骨保护素对脐静脉内皮细胞生长的影响

目的:观察骨保护素对内皮细胞数量变化及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响,探讨其对内皮细胞的作用。方法:常规培养永生化的人内皮细胞,用不同浓度(0,0·5,2·0,4·0,6·0,8·0μg/L)的骨保护素作用细胞48h后,用细胞计数试剂盒(cellcount kit,CCK-8)来检测细胞的数量;免疫细胞化学检测eNOS蛋白的表达水平,实时定量PCR检测eNOS基因的定量表达。结果:与对照组(0·936±0·146)相比,在8·0μg/L组的内皮细胞增殖量明显增加(1·291±0·200;P<0·05);eNOS蛋白表达在2·0μg/L、4·0μg/L组(P<0·05)和6·0μg/L、8·0μg/L组(P<0·01)均显著增加;而4·0μg/L、6·0μg/L、8·0μg/L组的eNOS mRNA较对照组均呈显著增高(P<0·01)。结论:骨保护素在人体的浓度波动范围内具有促进内皮细胞增殖效应,在抗动脉粥样硬化过程中,可能具有促内皮细胞修复作用,且与浓度梯度有明显的正相关性。     

骨保护素与动脉粥样硬化的研究进展

骨保护素是属于肿瘤坏死因子超家族成员之一的一种可溶性糖蛋白,近来研究表明骨保护素不仅参与骨代谢,同时与体内能量和糖脂代谢关系密切,且其与动脉粥样硬化及糖脂代谢异常相关的心血管病变、微血管病变联系紧密。骨保护素可能通过调节糖脂代谢和内皮功能、抑制血管钙化、抑制炎症、抑制凋亡等机制参与动脉粥样硬化发生发展过程。     

骨保护素的研究进展

骨保护素（Ｏｓｔｅｏｐｔｅｇｅｒｉｎ,ＯＰＧ）及其配体（ＯＰＧＬ）的发现是近年来骨代谢研究领域的又一项重要发现。ＯＰＧ是一种可溶性肿瘤坏死因子受体,主要通过与ＯＰＧＬ结合而起作用。ＯＰＧ不仅抑制破骨细胞（ＯＣ）生成,而且还抑制ＯＣ的骨吸收功能。对于骨质疏松、免疫性骨关节损害、恶性肿瘤并发体液性高钙血症等疾病,ＯＰＧ可能具有有效的治疗作用。     

骨保护素与代谢综合征

骨保护素(OPG)是一种分泌型糖蛋白,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,不仅在骨代谢过程中起重要作用,而且是重要的血管调节因子,能够保护血管内皮细胞,抑制血管钙化和动脉粥样硬化.代谢综合征(MS)包括腹型肥胖、胰岛素抵抗、血脂异常、高血糖、高血压等.MS各组分均为心血管疾病的危险因素,2型糖尿病患者血OPG水平明显升高,但是OPG与MS其他各组分之间的关系日前还存在争议.     

骨保护素系统在血管疾病中的研究进展

骨保护素是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,主要通过与核因子КB受体活化因子竞争性的与其核因子КB受体活化因子配体的结合来调节破骨细胞的功能从而在骨代谢疾病中发挥重要作用。骨保护素受多种因素的调控,如炎症因子(肿瘤坏死因子α-、白介素),激素(甲状旁腺激素、糖皮质激素、雌激素),转录因子等。近年来研究发现骨保护素也参与了心血管系统和内分泌系统疾病的发生发展。特别是骨保护素在血管系统的疾病中有不同程度的增高,其作用机制尚不清楚,对其机制的了解成为一个值得关注的焦点。     

骨保护素系统与动脉粥样硬化的关系

自最初发现骨保护素(OPG)对骨骼新陈代谢有重要的调节功能以来,因其在血管性疾病和钙化中发挥的重要作用已经引起了人们的广泛关注.在动物模型和临床研究中发现,骨保护素不仅能抑制动脉粥样硬化,而且其血清水平随着血管硬化、冠状动脉疾病和未来心血管事件的进展而升高.这一特点的确切机制和意义尚不明确.为了解其完整的作用模式,骨保护素基因多态性、钙化、炎症、凋亡及其配体之间的相互关系应纳入研究,文章将近年来骨保护素与动脉粥样硬化关系的研究进展作一综述.     

前列腺素E2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的研究前列腺素E2（PGE2）对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6（IL-6）、骨保护素（Osteoprotegerin，OPG）、骨保护索配体（Ligand of receptor activator of NF-κB，RANKL）表达的调节，探讨PGE引发骨吸收的机制。方法体外培养成骨瘤细胞株（MG-63），分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验，用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达；用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用；提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析，检测IL-6，OPG，RANKL基因表达水平的改变。结果PGE2减少碱性磷酸酶的表达，抑制MG-63细胞的增殖，并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA，RANKL／OPGmRNA水平。结论PGE2可以通过IL-6，RANKL／OPGmRNA基因水平的上调，促进骨吸收，此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制。     

前列腺素E_2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的研究前列腺素E2(PGE2)对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6(IL-6)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(L igand of receptor activator ofNF-κB,RANKL)表达的调节,探讨PGE引发骨吸收的机制。方法体外培养成骨瘤细胞株(MG-63),分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验,用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达;用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用;提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析,检测IL-6,OPG,RANKL基因表达水平的改变。结果PGE2减少碱性磷酸酶的表达,抑制MG-63细胞的增殖,并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA,RANKL/OPG mRNA水平。结论PGE2可以通过IL-6,RANKL/OPG mRNA基因水平的上调,促进骨吸收,此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制。     

骨保护素与动脉粥样硬化和血管钙化

骨保护素(OPG)作为肿瘤坏死因子受体超家族成员,不仅是骨代谢的一个重要调节因子,还是重要的血管调节因子,能够保护血管内皮细胞,抑制血管钙化和动脉粥样硬化。冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)及外周动脉硬化疾病血清OPG水平及动脉壁中OPG含量明显升高,OPG在动脉粥样硬化的发生发展中可能起着重要的调节作用。但其确切的机制尚不清楚,可能是一种自我防御代偿机制,以对抗促动脉粥样硬化、血管钙化及血管损伤的其它因子。     

骨保护素及其临床应用

骨保护素(OPG)是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的新成员,也被称为破骨细胞抑制因子(OCIF)(1),具有抑制破骨细胞的功能.近年来,还发现OPG在类风湿关节炎、骨质疏松、动脉粥样硬化、糖尿病、免疫系统疾病及肿瘤等疾病的治疗中临床应用广泛.     

外周血内皮祖细胞数量及eNOS基因表达在动脉粥样硬化大鼠中的改变

目的:探讨外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及动脉内皮细胞型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达在动脉粥样硬化(AS)大鼠中的改变。方法:将70只大鼠分为3组:正常对照组20只,采用假手术+普通饲料喂养;实验对照组20只,采用假手术+高脂饲料喂养;AS组30只,采用球囊损伤主动脉内皮、维生素D33×105 U·kg-1·d-1分6次肌内注射和饲以高脂饲料喂养。90d后分别采外周血进行EPCs的分离培养,于倒置相差显微镜下计数内皮祖细胞克隆形成单位(EPC-CFU),并采用Real-time PCR法检测腹主动脉中eNOS基因的表达。结果:与正常对照组和实验对照组相比,AS组外周血EPCs数量明显减少(P<0.01),eNOS基因表达明显下调(P<0.01);EPCs数量及eNOS表达在正常对照组和实验对照组中差异无统计学意义。结论:AS时EPCs数量减少,eNOS基因表达明显下调。     

miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制,为临床动脉硬化疾病提供新的诊疗方向。方法收集临床病理首次确诊为糖尿病下肢动脉粥样硬化病变的患者病变处动脉内皮组织和正常内皮组织,qPCR检测miR-206的表达;而后通过基础实验研究将HUVEC分为未转染组、miR-206-mimics组和miR-206-inhibitor组,观察转染效率;三组细胞均采用CCK8检测细胞增殖情况,Transwell进行迁移能力评估,流式细胞仪检测细胞周期情况,Western blot检测Cx43表达情况。结果糖尿病动脉硬化患者下肢动脉(均为胫腓动脉)病变处内皮细胞miR-206的mRNA表达较正常组织内皮细胞明显增加(P0.05);HUVEC转染miR-206-mimics后,miR-206表达显著升高(P0.05),转染miR-206-inhibitor后,miR-206表达明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics 24 h后,细胞增殖率相比于未转染组和miR-206-inhibitor组要明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics后,细胞迁移能力明显降低(P0.05),细胞周期在G2期发生阻滞,而HUVEC转染miR-206-inhibitor后细胞迁移能力提高(P0.05);miR-206-mimics组细胞Cx43表达明显降低,而miR-206-inhibitor组细胞Cx43表达明显增加。结论 miR-206可以抑制血管内皮细胞的增殖,将内皮细胞阻滞在有丝分裂G2期,并且抑制内皮细胞迁移,其对内皮细胞增殖的影响可能是通过调节Cx43表达来实现的。     

白藜芦醇对外周血内皮祖细胞功能的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇对于内皮祖细胞体外功能的影响。方法密度梯度离心法获得人外周血单个核细胞,培养7 d后,采用免疫荧光和流式细胞仪进行细胞鉴定;随后加入不同浓度的白藜芦醇[0（对照）、1、5、15、60μmol/L]干预72 h,观察其对内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力的影响;同时采用RT-PCR和ELISA方法测定药物干预后,内皮祖细胞中内皮型一氧化氮合成酶（endothelial n itric oxide synthase,eNOS）的表达。结果与对照组相比,1μmol/L白藜芦醇促进内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,同时上调eNOS的mRNA和蛋白水平的表达;而60μmol/L白藜芦醇抑制内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,并且下调eNOS的mRNA和蛋白水平的表达。结论低浓度白藜芦醇可改善内皮祖细胞增殖、迁移和黏附功能,并上调eNOS表达,而高浓度白藜芦醇则抑制上述细胞功能和eNOS表达。     

Osteosclerosis in advanced chronic idiopathic myelofibrosis is associated with endothelial overexpression of osteoprotegerin

Advanced chronic idiopathic myelofibrosis (IMF) with osteosclerosis and increase and thickening of bone trabeculae is typically contrasted by the absence or sparse presence of osteoclasts. Because osteoclast formation can be inhibited by osteoprotegerin (OPG) we investigated OPG expression in IMF with severe fibrosis and osteosclerosis, which expressed significantly higher (up to 71-fold) OPG mRNA levels when compared with prefibrotic cellular IMF and control cases. The receptor activator of nuclear factor kappaB ligand (RANKL), a positive regulator of osteoclast differentiation and putative antagonist of OPG was overexpressed by up to 34-fold exclusively in advanced IMF. Case-specific calculation of the RANKL/OPG ratio in advanced IMF showed a wide range without significant differences when compared with the prefibrotic IMF and non-neoplastic haematopoiesis. Immunohistochemical detection of OPG protein revealed strong labelling of endothelial cells within proliferating vessels in fibrotic IMF and heterogeneously labelled megakaryocytes, and fibroblasts. Osteosclerosis and impaired osteoclast function in IMF appears to be associated with upregulated endothelial OPG expression but concomitant reduction of the antagonist RANKL could not be demonstrated. We conclude that osteosclerosis in IMF is associated with increased endothelial OPG expression without concomitant RANKL downregulation.     

血清骨保护素与高血压及合并颈动脉粥样硬化的相关性研究

【摘要】　目的　探讨血清骨保护素(OPG)水平与原发性高血压(EH)及合并颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法　选择健康体检者40例(对照组)、单纯高血压患者(EH组)42例及高血压合并颈动脉粥样硬化患者(EH+CAS组)46例为研究对象。颈动脉超声检查测量颈动脉内-中膜厚度(IMT),判断有无颈动脉粥样硬化;同时测定血清OPG水平及总胆固醇(TC)、甘油三脂 (TG)、低密度胆固醇(LDL-C)、高密度胆固醇(HDL-C)及C反应蛋白(CRP)等生化指标,并观察3组间各指标的变化。结果　单因素分析显示,EH组及EH CAS组血清OPG水平明显高于对照组[3.58(2.72~4.33),4.99(4.20~6.26)vs 2.68(2.07~3.37)(P<0.001)]。EH CAS组血清OPG水平高于EH组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清OPG水平(OR=1.614,95 % CI：1.088~2.393)是高血压合并颈动脉粥样硬化的独立影响因素。 结论　高血压合并CAS 患者血清OPG 高于正常人和单纯高血压患者,OPG可能与高血压患者CAS 的发生有关。     

血管内皮生长因子调节内皮祖细胞生物学功能

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）对体外培养骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及机制初探。方法密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定。单个核细胞培养7d后分为对照组和VEGF干预组。VEGF干预组加入不同浓度VEGF（25,50,75,100μg／L）培养48h,分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。RT—PCR法半定量检测VEGF对EPCs内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响。硝酸还原酶法比色测定VEGF对EPCs分泌一氧化氮的影响。结果VEGF可浓度依赖性地增加EPCs数量并明显促进EPCs的黏附、迁移和增殖能力,与对照组比较差异显著。VEGF可上调EPCseNOSmRNA的表达,促进EPCs分泌一氧化氮。结论VEGF可能通过上调EPCseNOSmRNA的表达影响EPCs部分生物学功能。     

脂联素对内皮祖细胞增殖和迁移能力的影响

目的研究脂联素通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(Akt)通路改善内皮祖细胞(EPC)增殖、迁移能力的影响并探讨其可能机制。方法利用密度梯度离心法分离、培养人外周血单个核细胞,将EPC分为对照组、脂联素组(10μg/ml)、磷酸肌醇3激酶抑制剂干预组(干预1组)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制剂干预组(干预2组)。采用四唑盐比色法、细胞集落形成单位计数等方法观察各组EPC增殖能力的变化情况,应用transwell小室法分析EPC迁移能力,采用免疫蛋白印迹法观察脂联素处理EPC后,Akt、磷酸化Akt、ERK、磷酸化ERK的表达情况。结果脂联素组EPC增殖能力较对照组明显提高(P<0.05),干预1组EPC增殖、迁移效应较脂联素组明显抑制(P<0.05),而干预2组对EPC增殖、迁移改善效应无明显影响。与对照组比较,脂联素组磷酸化Akt表达明显增加,干预1组磷酸化Akt表达及脂联素组磷酸化ERK表达无明显增加。结论脂联素具有促进EPC增殖、迁移等功能活性的作用,其主要机制可能与磷酸肌醇3激酶/Akt信号通路激活有关。     

Glucose inhibits replication of cultured human endothelial cells

Summary Diabetes is an important risk factor for atherosclerosis but the mechanism of the risk is unknown. As endothelial injury is considered to be an early event in the development of atherosclerosis, the effect of glucose on endothelial cell replication was studied. Concentrations of glucose of 11.2, 16.8 and 22.4 mmol/l inhibited DNA synthesis in cultured human umbilical venous endothelial cells by 8.1±10.8, 24.3±8.8 and 30.9±7.4%, respectively. Glucose also inhibited the proliferative response of endothelial cells to experimental wounds in the cell layer. Sorbitol (22.4 mmol/l) inhibited endothelial cell DNA synthesis by 50±13.6%, but mannitol (22.4 mmol/l) inhibited DNA synthesis by only 3±24.3%. It is suggested that in diabetic subjects, high blood glucose levels may cause endothelial injury, or inhibit its repair, and hence allow the exposure of the arterial media to plasma and its constituents.     

Globular adiponectin upregulates nitric oxide production in vascular endothelial cells

Aims/hypothesis Adiponectin, also called ACRP30, is a novel adipose tissue-specific protein that has been shown to improve insulin sensitivity and to exert anti-atherogenic effects. It is known that knockout mice lacking endothelial NO synthase (eNOS) develop hypertension, insulin resistance, hyperlipidaemia, and show augmented ischaemia-reperfusion damage. Thus, we examined whether globular adiponectin activates eNOS to produce NO.Methods To analyze NO production in bovine aortic endothelial cells (BAE), NOx (nitrite and nitrate) was measured in the medium with an automated NO detector/high-performance liquid chromatography system. eNOS activation was assessed by phosphorylation of the enzyme and its activity was evaluated by citrulline synthesis in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). eNOS mRNA and protein expressions in HUVEC were evaluated by Realtime PCR and Western blot analysis.Results Gobular adiponectin increased NO production in BAE. It also caused eNOS phosphorylation and potentiated eNOS activity in HUVEC. In addition, globular adiponectin up-regulated the eNOS gene to increase protein expression in HUVEC.Conclusion/interpretation Globular adiponectin increases NO production through two mechanisms, namely, by activation of eNOS enzyme activity and via an increase in eNOS expression. Activation and up-regulation of eNOS could explain some of the observed vasoprotective properties of globular adiponectin, as well as its beneficial effects on the cardiovascular system.Abbreviations NO nitric oxide - eNOS endothelial NO synthase - BAE bovine aortic endothelial cells - HUVEC human umbilical vein endothelial cells - ACRP30 adipocyte complement-related protein of 30 kDa - GAPDH glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase