加味桃核承气汤含药血清对胰岛素诱导兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨加味桃核承气汤含药血清对胰岛素诱导兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:采用兔主动脉平滑肌细胞株(SMC),以胰岛素(RI)诱导SMC增殖,制备桃核承气汤不同配伍组方含药血清,MTT法观察各组对RI诱导SMC增殖的抑制作用,以罗格列酮及美迪康作为对照组,探讨各组在糖尿病大血管病变发生与发展中可能的作用。结果:RI诱导SMC增殖试验确定RI终浓度为300mu/L;加味桃核承气汤含药血清对RI诱导SMC增殖的抑制作用试验显示,活血 泻热通下组、桃核承气汤组、罗格列酮组增殖抑制作用十分显著(P<0.01),以活血 泻热通下组抑制率最高(39.8%)。美迪康组、泻热通下组及益气养阴组增殖抑制作用不明显(P>0.05)。结论:加味桃核承气汤可能通过抑制RI诱导SMC增殖作用抗糖尿病动脉粥样硬化所致的大血管病变,本方抑制平滑肌细胞增殖的有效成份可能存在于活血 泻热通下组中。     

丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞内质网应激相关基因表达的影响

目的:研究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的丹参酮ⅡA共同培养,Annexin/PI双染法、原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,观察凋亡细胞形态;实时荧光定量PCR检测Bip基因表达.结果:丹参酮ⅡA可显著促进兔VSMC凋亡,细胞凋亡率与HCY组相比差异显著(P＜0.01),且存在剂量依赖性;丹参酮ⅡA组Bip mRNA表达水平显著升高,与HCY组相比差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA上调Bip基因表达,放大ERS信号,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的兔血管平滑肌细胞增殖的影响,为探讨淫羊藿苷降血脂、预防动脉粥样硬化的作用机制及其药效提供实验依据.方法 兔血管平滑肌细胞增殖模型组给予不同剂量淫羊藿苷处理,采用MTT方法测定各组细胞OD值,用流式细胞术分析其细胞周期.并用TUNEL法镜下观察凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 半胱氨酸能显著促进VSMC的增殖(P<0.05),而淫羊藿苷对半胱氨酸刺激平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05).淫羊藿苷影响了增殖平滑肌细胞的细胞周期,使S期细胞数量减少.淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞具有促凋亡作用,随药物浓度的增加,细胞的凋亡率增加.结论 淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞有明显的抑制生长及促凋亡作用,在心血管疾病的治疗方面具有重要的研究价值.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞增殖活性及总蛋白含量的影响

目的:研究淫羊藿苷( icariin,ICA)对氧化低密度脂蛋白(oxidized,ox - LDL)诱导增殖血管平滑肌细胞(vascular smoooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用.方法:建立ox- LDL诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷共同培养,用MTT法检测细胞增殖活性;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白量.结果:与空白组相比较,模型组OD值显著升高(P＜0.01),证明LDL可促进VSMC增殖;与模型组相比,高、中、低浓度的ICA均可抑制LDL所诱导的VSMC增殖(P＜0.01);经ICA处理24h、48h、72 h后,VSMC总蛋白含量均低于LDL组,提示ICA对VSMC增殖均有抑制作用.结论:淫羊藿苷拮抗ox-LDL诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡.     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞的促凋亡作用

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的促凋亡作用。方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷共同培养48h后,用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;比色法测半胱天冬蛋白酶3(Caspas-3)活性。结果:与空白组相比较,模型组OD值显著升高(P0.01),证明HCY可促进VSMC增殖;与模型组相比,高、中、低浓度的ICA都可抑制HCY所诱导的VSMC增殖(P0.05),抑制作用与ICA浓度呈正相关;淫羊藿苷各组凋亡细胞数明显增多,与HCY组相比差异显著(P0.01);与空白组相比较,模型组A405nm显著降低(P0.01),表明HCY可通过抑制Caspas-3酶的活性而抑制VSMC凋亡;与模型组相比,高、中、低浓度ICA组Caspas-3酶活性显著升高(P0.01)。结论:淫羊藿苷拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡,激活caspase-3这一凋亡效应酶可能是其机制之一。     

葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡的细胞周期调控机制研究

目的：研究葛根素对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法：建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,予不同浓度的葛根素（107mol／L,10^-6mol／L．10^-5mol／L）共同培养48h后,用MTT法检测细胞增殖能力;用流式细胞仪Annexin／PI双染法检测细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白CyclinDl和CDK4的表达。结果：葛根素可抑制HCY所诱导的VSMC增殖,抑制作用与葛根素浓度呈正相关;葛根素组G0／G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,与HCY模型组比较,差异均有非常显著性意义（P〈001）;Cychn D1和CDK4的表达量均随葛根素浓度增加而减少。结论：葛根素拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,主要机制之一可能与Cyclin D1及CDK4低表达所致的细胞周期抑制有关。     

加味桃核承气汤对四氯化碳肝纤维化大鼠α-SMA表达的影响

目的:观察加味桃核承气汤对四氯化碳(CCl4)肝纤维化大鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,随机分为正常组、模型组,加味桃核承气汤高、中、低剂量组和秋水仙碱组;采用灌胃给药,疗程8周;用苦味酸-天狼红胶原染色方法进行半定量肝纤维化计分(SSS),观察肝纤维化程度的变化;用免疫组化技术半定量检测肝组织α-SMA的表达变化.结果:模型组大鼠SSS水平显著高于正常组,经加味桃核承气汤治疗后肝纤维化SSS水平明显下降;正常组、模型组,加味桃核承气汤高、中、低剂量组和秋水仙碱组肝组织α-SMA的蛋白表达水平分别为1.68±0.51、8.74±2.40、4.52±1.34、5.47±2.01、6.50±1.67、7.05±1.53.各治疗组α-SMA的蛋白表达水平显著下降.结论:加味桃核承气汤对CCl4诱导的肝纤维化有显著的治疗作用,其作用机制与抑制HSC的活化有关.     

加味宫外孕Ⅰ号方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡率和细胞周期的影响

目的:运用血清药理学方法,观察加味宫外孕Ⅰ号方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡率和细胞周期的影响。方法:根据血清药理学的方法,用SD大鼠制备中药组(加味宫外孕Ⅰ号方含药血清),西药组(甲氨蝶呤含药血清)和对照组(正常血清),分别加入体外培养的滋养细胞培养体系中。培养72 h后,流式细胞法测定3组的细胞凋亡率和细胞周期。结果:中药组与对照组相比,滋养细胞凋亡率显著上升(P0.01),细胞周期发生阻滞,G0/G1期细胞百分比显著增多(P0.01);中药组与西药组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:加味宫外孕Ⅰ号方诱导滋养细胞凋亡,改变细胞周期进程可能是其发挥杀胚效应的机制之一。     

痛痹颗粒对兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:观察中药复方痛痹颗粒对体外一氧化氮(NO)诱导的兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:采用流式细胞仪的Annexin V和DNA分析方法分别检测各组的细胞早期凋亡和细胞周期百分率。结果:硝普钠和痛痹颗粒混合培养的软骨细胞组的早期凋亡率与模型组(P<0.01)和空白对照组(P<0.05)比较显著下降,S期细胞百分率较模型组、空白组显著升高(P<0.05)。G0/G1期细胞百分率则显著低于模型组(P<0.01)。结论:痛痹颗粒能明显降低体外NO诱导的兔软骨细胞凋亡,并有促进兔软骨细胞增殖的作用。     

淡豆豉异黄酮对Ang Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞周期的影响

目的:观察淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(Vascular Smooth MuscleCell,VSMC)细胞周期的影响,探讨其抑制增殖的可能机制。方法:原代培养大鼠VSMC,建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法观察淡豆豉异黄酮对Ang Ⅱ诱导VSMC增殖的干预作用,流式细胞仪观察淡豆豉异黄酮干预细胞后细胞周期的变化。结果:淡豆豉异黄酮50μg/L预孵育12、24 h,100μg/L预孵育1、4、12、24 h,200μg/L预孵育1、4、24 h,500μg/L预孵育4 h可显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖;50、100、200μg/L作用24 h抑制增殖作用最为明显,并可显著增加VSMC G0/G1期比例,降低S期比例。结论:淡豆豉异黄酮抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖作用机制可能与阻止细胞由G0/G1期进入S期,进行VSMC细胞周期的调控有关。     

加味桃核承气汤防治糖尿病胃轻瘫作用机制及网络药理学分析

目的:运用网络药理学技术分析加味桃核承气汤治疗糖尿病胃轻瘫的作用靶点和相关信号通路,进一步分析其防治糖尿病胃轻瘫的理论基础和作用机制。方法:运用中药系统药理学成分分析平台(bioinformatics analysis tool for molecular mechanism of TCM,BATMAN-TCM)数据库获取加味桃核承气汤的化学成分及作用靶标基因,从comparative toxicogenomics database(CTD)数据库收集糖尿病胃轻瘫的靶标基因,将两者取交集后得到加味桃核承气汤--糖尿病胃轻瘫靶基因交集,运用STRING构建蛋白质间相互作用网络,并将结果进行网络可视化展示,通过Cytospace软件Clue GO,Clue Pedia插件进行加味桃核承气汤--糖尿病胃轻瘫靶基因交集的基因本体论(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并将结果进行可视化展示。最后利用CTD数据库并结合文献学习,获取交集基因于糖尿病胃轻瘫的疾病治疗作用。结果:加味桃核承气汤的621个靶点基因中有25个靶点与糖尿病胃轻瘫相互关联,该方可能通过影响MLNR,SST,PTGS1,HRH2,HTR3A,HTR4,HTR7,NOS3基因表达,改善胃肠激素水平,影响血清素与其受体结合,活化腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC),诱导环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP),蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)表达,从而激活AC/c AMP/PKA信号通路,并调节Ca2+/K+通道的开放,控制离子平衡,继而促进胃平滑肌适应,收缩胃平滑肌以调节胃容量,同时改善胃酸分泌,保护胃黏膜,不排除改善血管收缩功能、血流动力学的可能。结论:网络药理学方法科学分析加味桃核承气汤通过多方面防治糖尿病胃轻瘫的作用机制,阐释其中医药多靶点、多通路防治糖尿病胃轻瘫的治疗优势,为加味桃核承气汤后续的实验研究提供研究方向和理论参考。     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

加味当归补血汤含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的:探讨加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响.方法:应用加味当归补血汤灌胃荷瘤Wistar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、调亡.结果:加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2/M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡.结论:加味当归补血汤含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2/M期和诱导细胞凋亡而实现.     

痛痹颗粒对兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:观察中药复方痛痹颗粒对体外一氧化氮(NO)诱导的兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:采用流式细胞仪的Annexin V和DNA分析方法分别检测各组的细胞早期凋亡和细胞周期百分率。结果:硝普钠和痛痹颗粒混合培养的软骨细胞组的早期凋亡率与模型组(P<0.01)和空白对照组(P<0.05)比较显著下降,S期细胞百分率较模型组、空白组显著升高(P<0.05)。G0/G1期细胞百分率则显著低于模型组(P<0.01)。结论:痛痹颗粒能明显降低体外NO诱导的兔软骨细胞凋亡,并有促进软骨细胞增殖的作用。     

淫羊藿苷与葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：研究淫羊藿苷（icariin,ICA）与葛根素（puerarin）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）凋亡的影响。方法：建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的淫羊藿苷与葛根素共同培养48h后,用TUNEL法检测凋亡细胞,荧光显微镜形态学观察并进行凋亡指数分析。结果：淫羊藿苷与葛根素各组凋亡细胞数明显增多,与HCY组相比,差别有统计学意义（P〈0．01）。结论：淫羊藿苷与葛根素联用可拮抗HCY诱导的兔VSMC增殖,促进其凋亡。     

加味三物白散诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡及对细胞周期影响的研究

目的 :观察加味三物白散对人胃腺癌SGC - 790 1细胞生长的抑制作用 ,影响细胞周期及诱导人胃腺癌SGC -790 1细胞凋亡。方法 :采用MTT法 ,观察抑制率 ;应用流式细胞仪检测加味三物白散诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡和对细胞周期的影响。结果 :加味三物白散对人胃腺癌SGC - 790 1细胞生长有抑制作用 ,大、中、小剂量抑制率分别是 5 5 .75 %、4 2 .6 7%和 38.6 3% ,进一步研究发现中、大剂量组诱导细胞凋亡百分率分别为 9.0 6 %、96 .32 % ,与阴性对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) ;此外与阴性对照组相比 ,中、大剂量组使G0 -G1期细胞明显减少 ,G2 -M期明显增高 ,S期明显减少 ;小剂量组使G0 -G1期细胞明显增高 ,G2 -M期明显减少 ,S期减少。结论 :加味三物白散能抑制人胃腺癌SGC - 790 1细胞生长 ;其中、大剂量组可以明显诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡 ;并且加味三物白散对人胃腺癌SGC - 790 1细胞的增殖周期有影响     

脑心通对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制

目的:研究脑心通对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其机制。方法:将体外传代培养的人脐动脉VSMC随机分为5组:空白组、模型组和脑心通(1g/L,0.5g/L,0.1g/L)三个不同剂量组。采用MTT比色法检测各组VSMC的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期构成比。结果:脑心通有抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖的作用,MTT吸光度(OD值)由0.733±0.033减少到0.672±0.035(P<0.05);流式细胞分析示G0/G1期细胞比例由51.67%±9.64增加到64.70%±5.54(P<0.05)。结论:脑心通可抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,机制与其阻止细胞进入有丝分裂期有关。     

紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制。方法:流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率变化;免疫组化法(SABC法)检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:紫草素可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);紫草素可上调Bax和下调Bcl-2基因蛋白的表达,与空白组对照差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,其凋亡机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调,Bcl-2下调相关。