家族性慢性良性天疱疮一家系致病基因新突变的发现

目的对家族性慢性良性天疱疮一家系的ATP2C1基因突变进行检测。方法采用聚合酶链反应扩增该家系患者和健康对照个体ATP2C1基因的全部外显子,直接测序法进行DNA测序,100例无亲缘关系的正常人作为对照。结果该家系患者ATP2C1基因内含子3的末端235-2碱基发生了1个腺嘌呤（A）→鸟嘌呤（G）的杂合性剪接位点突变。家系中健康对照个体及无亲缘关系的正常对照均未发现该突变。结论该剪接位点突变可影响基因转录和翻译产物,是ATP2C1基因新的特异性突变。     

家族性良性慢性天疱疮一家系及ATP2C1基因突变分析

目的 报道家族性良性慢性天疱疮一家系,并对ATP2C1基因突变进行分析。方法 收集家族性良性慢性天疱疮家系成员的一般资料,进行临床调查,绘制家系图谱。采用PCR及Sanger直接测序法对该家系中4例患者的ATP2C1基因进行检测,并以该家系3例健康者和100例无亲缘关系的正常人作为对照。结果 4例家族性良性慢性天疱疮患者ATP2C1基因的第21号外显子的第472位核苷酸由G变为A,该突变导致原先158位的天冬氨酸变为天冬酰胺（p.Asp158Asn）的错义突变。而家系中健康对照及无亲缘关系的正常人均未发现该突变。结论 ATP2C1基因的第21号外显子的第472位核苷酸由G变为A是ATP2C1基因新的突变位点,可能是家族性良性慢性天疱疮家系发病的主要原因。     

表皮松解性角化过度鱼鳞病COL7A1基因突变研究

目的探讨一个表皮松解性角化过度鱼鳞病家系基因的突变。方法提取表皮松解性角化过度鱼鳞病患者及家族成员的基因组DNA，采用PCR扩增COL7A1基因所有的外显子及其邻近的剪切点并进行双向直接测序，用PCR检测突变位点从而进一步确定家系的致病原因。结果发现患者COL7A1基因的一条等位基因第2号外显子上存在S48P的错义突变，而另一条等位基因第27号外显子上存在3625del 11缺失突变，造成编码区阅读框架的移位，最终导致蛋白终止密码（PTC）的生产。结论COL7A1基因的缺失突变和锆义突变引起该患者临床症状的特异突变。     

散发家族性慢性良性天疱疮ATP2C1基因突变1例并20年文献复习

目的 探讨浙江省杭州市中医院就诊的1例散发性家族性慢性良性天疱疮（HHD）患者的ATP2C1基因的突变情况,并整理、归纳近20年HHD患者的临床和遗传学特点。方法 应用外周血DNA提取、PCR和DNA直接测序等方法对1例散发HHD患者的ATP2C1基因的27个外显子进行突变检测,并利用Pubmed和中国学术文献网络出版总库检索近20年国内有关HHD病例和家系及ATP2C1基因突变报道并进行统计分析。结果 本例散发患者ATP2C1基因的7号外显子第457位碱基由C变为T,导致第153位的精氨酸被终止密码子取代（R153X）;国内报道ATP2C1突变171次,以移码、错义、无义突变为主,突变位点集中在21-26号外显子。结论 无义突变c. 457C>T(P. R153X)是该患者发病的主要原因,文献发现ATP2C1基因21-26号外显子可能是中国汉族人群的突变热点区域。     

家族性慢性良性天疱疮一家系ATP2C1基因突变检测

目的研究家族性慢性良性天疱疮一家系的ATP2C1基因突变情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)及直接测序的方法对家系中4例患者ATP2C1基因进行突变检测,以家系中3例健康者和100例无血缘关系的正常人作对照。结果该家系4例患者ATP2C1基因的7号外显子第457位碱基胞嘧啶C被胸腺嘧啶T替代,导致第153位的精氨酸被终止密码子取代(R153X),家系中健康对照及无血缘关系的正常人均未发现该突变。结论无义突变c.457C>T(p.R153X)是导致该家系发病的主要原因。     

中国汉族乳腺癌家系中BRCA1和BRCA2基因的胚系突变

目的 检测中国家族性乳腺癌中BRCA1和BRCA2的胚系突变位点。方法 对象为来自汉族的14个乳腺癌家系中的15例乳腺癌患者、散发性乳腺癌患者76例和正常对照100名,知情同意后取其外周静脉血,提取基因组DNA,用15例家族性乳腺癌患者和2份pool DNA(每份pool DNA含50名正常对照者的等量DNA)作为样本,对BRCA1基因外显子4、8、11、18、19、20和部分内含子区域,BRCA2基因外显子1～14、外显子17～24和外显子27及部分内含子区域进行序列测定。用DNA Star软件进行序列比较分析,筛查基因突变位点及多态性位点,对有意义的突变位点在正常对照和散发性乳腺癌患者中进行基因分型。结果 在BRCA1的外显子11上发现6个单核苷酸多态性(SNP)位点,2个不改变氨基酸编码,4个改变氨基酸编码。其中2个为致病性位点：一个致病位点为G 1235A(Trp 372 stop),导致蛋白质合成终止,该位点仅在1例29岁的家族性乳腺癌患者中发现;另一致病位点C 1196 T(Pro 359 Leu)也只在1例37岁的家族性乳腺癌患者中发现,该位点在正常对照和散发性乳腺癌患者中进行基因分型后均为野生型,并在相关的文献和乳腺癌信息中心网站的突变数据库中均未检索到,为一新的中国家族性乳腺癌特有的致病位点。在BRCA2的外显子3、10及11中发现8个SNP位点,5个不改变氨基酸编码,3个改变氨基酸的编码,其中2个位点A 1093 C(Asn 289 His)和A 3199 G(Asn 991 Asp)在2个pool DNA样本中均为野生型。结论 在BRCA1上发现两个致病的SNP,可能与早发型乳腺癌有关,其中一个可能是中国家族性乳腺癌特有的新的突变位点。     

在mRNA水平验证SGLT2基因剪切突变的新方法

目的：由于实验技术的限制,在以往SGLT2基因突变筛查过程中未能对剪切突变在mRNA水平进行验证,因此本研究拟建立一种方便的验证SGLT2基因剪切突变的方法。方法：收集家族性肾性糖尿患者临床及家系资料,55名健康献血员作为对照。聚合酶链反应（PCR）扩增SGLT2基因14个外显子及其周围内含子区和启动子区,PCR产物直接测序法筛选突变。发现可能的剪切突变后,本研究用EB病毒转染B淋巴细胞的方法建立肾性糖尿患者的永生细胞系,提取永生细胞总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增SGLT2编码的mRNA,经PCR扩增后直接测序的方法分析和验证剪切突变,从而确证剪切突变对mRNA的影响。结果：在家族性肾性糖尿患者中,发现了2个剪切突变位点（IVS 1-16 C〉A,IVS 11＋1 G〉C）,通过本研究建立的验证SGLT2基因剪切突变的方法,在SGLT2基因mRNA水平验证了剪切突变对mRNA的影响（IVS 1-16 C〉A：外显子3缺失,11＋1 G〉C：外显子11缺失）。结论：本研究解决了SGLT2基因mRNA在外周血有核细胞中表达量少造成mRNA获取困难的问题,建立了一种方便的验证SGLT2基因剪切突变的方法,为进一步探讨FRG的分子致病机制奠定了基础。     

内蒙古地区妇女散发性乳腺癌BRCAl基因突变分析

目的：筛查内蒙古地区散发性乳腺癌患者中BRCAl突变位点。方法：收集新近确诊的乳腺癌患者病例及全血标本40例。以及非癌乳腺良性疾病患者全血30例作为对照,利用TIANampBloodDNA Kit试剂盒获取基因组DNA;PCR方法扩增基因组DNA的BRCAl基因第11外显子的2620～2894bp和3570～3847bp片段．所有标本利用ABl3100-DNA测序仪分析扩增的DNA片段。结果：测序的DNA片段与GeneBank中的序列进行了比对,在所扩增DNA片段中未发现碱基的突变。结论：在我们的研究中所检测的散发性乳腺癌患者的BRCAl基因第11外显子2620～2894bp和3570～3847bp区域未发现突变。     

家族性良性慢性天疱疮

<正> 本病为一罕见的遗传性皮肤病,1939年由Hailey 和 Hailey 首先报道,并定名为家族性良性慢性天疱疮(FBCP)为现今所沿用的命名。其他命名尚有 Hailey—Hailey 病,水疱型 Darier 氏病等。最近三个月内即我们见到本病3例,而3例均被误诊为湿疹或脓疱疮。说明本病少见似与部份病例漏诊、误诊有关。兹报告6例如下:     

20例中国Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区突变分析

目的检测Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区序列,进一步明确STK11基因可能存在新的突变位点。方法收集空军总医院2009年1月~2010年10月期间收治的20例Peutz-Jeghers综合征患者的血液样本,采用PCR扩增技术及DNA测序方法检测STK11基因编码区序列,与STK11基因的正常序列比对分析。结果 20例Peutz-Jeghers综合征患者中有14例患者检测到STK11基因的编码区发生突变,1例患者携带2个突变位点,13例患者携带单一突变位点。测序发现1例患者在3号外显子第460位发现一错义突变(460C→G),在第154密码子处形成另一种新的氨基酸,为一新的突变位点。2个家系中4例患者在同一位点发生突变;同一家系患者的突变位点一致。其余6例患者STK11基因编码区未见突变位点。结论 STK11基因突变是Peutz-Jeghers综合征发生的主要病因,3号外显子第460位错义突变,即460C→G,是导致Peutz-Jeghers综合征发生新的突变位点。     

先天性肾性尿崩症患者精氨酸加压素受体2基因突变的检测分析

目的　探讨并检测先天性尿崩症患者精氨酸加压素受体 2 (AVPR2 )基因突变的临床意义。方法　对临床诊断为先天性尿崩症的 7例患者及 2 4名亲属的血液样本 ,提取基因组DNA ,通过PCR扩增AVPR2基因的 6个片断 ,用单链构象多肽性 (SSCP)进行基因突变的筛查 ,再对异常条带进行DNA测序证实基因的突变。结果　在 7例先天性尿崩症的患者中 ,发现 6例患者存在 5种类型共8个AVPR2的突变点 ,2例患者有AVPR2基因的双点突变 ,其余为单突变点 ,1例患者的母亲为AVPR2基因突变的携带者。其中 4个突变点国际尚未报道 ,它们分别是 :G 4 6 9 4 93del 2 4 ,G 5 4 1insT ,G 4 6 2delC和G 935T >C ,分别导致AVPR2受体蛋白A37 L4 4del(缺失突变 ) ,A6 1G 190X(插入移码突变 ,无义突变 ) ,P34R 36X(缺失移码突变和无义突变 ) ,C192R(错义突变 )。结论　发现了 4种新的AVPR2基因突变类型。采用PCR SSCP的方法可以对尿崩症的患者进行基因突变的粗筛 ,最后经过DNA测序可以做出基因突变的诊断。     

THE ANALYSIS OF NF2 GENE MUTATION IN SPORADIC SCHWANNOMAS

Ｒ啨ｓｕｍ啨　　 Ｏｂｊｅｃｔｉｆ　Ａｎａｌｙｓｅｒｌａｍｕｔａｔｉｏｎｄｕｇ埁ｎｅＮＦ2 (ｅｘｔｒｏｎ 2 ,4,6ｅｔ 13)ｃｈｅｚｌｅｓｓｃｈｗａｎｎｏｍｅｓ.Ｍ啨ｔｈｏｄｅｓ　Ｌａｍｕｔａｔｉｏｎｄｕ ｇ埁ｎｅＮＦ2ｃｈｅｚ 36ｓｃｈｗａｎｎｏｍｅｓ啨ｔａｉｔｏｂｓｅｒｖ啨ｅ ｐａｒＰＣＲ ＳＳＣＰｅｔｌ ａｎａｌｙｓｅｓ啨ｑｕｅｎｔｉｅｌｌｅｄｅｌ ＡＮＤ .Ｌ ｉｎｄｉｃｅｄｅ ｐｒｏｌｉｆ啨ｒａｔｉｏｎｄｕｓｃｈｗａｎｎｏｍｅ啨ｔａｉｔｄ啨ｔｅｃｔ啨 ｐａｒｌ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｉｍｉｅ .Ｒ啨ｓｕ…     

脑血管狭窄患者Nf1全基因的DHPLC分析(附5例报告)

目的 探讨脑血管狭窄患者Nf1基因的突变热点及突变方式.方法 从全血中提取DNA,采用变性高效液相色谱分析(DHPLC)对5例脑血管狭窄病例进行Nf1全基因突变筛查;对DHPLC检测有差异洗脱峰型的区域进行测序分析.结果 5例无危险因素的脑血管狭窄患者Nf1全基因筛查发现:①1例出现5号外显子无义突变位点,c.541C-T;②5例均有14号和15号外显子之间内含子的基因突变;③4例有7号外显子c.702G-A的同义突变位点;④1例出现32号(c.4177G-A,Val-Ile)和46号外显子(c.6918T-G,Asn-Lys)的错义突变.结论 在目前无其他基础疾病的脑血管狭窄患者体内的Nf1基因并非以稳定野生型存在,而是具有不同类型的突变,这些突变集中在第5、7、14、32和46等外显子上.     

X染色体连锁显性遗传先天性眼球震颤家系的致病基因突变研究

目的对4个X染色体连锁显性遗传先天性眼球震颤(XL-CIN)家系进行候选致病基因FRMD7突变筛查。方法采集家系成员外周血5 ml,提取基因组DNA;以4个家系的先证者基因组DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增FRMD7基因的全部外显子及其外显子-内含子拼接部的序列,DNA直接测序筛查突变位点;一旦发现突变致病性位点,则采用DNA双向测序方法在其他家系成员进行疾病与致病突变共分离分析,以及进一步确认突变,将患者的FRMD7基因外显子8和10的扩增产物克隆至TA克隆载体测序。结果 4个XL-CIN家系皆为X染色体连锁显性遗传伴外显不全,其中2个家系携带FRMD7基因已知致病性突变:XL-CIN 02家系存在c.G886C/GGT>CGT(p.G296R)错义突变,位于FRMD7基因外显子8;XL-CIN 03家系存在c.C910T/CGA>TGA(p.R304X)无义突变,位于外显子10。结论 FRMD7 G296R和R304X是导致XL-CIN 02和XL-CIN 03家系致病的主要原因。     

变性梯度凝胶电泳在遗传性多发性外生性骨疣基因诊断中的应用

目的:采用检测遗传性多发性外生性骨疣(hereditary multiple exostoses,HME)患者EXT2基因的突变,分析该方法的敏感性及用于HME基因诊断的可行性.方法:收集5个HME家系和3个HME散发患者,利用变性梯度凝胶电泳方法对EXT2基因的所有编码外显子及其旁侧内含子序列进行检测,并对出现异常构象的片段进行DNA测序分析.结果:在两个家系中分别发现了一种 A313T的无义突变和一种319insGT的移码突变.结论:在HME患者中发现了2个EXT2基因致病突变,DGGE可作为基因诊断理想的候选方法.     

直接测序联合多重连接依赖探针扩增法检测家族性腺瘤性息肉病APC基因胚系突变

目的 研究中国家族性腺瘤性息肉病(FAP)患者APC基因胚系突变的特点.方法 对来自北京、河北、河南、安徽、内蒙古、山西、福建等地区的14个FAP家系先证者用直接测序法进行APC基因突变检测,对突变检测阴性者应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术进行APE基因大片段缺失检测.结果 14例先证者中9例(64.3%)检测出APC基因微小突变,其中移码突变6例,剪接区突变2例,无义突变1例;2例(14.3%)检测出APC基因大片段缺失,微小突变与大片段缺失的总检出率为78.6%.c.2336-2337insT、c.3923-3929delAAGAAAA、c.532-2A>T和c.4179-4180GAdelinsT等4个微小突变和外显子11、10A缺失、外显子15 start缺失等2个大片段缺失为首次报道.结论 中国FAP患者APC基因的胚系突变类型多样,以移码突变居多,突变位点以第15外显子居多;直接测序法联合MLPA法检测大片段缺失可提高APC基因突变的检出率.     

SCREENING FOR MUTATIONS IN A NOVEL RETINA-SPECIFIC GENE AMONG CHINESE PATIENTS WITH RETINITIS PIGMENTOSA

To identify and evaluate mutations in the RPl gene among Chinese patients with retinitis pigmen-tosa (RP).Methods. Leukocyte DNA of 92 RP patients were collected in Hong Kong. Sequence changes of the entire coding region of the RP1 gene were examined using PCR, conformation sensitive gel electrophoresis and DNA sequencing.Results. In total, 1 nonsense mutation and 1 nonsense variant as well as 10 missense alterations were identified in the RPl gene, among which, Arg677Ter was found in 1 RP patient and another nonsense variant, Argl933Ter, was identified in 3 normal individuals and 1 patient with Stargardt' s disease, suggesting its nonpathogenicity. Arg677Ter is expected to lead to large disruptions of the encoded protein.Conclusions. The nonpathogenicity of Argl933Ter indicates that the C - terminal 224 residues of RPl protein may be not critical for RPl. The most C - terminal truncation previously reported was due to Tyr1053 (1-bp del) and occurred in RP patients. Thus RP can be caused by reduction in