p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用,以探讨罗哌卡因诱发神经毒性的机制.方法 采用随机数字表法,将SH-SY5Y细胞随机分为4组(n=18):正常对照组(C组)、10 μmol/L p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB组)、3 mmol/L罗哌卡因组(R组)、10 μmol/L SB203580+3 mmol/L罗哌卡因组(SB+R组).C组在细胞培养液中继续培养；SB组在含10 μmol/L SB203580培养液中孵育；R组在含3 mmol/L罗哌卡因的培养液中孵育；SB+R组在含10 μmol/L SB203580的培养液中孵育30 min后,用含3mmol/L罗哌卡因的培养液继续孵育.各组细胞培养或罗哌卡因孵育4 h后采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率,采用Western blot法检测p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达,采用MTT法检测细胞活力.结果 与C组比较,R组和SB+R组ROS水平升高,p-p38MAPK表达上调,细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01),SB组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；与R组比较,SB组p-p38MAPK表达下调,细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P＜0.01).四组p38MAPK表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡作用的机制部分与p38MAPK的激活有关.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对HepG2中SLIT2甲基化和细胞恶性表型影响的实验研究

目的评估5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dc）对人肝癌细胞系HepG2中抑癌基因SLIT2甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应。方法实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、MTT、划痕实验、侵袭实验、AnnexinV—FITC／PI双染实验检测细胞中SLIT2基因的甲基化状态和细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。结果5-aza-2dc处理后,HepG2细胞株中SLIT2基因甲基化程度得到一定程度逆转,并呈现出剂量依赖性;划痕实验48h后,对照组肝癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组肝癌细胞迁移受到抑制;侵袭实验24h后,加药组细胞的侵袭能力较对照组降低（P〈0．05）;AnnexinV．FITC／PI双染实验显示加药组细胞凋亡率显著增加（P〈0．01）。结论5-aza-2dc对HepG2细胞有抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,其中对抑制细胞迁移和侵袭的作用可能是通过逆转SILT2基因甲基化、恢复其表达来实现的。     

p38丝裂原活化蛋白激酶途径在大鼠严重烧伤后早期心肌膜磷降解中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径在严重烧伤后早期心肌胞质型磷脂酶A2（cPLA2）表达及膜磷脂降解中的作用。方法将Wistar大鼠分为：正常组（8只）、单纯烧伤组（40只）、烧伤＋SB203580组（16只）和烧伤＋等渗盐水组（16只）。后3组大鼠制成40％TBSAⅢ度烧伤模型,后2组按实验设计分别注射p38MAPK抑制剂SB203580或等渗盐水。单纯烧伤组设5个时相点,其余烧伤组设2个时相点,每时相点8只。检测各组大鼠心肌cPLA2 mRNA表达和膜磷脂含量变化。缺氧复合烧伤血清处理体外培养的大鼠心肌细胞,观察SB203580对其cPLA2 mRNA表达的影响。结果单纯烧伤组大鼠伤后各时相点cPLA2 mRNA表达显著高于正常组的0．280±0．020,伤后3h达峰值;单纯烧伤组大鼠心肌膜磷脂含量伤后即降低,6h达最低值[（0．052±0．017）mg磷／mg蛋白]。烧伤后心肌cPLA2 mRNA表达与膜磷脂含量呈显著负相关（r=-0．53,P＜0．05）。与烧伤＋等渗盐水组比较,伤后6、12h烧伤＋SB203580组大鼠心肌磷酸化p38MAPK水平显著降低,cPLA2 mRNA表达仅为该组的72％、51％（P＜0．01）,心肌膜磷脂含量也显著高于该组。此外,SB203580也显著降低了缺氧复合烧伤血清处理的离体大鼠心肌细胞cPLA2 mRNA的表达水平。结论p38MAPK途径在大鼠严重烧伤后早期心肌膜磷脂降解中起重要作用,其机制可能与磷酸化p38MAPK上调心肌cPLA2 mRNA表达水平有关。     

匹格列酮对高糖时肾小球系膜细胞p38信号通路和TGF-β的影响

目的：研究匹格列酮对高糖培养下人肾小球系膜细胞P38促分裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路及转化生长因子（TGF-β）的影响,进一步探讨匹格列酮抗糖尿病肾病的作用机制。方法：实验分组：正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖＋SB203580组、高糖＋匹格列酮组,观察匹格列酮对高糖培养下的人肾小球系膜细胞p38MAPK信号通路和TGF-β蛋白表达的影响。结果：与高糖组相比,匹格列酮降低系膜细胞p38MAPK信号通路和TGF-β蛋白表达水平。结论：匹格列酮抗糖尿病肾病的作用可能与其抑制p38MAPK信号通路激活和减少TGF-β的表达密切相关。     

沉默BC047440基因对HepG2细胞侵袭能力的影响

目的:观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法:实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA（siRNA）沉默BC047440基因,然后用MTT法检测细胞黏附率,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Boyden小室法检测细胞侵袭性。结果:沉默组的细胞黏附率在20 min和40 min时与HepG2细胞组和无关质粒组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但在60 min时沉默组显著低于后2组(P＜0.05); 划痕实验显示划痕48h后,无关质粒组和HepG2细胞组划痕区已基本长满,而沉默组划痕依然明显; 接种16 h后无关质粒组和HepG2细胞组侵袭到Boyden小室下室面的细胞数明显多于沉默(P＜0.05)。而无关质粒组与HepG2细胞组间差异均无显著性（P＞0.05）。结论:沉默BC047440基因后可明显抑制HepG2细胞其在细胞外基质上的黏附能力、运动能力和体外侵袭能力,提示BC047440基因可增加肝癌的转移侵袭性。     

p38MAPK信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重180～230 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组:对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(ALI组,n=24)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580+ALI组(SB+ALI组,n=24)和SB203580组(SB组,n=6).ALI组尾静脉注射内毒素5 mg/kg制备大鼠急性肺损伤模型,C组给予等容量生理盐水,SB+ALI组于注射内毒素前30 min经尾静脉注射SB20358010 mg/kg.ALI组和SB+ALI组于注射内毒素后1、3、6 h(T1-3)时随机取8只大鼠,C组和SB组分别于给予生理盐水、SB203580后1 h处死取肺组织,检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.T3时回收支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度.计算细胞凋亡指数,观察肺组织病理学结果.另取32只大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):ALI组和SB+ALI组,观察48 h内大鼠生存情况.结果 与C组相比,ALI组和SB+ALI组BALF中蛋白浓度、细胞凋亡指数、肺组织p-p38MAPK蛋白表达水平升高(P＜0.05);与ALI组相比,SB+ALI组上述指标降低(P＜0.05).SB+ALI组病理学损伤程度较ALI组明显减轻.ALI组大鼠生存率较SB+ALI组降低(P＜0.01).结论 p38MAPK信号转导通路参与了大鼠内毒素性急性肺损伤的发生和发展,可能与肺组织细胞凋亡有关.

Abstract：

Objective To investigate the role of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal transduction pathway in lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI).Methods Sixty male SD rats weighing 180-230 g were randomly divided into 4 groups: control group (group C, n = 6), ALI group ( n = 24),p38MAPK specific inhibitor SB203580 + ALI group (group SB + ALI, n = 24), SB203580 group (group SB,n =6). LPS 5 mg/kg was injected intravenously via tail vein in group ALI and SB + ALI, while the equal volume of normal saline was given instead in group C. Group SB + ALI received iv injection of SB203580 10 mg/kg via tail vein 30 min before LPS administration. Group SB received injection of SB203580. The rats were sacrificed at 1, 3 and6 h agter LPS administration (T1-3) in group ALI and SB + ALI (8 rats at each time point) andat 1 h after administration in C and SB groups. The lungs were immediately removed for microscopic examination and determination of phosphorylated p38MAPK (p-p38MAPK) expression, the concentration of protein in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) and apoptotic index (AI). Another 32 rats were selected and randomly divided into 2 groups for survival study: ALI group and SB + ALI group ( n = 16 each), and then they were treated as mentioned above and observed for 48 h. Results The concentration of protein in BALF, AI and p-p38MAPK expression were significantly increased in group ALI and SB + ALI compared with group C, while decreased in group SB + ALI compared with group ALI ( P ＜ 0. 05 ). LPS-induced pulmonary histological changes were significantly attenuated in group SB + ALI compared with group ALI. The survival rate was significantly decreased in group ALI compgred with group SB + ALI ( P ＜ 0.01 ). Conclusion p38 MAPK signal transduction pathway is involved in LPS-induced ALI, which may be related to the apoptosis in the cells in the lung.     

P38 MAPK抑制剂在高糖诱导系膜细胞CTGF表达和基质蛋白分泌中的作用

目的:探讨P38 MAPK抑制剂SB203580在高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达和细胞外基质蛋白分泌的作用。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组:正常对照组(NG组,5. 5 mmol/L葡萄糖);渗透压对照组(NG+M组,5. 5 mmol/L葡萄糖+24. 5 mmol/L甘露醇);高糖组(HG组,30 mmol/L葡萄糖);高糖+SB203580组(HG+SB203580组,30 mmol/L葡萄糖+10μmol/L SB203580),分别给予不同刺激。48 h收集细胞,分别提取系膜细胞蛋白、RNA及细胞上清液。采用Western blot检测MKP-1、p38 MAPK及磷酸化p38MaPK的表达; RT-PCR检测p38 MAPK、MKP-1、CTGF和FN mRNA的表达; ELISA法测定细胞上清CTGF和纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)含量,放免法测定细胞上清液Ⅳ型胶原的含量。结果:与NG组相比,HG组系膜细胞MKP-1表达下调,p38 MAPK蛋白表达无明显差别,但磷酸化的p38 MAPK表达明显升高,MKP-1 mRNA表达下降,p38 MAPK、CTGF和FN mRNA的表达增加,细胞上清液中CTGF、FN和Ⅳ型胶原含量增加;与HG组相比,HG+SB203580组MKP-1表达升高,p38 MAPK蛋白表达无明显差别,但磷酸化的p38MAPK表达明显下降,p38 MAPK、CTGF和FN mRNA的表达下降,系膜细胞上清液中CTGF、FN和Ⅳ型胶原含量下降。结论:p38 MAPK抑制剂SB203580通过增强MKP-1的表达,增强p38 MAPK去磷酸化,使p38 MAPK活性下降,从而阻断CTGF的合成和细胞外基质蛋白表达,在糖尿病肾病细胞外基质重构中发挥保护作用。     

外源性CC10基因表达对肝癌细胞增殖、 凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探究外源性Clara细胞分泌蛋白10（CC10）的基因表达对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和 侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用RT-qPCR和Western blotting检测人正常肝细胞LO2和 肝癌细胞HepG2、Hep3B中CC10的内源表达水平;将HepG2细胞系分为pcDNA 3.1组和pcDNA 3.1-CC10 组,用LipofectionTM分别转染pcDNA 3.1空载体质粒和重组质粒pcDNA 3.1-CC10。用CCK-8法、TUNEL 法和Transwell小室实验分别检测两组细胞增殖、凋亡情况及迁移、侵袭能力。采用RT-qPCR和Western blotting检测两组细胞中CC10和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达水平。结果 与正常肝细胞LO2相 比,CC10在肝癌细胞HepG2、Hep3B中呈明显低表达（P<0.05）;转染 pcDNA 3.1-CC10后的HepG2细胞内 CC10 mRNA和蛋白水平均显著增高（P<0.05）。与 pcDNA 3.1组相比,pcDNA 3.1-CC10组细胞活力受到抑 制,细胞活力以时间依赖性方式降低（P<0.05）,细胞迁移和侵袭实验中的过膜细胞数均低于pcDNA 3.1组 （P<0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA 3.1组（P<0.05）。同时,Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低 （P<0.05）。 结论? 外源性CC10基因表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与 下调Cyclin D1表达有关。     

白细胞介素-6通过p38蛋白调控髓核细胞的增殖和迁移

目的 观察白细胞介素-6(IL-6)对髓核细胞增殖和迁移的调控作用.方法 体外分离培养大鼠髓核细胞,将其随机分为对照组、IL-6组、加压组、IL-6+加压组和IL-6+ p38蛋白抑制剂(SB203580)+加压组.给予相应处理后,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估髓核细胞增殖能力,应用划痕实验评估细胞迁移能力.结果 CCK-8法检测各组细胞吸光度值,未加压环境下,IL-6组吸光度值(1.08±0.02)较对照组(0.67±0.01)明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组吸光度值(1.51±0.06)也较对照组(0.88±0.04)明显升高(P＜0.05).细胞划痕实验中,未加压环境下,IL-6组迁移距离[(27.73±3.15)像素]较对照组[(12.90±4.77)像素]明显升高(P＜0.05);加压环境下,IL-6组迁移距离[(52.81±3.72)像素]也较对照组[(14.32±3.84)像素]明显升高(P＜0.05).加压环境下使用SB203580阻断p38蛋白后,吸光度值(0.81±0.04)和迁移距离[(33.82±3.72)像素]均较IL-6组[(1.51±0.06)、(52.81±3.72)像素]显著下降(P＜0.05).结论IL-6能通过p38蛋白通路促进髓核细胞的增殖和迁移.     

丝裂原活化蛋白激酶对大鼠成骨细胞TRPV6表达的影响

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶对大鼠成骨细胞瞬时性受体电位香草精受体6（transient receptor poten-tial vanilloid receptor 6,TRPV6）表达的影响。方法采用Wistar大鼠乳鼠,连续酶消化法提取成骨细胞并培养。根据组织形态学、改良Kaplow氏成骨细胞碱性磷酸酶染色、矿化结节茜素红染等方法进行鉴定。实验分组：a）正常对照组;b）PD组（PD98059 5μmol/L;PD98059 10μmol/L;PD98059 20μmol/L）;c）SB组（SB203580 5μmol/L;SB20358010μmol/L;SB203580 20μmol/L）;d）PD＋SB组（PD98059 5μmol/L＋SB203580 5μmol/L;PD98059 10μmol/L＋SB203580 10μmol/L;PD98059 20μmol/L＋SB203580 20μmol/L）。细胞计数法、MTT法检测细胞活性,RT-PCR检测成骨细胞TRPV6 mRNA。所得数据用x-±s表示,采用t检验进行统计学分析。结果随着PD98059和/或SB203580浓度的增加,细胞增殖活性有下降的趋势,二者联合作用时细胞活性低于二者单独作用。细胞计数法检测显示,PD98059与SB203580联合作用时,三种组合中细胞数均显著低于空白对照组,P〈0.01;同时也明显低于二者单独作用组细胞数量。碱性磷酸酶染色显示,联合用药组较单独用药细胞数明显减少,细胞体积变小,突起狭长,ALP染色阳性颗粒减少,随药物作用浓度增加上述变化更加显著。茜素红染色显示,钙结节与对照组比较数量少、体积小;10、20μmol/L联合作用组,细胞数减少更加明显,无钙结节形成。SB203580与PD98059二者联合应用显著抑制TR-PV6 mRNA的表达,5 mmol/L联合作用组即可明显抑制,随着作用浓度增加TRPV6 mRNA的表达量逐渐减少。结论 p44/42途径阻断剂PD98059能抑制成骨细胞增殖,明显降低成骨细胞TRPV6 mRNA表达,减少钙结节形成。p38途径阻断剂SB203580能抑制成骨细胞增殖,明显降低成骨细胞TRPV6 mRNA表达,减少钙结节形成。PD98059与SB203580在抑制成骨细胞增殖、降低成骨细胞TRPV6 mRNA表达、减少钙结节形成的作用方面存在协同作用。     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在单核细胞趋化蛋白1介导系膜细胞增殖及细胞外基质表达中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）介导大鼠系膜细胞（MCs）增殖及纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）表达中的调控作用。方法用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）评估不同浓度的MCP-1（12．5、25、50、100ng／ml）及p38MAPK阻断剂SB203580（1、5、10μmol／L）于不同时间对体外培养的大鼠MCs的增殖作用。采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测细胞内FN、ColⅠmRNA的表达。用ELISA法检测上清液FN、ColⅠ蛋白含量。结果MCP-1能刺激MCs的增殖，呈剂量和时间依赖性（P〈0．05），而p38MAPK阻断剂明显抑制上述MCP-1的作用（P〈0.01）。MCP-1能使细胞FN、ColⅠ的表达上调，而p38MAPK阻断剂能抑制其上调表达的作用。结论p38MAPK信号转导通路在MCP-1介导大鼠MCs增殖及FN和ColⅠ表达中起调控作用。MCP-1在系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）的发病中起一定的作用。     

高糖加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的探讨高糖对造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响及其分子机制。方法将NRK52E细胞分成6组：正常对照组（A组）;造影剂组（B组）;葡萄糖（5mmol／L）＋造影剂组（C组）;葡萄糖（15retool／L）＋造影剂组（D组）;葡萄糖（30mmol／L）＋造影剂组（E组）;8]3203580＋葡萄糖（30mmol／L）＋造影剂组（F组）。F组SB203580（20μmol／L）在造影剂加入30min前加入。结果C组细胞葡萄糖作用6、12、24h及D、E组细胞葡萄糖作用6h,未见造影剂诱导的肾损伤和肾小管上皮细胞凋亡加重。D、E组细胞葡萄糖作用12h,造影剂肾损伤和肾小管上皮细胞凋亡重于B组,葡萄糖作用24h,肾损伤和肾小管上皮细胞凋亡重于葡萄糖作用12h,且E组重于D组（P〈0．05）。高糖显著增加造影剂诱导的肾小管上皮细胞ROS水平及p-p38和caspase3蛋白表达,SB203580抑制1〉p38和caspase3蛋白表达。ROS与p-p38、caspase3及p-p38与caspase3呈显著正相关（r分别为0．70、0．68和0．65,P〈0．05）。结论高糖以时间和剂量依赖方式加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤,其分子机制与高糖显著增加细胞内ROS水平及上调p-p38、caspase3表达有关。     

Effect of cysteine-rich protein 61 on oxidative stress in human kidney tubular epithelial cell line after anoxia

Objective To investigate the effect and mechanism of cysteine-rich protein 61(Cyr61) on oxidative stress in human kidney tubular epithelial cell line after anoxia. Methods Human kidney tubular epithelial cell line (HK-2 cells) were divided into 5 groups：control group, Cyr61 group, MAPK inhibitor group (Cyr61+PD98059), p38 inhibitor group (Cyr61+SB203580) and PI3K inhibitor group (Cyr61+Wortmannin). Each group was pretreated for 12 h and then injured by anoxia．The cell viability was determined by MTT assay and the apoptosis rate of HK-2 cells was determined by flow-cytometry. The cellular ROS level was measured by spectro-fluorometry. The cellular superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) were measured by nephelometry test. The expression of Nrf2 in HK-2 cells was detected by Western blotting. Results Anoxia enhanced the expression of ROS and Nrf2, decreased the expression of SOD and CAT significantly,meanwhile decreased HK-2 viability and increased HK-2 apoptosis (all P＜0.05). Cyr61 increased the expression of p-Akt, Nrf2, SOD and CAT in HK-2, and decreased the expression of ROS, at the same time increased HK-2 viability and decreased HK-2 apoptosis (all P＜0.05). Wortmannin inhibited the expression of p-Akt,Nrf2, SOD and CAT, meanwhile decreased HK-2 viability and increased HK-2 apoptosis (P＜0.05). PD98059 and SB203580 had no affect on HK-2 compared to Cyr61 group (P＞0.05). Conclusions Cyr61 promotes the expression of Nrf2 through PI3K pathway in HK-2, which enhances the expression of SOD and CAT, and decreases the expression of ROS. Cyr61 exhibits protective effects on HK-2 cells injured by oxidative stress after anoxia.     

一氧化氮合酶、p38MAPK、Caspase-3介导缺氧神经细胞凋亡机制的研究

目的探讨缺氧引起PC12细胞凋亡和NOS、p38MAPK和(Caspase-3在缺氧后神经细胞凋亡中的共同作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法测定缺氧对PC12细胞的生长抑制率,荧光显微镜观察缺氧对PC12细胞损伤,比色法测定PC12细胞在缺氧环境下乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术(FCM)检测缺氧PC12细胞NT阳性细胞百分比,以及细胞周期改变和细胞凋亡率, RT-PCR半定量分析nNOS、iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA的表达。结果MTT法测定缺氧抑制PC12细胞生长趋势;AO荧光染色缺氧24 h时PC12细胞可见凋亡小体;缺氧时间延长,LDH渗出量增多,NT阳性细胞百分比增大,S期细胞增多,细胞凋亡率升高,缺氧24 h调亡率达到45.67%;PCR结果分析显示nNOS mRNA在缺氧早期表达,iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA主要在缺氧晚期表达。结论缺氧能够引起PC12细胞凋亡现象,nNOS、iNOS分别在缺氧早期和晚期发挥神经毒性作用,NOS,p38MAPK和Caspase-3三种基因共同介导缺氧后PC12细胞凋亡。     

榄香烯对胃癌细胞p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的 探讨榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞株增殖的影响,以及与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的关系.方法 用不同浓度的榄香烯处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖情况;光镜和透射电镜观察形态学改变;Western blot方法检测P38和磷酸化P38(P-P38)的表达.结果 榄香烯抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,并呈浓度和时间依赖性;在光镜和透射电镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变;经0.08 mg/ml榄香烯作用4 h后,胃癌SGC-7901细胞中p38MAPK通路被激活,p-P38表达与对照组相比升高3.72倍,差异有统计学意义(P＜0.01),而P38总蛋白量未发生明显变化.预先应用p38MAPK通路抑制剂SB203580作用24 h与单用榄香烯作用组比较,p-P38表达下降54.12%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 榄香烯可以抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,诱发细胞凋亡,其机制可能与p38MAPK通路有关.