应用PCR技术快速检测市售猪肉中产单核李斯特菌

目的：调查安徽省产单核李斯特菌对动物性食品的污染状况。方法：采集合肥农贸市场生猪肉样品，通过李斯特菌富集培养基培养16h，应用PCR技术进行产单核李斯特菌的检测。结果：从120份猪肉样品中分离出2株产单核李斯特菌，阳性检出率为1．7％。结论：表明安徽省市售猪肉中有不同程度产单核李斯特菌的污染，且存在李斯特菌病的可能性。整个检测过程只需24h，显示PCR技术对产单核李斯特菌的检测具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点。     

2005—2007年衢州市食品中产单核李斯特菌污染状况调查

目的:掌握衙州市食品中产单核李斯特菌污染状况.方法:按GB/T4789.30-2003方法分离单增生李斯特菌.结果:2005～2007年从323份食品中共分离产单核李斯特菌27株,总污染率为8.36%(27/323).生肉类、水产品的污染率分别为14.55%、7.32%;熟肉、生食果蔬类及其制品中未检出.结论:我市存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险.     

产单核李斯特菌的研究进展

产单核李斯特菌属于典型的胞内寄生菌，是一种可引起全世界范围内人畜共患和食源性疾病的致病菌。文章从该菌的生物学特性、毒力因子、与动物性食品污染的关系以及检测等方面的研究进展进行了阐述。     

2000～2004年浙江省食品中产单核李斯特菌污染状况调查

目的：掌握浙江省食品中产单核李斯特菌污染状况。以及内化素基因（Inl）和李氏溶血素O（Hly）两种致病基因携带情况。方法：按GB4789．30方法分离单增生李斯特菌，采用PCR技术检测李斯特菌的两种致病基因。结果：2000～2004年从2282份食品中共分离产单核李斯特菌163株，总污染率为7．14％（163／2282）。生肉类、熟肉及水产品的污染率分别为12．80％、7．67％和2．24％；114份生食蔬菜中1份标本分离到产单核李斯特菌；285份乳及乳制品、59份冰激凌均未分离到产单核李斯特菌；163株产单核李斯特菌有155株同时检测到内化素基因和李氏溶血素O基因。结论：我省存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险。     

温州市食源性产单核李斯特菌污染调查

目的：掌握温州市各类食品中产单核李斯特菌（LM）的污染状况，初步确定易受污染的食品，为食源性疾病监测提供科学依据。方法：采集8大类食品及冰箱内壁涂抹物，按国标GB／T4789-30方法进行分离培养，然后用生化、API鉴定。结果：218件样品中检出LM13株，检出率为5．96％。冰箱内壁涂抹物96件均未检出。结论：LM主要污染的食品为家禽类、熟食制品、淡水鱼及涮羊肉等。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。     

快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究

目的：为产单核李斯特菌提供了一个方便快捷切实有效的检测技术。方法：采用胶体金标记产单核李斯特菌抗体制备免疫层析检测试剂，通过免疫层析作用对产单核李斯特菌进行检测。结果：通过选用柠檬酸钠改良法制备胶体金，测定其最适结合蛋白浓度为28μg／ml，构建起免疫层析检测试剂和检测方法，检测了冷冻猪肉、牛奶、冰激凌以及不同稀释度的产单核李斯特菌标准样品，灵敏度达87．5％，具有良好的重现性。结论：免疫胶体金层析法用于快速检测产单核李斯特菌是可行的。     

食品中李斯特菌快速检测方法的建立与研究

李斯特菌特别是单核细胞增生李斯特菌在世界范围内引发了多起较严重的食物中毒 ,因而越来越引起重视 ,各国政府都花巨资投入到对该菌的研究。单核细胞增生李斯特菌能引起老人、孕妇和小孩发病。[1] 本实验室以ｍｉｎｉＶＩＤＡＳ和ＶＩＴＥＫ-ＡＭＳ两台仪器连用 ,建立了快速检测食品中李斯特菌的检测系统 (简称仪器法 )。用该法从四大类食品中分离到 10株单核细胞增生李斯特菌。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　样品 :均随机抽取于超市货架上的食品。1 1 2　ｍｉｎｉＶＩＤＡＳ检测仪及其配套试剂 :ＶＩＴＥＫ -ＡＭＳ检测仪及其配套试剂 :均…     

食品绵羊李斯特菌PCR-DHPLC快速检测

李斯特菌是一种病原菌.李斯特菌食品传播亦渐被重视 (1).在李斯特菌属的分类种中,单核细胞增生李斯特菌对人类致病性最强,绵羊李斯特菌对人类也有一定的致病性,其余李斯特菌的致病性少有报道 (2).建立食品中致病菌快速检测技术,可保障食品安全.基于PCR技术的分子生物学检测方法是最有效的快速检测手段,已被广泛应用于食源性致病菌的检测 (3-5).有关绵羊李斯特菌的PCR快速检测技术研究报道较少.本研究以绵羊李斯特菌为检测对象,基于PCR结合变性高效液相色谱 (DHPLC)技术,建立食品中绵羊李斯特菌的快速检测方法,以达到快速、简便、准确检测的目的.现报告如下.     

食品中产单核细胞增生李斯特菌污染状况的分析

[目的]了解马鞍山市7类食品中单增李斯特菌污染状况,并评价不同方法的检测效果,为食品中单增李斯特菌定量风险评估提供科学依据. [方法]依据国标GB4789.30-2003和国家食源性疾病监测网2007年年度工作手册进行,同时用EB增菌法、LB增菌法和Fraser肉汤培养法对食品样品进行单增李斯特菌分离鉴定并进行比较. [结果]7类482份食品样品,检出单增李斯特菌(L.m)56株,检出率为11.62%;在288份生肉和水产品中检出28株产H2S李斯特菌,阳性率为9.72%. [结论]在7类食品中除冰淇淋外,均不同程度受到L.m污染,尤以速冻面米食品污染严重,其次为熟肉制品、生畜禽肉和水产品.LB增菌法明显优于EB增菌法,Fraser肉汤培养法和LB增菌法检出率相等,而后者操作更方便.     

单增李斯特菌不同PCR快速检测方法比较

目的比较3种PCR快速检测方法在检测单核细胞增生李斯特菌时的特异性和灵敏度方面的差异。方法针对单核细胞增生李斯特菌的毒力基因iap和prfA基因,分别设计引物,进行单个PCR、多重PCR、套式PCR等3种方法检测。结果3种PCR方法均具有较强的特异性;套式PCR的灵敏度为10²cfu/ml,高于单个PCR(10³cfu/ml)和多重PCR(10⁴cfu/ml)。结论多重PCR在特异性检测方面具有优势,而在灵敏度方面,套式PCR要明显优于单个及多重PCR方法。     

奶液模拟标本中单增李斯特菌real-time PCR检测方法的建立

目的建立了基于TaqMan探针的real-time PCR技术针对奶液模拟标本中单增李斯特菌的快速检测方法。方法用单增李斯特菌hlyO基因的部分片段作为靶基因,制作标准曲线,定量检测奶液中的单增李斯特菌。结果通过对不同李斯特菌及一些较为常见的致病菌的DNA进行扩增,只有单增李斯特菌能够产生扩增曲线,其余菌株均不产生扩增曲线。单增李斯特菌的检测灵敏度可以达到9copies/反应体系。结论该方法特异性好,灵敏度高,整个实验可在1.5h内完成,可用于食品中单增李斯特菌的快速检测和疫情暴发时的相关病原调查。     

食品中单增李斯特菌PCR检测方法建立与评价

目的建立单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）快速、敏感、特异的PCR诊断方法。方法采用聚合酶链式反应技术（PCR）特异性扩增单核细胞增生李斯特菌溶血素基因（hlyA），并评价该方法的特异性与敏感性。结果在706bp处出现nuc基因的目的片断，只有单增李斯特菌的目的片段获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性；该方法可以检测到3．3ng／L的DNA。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便。为食品中单增李斯特菌的快速检测提供了新的手段。     

食品中单核细胞增生李斯特菌污染及耐药状况调查

目的:了解吉林省市售八类食品中单增李斯特菌的污染状况和耐药现状。方法:采集市售八类食品样品,采用显色培养基,API及BAX分离鉴定,K-B法药敏实验。结果:1251份样品共检出单增李斯特菌74株,总检出率为5.9%。主要在熟肉制品(17.0%)和凉拌菜(9.1%)。74株菌株对氨苄西林、青霉素、庆大霉素、卡那霉素全部敏感。头孢噻肟、新霉素耐药率达50%以上。其次为恩氟沙星(35.1%)、环丙沙星(33.8%)和诺氟沙星(25.6%)。结论:吉林省市售八类食品中尤其是熟肉制品和凉拌菜中单增李斯特菌污染和耐药现象严重。应高度重视并加强污染状况及耐药性监测,保证食品安全和人类健康。     

食品中单增李斯特菌血清型及耐药性研究

目的：掌握食品中单增李斯特菌血清型及耐药水平。方法：玻片凝集法检测O抗原，试管凝集法检测H抗原；用K—B法测定耐药性。结果：186株单增李斯特菌对甲氧苄胺嘧啶、丁胺卡那霉素、利福平等8种抗生素耐药性小于5％，对四环素、头孢噻肟和呋喃妥因的耐药性分别为8．97％、39．74％和49．36％，对胺苄青霉素、氯洁霉素、头孢西丁耐药性在50％以上。胺苄青霉素、头孢西丁、头孢噻肟耐药株逐年增加；152株单增李斯特菌分属7个血清型，1／2b血清型占50％，1／2a血清型占30．26％，1／2c血清型占13．16％。结论：食品中单增李斯特菌血清型主要为1／2b、1／2a和1／2c；甲氧苄胺嘧啶可替代胺苄青霉素作为单增李斯特菌病临床首选药物。     

应用PCR方法检定单核细胞增多性李斯特菌

目的建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证。采用ＰＣＲ和常规鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果可扩增含有保守ＨｉｎｄⅢ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株用两种方法都鉴定为单增李斯特菌，两种方法的结果完全符合。当用于食物标本检测时，ＰＣＲ反应遭强烈抑制。经过２５小时的增菌培养，对培养物进行化学抽提、纯化的菌体经加热裂解后直接用作ＰＣＲ反应模板，可使抑制作用大大降低。每毫升牛奶人工接种４个菌可用该法特异检出。结论建立了ＰＣＲ方法，可初步用于单增李斯特菌的快速、特异、敏感诊断。     

食品中单增李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型

目的分析吉林省食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别,探讨吉林省食品中单核细胞增生李斯特菌污染的同源性。方法将市售熟制米面制品、熟肉制品、中式凉拌菜和即食非发酵豆制品中分离出的39株单核细胞增生李斯特菌进行PFGE分子分型,BioNumerics version软件分析比较同源性。结果 39株单核细胞增生李斯特菌的PFGE结果主要分为6大群,其中1群包括6株,相似度为86.0%以上;2群包括16株,分为2个亚群,2A亚群包括7株,相似度为94.1%以上,2B亚群9株,相似度为74.8%;3群包括3株,相似度为80.0%以上;4群包括14株,亦分为4个亚群;5群包括3株,相似度为85.7%以上;6群包括1株,相似度为63.3%以上。结论吉林省食品中的LM来源于不同的克隆株,但部分LM有不同程度的相关性;PFGE是分析LM同源性的有效方法,对LM的流行趋势、分布特点和分子流行病学研究具有重要意义。     

全自动微生物磁珠分选系统检测单核细胞增生李斯特菌效果研究

目的:研究全自动微生物磁珠分选系统对食品中单增李斯特氏菌的检测效果。方法:取400份自然样品,用磁珠分选系统和国标法对样品进行对比检测。结果:全自动微生物磁珠分选系统相较国标法对自然样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出率有一定程度提高。结论:全自动微生物磁珠分选系统简单易用,标准化程度高,可以和国标检测方法相结合以提高单增李斯特氏菌的检出率。     

广西食源性单核细胞增生李斯特菌耐药趋势分析

目的了解广西食源性单核细胞增生李斯特菌耐药情况,为临床治疗合理用药提供依据。方法药敏试验采用微量肉汤稀释法(MIC)。结果菌株耐药严重,除3株(3.30%)对8种抗生素无耐药外,其余88株(96.70%)均有不同程度的耐药。对苯唑西林、克林霉素的耐药率分别为87.91%、71.43%。菌株的多重耐药较为严重,2重及以上耐药菌株63株,占69.23%;2重耐药菌株占最大比例(54株,85.71%),其中51株同时对苯唑西林和克林霉素耐药。各年度间耐药率差异无统计学意义(χ2=8.389,P>0.05)。结论单核细胞增生李斯特菌对部分抗生素呈高耐药和多重耐药趋势,应引起关注。