀(0.01～10.00μmol/L)培养6～48 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素结合的植物凝集素(FITC-UEA-I)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数. 结果 辛伐他汀显著抑制骨髓源SPC增殖,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,SPC数量减少了(5.8±3.1)%(对照组与0.01μmol/L辛伐他汀组分别为4070±184与3833±126,P<0.05).辛伐他汀可促进EPC增殖,其促进作用随辛伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1.00μmol/L辛伐他汀作用24 h EPC数量增加(2.0±0.1)倍(对照组与1 μmol/L辛伐他汀组分别为1249±146与3762±138,P<0.01). 结论 辛伐他汀抑制SPC增殖,促进EPC增殖,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能.     

内皮素-1及其受体拮抗剂对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的　探讨内皮素 - 1(ET- 1)及其特异性内皮素 A受体 (ETA- R)拮抗剂 (BQ12 3)对脐动脉血管平滑肌细胞(HUSMC)凋亡的影响。方法　组织块培养 HU SMC,传代后分为对照组、ET- 1组、BQ12 3+ET- 1组。流式细胞术测定细胞核 DNA降解规律、凋亡细胞数、及细胞周期中各时相细胞的变化。结果　 ET- 1组可见明显 Ap峰 ,凋亡细胞百分比 (13.86 %± 4 .85 % )较对照组 (1.5 8%± 0 .2 3% )显著增加 (P<0 .0 5 )。ET- 1组 HUSMC的 G0 / G1 期细胞百分数 (31.5 6 %± 2 .73% ) ,较对照组 (71.15 %± 1.34% )明显降低 (P <0 .0 1)。 S期细胞百分数 (37.6 5 %±3.0 1% )和 G2 / M期细胞百分数 (30 .78%± 0 .30 % ) ,分别较对照组 (19.10 %± 1.99% )和 (12 .2 1%± 1.86 % )明显升高 (P<0 .0 1)。 BQ12 3+ET- 1组各期细胞百分数与相应对照组比较 ,统计学均无差异 (P>0 .0 5 )。结论　 ET- 1促 HU SMC凋亡和增殖的程度不同 ,产生增殖与凋亡的失平衡。BQ12 3可完全抑制 ET- 1的上述作用 ,具有临床应用前景     

体外血管钙化对细胞增殖的影响

目的探讨体外血管钙化对细胞增殖的影响。方法根据牛主动脉中膜平滑肌细胞培养时是否添加10mmol/Lβ-甘油磷酸盐,将其分为实验组和对照组,观察细胞层钙沉积、茜素红S染色、噻唑蓝比色试验、锥虫蓝排斥试验和流式细胞分析。结果与对照组比较,10天后实验组细胞茜素红S染色阳性,β-甘油磷酸盐随时间延长依赖性增加钙沉积;且随时间、浓度变化依赖性抑制细胞增殖(P<0.01),凋亡率略增加并与钙沉积相关(r=0.9,P<0.05),细胞增殖指数下降。结论体外血管钙化期间细胞增殖受到明显抑制,凋亡可能参与钙化。     

超声辐照载紫杉醇微泡对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨超声辐照载紫杉醇微泡对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及其作用机制.方法 将体外培养的大鼠胸主动脉VSMCs用血小板衍生生长因子-BB刺激后分组如下:对照组(A组)、超声辐照+微泡组(B组)、超声辐照+载紫杉醇微泡组(C组)、单纯载紫杉醇微泡组(D组)和紫杉醇组(E组).采用频率1MHz、声强0.3W/cm2的连续波超声辐照VSMCs 120s,用流式细胞仪、Annexin V/PI染色和免疫细胞化学技术检测各组细胞周期、细胞凋亡以及凋亡相关蛋白表达的变化.结果 与A组比较,各组S期细胞比例均显著降低(P＜0.01),B组G0/G1期细胞比例显著增高(P＜0.01),D组和E组G2/M细胞比例显著增高(P＜0.01),C组G0/G1期细胞比例和G2/M细胞比例均显著增高(P＜0.01).与A组比较,B组和C组VSMCs凋亡率显著增高(P＜0.01),Bax蛋白表达显著上调、而Bcl-2蛋白表达则显著降低(P＜0.01).结论 超声辐照载紫杉醇微泡可诱导VSMCs凋亡,其机制可能是微泡介导的超声空化效应,致Bax蛋白表达上调及Bcl-2蛋白表达下调.     

紫杉醇对大鼠肺血管平滑肌细胞表型和细胞骨架的影响

目的 探讨不同浓度的紫杉醇对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其对细胞骨架和表型转化的影响.方法 采用MTT、[3H]-胸腺嘧啶掺入法检测不同药物浓度紫杉醇对血小板源性生长因子BB( PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)对平滑肌α肌动蛋白及平滑肌22α蛋白(SM22α)表达活性进行检测;利用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的改变.结果 与PDGF组比较,紫杉醇药物干预组细胞增殖受到明显抑制,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测抑制率分别为40.0％,30.0％,18.0％ (P＜0.01),[3H]-胸腺嘧啶掺入法测得的细胞增殖抑制率分别为45.4％,35.4％,21.6％ (P ＜0.01),平滑肌α肌动蛋白和SM22α表达均升高,细胞骨架F-肌动蛋白的荧光强度明显下降.结论 在PDGF-BB存在的情况下,紫杉醇可剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞的增殖,通过作用于微丝细胞骨架促进血管平滑肌细胞由合成型向收缩型转化,进而影响血管平滑肌细胞的增殖.     

C-myc与平滑肌细胞增殖、凋亡

动脉粥样硬死是一种严惩危害人类健康的疾病,血管平滑肌细胞的增殖与凋亡在其病理生理过程中起核心作用,根本上受各种原癌基因的调控,C-myc在其中发挥了不可替代的双重功能,它影响和调控细胞的生长、增殖、分化、凋亡和细胞周期的进程,同时对自身的基因表达和其他细胞内基因表达也有重要的调节作用。研究C-myc对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响及其机制,可为彻底阐明动脉样硬化发病机制以及为临床上预防和治疗动脉粥样硬化开拓一个新领域。     

基质细胞衍生因子1α对大鼠血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的影响

目的探讨基质细胞衍生因子1α对大鼠血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的影响。方法原代培养的大鼠血管平滑肌细胞与50mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育48h,将单核细胞与平滑肌细胞共孵育后洗脱检测粘附功能,并用基质细胞衍生因子1α抗体阻断。结果经氧化型低密度脂蛋白处理的血管平滑肌细胞基质细胞衍生因子1α上调5倍,单核细胞粘附增加29倍,但可被基质细胞衍生因子1α单抗所阻断。结论基质细胞衍生因子1α参与单核细胞与大鼠血管平滑肌细胞的粘附过程。     

乐卡地平对老年大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)发生衰老过程中,乐卡地平对细胞增殖和凋亡的影响和作用机制。方法取原代培养的4月龄和24月龄Wistar大鼠VSMCs分别为青年组、老年组,青年和老年大鼠加乐卡地平10μmol/L处理24 h分为青年实验组和老年实验组。采用免疫荧光染色、Western blot法、流式细胞分析仪和Real-time共聚焦等技术检测各组细胞核内p21蛋白结构含量的变化、细胞的增殖及凋亡指数和凋亡率。结果与青年组比较,青年实验组大鼠VSMCs分裂指数明显下降,相差13倍(P<0.05)。与青年组大鼠比较,乐卡地平对老年组大鼠的细胞内钙的抑制作用更强。与老年组比较,老年实验组大鼠细胞分裂指数和凋亡指数降低,差异有统计学意义[(2.08±0.22)%vs(0.7±0.06)%,P<0.05],凋亡率明显下降,差异有统计学意义[(16.1±2.04)%vs(2.3±0.88)%,P<0.01]。与青年组和老年组比较,老年实验组大鼠细胞核内p21蛋白随乐卡地平剂量增加而增强,蛋白结构发生变化,增殖性核抗原表达减少。结论乐卡地平通过改变p21蛋白的结构和含量表达,从而抑制增殖性核抗原表达,抑制VSMCs的增殖,降低老年大鼠VSMCs凋亡,减缓衰老。     

罗格列酮对大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖和调亡的影响

目的观察罗格列酮对大鼠颈动脉损伤后平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为3组,即对照组、手术组、治疗组。手术组及治疗组均给予左侧颈总动脉球囊损伤,治疗组给予罗格列酮灌胃治疗。术后2周取损伤血管行HE染色及光镜观察,计算内膜面积（NIA）、内弹力板围绕面积（IELA）及管腔狭窄指数（SI）。免疫组化法检测平滑肌细胞增殖率,Tunnel法检测平滑肌细胞凋亡率。结果术后2周,手术组内膜面积、管腔狭窄指数显著高于对照组（P<0.01）;经治疗后,治疗组内膜面积、管腔狭窄指数显著低于手术组（P<0.01）。手术组细胞增殖率显著高于对照组（P<0.01）,而治疗组细胞增殖率显著低于手术组（P<0.01）。手术组细胞凋亡率显著低于对照组（P<0.01）,而治疗组细胞凋亡率显著高于手术组（P<0.01）。结论罗格列酮可以促进血管平滑肌细胞凋亡,抑制其增殖,从而减轻损伤血管的再狭窄。     

趋化素样因子1对人动脉平滑肌细胞的增殖促进作用

目的观察人趋化素样因子1(CKLF1)对人外周动脉血管平滑肌细胞(ASMCs)的作用。方法用CKLF1真核细胞表达载体瞬时转染293T细胞,72 h后收集上清培养液,采用ELISA方法检测培养上清中CKLF1;用该上清培养人ASMCs细胞后,MTT法检测该上清对细胞增殖的影响。结果 MTT结果显示,10倍稀释的转染上清刺激ASMCs 72 h后,实验组OD490=0.480±0.024,与对照组OD490=0.424±0.011相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CKLF1对人ASMCs具有促增殖作用。CKLF1可能参与动脉粥样硬化血管内膜增厚的过程。     

Metabolic changes in modified smooth muscle cells of rabbit carotid arteries

Summary In the common carotid artery of rabbits, intimal myocyte proliferations were induced by daily repeated local electrical stimulation of the vessel wall in combination with a cholesterol containing diet given for 4 weeks. Some biochemical parameters of the morphologically modified intimal smooth muscle cells were studied and compared with those of samples obtained from nonstimulated tunica media of the contralateral carotid artery. The results show that in relation to dry weight both alkali extractable protein and DNA content of the proliferates are increased to about 125%. In the proliferates, the in-vivo tissue concentrations of glucose and glycogen are only 50–70% of the normal values, whereas the concentration of lactate is increased to about 160%. In-vitro incubation experiments of excised tissue samples from the intimal proliferates and normal media indicate that under an optimal supply of substrates the glucose uptake and lactate production of the proliferates are increased to 140% and 150%, respectively. This result provides evidence for an increased capacity of glycolysis in the proliferates, which in vivo may lead to a decrease in glucose concentration and to an increased concentration of lactate. This investigation shows that modified smooth muscle cells proliferating in the arterial intima exhibit an activated metabolism as seen in other models of arteriosclerosis.

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Zusammenfassung In der Arteria carotis communis von Kaninchen wurden durch wiederholte, lokale elektrische Reizung intimale Myozytenproliferate hervorgerufen. Einige Stoffwechselparameter der morphologisch modifizierten Intimamyozyten wurden verglichen mit denen glatter Muskelzellen, die aus der Media unstimulierter Gefäßabschnitte stammten. Die Ergebnisse zeigen, daß der Gehalt an DNA und alkaliextrahierbarem Protein in den Proliferaten um etwa 25% erhöht ist. Ebenso ist der laktatspiegel erhöht (etwa um 60%), während die Konzentrationen von Glukose und Glykogen auf etwa 50–70% der Normalwerte absinken. In-vitro-Inkubationen von Gewebeproben aus intimalen Proliferaten und normaler Media zeigen, daß die Glukoseaufnahme und die Laktatproduktion um 40 bzw. 50% gesteigert sind. Diese Ergebnisse lassen den Schluß zu, daß die Zellen des Proliferates eine erhöhte Glykolysekapazität aufweisen, die unter In-vivo-Verhältnissen zu einer verminderten Glukose- und Glykogenkonzentration und zu einem erhöhten Laktatgehalt im Gewebe führt. Das heißt, daß in Übereinstimmung mit anderen Arteriosklerosemodellen sich die morphologisch modifizierten Intimamyozyten auch durch einen gesteigerten Stoffwechsel von den normalen Mediamyozyten unterscheiden.

     

伊贝沙坦对血管平滑肌细胞分泌细胞因子的影响

目的 :探讨伊贝沙坦 （Irb）对血管平滑肌细胞 （VSMC）分泌细胞因子的影响。方法 :兔 VSMC分 6组处理 ,即对照组 ,低密度脂蛋白组 ,氧化低密度脂蛋白 （ox L DL）组 ,Irb不同浓度组 ,Irb不同时间组及 Irb+ox L DL 组。以酶联免疫法检测培养上清液中细胞因子 TNFα,IL- 6 ,IL- 8水平。结果 :ox L DL（5 0 m g/L）对 TNFα,IL- 6 ,IL- 8分泌水平于刺激后 8h增加至 6 .4～ 8.5倍 ;Irb呈浓度 （0 .0 1～ 10 0 μmol/L）、时间 （1～ 2 4 h）依赖地抑制基础及 ox L DL 刺激的细胞因子分泌 （与对照组比较均 P<0 .0 5 ）。结论 :Irb可能通过抑制基础及 ox L DL 刺激的细胞因子分泌对VSMC生物学功能发挥调节作用     

反义c-myc RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

构建一个含1．53kb反义c－myc片段的逆转录病毒载体PAS-c-myc，将其通过Lipofectin导入PA317细胞并经G418筛选获得分泌病毒上清液的阳性克隆。病毒上清波感染血管平滑肌细胞（SMC）经G418筛选获得抗性克区。DNA印迹杂交证实了反义c-myc片段整合于SMC基因组中。RNA印迹杂交证实了反义c－mycRNA在SMC中得到了表达，且显著降低了SMC中c－mycmRNA的水平。蛋白印迹杂交证实了反义c－mycRNA抑制了c－myc蛋白的翻译。提示：c－myc基因表达在SMC增殖中起重要作用。     

氟伐他汀对高血压血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法：培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞,不同浓度的氟伐他汀和甲羟戊干预后,进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率的测定。结果：（１）氟伐他汀呈浓度依赖性（１０＾－５￣１０＾－７ｍｏｌ）抑制血管平滑肌细胞数目的增加和＾３Ｈ－ＴｄＲ的掺入率;（２）１０＾－３ｍｏｌ的甲羟戊酸几科完全逆转了氟伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。结论：     

Fe~(2+)对人脐静脉平滑肌细胞增殖及分泌基质金属蛋白酶-2的影响

目的探讨Fe2+对高糖预孵育的人脐静脉平滑肌细胞(human umbilical vascular smooth muscle cell,HUSMC)增殖及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌的影响。方法取高糖DMEM培养液培养的原代HUSMC(3~5代),分为空白对照组(加DMEM培养液)、A组(100 mg/L Fe2+培养液)、B组(50 mg/L Fe2+培养液)、C组(25 mg/L Fe2+培养液)、D组(12.5 mg/L Fe2+培养液)、E组(6.25 mg/L Fe2+培养液)。干预24 h后,MTT比色法测定细胞增殖,ELISA检测MMP-2含量,激光共聚焦显微镜测定细胞内Ca2+浓度。结果除E组外其他各Fe2+组促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用均高于空白对照组(P<0.01),A组、B组作用最强;各浓度Fe2+组MMP-2含量均高于空白对照组(P<0.05);A组细胞内Ca2+荧光强度较空白对照组强(P<0.01)。结论Fe2+能明显促进VSMC增殖,并促进分泌MMP-2,升高细胞内Ca2+浓度。     

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法: 将p38特异性抑制剂SB203580(25 μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果: SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降（P<0.01）。结论: 阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。     

大鼠血管球囊损伤后平滑肌细胞的增殖与雷帕霉素的干预

目的:研究经皮穿刺血管内成形术后大鼠腹主动脉血管平滑肌细胞增殖程度与p27蛋白水平的关系,及国产雷帕霉素（Rapamyc in）对血管平滑肌细胞增殖的抑制,探讨防治经皮冠状动脉内成形术（PTCA）后再狭窄的有效途径和指标。方法:流式细胞计数法测定p27蛋白、CDK2、cyc lin E在大鼠再狭窄血管平滑肌细胞及对照组的表达水平。结果:雷帕霉素干预后p27蛋白表达水平在PTCA术后各组与对照组相比均有上移,减轻血管狭窄程度（P<0.01）。结论:p27蛋白在增殖的血管平滑肌细胞中表达水平与狭窄程度负相关,国产雷帕霉素可上调p27蛋白水平从而抑制血管狭窄形成。